Header Page of 126 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRỊNH THỊ HOA NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC TINH DẦU VÀ DỊCH CHIẾT CỦA CÂY RIỀNG MÉP NGẮN (ALPINIA BREVILIGULATA) Ở ĐÀ NẴNG Chuyên ngành : Hoá hữu Mã số : 60-44-27 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Đà Nẵng - 2011 Footer Page of 126 Header Page of 126 Cơng trình hồn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Bích Tuyết Phản biện 1: PGS TS Lê Tự Hải Phản biện 2: TS Trịnh Đình Chính Luận văn ñược bảo vệ trước Hội ñồng chấm luận văn tốt nghiệp thạc sĩ khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 25 tháng năm 2011 Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm Thơng tin - Học liệu, Đại học Đà Nẵng - Thư viện trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng Footer Page of 126 Header Page of 126 MỞ ĐẦU Lý chọn ñề tài Trong năm gần ñây, với phát triển khoa học cơng nghệ nói chung, q trình nghiên cứu cấu trúc hoạt tính sinh học hợp chất tự nhiên ñã phát triển mạnh mẽ Việc nghiên cứu hợp chất tự nhiên đóng vai trị quan trọng việc tìm tịi, nghiên cứu sản xuất vị thuốc quý không cho y học cổ truyền mà y học đại Cũng sở nghiên cứu xây dựng quy trình tổng hợp hợp chất tự nhiên, đường hữu ích cơng nghệ hố học ngành cơng nghệ khác ngành thực phẩm, hương liệu, mỹ phẩm, dược phẩm… Việt Nam nước thuộc vùng nhiệt ñới gió mùa ẩm, với hệ thống thảm thực vật phong phú ña dạng, nhiều loại quý có giá trị ngành dược liệu ngành kinh tế khác [4] Trong số đó, phải kể ñến loài Alpinia breviligulata Gagnep (Riềng mép ngắn, Riềng lưỡi ngắn) thuộc họ Gừng (Zing+`iberaceae) thuốc dân gian, mọc hoang chủ yếu miền Trung nước ta (lồi tìm thấy Việt Nam từ Thanh Hố đến Quảng Trị, Thừa Thiên-Huế, Đà nẵng) lùm bụi, ñất ẩm râm mát [20] Thân rễ (rhizome) hạt thường ñược dùng chữa bệnh: ñau bụng, ñau dày, tá tràng tinh dầu dùng chữa bệnh ñau [3], [12], [15] Tuy nhiên, cho ñến Alpinia breviligulata Gagnep ñược nhắc ñến sách thuốc dân gian Việc nghiên cứu thành phần hoá học chưa nhiều chưa có hệ thống, đặc biệt chưa có tài liệu cơng bố thành phần hoá học dịch chiết (phần thân rễ) việc tách nghiên cứu hoạt tính cấu tử Vì vậy, chúng tơi chọn đề tài “NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC TINH DẦU VÀ DỊCH CHIẾT CỦA CÂY RIỀNG MÉP NGẮN Footer Page of 126 Header Page of 126 (ALPINIA BREVILIGULATA) Ở ĐÀ NẴNG " Hy vọng kết nghiên cứu ñược ñề tài với cơng trình nghiên cứu trước làm chứng khoa học cho việc sử dụng loại tài nguyên vào lĩnh vực sản xuất dược liệu, hương liệu, mỹ phẩm Và từ có hướng qui hoạch canh tác, khai thác sử dụng loại thực vật ñịa bàn Đà Nẵng nói riêng nước nói chung Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu thành phần hoá học tinh dầu dịch chiết, thử hoạt tính sinh học dịch chiết Alpinia breviligulata Gagnep Đối tượng phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu của: lá, thân cây, thân rễ Nghiên cứu thành phần hóa học dịch chiết thân rễ dung môi: Dung môi n-hexan; dung môi clorofom; dung môi etanol Xác định hoạt tính sinh học dịch chiết thân rễ Tách xác định thành phần hố học từ dịch chiết n-hexan thân rễ tinh dầu (thân rễ, lá, thân) Alpinia breviligulata Gagnep Phương pháp nghiên cứu * Nghiên cứu lý thuyết Thu thập, tổng hợp tài liệu, tư liệu, sách báo ngồi nước có liên quan đến đề tài Nghiên cứu lí thuyết: Phương pháp nghiên cứu hợp chất tự nhiên; tổng quan tài liệu ñặc ñiểm hình thái thực vật, thành phần hố học số thuộc chi Riềng (Alpinia) nói chung RMN (Alpinia breviligulata Gagnep.) nói riêng * Phương pháp thực nghiệm Phương pháp tách tinh dầu chưng cất lôi nước Phương pháp ngâm chiết dung môi hữu (metanol) Footer Page of 126 Header Page of 126 Phương pháp xác ñịnh số vật lý hóa học: Nhiệt độ nóng chảy, số khúc xạ, số axit, số este… Phương pháp tách xác định thành phần hố học tinh dầu dịch chiết: Sắc ký khí - khối phổ liên hợp (GC/MS) Phương pháp phổ xác ñịnh cấu trúc: phổ khối lượng (MS) Ý nghĩa khoa học thực tiễn ñề tài Từ nghiên cứu trên, luận văn ñã thu ñược số kết với đóng góp thiết thực sau: - Xác ñịnh ñược hàm lượng, số vật lý, hoá học tinh dầu phận RMN Đà Nẵng nhằm ñịnh hướng cho việc quy hoạch khai thác sau - Xác ñịnh thành phần hoá học tinh dầu : lá, thân cây, thân rễ dịch chiết thân rễ - Thử hoạt tính sinh học dịch chiết thân rễ ñể ñịnh hướng cho việc ứng dụng thực tế Cấu trúc luận văn Ngồi phần mở đầu, kết luận, tài liệu tham khảo phụ lục luận văn ñược chia thành ba chương sau: Chương 1: Tổng quan Chương 2: Những nghiên cứu thực nghiệm Chương 3: Kết bàn luận CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm hình thái thực vật thành phần hố học số thuộc chi Riềng (Alpinia) 1.2 Alpinia breviligulata Gagnep -Riềng mép (lưỡi) ngắn 1.2.1 Mô tả sơ lược ñặc ñiểm thực vật Riềng mép ngắn (Alpinia breviligulata Gagnep.) Footer Page of 126 Header Page of 126 Alpinia breviligulata Gagnep., RMN thuộc họ Gừng (Zingiberaceae) Cây thân thảo cao khoảng 1-1,5m, hay cao Lá khơng cuốn, hình dài mũi mác, mép có gai nhỏ, dài khoảng 20cm, rộng khoảng 2,5cm Bẹ nhẵn, lưỡi ngun, trịn, ngắn (hình 1.8; 1.10 ) Chuỳ hình tháp, dài từ 20-25cm, phân thành nhiều nhánh, nhánh mang 1-4 nhánh nhỏ cách quảng, nhánh có từ 3-4 hoa Lá bắc dễ rụng Dài hình ống, có hình tam giác tù Tràng có ống thụt vào, thuỳ thn, họ có lơng mặt lưng Nhị có bao phấn, có gốc nhị lép hình mũi dùi hay dạng hình dải Cánh mơi hình bầu dục, màu trắng viền đỏ, bầu có lơng Quả mọng khơ, hình cầu, đường kính khoảng 12mm, chứa khoảng 10-12 hạt, màu vàng đỏ ích Cây hoa từ tháng 8-9, cho từ tháng 10-12 [1], [2], [3], [7], [l2] Loài tìm thấy Việt Nam từ Thanh Hố đến Quảng Trị, Thừa Thiên-Huế, Đà Nẵng, Quảng Nam Sống lùm