Header Page of 126 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Công trình ñược hoàn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG NGUYỄN THỊ HỒNG Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Đào Hùng Cường Phản biện 1: GS.TSKH.Trần Văn Sung NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN VÀ CẤU TẠO MỘT SỐ HỢP CHẤT HÓA HỌC TRONG TINH DẦU TỪ CÂY NGẢI CỨU Ở QUẢNG NAM Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60.44.27 Phản biện 2: PGS.TS Trương Thị Minh Hạnh Luận văn ñã ñược bảo vệ Hội ñồng bảo vệ chấm Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 30 tháng12 năm 2011 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm thông tin - Học liệu - Đại học Đà Nẵng - Thư viện trường Đại học Sư Phạm, Đại học Đà Nẵng Đà Nẵng - Năm 2011 Footer Page of 126 Header Page of 126 MỞ ĐẦU Lý chọn ñề tài Nước ta có khí hậu nhiệt ñới ẩm nên thảm thực vật phong phú ña dạng Dân tộc Việt nam có truyền thống sử dụng Đối tượng nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu 4.1 Nghiên cứu lý thuyết 4.2 Phương pháp thực nghiệm loài thảo mộc làm thuốc chữa bệnh Theo số liệu thống kê - Lấy mẫu, thu hái xử lí mẫu thảm thực vật Việt Nam có 12000 loài, số ñó có - Xác ñịnh số tiêu hóa lý 3200 loài thực vật ñược sử dụng làm thuốc y học dân gian - Phương pháp chưng cất lôi nước [1], [2], [8], [10] - Phương pháp chiết tách dung môi hữu Trong loại thực vật ñó, ngải cứu vị thuốc thông dụng ñông y ñồng thời vị thuốc dân gian ñược phổ - Xác ñịnh thành phần hóa học tinh dầu phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC/MS) biến rộng rãi nước, gia ñình nông thôn, phòng - Xác ñịnh thành phần hóa học dịch chiết dung chữa nhiều chứng bệnh Dân gian thường sử dụng ngải cứu ñể chế môi hữu (metanol, cloroform, hexan) phương pháp sắc kí khí biến làm ăn rán trứng gà với ngải cứu, nấu cạnh thịt nạc ghép khối phổ (GC/MS) với ngải cứu, ñặc biệt người sử dụng làm thuốc chữa bệnh Ý nghĩa khoa học thực tiễn ñề tài ñau ñầu, làm thuốc ñiều kinh, rong kinh, ñộng thai, sẩy thai, tăng Cấu trúc luận văn sức khỏe cho thể, thiếu máu, ho, viêm họng, huyết áp thấp, Để làm sáng tỏ công dụng ngải cứu, tác giả luận văn chọn ñề tài: “Nghiên cứu xác ñịnh thành phần cấu tạo Luận văn gồm 75 trang, ñó có 34 bảng 18 hình Phần mở ñầu (4 trang), kết luận kiến nghị (2 trang), tài liệu tham khảo (2 trang) Nội dung luận văn chia làm chương số hợp chất hóa học tinh dầu từ ngải cứu Quảng Chương 1- Tổng quan (21 trang) Nam” Chương 2- Những nghiên cứu thực nghiệm (13 trang) Mục ñích nghiên cứu - Xác ñịnh hàm lượng, tiêu hóa lý số