Header Page of 126 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG PHẠM THỊ THANH AN NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN MỘT SỐ AXIT HỮU CƠ TRONG LÁ CÂY SỐNG ĐỜI Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 27 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Đà Nẵng - Năm 2011 Footer Page of 126 Header Page of 126 Công trình ñược hoàn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Đào Hùng Cường Phản biện 1: PGS.TS Nguyễn Thị Thu Lan Phản biện 2: PGS.TS Lê Thị Liên Thanh Luận văn ñược bảo vệ Hội ñồng chấm Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ khoa học họp Đại học Đà Nẵng ngày 28 tháng 10 năm 2011 * Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm Thông tin Học liệu, Đại học Đà Nẵng - Thư viện Trường Đại học Sư Phạm, Đại học Đà Nẵng Footer Page of 126 Header Page of 126 MỞ ĐẦU Lý chọn ñề tài Cây sống ñời thuộc chi Kalanchoe, có tên khoa học Kalanchoe pinnata (Lamk.) Pers, họ Crassulaceae Các tên gọi khác thuốc bỏng, trường sinh, diệp sinh căn, ñà Nó vừa cảnh, vừa thuốc ñược sử dụng từ lâu ñời y học cổ truyền không Việt Nam mà giới Bộ phận sử dụng chủ yếu Trong dân gian, ñược dùng trị bỏng, kháng khuẩn, chống viêm nhiễm trùng vết loét sưng ñỏ, cầm máu, dùng làm thuốc giải ñộc, trị số bệnh da Cây sống ñời có ưu ñiểm dễ trồng, trồng nhà, dễ mọc từ cưa thời gian sinh trưởng ngắn mau cho thu hoạch Tuy nhiên nước ta sống ñời chủ yếu dùng làm cảnh Các nước giới ñã sử dụng sống ñời từ lâu với nhiều mục ñích phong phú Tại Brazil sử dụng chữa áp-xe, bệnh vòm họng, viêm phế quản, viêm khớp, bóng nước, bỏng, cục chai, viêm kết mạc, ho, viêm da, bệnh da liễu, ñau tai, eczema, phù, sốt, bệnh tăng nhãn áp, nhức ñầu, nhiễm trùng, viêm, côn trùng ñốt, vấn ñề ñường ruột, ngứa, sỏi thận, rối loạn bạch huyết, lở loét miệng căng thẳng, nhiễm trùng hô hấp, bệnh thấp khớp, vấn ñề da, ñau răng, bệnh lao, ung thư, loét, suy tiết niệu, mụn cơm, ho gà, vết thương, sử dụng thuốc an thần Tại Ecuador sử dụng chữa nhức mỏi, tiêu chảy, vấn ñề da Tại Ấn Độ sử dụng chữa cảm giác khó chịu bụng, sôi, vết bầm tím, bệnh tả, cầm máu sát trùng vết cắt, bệnh tiểu ñường, tiêu chảy, kiết lỵ, ñầy hơi, nhức ñầu, sỏi thận, khó tiêu, côn trùng cắn, ghẻ, lở loét, suy tiết niệu, vết thương Tại Mexico sử dụng chữa bệnh nhiễm trùng mắt, nhức ñầu, viêm Footer Page of 126 Header Page of 126 nhiễm, rối loạn kinh nguyệt, mụn, vết thương Tại Nicaragua sử dụng chữa ñau nhức, bỏng, cảm lạnh, ho, sốt, nhức ñầu, ñau, nhiễm trùng ñường hô hấp Tại Nigeria sử dụng chữa ho, ñau tai, eczema, viêm, mụn Tại Peru sử dụng chữa bệnh nhiễm trùng vi khuẩn, bóng nước, gãy xương, viêm phế quản, ung thư (ung thư hạch), viêm kết mạc, ho, ñau tai, nhiễm trùng mắt, ñộng kinh, viêm quầng, sốt, khí ñốt, nhức ñầu, ợ nóng, viêm, vấn ñề ñường ruột, ñau nửa ñầu, buồn nôn, vấn ñề da, lở loét, viêm niệu ñạo Tại Nam Mỹ sử dụng chữa bệnh suyễn, ñau tai, ñau ñầu, ức chế khối u Tại Mỹ sử dụng chữa thủy ñậu, sốt, ñau bụng…[15] Trên giới loài thuộc