bụi, chỗ ñất ẩm, râm mát, gần khe suối Hình 1.8 Hoa, Apinia breviligulata Gagnep Đà Nẵng Footer Page of 126 Header Page of 126 Hình 1.10 Thân rễ Apinia breviligulata Gagnep Đà Nẵng 1.2.2 Công dụng chữa bệnh số lồi riềng 1.2.3 Tình hình nghiên cứu mặt hoá học Alpinia breviligulata Gagnep 1.3 Cơ sở lý thuyết phương pháp chiết tách hợp chất hưu CHƯƠNG NHỮNG NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 2.1 Nguyên liệu 2.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 2.3 Nghiên cứu chiết tách tinh dầu Riềng mép ngắn (Alpinia breviligulata Gagnep) 2.3.1 Chiết tách tinh dầu Tinh dầu thu theo phương pháp chưng cất lôi nước 2.3.2 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng ñến lượng tinh dầu 2.3.3 Định lượng tinh dầu, xác ñịnh số vật lý hóa học tinh dầu 2.3.4 Xác định thành phần hóa học tinh dầu Footer Page of 126 Header Page of 126 Các cấu tử tinh dầu ñược xác ñịnh thành phần phần trăm (%) nhận diện phương pháp GC/MS 2.3.5 Thử nghiệm hoạt tính sinh học, khả kháng oxi hóa 2.4 Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết từ thân rễ dung môi hữu 2.4.1 Phương pháp ngâm chiết Cho 500 gam thân rễ xay nhỏ vào bình thủy tinh lớn, sau cho vào lit dung mơi CH3OH, đậy kín vịng tháng, sau chiết thu dịch chiết 2.4.2 Xác định thành phần hóa học dịch chiết thân rễ Alpinia breviligulata Gagnep Thành phần hóa học dịch chiết dung mơi n-Hexan, clorofom etanol xác ñịnh phần trăm (%) nhận diện phương pháp GC/MS CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Xác ñịnh tên khoa học 3.2 Kết nghiên cứu chiết tách tinh dầu 3.2.1 Tính chất cảm quan hàm lượng tinh dầu Bảng 3.1 Tính chất cảm quan hàm lượng tinh dầu Tinh dầu Thân Lá Thân rễ Tính chất cảm quan Hàm lượng tinh dầu (%) Màu vàng sáng, mùi thơm dịu, vị the 0,58 Màu vàng sáng mùi thơm, vị the, cay 1,80 Màu vàng sẫm, mùi thơm dịu, Footer Page of 126 vị the 0,33 Header Page of 126 3.2.2 Hàm lượng tinh dầu thân rễ Alpinia breviligulata Gagnep (0,325 + 0,351 + 0,349) % TD = = 0,342% 3.2.3 Kết khảo sát yếu tố ảnh hưởng ñến hàm lượng tinh dầu 3.2.3.1 Khảo sát tỉ lệ khối lượng nguyên liệu/nước Bảng 3.2 Kết khảo sát tỉ lệ khối lượng thân rễ / thể tích nước mnguyên liệu/Vnước 1,0:1,0 2,0:2,5 2,0:3,0 2,0:3,5 1,0:2,0 0,3 0,4 0,5 0,4 0,4 Vtinh dầu(ml) 3.2.3.2 Khảo sát thời gian chưng cất Bảng 3.3 Kết khảo sát thời gian chưng cất tinh dầu Thời gian (h) Vtinh dầu(ml) 0,4 0,5 0,5 0,6 0,7 0,7 3.2.4 Kết xác ñịnh số hóa lý tinh dầu Alpinia breviligulata Gagnep 3.2.4.1 Kết xác ñịnh tỉ trọng Bảng 3.4 Tỉ trọng tinh dầu Alpinia breviligulata Gagnep Tinh dầu Tỉ Trọng (d25) Thân 0,9357 Lá 0,9370 Thân rễ 0,9189 Footer Page of 126 10 Header Page 10 of 126 3.2.4.2 Kết xác ñịnh số khúc xạ Bảng 3.5 Chỉ số khúc xạ Alpinia breviligulata Gagnep Tinh dầu Chỉ số khúc xạ (n25) Thân 1,4917 Lá 1,4925 Thân rễ 1,4885 3.2.5 Kết xác định số hóa học tinh dầu thân rễ RMN (Alpinia breviligulata Gagnep.) 