hợp chất hóa học tinh dầu ngải cứu tỉnh Quảng Nam - Xây dựng quy trình chiết tách số hợp chất hóa học từ dịch chiết ngải cứu - Xác ñịnh thành phần hóa học, công thức cấu tạo số Footer of 126 hợpPage chất 2chính dịch chiết Chương 3- Kết bàn luận (33 trang) Header Page of 126 Chương I - TỔNG QUAN tế bào chết, làm mềm da vết chai, giúp máu lưu thông mạnh hơn, làm dịu ñang bị ñau chỗ bị sưng hay viêm Ngoài ra, 1.1 KHÁI QUÁT VỀ HỌ CÚC & GIỚI THIỆU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM VỀ CÂY NGẢI CỨU 1.1.1 Khái quát họ cúc 1.1.1.1 Phân loại khoa học 1.1.1.2 Phân bố 1.1.1.3 Đặc tính thực vật 1.1.2 Giới thiệu số ñặc ñiểm ngải cứu 1.1.2.1 Đặc ñiểm thực vật Ngải cứu có tên khoa học Artemisia vulgris L Ngoài có tên khác là: Ngải Diệp, Bắc ngải, Nhả ngải, Quá sú, Ngỏi, Cỏ linh chi Giới: Plantae Ngành: Angiospermae Lớp: Magnoliidae Bộ: Cúc (Asterales) Họ: cúc (Asteraceae) Chi: Astemisia L Loài: Artemisia vulgris L 1.1.2.2 Đặc ñiểm sinh thái 1.1.2.3 Dược tính ngải cứu ăn hàng ngày người Việt 1.1.2.4 1.2 Y học dân gian từ ngải cứu[12], [13] TỔNG QUAN VỀ TINH DẦU 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Phân loại 1.2.3 Vai trò 1.2.4 Cách sử dụng 1.2.5 Tính chất vật lí tinh dầu 1.2.6 Thành phần hóa học chủ yếu tinh dầu ñễ bay 1.2.7 Kiểm ñịnh cách bảo quản tinh dầu 1.2.8 Định lượng tinh dầu 1.3 LÝ THUYẾT VỀ CHƯNG CẤT 1.3.1 Định nghĩa 1.3.2 Những ảnh hưởng chưng cất nước 1.3.3 Phân loại 1.3.4 Phương pháp chưng cất lôi nước 1.3.5 Các phương pháp tiến hành tách sắc ký 1.3.6 Các phương pháp sắc kí Chương 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Hiện Ngải cứu vị thuốc thường dùng nhân dân Việt Nam, ñược dùng chữa trị bệnh kinh nguyệt không ñều, bụng lạnh ñau, tử cung lạnh có thai, thổ huyết, nục huyết, băng lậu kinh nhiều, có thai, ñới hạ phụ nữ Trị mụn trứng cá, Page mẩn ngứa, ghẻ lở, tăng sức khoẻ cho thể Ngải cứu tẩy Footer of 126 2.1 NGUYÊN LIỆU 2.1.1 Thu mẫu cây, xác ñịnh tên khoa học Header Page of 126 Nguyên liệu ñể nghiên cứu Ngải cứu ñược thu hái vào cuối tháng ñầu tháng năm 2011 huyện Đại Lộc, tỉnh Quảng Lá ngải cứu non, ngải cứu già Nam Cây Ngải cứu ñược gọi Ngải Diệp, Bắc ngải, Nhả ngải, Quá sú, Ngỏi, Cỏ linh chi Có tên khoa học Artemisia vulgris L, X lí thuộc họ Cúc Asteraceae [5] 2.1.2 Xử lý mẫu 2.2 HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 2.2.1 Hóa chất 2.2.2 Thiết bị thí nghiệm 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Xác ñịnh ñộ ẩm Chiết phương pháp chưng cất lôi nước Xác ñịnh hàm lượng tro 2.3.1 Lấy mẫu xử lý mẫu + Phần tươi (lá ngải cứu non ngải cứu