chi Kalanchoe ñược trọng nghiên cứu lĩnh vực: chiết tách, xác ñịnh thành phần hợp chất hữu cơ, nghiên cứu tính kháng khuẩn chống ñộc tế bào … Ở nước ta cho ñến nay, chưa có nghiên cứu mang tính thành phần, tính chất, khả ứng dụng, công nghệ khai thác hợp chất hoá học có sống ñời Đây vấn ñề ñáng ñược quan tâm nghiên cứu nhằm góp phần quy hoạch, khai thác, chế biến ứng dụng sản phẩm sống ñời cách có hiệu quả, khoa học Với lý trên, tác giả ñịnh chọn ñề tài: "Nghiên cứu chiết tách, xác ñịnh thành phần số axit hữu sống ñời” Mục ñích nghiên cứu - Xác ñịnh ñộ ẩm, hàm lượng tro sống ñời Kalanchoe Pinnata; - Xác ñịnh tổng lượng axit hữu tươi khô; - Định danh số axit hữu lá; - Thử hoạt tính kháng khuẩn kháng oxi hóa dịch chiết tươi Footer Page of 126 Header Page of 126 Đối tượng phạm vi nghiên cứu - Đối tượng: sống ñời xã Hòa Liên, huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng - Phạm vi nghiên cứu: + Xác ñịnh số số ñộ ẩm, hàm lượng tro tươi; + So sánh, xác ñịnh tổng lượng axit chiết ñược dung môi khác từ phương pháp chiết khác nhau; + Định danh axit loại phổ Axit phân cực yếu GC-MS axit phân cực mạnh sắc kí lỏng trao ñổi ion IC; + Tối ưu hóa số tiêu cho quy trình chiết tươi dung môi ancol etylic; + Thử hoạt tính kháng khuẩn kháng oxi hóa dịch chiết tươi Phương pháp nghiên cứu 4.1 Nghiên cứu lý thuyết Phương pháp nghiên cứu hợp chất thiên nhiên, tổng quan tài liệu ñặc ñiểm thực vật, thành phần hóa học, hoạt tính sinh học sống ñời Các phương pháp chiết tách xác ñịnh thành phần hóa học axit 4.2 Nghiên cứu thực nghiệm - Phương pháp chiết: ngâm kiệt, chưng ninh, chiết soxhlet dung môi có ñộ phân cực khác - Phương pháp xác ñịnh số vật lý hóa học: xác ñịnh ñộ ẩm phương pháp trọng lượng, xác ñịnh hàm lượng tro phương pháp tro hóa mẫu Footer Page of 126 Header Page of 126 - Phương pháp xác ñịnh thành phần hóa học, ñịnh danh xác ñịnh cấu trúc cấu tử phương pháp sắc kí lỏng trao ñổi ion IC sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS) - Thử hoạt tính kháng khuẩn kháng oxi hóa dịch chiết tươi Ý nghĩa khoa học thực tiễn Cung cấp thông tin khoa học thành phần axit công dụng phối hợp sống ñời góp phần nâng cao giá trị sử dụng sống ñời Cấu trúc luận văn Luận văn có 71 trang ñó phần mở ñầu trang, kết luận kiến nghị trang, tài liệu tham khảo có trang Luận văn có 14 bảng, 41 hình ñồ thị Nội dung chia thành chương Chương 1: Tổng quan (19 trang) Chương 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu (10 trang) Chương 3: Kết thảo luận (34 trang) Footer Page of 126 Header Page of 126 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU CÂY SỐNG ĐỜI Cây sống ñời thuộc [2] Lớp: Magnoliopsida Bộ: Saxifragales Họ: thuốc bỏng (Crassulaceae) Chi: Kalanchoe Bao gồm khoảng 33 chi, khoảng 1.400 loài Giới thiệu vài loài sống ñời thuộc chi Kalanchoe 1.1.1 Trường sinh lông chim, thuốc bỏng - Kalanchoe pinnata.