3.2.5.1.Chỉ số axit Bảng 3.6 Chỉ số axit tinh dầu thân rễ RMN Đà Nẵng Khối lượng tinh Thể tích KOH dầu (g) 0,1N(ml) 0,2084 0,12 3,21 0,2175 0,13 3,35 0,2103 0,12 3,2 Lần Chỉ số axit Ax = 3,253 3.2.5.2 Chỉ số este: Bảng 3.7 Chỉ số este tinh dầu thân rễ RMN Đà Nẵng Khối lượng tinh V1 V Chỉ số dầu (g) (ml) (ml) este 0,2074 8,89 9,55 88,73 0,2164 8,92 9,56 80,54 0,2112 8,91 9,55 89,83 Lần Es = 86,37 Footer Page 10 of 126 Header Page 12 of 126 8,92 12 Benzyl methyl ketone C9H10O 0,30 C10H14O 1,10 2-Norpinene-210 9,05 carboxaldehyde,6,6-dimethyl,(1S,5R)-(+)- 11 9,37 Eucarvone C10H14O 1,57 12 9,52 Citral (isomer) cis,trans- C10H16O 0,35 13 10,05 P-Mentha-6,8-dien-2-one C10H14O 0,24 14 10,67 Bornyl axetat C12H20O2 0,23 15 11,82 C13H20 0,20 16 12,37 C15H24 0,22 17 12,52 C15H24 6,31 18 12,68 C15H24 0,30 C17H24O 0,96 Megastigma-4,6(Z),8(Z)triene longicyclene 1,3,5Cyclononatriene,hexamethyl 1H-Cyclopenta 1,3 cyclopropa 1,2 benzene,octahydro Falcarinol(Z)-(-)-1,9 19 13,12 Heptadecadiene-4,6-diyne-3ol 20 13,40 Iso caryophyllen C15H24 0,58 21 14,22 (+)-Sativen C15H24 2,02 22 14,43 γ-Cadinen C15H24 0,56 23 14,78 α-Humulen C15H24 0,98 24 14,92 ε-Cadinol C15H26O 1,94 25 15,27 Cadina-3,9-dien C15H24 3,12 26 15,32 –Cadin-4-en-10-ol C15H26O 1,31 27 15,40 Cadina-1,3,5-trien C15H22 0,91 28 16,02 α- Farnesen C15H24 2,17 29 16,68 Patchulan C15H26 15,38 Footer Page 12 of 126 13 Header Page 13 of 126 30 16,75 β -Periplanon C14H20O3 14,12 31 17,05 α- Bisabolol C15H26O 0,91 32 17,18 Caryophylen oxit C15H24O 5,69 33 17,40 α-Longipinen C15H24 1,48 C15H26O 1,06 C15H18 0,91 1H-Cyclopropeazulen-434 17,65 ol,decahydro-1,1,4,7-tetra methyl Naphthalene,4-isopropyl-1,6- 35 18,27 36 18,33 Velleral C15H20O2 2,01 37 18,80 n-Dodecenylsuccinic anhydrid C16H26O3 1,03 dimethyl 38 Các thành phần khác chưa ñịnh danh 3,63 39 Tổng cộng 100 3.2.6.2 Kết xác ñịnh thành phần hóa học tinh dầu thân Alpinia breviligulata Gagnep Hình 3.8 Sắc ký đồ GC TD thân Alpinia breviligulata Gagnep Footer Page 13 of 126 Header Page 14 of 126 14 Bảng 3.9 TPHH TD thân RMN (Alpinia breviligulata Gagnep.) Đà Nẵng T gian lưu 3,78 4,03 10 11 12 13 14 15 16 4,48 5,38 5,48 7,80 7,88 8,50 8,87 8,97 9,20 9,28 10,60 12,47 12,65 13,03 17 13,38 18 19 20 21 14,08 14,17 14,37 14,73 STT Footer Page 14 of 126 Hợp chất CTPT α-cis-Ocimen 3-Methyl-4-phenyl-1Butene β- Pinen α-Myrcen 7-Octen-2-one Pinocarveol (S)-cis-Verbenol Borneol Benzylmethyl ketone Linalol Fenchyl axetat Eucarvone Bornyl axetat Copaen Iso caryophyllen Falcarinol (Z)-(-)-1,9 heptadecadiene-4,6diyne-3-ol Cyclohexan,1,5diethenyl-3-methyl2-methylene α- Caryophyllen (+)-Sativen γ- Cadinen α-Humulen C10H16 C11H14 Hàm lượng (%) 6,66 0,26 C10H16 C10H16 C8H14O C10H16O C10H16O C10H18O C9H10O C10H18O C12H20O2 C10H14O C12H20O2 C15H24 C15H24 