già): dùng ñể xác ñịnh Xác ñịnh hàm lượng kim loại Tinh dầu Làm khan Na2SO4 ñộ ẩm, hàm lượng, chưng cất lôi nước + Phần khô: dùng ñể chiết tách dung môi hữu Xác ñịnh thành phần, công thức cấu tạo hợp chất 2.3.2 Xác ñịnh ñộ ẩm, hàm lượng tro, hàm lượng kim loại 2.3.2.1 Xác ñịnh ñộ ẩm nguyên liệu Khảo Khảo sát sát các yếu tố ảnh hưởn ưởng ñến ñến trìn trình chưng cất 2.3.2.2 Xác ñịnh hàm lượng tro nguyên liệu 2.3.2.3 Xác ñịnh hàm lượng kim loại Đo GC-MS 2.3.3 Nghiên cứu chiết tách số hợp chất hóa học tinh dầu ngải cứu [9] 2.3.3.1 Chiết tách tinh dầu Quy trình chiết tách tinh dầu hình 2.5 Hình 2.5 Sơ ñồ chiết tách tinh dầu ngải cứu 2.3.3.2 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng ñến lượng tinh dầu 2.3.3.3 Xác ñịnh hàm lượng tinh dầu 2.3.3.4 Nghiên cứu xác ñịnh thành phần, cấu tạo số hợp chất tinh dầu 2.3.4 Nghiên cứu chiết tách số hợp chất hóa học dịch chiết ngải cứu dung môi Footer Page of 126 2.3.4.1 Phương pháp chiết Header Page of 126 10 a Phương pháp chưng ninh b Phương pháp soxhlet 2.3.4.2 Khảo sát chọn dung môi chiết - Dung môi: butanol, etanol metanol a Bằng phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử UV-VIS b Bằng phương pháp phân tích trọng lượng 2.3.4.3 Khảo sát ñiều kiện chiết a Bằng phương pháp chưng ninh a1 Khảo sát thời gian chiết a2 Khảo sát tỉ lệ rắn – lỏng b Bằng phương pháp chiết soxhlet b1 Khảo sát thời gian chiết b2 Khảo sát tỉ lệ rắn-lỏng 2.3.4.3 Xác ñịnh thành phần cấu tạo số hợp chất Hình 2.6 Quy trình chiết tách hợp chất dung môi dịch chiết Sử dụng phương pháp phân tích sắc ký khí - khối phổ (GC/MS) ñể phân tích xác ñịnh thành phần, cấu tạo số hợp chất dịch chiết Quy trình chiết tách số hợp chất hóa học ngải cứu dung môi hữu cơ, ñược thực theo sơ ñồ hình 2.6 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 XÁC ĐỊNH ĐỘ ẨM, HÀM LƯỢNG TRO VÀ HÀM LƯỢNG KIM LOẠI 3.1.1 Xác ñịnh ñộ ẩm Độ ẩm trung bình ngải cứu non 84,33% Độ ẩm trung bình ngải cứu già 80,89% 3.1.2 Hàm lượng tro Độ tro trung bình ngải cứu non 13,92% Độ tro trung bình ngải cứu già 15,24% 3.1.3 Hàm lượng kim loại Thu xử lý nguyên liệu Căn vào ñịnh số 867/1998/ QĐ-BYT ngày 04 tháng năm 1998 Bộ y tế việc ban hành danh mục “Tiêu Footer Page of 126 Bột ngải cứu Header Page of 126 12 11 chuẩn vệ sinh ñối với lương thực thực phẩm”, ñối chiếu với mục hàm Bảng 3.8.Thể tích tinh dầu ngải cứu già không xay lượng kim loại cho phép rau thành phần kim loại nặng Thời gian (h) ngải cứu nghiên cứu nhỏ nhiều so với hàm lượng tối ña Vtinh dầu(ml) 0,3 0,7 0,9 1,0 1,0 1,0 cho phép nên sử dụng, an toàn, không ảnh hưởng