(Lam.) Pers 1.1.2 Trường sinh xuân, báo hỉ - Kalanchoe blossfeldiana Poelln 1.1.3 Trường sinh nguyên - Kalanchoe integra (Medik.) O Kuntze 1.1.4 Trường sinh rách - Kalanchoe laciniata (L.) DC 1.1.5 Sống ñời Mortagei - Kalanchoe mortagei Raym 1.1.6 Trường sinh rằn - Kalanchoe tubiflora(Haw) 1.1.7 Trường sinh muỗng - Kalanchoe spathulata (Poir) DC 1.1.8 Trường sinh tròn - Sedum lineare Thunb 1.2 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA KALANCHOE PINNATA 1.2.1 Sử dụng truyền thống nước giới 1.2.2 Công dụng ñã ñược nghiên cứu Kháng khuẩn: Lá nước ép tươi ñã chứng minh vai trò quan trọng hoạt ñộng kháng khuẩn ñối với Staphylococcus, E coli, Shigella, Bacillus Pseudomonas [14]; Chống ung thư: Các có chứa nhóm chất gọi bufadienolides Nó cấu trúc hoạt ñộng tương tự hai glycoside tim khác digoxin digitoxin (thuốc ñược sử dụng ñể ñiều trị lâm sàng suy tim sung huyết số bệnh liên quan) Footer Page of 126 Header Page of 126 Bufadienolides Kalanchoe ñã chứng minh nghiên cứu lâm sàng có tính kháng khuẩn, phòng ngừa ung thư [30] Bersaldegenin1,3,5-orthoacetate ức chế tăng trưởng số tế bào ung thư; Chống giun kí sinh: Trích xuất nước ép Kalanchoe ñã ñược chứng minh ngăn ngừa ñiều trị leishmaniasis (một bệnh ký sinh trùng phổ biến nước nhiệt ñới ñược truyền qua vết thương hở) người ñộng vật [21]; Chống côn trùng: Bryophyllin A cho thấy hoạt ñộng mạnh mẽ chống lại ấu trùng côn trùng instar thứ ba tằm [31]; Chống dị ứng: Ngoài tính chất kháng khuẩn nó, công dụng truyền thống Kalanchoe trị bệnh hô hấp ho ñược giải thích nghiên cứu chứng minh nước ép có tiềm chống histamine chống dị ứng Trong nghiên cứu (với chuột lợn guinea) nước ép ñã bảo vệ chống lại chất hóa học gây phản ứng phản vệ tử vong chọn lọc ngăn chặn thụ thể histamine phổi; Chống viêm: Các nghiên cứu thể khẳng ñịnh Kalanchoe làm giảm sốt, kháng viêm, giảm ñau tác dụng giãn Hiệu ứng chống viêm ñã ñược giải thích phần tăng khả hệ miễn dịch [33]; An thần: Kalanchoe ñã thể thuốc an thần chống trầm cảm nghiên cứu ñộng vật Các hiệu ứng phần ñể chiết xuất thể khả làm tăng mức ñộ chất truyền thần kinh não gọi GABA (gamma aminobutyric axit) [15]; Phòng, chống loét: Trích xuất bảo vệ chuột khỏi loét, gây cảm ứng căng thẳng, aspirin, ethanol histamine giảm Footer Page of 126 Header Page of 126 căng thẳng Hyper [21] Các có chứa hydroxyproline chữa lành vết thương [24]; Chất chống oxi hóa: Lá có chứa hợp chất phenolic axit phenolic Quercetin chất chống oxy hóa [33], [11]; 10 Chống kí sinh trùng sốt rét: Những nghiên cứu gần ñây tập trung làm sáng tỏ khả chữa bệnh sốt rét sống ñời, nhiên chưa cho kết rõ ràng thành phần có công dụng cho tác dụng [9], [32] 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU HÓA HỌC THỰC VẬT CỦA CHI KALANCHOE 1.3.1 Nhóm axit phenolic 1.3.1.1 Axit caffeic Danh pháp: - (3,4-Dihydroxyphenyl 2-propenoic axit) 1.3.1.2 Axit Cinnamic Danh pháp: 3-phenylprop-2-enoic 1.3.1.3 Axit Ferulic Danh pháp: 3-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl) prop-2-enoic 1.3.1.4 Axit Protocatechuic Danh pháp: Axit 3,4-ñihydroxybenzoic 1.3.2 Axit béo 1.3.3 Axit hữu phân cực 1.3.3.1 Axit malic 1.3.3.2 Axit citric [40] Footer Page of 126 Header Page 10 of 126 10 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Lá sống ñời ñược hái xã Hòa Liên, huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng Tên khoa học: Kalanchoe pinnata.(Lam.) Pers Thuộc họ thuốc bỏng: Crassulaceae Chi: Kalanchoe 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Phương pháp hóa học 2.2.1.1 Phân tích trọng lượng [1] - Bản chất phương pháp - Phân loại - Một số kỹ thuật phương pháp [4] - Ưu, nhược ñiểm phương pháp 2.2.1.2 Phương pháp chiết chất rắn [4] - Chiết ñơn giản lần - Chiết ñơn giản, nhiều lần 2.2.1.3 Phương pháp chuẩn ñộ axit – bazơ 2.2.2 Phương pháp vật lí 2.2.2.1 Phương pháp sắc kí lỏng trao ñổi ion (IC) [3], [6] Định nghĩa Sắc kí ion loại sắc kí lỏng- rắn Về kĩ thuật thiết bị sắc kí ion giống kiểu sắc kí lỏng- rắn nói chung Điều khác biệt pha tĩnh, loại hợp chất có khả trao ñổi ion (cation anion) Quá trình sắc kí dựa vào phản ứng trao ñổi ion thành phần pha ñộng chất trao ñổi ion ñược Footer Page 10 of 126 Header Page 12 of 126 12 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU 3.1.1 Xử lý nguyên liệu, xác ñịnh tổng axit sống ñời tươi, khô phương pháp chuẩn ñộ cân Lá tươi Nguyên liệu Độ ẩm Soxhlet C2H5OH Lượng tro Chưng ninh H2O Dịch Bã Dịch Bã + KOH 0,1N, Đuổi + KOH 0,1N, Tẩy màu ñun giờ, dung ñun giờ, C ngâm ngày hoạt tính ngâm ngày Tẩy màu Dịch than Dịch Chuẩn ñộ NaOH hoạt tính 0,01N Axit hóa Chuẩn ñộ HCl ñặc Lọc, sấy, cân Xác ñịnh NaOH 0,01N X/ñịnh axit phân cực axit béo Footer Page 12 of 126 Axit hóa HCl ñặc Lọc, sấy, cân X/ñịnh Axit phân X/ñịnh axit béo cực Header Page 13 of 126 13 Lá khô Ngâm kiệt, ete dầu hỏa, 10 ngày ñêm, nhiệt ñộ phòng Bã Dịch Soxhlet C2H5OH, Chiết kiệt KOH 0,5N Dịch Soxhlet CHCl3, Chiết kiệt KOH 0,5N Axit hóa HCl ñặc Lắc kĩ với CHCl3 nhằm Axit hóa HCl ñặc Đuổi dung môi chuyển RCOOH vào Đuổi hết dung môi CHCl3 Lọc, sấy, cân Hòa cặn vào H O cất Tẩy màu Lọc, sấy, cân Chuẩn ñộ phần không phần dịch axit phân Xác ñịnh Xác ñịnh cực axit béo axit phân Chuẩn ñộ Xác ñịnh Xác ñịnh axit béo cực Footer Page 13 of 126 Header Page 14 of 126 14 3.1.2 Định danh xác ñịnh thành phần axit dịch chiết sống ñời phổ GC-MS Lá tươi Chiết kiệt dd Soxhlet, C2H5OH KOH 0,1N Dịch muối Dịch màu xanh RCOOK Axit hóa Kiềm hóa KOH 0,1N HCl ñặc, dư Đuổi dung môi, thu cắn Chiết kiệt etyl axetat Axit hóa HCl ñậm ñặc dư Chạy phổ GC-MS Chiết kiệt etyl axetat Chạy phổ GC-MS Footer Page 14 of 126 Header Page 15 of 126 15 3.1.3 Định danh thành phần axit dịch chiết sống ñời IC Lá tươi Soxhlet, C2H5OH Dịch màu xanh Tẩy màu C hoạt tính Chạy phổ IC 3.1.4 Tối ưu vài tiêu ñối với phương pháp chiết Soxhlet dung môi C2H5OH Chiết Soxhlet C2H5OH Thời gian chiết Tỉ lệ rắn lỏng 3.1.5 Thử hoạt tính sinh học dịch chiết H2O Chưng ninh với H2O Kháng vi khuẩn, kháng nấm Footer Page 15 of 126 Chống oxi hóa Peroxydaza Header Page 16 of 126 16 3.2 TIẾN HÀNH THỰC NGHIỆM 3.2.1 Thu nguyên liệu 3.2.2 Xử lí nguyên liệu 3.2.3 Xác ñịnh