C17H24O 0,47 0,38 0,33 0,18 0,35 0,66 0,17 0,54 1,20 0,40 0,47 C12H18 4,46 C15H24 C15H24 C15H24 C15H24 1,48 1,59 0,43 0,62 5,72 0,38 0,34 Header Page 15 of 126 15 ε -Cadinol 1,6-Octadien-3-ol,3,7dimethyl-,propionate Cadina-3,9-diene Cadina-1,3,5-triene 5-Pentadecen-7-yne C15H26O C13H22O2 0,72 0,98 C15H24 C15H22 C15H26 6,34 0,80 2,91 C15H26O 4.57 C15H26 C14H20O3 C16H28 C14H22O2 29,44 7,22 3,89 3,77 C15H18 0,93 18,40 1,6,10-Dodecatrien3-ol,3,7,11-trimethylPatchulan β -Periplanon 4-Hexadecen-6-yne Tricyclo 5.1.0.02,4 octane-5-carboxylic acid, 3,3,8,8-Tetra methyl Naphthalene,4isopropyl-1,6dimethyl6-Hexadecen-4-yne C16H28 2,61 34 18,45 Velleral C15H20O2 0,66 35 22,70 Hexadecanoic acid C16H32O2 0,35 36 23,32 0,20 38 All-trans-Farnesyl C17H28O2 acetate 29,97 Bis(2C24H38O4 ethylhexyl)phthalate Các thành phần khác chưa ñịnh danh 39 Tổng cộng 100 22 23 14,83 14,93 24 25 26 27 15,25 15,37 16,00 28 29 30 31 16,83 16,90 17,25 17,98 32 18,30 33 37 16,25 Footer Page 15 of 126 0,87 6,64 Header Page 16 of 126 16 3.2.6.3 Kết xác ñịnh thành phần hóa học tinh dầu thân rễ Alpinia breviligulata Gagnep Hình 3.11 Sắc ký đồ GC TD thân rễ Alpinia breviligulata Gagnep Bảng 3.10 TPHH TD thân rễ RMN (Alpinia breviligulata Gagnep.) Đà Nẵng Thời STT gian Hợp chất lưu 3,80 α-cis-Ocimen 4,08 Camphen 4,60 β-Pinen 5,05 Tricyclen 5,47 Limonen 5,62 1,8-Cineol 6,00 γ-terpinen 6,75 Cis-Verbennol 6,88 α-Linalol 10 7,45 (1R)-Endo-(+)-Fenchol 11 8,7 Borneol 12 9,18 Linalyl propanoat Footer Page 16 of 126 Công thức phân tử C10H16 C10H16 C10H16 C10H16 C10H16 C10H18O C10H16 C10H16O C10H18O C10H18O C10H18O C13H22O2 Hàm lượng (%) 7,05 4,70 12,69 1,21 2,44 10,56 0,38 0,64 1,76 3,75 9,42 1,41 Header Page 17 of 126 13 9,42 14 9,57 15 16 17 18 19 10,70 11,93 12,47 13,43 14,15 20 14,63 21 22 23 14,63 14,93 15,23 24 15,35 25 15,90 26 27 15,97 16,63 28 17,13 29 30 31 17,32 17,47 17,88 32 17,93 33 34 35 36 18,15 20,45 17 Fenchyl axetat C12H20O2 1-Isopropyl-2-metoxy-4C11H16O metylbenzen Bornyl axetat C12H20O2 C10H18O γ-terpineol Copaen C15H24 Isocaryophyllen C15H24 C15H24 α-caryophyllen Naphtalen,1,2,3,4,4A,5,6,8Aoctahydro-4A,8-dimetyl-2-(1C15H24 metyletenyl Patchoulen C15H24 C15H24 α-Humulen Cadina-3,9-dien C15H24 o-Menth-2-en, 4-isopropylidenC15H24 1-vinyl o-Menth-8-en-4-metanol,α,αC15H26O dimetyl-1-vinyl trans-Nerolidol C15H26O Caryophylen oxit C15H24O 12-Oxabicyclo 9.1.0 dodeca-3,7C15H24O dien,1,5,5,8-tetrametyl Guaiol C15H26O C15H26O γ-Eudesmol Agarospirol C15H26O 2phtalenmetanol,2,3,4,4A,5,6,7,8- C15H26O octahydro-α,4A,8-tetrametyl (-)-Globulol C15H26O Luciferin C15H24O2 Các thành phần khác chưa ñịnh danh Tổng cộng Footer Page 17 of 126 18,28 0,54 2,03 0,99 0,84 3,40 3,36 0,70 0,35 0,52 1,18 0,30 0,27 0,45 3,66 1,44 0,27 0,58 0,70 0,42 1,46 0,62 1,62 100 Header Page 18 of 126 18 3.2.7 So sánh thành phần hóa học tinh