ñến sức khoẻ người * Nguyên liệu xay nhỏ: Bảng 3.9 Kết khảo sát thể tích tinh dầu ngải cứu non xay nhỏ 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH TINH DẦU Thời gian (h) 3.2.1 Tính chất cảm quan tinh dầu ngải cứu non Vtinh dầu(ml) 0,4 0,6 0,9 1,1 1,1 1,1 ngải cứu già: Tinh dầu thu ñược theo phương pháp chưng cất lôi nước từ ngải cứu non ngải cứu già ñều có màu màu vàng nhạt, mùi hắc, vị cay, nhẹ nước, không tan nước 3.2.2 Kết khảo sát yếu tố ảnh hưởng ñến hàm lượng 3.2.2.1 Kết khảo sát nguyên liệu không xay nguyên liệu xay: Tiến hành chưng cất 100g nguyên liệu (lá ngải cứu non Vtinh dầu(ml) 0,9 1,2 1,3 1,4 1,4 1,4 nguyên liệu xay nhỏ 3.2.2.2 Kết khảo sát thời gian chưng cất Cân khoảng 100g nguyên liệu (lá ngải cứu non ngải cứu ngải cứu già) với thể tích nước 300 ml thời gian 2-7 già), xay nhỏ, ngâm với 300 ml dung dịch NaCl 10% giờ, sau * Nguyên liệu không xay: ñó tiến hành chưng cất lôi nước thời gian từ 2, 3, 4, 5, Bảng 3.7.Thể tích tinh dầu ngải cứu non không xay Vtinh dầu(ml) Thời gian (h) Nhận xét: Tinh dầu thu ñược có hiệu suất cao ñối với tinh dầu Thời gian (h) Bảng 3.10 Kết khảo sát thể tích tinh dầu ngải cứu già xay nhỏ 0,1 0,3 0,5 0,8 0,8 0,8 6, Kết thu tinh dầu ñược: Bảng 3.11.Tthời gian chưng cất tinh dầu ngải cứu non Thời gian (giờ) Vtinh dầu(ml) 0,8 1,0 1,1 1,2 1,2 1,2 Bảng 3.12 Thời gian chưng cất tinh dầu ngải cứu già Thời gian (giờ) Vtinh dầu(ml) Footer Page of 126 0,8 1,1 1,3 1,4 1,4 1,4 Header Page of 126 14 13 Nhận xét: Theo phương pháp chưng cất lôi nước, 3.2.2.4 Kết khảo sát nồng ñộ muối ăn NaCl: thời gian từ ñến giờ, thể tích tinh dầu thu ñược tăng Ngâm khoảng 100g nguyên liệu (lá ngải cứu non ngải cứu già) nhanh, từ ñến giờ, thể tích tinh dầu tăng thêm không ñáng kể, xay nhỏ 300 ml dung dịch muối ăn NaCl với nồng ñộ lần sau thể tích không tăng thêm Do vậy, chọn lượt 0%, 5%, 10%, 15% 20% Sau ñó tiến hành thời gian chưng cất thích hợp chưng cất 3.2.2.3 Kết khảo sát tỉ lệ khối lượng tươi / thể tích nước Cân khoảng 100g nguyên liệu (lá ngải cứu non ngải cứu già) xay nhỏ, với thể tích nước 200 ml, 250 ml, 300 ml, Bảng 3.15 Khảo sát nồng ñộ muối ăn NaCl ñối với ngải cứu non Nồng ñộ NaCl(%) 10 15 20 Vtinh dầu(ml) 0,9 1,3 1,5 1,5 1,5 350 ml, 400 ml ñun phương pháp chưng cất lôi nước Kết khảo sát tỉ lệ khối lượng tươi/thể tích nước ñược trình bày bảng 3.13 3.14, ñây Bảng 3.13 Khảo sát tỉ lệ khối lượng ngải cứu non/ thể tích nước mnguyên liệu/Vnước( g/ml) 1:2,0 1:2,5 1:3,0 1:3,5 1:4,0 Vtinh dầu(ml) 0,8 1,1 1,2 1,2 1,2 Bảng 3.16 Khảo sát nồng ñộ muối ăn NaCl ñối với ngải cứu già Nồng ñộ NaCl(%) 10 15 20 Vtinh dầu(ml) 1,2 1,5 1,6 1,6 1,6 Nhận xét: Căn vào thể tích tinh dầu thu ñược khảo sát nồng ñộ muối ăn tăng dần từ 0% ñến 20%, ta lựa chọn nồng ñộ NaCl thích hợp dùng ñể ngâm nguyên liệu trước chưng cất Bảng 3.14 Khảo sát tỉ lệ khối lượng ngải cứu già / thể tích nước mnguyên liệu/Vnước( g/ml) 1:2,0 1:2,5 1:3,0 1:3,5 1:4,0 Vtinh dầu(ml) 0,9 1,2 1,5 1,5 1,5 Nhận xét: Qua bảng chọn thể tích nước 300 ml thể tích thích hợp ñể chưng cất 100 g nguyên liệu, hay nói cách khác, tỉ lệ khối lượng nguyên liệu / thể tích nước 1:3 tỉ lệ thích hợp cho trình chưng cất thu tinh dầu ngải cứu Kết ñúng ñối với loại non già tinh dầu 10% ñối với hai loại nguyên liệu khảo sát Điều kiện chưng cất lôi nước thích hợp là: + Nguyên liệu: xay nhỏ + Thời gian chưng cất: + Tỉ lệ khối lượng tươi/thể tích nước: 1:3 (g/ml) +Nồng ñộ muối ăn: 10% 3.2.3 Kết xác ñịnh hàm lượng tinh dầu Hàm lượng tinh dầu ngải cứu non 1,27% Hàm lượng tinh dầu ngải cứu già 1,57% Footer Page of 126 Header Page of 126 15 16 3.2.4 Kết nghiên cứu xác ñịnh thành phần, hàm lượng tetramethyl 15 germacrene B 16 17 C15H24 14,178 0,67 p-menth-3-ene,2-isopropenyl-1-vinyl C15H24 14,261 0,81 alpha-cubebene C15H24 14,578 0,15 18 alpha-amorphene C15H24 15,261 0,14 So sánh sắc kí ñồ - khối phổ thu ñược hình 3.2 với thư viện chuẩn 19 copaene C15H24 15,478 3,35 cho thấy thành phần tinh dầu ngải cứu Quảng Nam 20 cyclobuta1,2:3,4dicyclopetene,decahydro- C15H24 15,678 0,36 công thức cấu tạo số hợp chất hóa học tinh dầu ngải cứu có khoảng 52 cấu tử (bảng 3.25) Các cấu tử chủ yếu thuộc 3A-methyl 21 elemene C15H24 15,845 3,17 nhóm monoterpen, secquiterpen, diterpen bao gồm dẫn xuất 22 isocaryophyllene C15H24 16,862 19,22 phenol, ancol, xeton Trong ñó có 51 hợp chất ñược xác ñịnh với 23 1H-cyclopenta 1,3cyclopropa 1,2bezene, C15H24 17,011 0,89 C12H20O 17,245 0,40 thành phần là: isocaryophyllen (19,22%); Germacrene D octahydro-7-methyl-3methylene 24 (18,67%); Dispiro2.0.2.5 undecan, 8-methylene (14,15%); O-menth8-ene-4-methanol,α,α-dimethyl-1-vinyl-(1S,2S,4R) (6,15%); Cadina- stereoisomer 25 chưa ñịnh danh 26 naphthalene,1,2,3,4,6,8a-hexahydro-1- 3,9-diene (6,00%); Alpha-caryophyllen (4,12%) CTPT 0,35 17,478 0,36 gian bicyclo7.2.0 undec-4-ene,4,11,11-trimethyl- C15H24 17,561 0,50 8-methylene Thời Hợp chất 17,345 C15H24 isopropyl-4,7-dimethyl 27 Bảng 3.19 Thành phần hóa học tinh dầu ngải cứu TT 2-petanone,5-(2-methylenecyclohexyl)- (%) lưu 28 alpha-caryophyllene C15H24 17,745 4,12 29 germacrene D C15H24 18,562 18,67 30 1H-cycloprop[E]azulene,decahydro-1,1,7- C15H24 18,811 2,70 01 