số ñại lượng vật lí 3.2.3.1 Xác ñịnh ñộ ẩm 3.2.3.2 Xác ñịnh hàm lượng tro sống ñời 3.2.4 Xác ñịnh tổng lượng axit hữu 3.2.4.1 Chiết Soxhlet dung môi C2H5OH 3.2.4.2 Chưng ninh H2O 3.2.4.3 Ngâm kiệt ete dầu hỏa 3.2.4.4 Soxhlet dung môi CHCl3 3.2.5 Định danh xác ñịnh thành phần axit dựa vào GC-MS 3.2.5.1 Chiết C2H5OH 3.2.5.2 Chưng ninh dung môi H2O 3.2.6 Định danh xác ñịnh thành phần axit phương pháp sắc kí trao ñổi ion IC 3.2.6.1 Xác ñịnh axit citric 3.2.6.2 Xác ñịnh vài axit phân cực mạnh 3.2.7 Nghiên cứu vài yếu tố ảnh hưởng tổng lượng axit hữu phương pháp chiết soxhlet C2H5OH 3.2.7.1 Ảnh hưởng thời gian chiết 3.2.7.2 Ảnh hưởng tỉ lệ rắn/lỏng 3.2.8 Thử hoạt tính sinh học dịch chiết H2O 3.2.8.1 Thử hoạt tính kháng sinh vật kiểm ñịnh 3.2.8.2 Thử khả chống oxi hóa Footer Page 16 of 126 Header Page 17 of 126 17 3.3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.3.1 Khảo sát ñại lượng vật lý 3.3.1.1 Độ ẩm Nhận xét: Độ ẩm trung bình là: 92,3% 3.3.1.2 Hàm lượng tro Nhận xét: Hàm lượng tro trung bình 1,06 % 3.3.2 Kết xác ñịnh tổng lượng axit sống ñời tươi khô phương pháp chuẩn ñộ cân Sau chiết mẫu theo sơ ñồ 3.1.1, ñem cân rắn chuẩn ñộ dịch Ta thu kết bảng 3.3 Tổng lượng axit thu phương pháp chiết khác 1.4 14 1.2 12 10 0.8 0.6 0.4 0.2 0 /C H C /e t kh ô kh ô V NaOH (ml) m axit béo (g) l3 m (g) 16 e V (ml) ñược so sánh ñồ thị 3.1 Hình 3.11: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tổng lượng axit vào dung môi Footer Page 17 of 126 Header Page 18 of 126 18 Nhận xét Đối với tươi chiết C2H5OH thu nhiều axit H2O Đối với khô dung môi CHCl3 tốt ete dầu hỏa Chiết với nguyên liệu khô lượng axit thu nguyên liệu tươi theo quan sát tác giả tiến hành sấy khô nguyên liệu lượng lớn axit ñã thất thoát CHCl3 chiết ñược nhiều axit béo 3.3.3 Kết xác ñịnh axit dịch chiết sắc kí khí ghép khối phổ GC-MS 3.3.3.1 Kết phổ GC-MS dịch chiết chưng ninh KOH Kết ñịnh danh thành phần axit sống ñời phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) thể hình 3.12, bảng 3.4 Một số este ñược xác ñịnh phổ GC-MS hình 3.13 3.14 Nhận xét Từ kết hình 3.12 bảng 3.4, ta ñịnh danh ñược 26 cấu tử Trong ñó hầu hết este cấu tử hydrocacbon mạch dài, phân cực yếu Qua kết phổ GC-MS cho dịch chưng ninh sống ñời tươi KOH ta nhận thấy chiết với KOH thu ñược hầu hết dạng este, ñiều giải thích axit tồn dạng tự dạng este dạng ete Khi chiết với KOH tác giả mong muốn phân ly liên kết thu axit dạng muối, sau ñó dùng axit HCl ñẩy axit dạng tự Chuyển axit vào etyl axetat (là dung môi phân cực yếu có khả hòa tan tốt axit béo) Song thu ñược este axi béo axit hóa muối axit béo tạo axit, axit sinh tác dụng ancol bị phân cắt phản ứng thủy phân KOH lại tạo este Footer Page 18 of 126 Header Page 19 of 126 19 Hình 3.12: Phổ ñồ GC-MS dịch chiết chưng ninh KOH Bảng 3.4: Một số hợp chất ñược ñịnh danh GC-MS mẫu1 Footer Page 19 of 126 Header Page 20 of 126 20 3.3.3.2 Kết phổ GC-MS dịch chiết soxhlet dung môi C2H5OH Kết ñịnh danh thành phần axit sống ñời phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) thể hình 3.15, bảng 3.5 Nhận xét Qua kết phổ GC dịch chiết soxhlet C2H5OH xác ñịnh ñược số cấu tử axit este Trong ñó có số este hàm lượng cao như: ñimetyl malat 33,39%, etyl stearat 21,55%, etyl panmitat 19,74% axit: axit hexadecen-9-oic, hexandecanoic, stearic Sự xuất nhiều este etyl este hóa xảy dịch bị axit hóa ñiều kiện chưa loại bỏ hết hoàn toàn dung môi C2H5OH So sánh kết phổ GC dịch chiết phương pháp chưng ninh soxhlet ancol etylic ta thấy dịch chiết ancol etylic bên cạnh este xuất vài axit Theo tác giả dịch chiết dung môi cồn thu nhiều hợp chất cồn dung môi hữu nên chiết hợp chất hữu tốt Vậy sau chiết tươi dung môi ancol etylic dung dịch KOH ta kết luận Chiết ancol etylic thu nhiều hợp chất hữu dung dịch KOH Nổi bật có este hàm lượng cao như: Este diisooctylphtalat 5.22%; Este etylpalmitat: 19.74%, Este Dietylmalat: 33.39%, Este etylstearat: 21.55% Bằng phương pháp GC-MS xác ñịnh ñược 13 axit phân cực yếu sống ñời tồn dạng axit tự este bảng 3.6 Footer Page 20 of 126 Header Page 21 of 126 21 Hình 3.15: Phổ ñồ GC – MS dịch chiết soxhlet C2H5OH Bảng 3.5: Một số chất ñược ñịnh danh GC-MS mẫu Footer Page 21 of 126 Header Page 22 of 126 22 3.3.4 Kết xác ñịnh axit sống ñời IC 3.3.4.1 Xác ñịnh thành phần axit citric Kết xác ñịnh hàm lượng axit citric sống ñời thể phổ ñồ hình 3.18 hình 3.19 Hình 3.18: Phổ IC chuẩn Hình 3.19: Phổ IC axit axit citric citric mẫu sống Các thông số kết thu ñược thể bảng 3.8 Bảng 3.8: Kết xác ñịnh lượng axit citric sống ñời Vm (ml) Vñm (ml) f Diện tích pic Cñc (mg/l) C (mg/l) 1,000 10 0,0090 0,238 2,38 Kết thu ñược diện tích pic mẫu sống ñời 0,009 Hàm lượng axit citric dịch chiết 2,38 mg/l Footer Page 22 of 126 Header Page 23 of 126 23 3.3.4.2 Kết xác ñịnh thành phần số axit lại Kết xác ñịnh hàm lượng axit phổ ñồ hình 3.20 hình 3.21 Hình 3.21: Phổ IC axit mẫu sống ñời Hình 3.20: Phổ IC chuẩn axit lactic, axit malic, axit succinic, axit oxalic Bảng 3.10: Kết xác ñịnh hàm lượng axit lactic, axit malic, axit succinic, axit oxalic Chỉ tiêu Vm Vñm F Axit lactic Axit malic Axit succinic 1,000 Axit oxalic Nhận xét: Footer Page 23 of 126 10 Cñc C mg/l (mg/l) 0,0394 0,643 6,43 0,0411 1,371 13,71 0,0065 0,437 4,37 0,0040 0,043 0,43 S pic Header Page 24 of 126 24 Bằng phương pháp sắc kí ion (IC) ñã xác ñịnh hàm lượng axit hữu với nồng ñộ tương ứng bảng 3.10 3.3.5 Khảo sát số yếu tổ ảnh hưởng tổng lượng axit hữu phương pháp chiết Soxhlet C2H5OH 3.3.5.1 Khảo sát thời gian chiết Đồ thị biểu diễn phụ thuộc lượng axit thu ñược vào thời gian chiết: 20 0.5 15 0.4 0.3 10 0.2 0.1 0 6h 7h 8h 9h V NaOH (ml) m axit béo (g) 10h 11h 12h Hình 3.22: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc lượng axit thu ñược vào thời gian chiết Nhận xét: Ta nhận thấy lượng axit chiết ñược tăng dần ñạt cực ñại vào khoảng thời gian chiết 10h Sau ñó lượng axit ổn ñịnh Vậy thời gian chiết tối ưu cho 20g tươi 200mL dung môi C2H5OH 10giờ thu ñược 0,4g axit béo lượng NaOH 0,01N dùng chuẩn ñộ 