dầu RMN 3.2.7.1 So sánh thành phần hóa học tinh dầu cây, thân thân rễ RMN Đà Nẵng Bảng 3.11 Bảng so sánh TPHH tinh dầu lá, thân, thân rễ RMN (Alpinia breviligulata Gagnep.) Đà Nẵng STT Hàm lượng % Hợp chất Lá Thân Thân rễ α-cis-Ocimen 19,48 6,66 7,05 α-Myrcen 0,90 0,38 - β- Pinen - 0,47 12,69 Borneol - 0,66 9,42 Fenchyl axetat 1,2 18,28 Iso caryophyllen 0,58 0,38 3,4 Cadina-3,9-diene 3,12 6,34 1,18 Patchulan 15,38 29,44 - β -Periplanon 14,12 7,22 - 10 Copaen 0,22 5,72 0,84 11 Bornyl axetat 0,23 0,47 2,03 12 Linalol - 0,54 1,76 13 α-Humulen 0,98 0,62 0,52 14 Cis-Verbennol 5,01 0,35 0,64 15 Eucarvon 1,57 0,4 - 16 Caryophylen oxit 5,69 - 3,66 Footer Page 18 of 126 19 Header Page 19 of 126 3.2.7.2 So sánh thành phần hóa học tinh dầu thân rễ RMN Đà Nẵng, Thừa Thiên –Huế Quảng Trị Bảng 3.12 So sánh TPHH TD thân rễ RMN Đà Nẵng , Thừa Thiên Huế Quảng Trị Hàm lượng % ST T Thừa Hợp chất Đà Nẵng Thiên Quảng Trị Huế α-Pinen - - 8,93 Camphen 4,7 - 6,16 β-pinen 12,69 7,1 16,72 1,8-Cineol 10,56 - 12,74 trans-β β-Oximen 7,05 - 0,7 Linalol 1,76 - 3,65 Endo-Fenchol 3,75 - 1,90 Endo-borneol - 7,0 8,93 α-terpineol 0,99 - 4,39 10 Fenchyl axetat 18,28 8,8 7,39 11 Isocaryophylen 3,4 8,0 0,99 12 α-Humulen - 7,9 2,53 13 γ-Cadinen 1,18 - 0,23 14 Caryophylen oxit 3,66 10,5 2,71 Từ bảng 3.11 3.12 cho thấy: Thành phần hóa học tinh dầu thân rễ RMN gồm: α-cis-Ocimen (7,05%), Camphen (4,70%), β-Pinen (12,69%), 1,8-Cineol (10,56%), Borneol (9,42%), Fenchyl axetat (18,28%), Caryophylen oxit (3,36%) Kết cho thấy, tinh dầu thân rễ RMN Đà Nẵng có hàm lượng cấu tử Camphen, β-Pinen, l,8-Cineol, Borneol thấp tinh dầu thân rễ Footer Page 19 of 126 Header Page 20 of 126 20 RMN Quảng Trị, hàm lượng cấu tử khác cao đặc biệt Fenchyl axetat: Camphen (6,16%), β-Pinen (16,72%), l,8Cineol (12,74%), Bornerol (8.93%), Fenchyl axetat (7,39%), Caryophylen oxit (2,71%) Và ngược lại, hàm lượng cấu tử cao tinh dầu thân rễ RMN Thừa Thiên-Huế: Camphen (2,5%); βPinen (11,1%); l,8-Cineol (4,7%); Borneol (7,0%); Fenchyl axetat (3,4%) Điều ñặc biệt tinh dầu thân rễ RMN Đà Nẵng chứa caryophylen oxit (3,66%), ñó tinh dầu thân rễ RMN Thừa Thiên-Huế caryophylen oxit chiếm 10,5% 3.3 Kết nghiên cứu dịch chiết thân rễ Alpinia breviligulata Gagnep 3.3.1 Thành phần hoá học dịch chiết thân rễ Riềng mép ngắn (Alpinia breviligulata Gagnep.) dung mơi n-hexan Hình 3.17 Sắc kí đồ dịch chiết dung mơi n-Hexan Footer Page 20 of 126 Header Page 21 of 126 21 Bảng 3.13 TPHH dịch chiết n-hexan thân rễ RMN Đà Nẵng STT Thời gian lưu (phút) 9,063 9,713 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 Hợp chất Hàm lượng (%) 0,23 1,02 p-Menth-8-en-2-ol,acetate α-Farnesen p-Mentha-4,8-dien-2-acetic acid,5,910,863 2,81 epoxy-α-methylene-1-vinyl-,methyl ester 3,7-Cyclodecadien-1-one,10-(112,563 0,45 methylethenyl) Bicyclo 3,3,1 nonan-2-one,914,113 0,27 