beta-cis-ocimene C10H16 4,043 0,27 02 β-pinen C10H16 4,960 0,21 31 Delta cadinene C15H24 18,911 0,40 03 beta-mycrene C10H16 5,093 0,16 32 Delta muurolene C15H24 19,211 0,36 04 limonene C10H16 6,093 0,07 33 cadina-3,9-diene C15H24 19,395 6,00 05 2-norpinene,3,6,6- trimethyl C10H16 6,160 0,11 34 cadina-1,3,5-triene C15H22 19,478 0,30 06 tricyclene C10H16 6,433 0,44 35 o-menth-8-ene-4-methanol,α,α-dimethyl-1- C15H26O 20,312 6,15 07 beta-limalool C10H18O 7,927 0,13 08 trimethyl-4-methylene vinyl-(1S,2S,4R) cyclohexen-5,6-diethenyl-3-methyl C11H16 8,777 1,63 36 caryophylleneoxide C15H24O 21,095 0,26 09 Dispiro2.0.2.5 undecan, 8-methylene C12H18 9,161 14,15 37 ledol C15H26O 21,428 0,41 10 p-menth-1-en-4-ol C10H18O 10,261 0,07 38 alpha-bisabolol C15H26O 22,178 0,92 11 linalyl propanoate C13H22O2 10,727 0,07 39 eudesmol C15H26O 22,345 1,02 12 isopyrethrone C11H14O 12,011 0,07 40 cadinol C15H26O 22,578 0,72 13 cyclohexen-3,4-diethenyl-3-methyl C11H16 12,161 0,11 41 1-cadin-4-en-10-ol C15H26O 22,662 1,11 14 tricyclo3.2.1.02,7oct-3-ene,2,3,4,5- C12H18 13,094 0,50 42 copaen-11-ol C15H24O 22,828 0,50 Footer Page of 126 Header Page of 126 17 18 43 eudesm-4(14)-en-11-ol C15H26O 22,995 3,28 44 3,7,11,15-tetramethyl-2-hexadecen-1-ol C20H40O 25,995 0,06 45 hexadecanoic acid C16H32O2 27,945 0,38 46 3,7,11,15-tetramethylhexadecen-1,3,6,10- C20H32 28,495 0,04 Kết luận: qua phương pháp khảo sát chọn dung môi chiết, ta chọn dung môi metanol ñể chiết cấu tử ngải cứu 3.3.2 pentaene cứu 47 2,4-dioctylphenol C22H38O 28,845 0,05 48 phytol C20H40O 29,495 3,72 49 hexadecanan diallyl acetal C22H42O2 29,795 0,09 50 kauren-18-ol,acetate,(4.beta) C22H34O2 29,895 0,14 51 pentacosane C25H52 33,396 0,08 52 bis(2-ethylhexyl)phthalate C24H38O4 33,979 0,15 3.3.2.1 Bằng phương pháp chưng ninh a Khảo sát thời gian chiết: thời gian chiết thích hợp cấu tử ngải cứu ñiều kiện 4h b Khảo sát tỉ lệ rắn – lỏng: Như tỉ lệ rắn – lỏng thích hợp ñể chiết cấu tử từ Như tinh dầu ngải cứu thu ñược số hợp chất ngải cứu 10g nguyên liệu /100ml metanol có hàm lượng cao bảng 3.22 sau: Bảng 3.20 Thành phần hóa học có hàm lượng cao tinh dầu Hợp chất 3.3.2.2 Bằng phương pháp chiết soxhlet a Khảo sát thời gian chiết: Qua bảng 3.25 thời gian thích hợp ñể ngải cứu TT Kết khảo sát ñiều kiện chiết cấu tử từ ngải CTPT Thời gian lưu (%) chiết soxhlet 8h thu ñược khối lượng cặn lớn b Khảo sát tỉ lệ rắn – lỏng: Qua bảng 3.26 ta chọn ñược tỉ lệ rắn – 01 isocaryophyllene C15H24 16,862 19,22 02 germacrene D C15H24 18,562 18,67 03 Dispiro2.0.2.5 undecan, 8-methylene C12H18 9,161 14,15 