17mL 3.3.5.2 Khảo sát theo tỷ lệ rắn / lỏng Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tỉ lệ rắn lỏng vào tổng lượng axit thu ñược Footer Page 24 of 126 Header Page 25 of 126 25 20 0.6 0.5 15 0.4 10 0.3 0.2 V NaOH (ml) m axit béo (g) 0.1 50 m l 10 0m l 15 0m l 20 0m l 25 0m l 30 0m l Hình 3.23: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc lượng axit thu ñược vào tỉ lệ rắn lỏng Nhận xét: Vậy tỉ lệ rắn/lỏng tối ưu phương pháp chiết soxhlet C2H5OH 20g tươi 250mL C2H5OH Chiết 10h thu axit béo 0,5g lượng NaOH 0,01N dùng chuẩn ñộ 18mL 3.3.6 Thử hoạt tính sinh học dịch chiết nước 3.3.6.1 Thử hoạt tính kháng khuẩn Kết quả: Nồng ñộ ức chế 50% phát triển số vi sinh vật nấm kiểm ñịnh –IC50 ( µ g/mL) >0,57.10-4N 3.3.6.2 Thử hoạt tính chống oxy hoá Peroxydaza Kết quả: Mẫu thể hoạt tính chống oxi hoá Peroxydaza nồng ñộ >0,57.10-4 Nhận xét: Dịch chiết axit sống ñời thể hoạt tính kháng chủng vi sinh vật kiểm ñịnh hoạt tính chống oxi hoá peroxydaza nồng ñộ 0,57.10-4N Nồng ñộ thấp, ta nhận thấy dịch chiết axit từ sống ñời có chứa hợp chất có hoạt tính sinh học cao Footer Page 25 of 126 Header Page 26 of 126 26 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Trong trình nghiên cứu ñề tài ñã ñạt số kết sau KẾT LUẬN Độ ẩm trung bình sống ñời tươi Kalanchoe Pinnata là: 92,3%, hàm lượng tro trung bình là: 1,06% Nguyên liệu cho nhiều axit tươi, dung môi chiết cho tổng lượng axit nhiều C2H5OH, thời gian chiết 10 giờ, tỉ lệ rắn/ lỏng chiết hợp lí 20g tươi 250mL dung môi Xác ñịnh axit phân cực yếu phương pháp phổ GC-MS cho thấy có 13 axit hữu khác tồn dạng axit tự este Đặc biệt ñó có axit tồn dạng este có nồng ñộ cao như: malic 33.39%, panmitic 19.74%, stearic 21.55% Xác ñịnh vài axit phân cực phương pháp sắc kí trao ñổi ion IC cho ta kết xác ñịnh ñược axit hữu với nồng ñộ tương ứng là: axit malic 13,71 mg/l; axit lactic 6,43 mg/l; axit succinic 4,37mg/l; axit citric 2,38 mg/l; axit oxalic 0,43 mg/l Thử hoạt tính kháng sinh vật kiểm ñịnh hoạt tính chống oxy hoá peroxydaza cho kết mẫu dịch chiết thể hai hoạt tính nồng ñộ >0,57.10-4N KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu xác ñịnh lượng axit ñặc biệt nhóm axit phenolic tổng lượng hợp chất phenol sống ñời có ứng dụng quan trọng Nghiên cứu, xác ñịnh thành phần hóa học lá, thân, rễ sống ñời ñược trồng khu vực thổ nhưỡng khác ñể khảo sát mở rộng phát triển sau Footer Page 26 of 126 ... dụng sản phẩm sống ñời cách có hiệu quả, khoa học Với lý trên, tác giả ñịnh chọn ñề tài: "Nghiên cứu chiết tách, xác ñịnh thành phần số axit hữu sống ñời” Mục ñích nghiên cứu - Xác ñịnh ñộ ẩm,... Kết xác ñịnh axit sống ñời IC 3.3.4.1 Xác ñịnh thành phần axit citric Kết xác ñịnh hàm lượng axit citric sống ñời thể phổ ñồ hình 3.18 hình 3.19 Hình 3.18: Phổ IC chuẩn Hình 3.19: Phổ IC axit axit... ñộ phần không phần dịch axit phân Xác ñịnh Xác ñịnh cực axit béo axit phân Chuẩn ñộ Xác ñịnh Xác ñịnh axit béo cực Footer Page 13 of 126 Header Page 14 of 126 14 3.1.2 Định danh xác ñịnh thành