isopropylidene 14,914 Myristic acid 0,24 16,08 Nerol acetate 0,78 16,297 Pentadecylic acid 0,30 16,963 Palmitic acid,methyl ester 1,34 17,397 9-Hexadecenoic acid 0,81 17,72 Hexadecanoic acid 10,15 18,747 Cyclopentane, 1-hexyl-3-methyl 0,57 18,88 Heptadecanoic acid 0,39 19,147 Linolelaidic acid, methyl ester 2,32 19,214 Methyl cis-6-octadecenoate 2,97 19,497 Stearic acid, methyl ester 0,53 19,92 9,12-Octadecadienoic acid 24,65 20,163 Stearic acid 1,80 21,547 11-Eicosenoic acid,methyl ester 0,35 22,497 Adipic acid,dioctyl ester 0,85 24,17 Diisooctyl phthalate 45,19 1,99 Các cấu tử chưa ñịnh danh khác Tổng cộng 100 Từ bảng 3.13 cho thấy thành phần hóa học dịch chiết thân rễ RMN gồm cấu tử: Hexadecanoic acid (10,15%), 9,12Octadecadienoic acid (24,65%), Diisooctyl phthalate (45,19%) Qua Footer Page 21 of 126 22 Header Page 22 of 126 khảo sát phổ MS cho thấy ña số cấu tử thuộc nhóm hợp chất axit béo este 3.3.2 Thành phần hoá học dịch chiết thân rễ Riềng mép ngắn (Alpinia breviligulata Gagnep.) dung môi Clorofom Bảng 3.14 TPHH dịch chiết clorofom thân rễ RMN Đà Nẵng Công thức Hàm lượng Thời gian STT Hợp chất lưu phân tử (%) 3,49 Toluen C7H8 0,21 21,44 4-Hydroxy benzaldehyde C7H6O2 0,25 22,64 3-Hydroxy 4-methoxy benzaldehyde C8H8O3 0,53 24,42 Methyl paraben C8H6O3 0,16 38,20 n-Hexadecanoic acid C16H32O2 0,59 41,25 (R)-(-)-14-Methyl-8hexadecyn-1-ol C17H32O 0,14 41,38 Trans-13-Octadecenoic acid, methyl ester C15H28O2 0,15 43,79 1-Heptadecanol, acetate C19H38O2 0,11 46,78 Hexanedioic acid, bis (2ethylhexyl) ester C22H42O4 0,36 10 47,94 Hentriacontane C31H64 0,10 11 48,00 1,2-Benzenedicarboxylic acid, mono (2-ethylhexyl) ester C16H22O4 0,22 12 48,55 1,2-Benzenedicarboxylic acid, mono (2-ethylhexyl) ester C16H22O4 92,09 Thành phần khác chưa ñịnh danh 5,09 Tổng cộng 100 Footer Page 22 of 126 23 Header Page 23 of 126 Hình 3.20 Phổ MS 1,2-Benzenedicarboxylic acid, mono (2ethylhexyl) ester clorofom 3.3.3 Thành phần hoá học dịch chiết thân rễ Riềng mép ngắn (Alpinia breviligulata Gagnep.) dung môi Ethanol Bảng 3.15 TPHH dịch chiết Etanol thân rễ RMN Đà Nẵng STT 10 11 Thời gian lưu (phút) 4,84 8,62 12,22 21,12 21,45 Hợp chất Công thức Hàm lượng (%) phân tử C5H10O2 1,40 C6H6O 2,88 C7H8O2 2,84 C8H10O3 0,46 0,87 C7H6O2 3-Methyl butanoic acid Phenol 2-Methoxy phenol 2,6-dimethoxy phenol 4-Hydroxy benzaldehyde 38,93 Hexadecanoic acid, C18H36O2 ethyl ester 43,02 Ethyl oleate C20H38O2 46,78 Hexanedioic acid, bis C22H42O4 (2-ethylhexyl) ester 48,51 1,2C16H22O4 Benzenedicarboxylic acid, mono (2ethylhexyl) ester Thành phần khác chưa ñịnh danh Tổng cộng Footer Page 23 of 126 4,84 1,35 1,35 35,02 48,99 100 Header Page 24 of 126 24 Nhận xét: Qua kết thành phần hóa học dịch chiết RMN dung môi Ethanol Clorofom ta nhận thấy hai dung môi ñều cho phép chiết 1,2-Benzenedicarboxylic acid, mono (2ethylhexyl) ester