04 o-menth-8-ene-4-methanol,α,α- C15H26O 20,312 6,15 05 dimethyl-1-vinyl-(1S,2S,4R) cadina-3,9-diene C15H24 19,395 6,00 lợi phương pháp chiết soxhlet với lượng bột ngải cứu alpha-caryophyllene C15H24 17,745 4,12 ban ñầu lượng dung môi thời gian chiết phương pháp 06 lỏng thích hợp ñể chiết 10g nguyên liệu/ 100ml dung môi Từ số liệu thu ñược phương pháp chưng ninh so sánh với phương pháp chiết soxhlet ta thấy phương pháp chưng ninh thuận chiết soxhlet mà khối lượng cặn thu ñược lại xấp xỉ Do ñó chọn phương pháp chưng ninh ñể chiết cấu tử từ 3.3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU DỊCH CHIẾT LÁ NGẢI CỨU 3.3.1 Kết khảo sát chọn dung môi chiết Dung môi khảo sát: butanol, etanol metanol 3.3.1.1 Bằng phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử UV-VIS 3.3.1.2 Bằng phương pháp phân tích trọng lượng ngải cứu, với tỉ lệ rắn – lỏng 10g nguyên liệu/ 100ml dung môi methanol chưng ninh 3.3.3 Phương pháp phân lập chất dung môi - Quá trình phân lập tiến hành qua dung môi có ñộ phân cực tăng dần là: n-hexan, chloroform, etylaxetat, methanol Footer Page of 126 Header Page 10 of 126 20 19 - Cách tến hành: theo sơ ñồ + Cho 25 ml dung môi n-hexan vào hòa tan cao methanol ñược 3.3.3 Xác ñịnh thành phần hóa học dịch chiết ngải cứu dung môi dịch chiết màu vàng ñậm, khuấy ñều ñến cân bằng, cho vào phểu chiết 3.3.3.1 Thành phần hóa học dịch chiết ngải cứu dung ñể yên giờ, chiết lấy phần dịch lỏng màu vàng nhạt dung môi hexan môi n-hexan Sau ñó tiến hành chiết liên tục nhiều lần, lần 25 ml dung môi n-hexan ñến phần dịch lỏng n-hexan ñến lần chiết cuối trở nên không màu thu ñược dịch n-hexan + Cho phần cắn hexan sau qua n-hexan có màu vàng ñậm, tiếp tục cho 25ml dung môi chloroform vào khuấy ñều, làm tương tự cho ñến phần dịch lỏng dung môi cloroform hết màu vàng nhạt thu ñược dịch chloroform + Cho phần cắn chloroform sau qua dung môi cloroorm có màu vàng lại cho tiếp dung môi etylaxetat vào, khuấy ñều thực thao tác cho ñến phần dịch lỏng dung môi etylaxetat từ màu vàng chuyển sang không màu dừng thu ñược dịch etylaxetat + Cho phần cắn etylaxetat sau qua dung môi etylaxetat có màu ñỏ ñậm, tiếp tục cho 25ml dung môi metanol vào, khuấy ñều thực thao tác cho ñến phần dịch lỏng dung môi metanol chuyển sang không màu dừng thu ñược dịch methanol Qua trình phân lập ta thu ñược dịch chiết dung môi n-hexan, cloroform, etylaxetat, methanol Đuổi bớt dung môi, ñem ño GC/MS máy ño sắc ký khí ghép khối phổ (GC/MS) Perkin Elmer (Trung tâm dịch vụ phân tích thí nghiệm Tp Hồ Chí Minh, số 2, Nguyễn Văn Thủ, phường Đa Kao, quận 