với hàm lượng cao Hình 3.21 Phổ MS 1,2-Benzenedicarboxylic acid, mono (2-ethylhexyl) ester etanol Hình 3.22 Phổ MS Hexadecanoic acid, ethyl ester etanol 3.4 Thử hoạt tính sinh học dịch chiết RMN Dịch chiết thân rễ Alpinia breviligulata Gagnep có tính kháng khuẩn vi sinh vật ñã kiểm ñịnh Footer Page 24 of 126 Header Page 25 of 126 25 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Qua triển khai nội dung nghiên cứu, chúng tơi thu ñược số kết sau: Bằng phương pháp chưng cất lơi nước, tách xác ñịnh ñược hàm lượng, số khúc xạ, tỉ khối thành phần hóa học cuả tinh dầu thân cây, thân rễ Alpinia breviligulata Gagnep Đà Nẵng Kết cho thấy thành phần hóa học tinh dầu chất: α-cis-Ocimen(19,48%), Patchulan(15,38%) , β – Periplanon(14,12%), Caryophylen oxit(5,69%), (S)-cis-Verbenol (5,01%),1,3,5-Cyclononatriene,hexamethyl-(6,31%); tinh dầu thân chất: α-cis-Ocimen(6,66%), Copaen(5,72%), Cyclohexan,1,5diethenyl-3-methyl-2-methylene(4,46%), Cadina-3,9-diene , Patchulan(29,44%), β –Periplanon(7,22%) ;tinh dầu thân rễ chất: α-cis-Ocimen(7,05%), Camphen(4,7%), β-Pinen(12,69%), 1,8Cineol(10,56%), Borneol(9,42%), Fenchyl axetat(18,28%), Caryophylen oxit(3,66%) Bằng phương pháp ngâm chiết dung mơi metanol tách xác định thành phần hóa học dịch chiết Kết cho thấy thành phần hóa học dịch chiết thân rễ Alpinia breviligulata Gagnep dung môi n-hexan gồm: Hexadecenoic acid (10,15%), 9,12-Octadecadienoic acid(24,65%), Diisooctyl phthalate (45,19%) Kết thành phần hóa học dịch chiết thân rễ Alpinia breviligulata Gagnep dung môi clorofom etanol : 1,2-Benzenedicarboxylic acid, mono (2-ethylhexyl) ester Footer Page 25 of 126 Header Page 26 of 126 26 Đã xác định tính kháng khuẩn dịch chiết dung môi clorofom etanol thân rễ Alpinia breviligulata Gagnep KIẾN NGHỊ `Qua kết nghiên cứu chúng tơi kiến nghị : Tìm cách tách xác định cấu trúc cấu tử có hàm lượng lớn dịch chiết n-hexan , cloroform, ethanol thân rễ Alpinia breviligulata Gagnep Đà Nẵng Tiếp tục khảo sát hoạt tính sinh học với số chủng vi khuẩn khác Alpinia breviligulata Gagnep Đà Nẵng nhằm giải thích thỏa đáng tác dụng chữa bệnh đóng góp vào vườn thuốc y học cổ truyền quốc gia Footer Page 26 of 126 ... tách nghiên cứu hoạt tính cấu tử Vì vậy, chúng tơi chọn đề tài “NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC TINH DẦU VÀ DỊCH CHIẾT CỦA CÂY RIỀNG MÉP NGẮN Footer Page of 126 Header Page of 126 (ALPINIA BREVILIGULATA). .. đích nghiên cứu Nghiên cứu thành phần hoá học tinh dầu dịch chiết, thử hoạt tính sinh học dịch chiết Alpinia breviligulata Gagnep Đối tượng phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu thành phần hóa học tinh. .. 3.2 Kết nghiên cứu chiết tách tinh dầu 3.2.1 Tính chất cảm quan hàm lượng tinh dầu Bảng 3.1 Tính chất cảm quan hàm lượng tinh dầu Tinh dầu Thân Lá Thân rễ Tính chất cảm quan Hàm lượng tinh dầu