1, Tp Hồ Chí Minh) Footer Page 10 of 126 Bảng 3.27 Thành phần cấu tử dịch chiết n-hexane Header Page 11 of 126 21 22 Bảng 3.28 Thành phần cấu tử dung môi n-hexane Bảng 3.30 Thành phần cấu tử dung môi chloroform Diện tích peak % TT Scan Tên Phytol 904589312 8,17 1273 Hexandecanoic acid 433549024 18,42 1415 9,12-Octadecadienoic acid 165849520 9,42 1365 Phytol 355174336 15,09 1287 Hexandecanoic acid 2005697280 18,12 1406 Linolenic acid,methyl ester 189959520 8,07 TT Scan Tên hợp chất 1373 Diện tích peak % 3.3.3.4 Thành phần hóa học dịch chiết ngải cứu 3.3.3.2 Thành phần cấu tử dịch chiết cloroform dung môi metanol Bảng 3.29 Thành phần cấu tử dịch chiết chloroform Bảng 3.33 Thành phần cấu tử dịch chiết metanol Nhận xét: Thành phần hoá học cấu tử dịch chiết metanol sau ñược ño GC/MS có 20 cấu tử thành phần cấu tử ñược trình bày bảng 3.46, sau Bảng 3.34 Thành phần cấu tử dịch chiết methanol Footer Page 11 of 126 TT Scan Công thức phân tử Tên gọi Tỉ lệ(%) 1190 C7H16O4 M=194 Myo-in ositol, 4-C-methyl 15,14 1271 C16H32O2 M=256 Hexa ñecanoic axit 16,98 1403 C39H76O5 M=624 9,12-Octa decadienoic acid 12,59 Header Page 12 of 126 24 23 Nhận xét: Thành phần chất dịch metanol có hàm KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ lượng lớn gồm có cấu tử, ñó cấu tử có công thức phức tạp hàm lượng lớn l Myo-inositol, 4-C-methyl với hàm lượng 15,14% KẾT LUẬN Đã xác ñịnh ñược ñộ ẩm, hàm lượng tro vô cơ, hàm lượng kim loại nặng, hàm lượng tinh dầu ngải cứu - Độ ẩm (lá ngải cứu non 84,33%, ngải cứu già 80,89%), hàm lượng tro vô (lá ngải cứu non 13,92%, ngải cứu già 15,24%), hàm lượng tinh dầu (lá ngải cứu non 1,27%, ngải cứu già 1,57%) - Hàm lượng kim loại nặng ngải cứu nằm giới hạn cho phép sử dụng Bộ y tế Đã khảo sát ñiều kiện thích hợp ñể chiết tách tinh dầu cấu tử có dịch chiết dung môi hữu - Điều kiện thích hợp ñể chiết tinh dầu là: + Lá ngải cứu già, + Nguyên liệu: xay nhỏ1 phút + Thời gian chưng cất: + Tỉ lệ khối lượng tươi/thể tích nước: 1:3 ( g/ml) +Nồng ñộ muối ăn: 10% - Khảo sát dung môi tối ưu ñể chiết tách cấu tử ngải cứu metanol Điều kiện thích hợp ñể chiết tách cấu tử ngải cứu phương pháp chưng ninh dung môi metanol với thời gian giờ, tỉ lệ rắn- lỏng 10g nguyên liệu/100ml metanol c Đã ñịnh danh ñược chất có tinh dầu ngải cứu dịch chiết ngải cứu dung môi - Trong tinh dầu: cấu tử chủ yếu thuộc nhóm monoterpen, Footer Page 12 of 126 secquiterpen, diterpen bao gồm dẫn xuất phenol, ancol, xeton Header Page 13 of 126 25 Trong ñó có 51 hợp chất ñược xác ñịnh với thành phần là: isocaryophyllen (19,22%); Germacrene D (18,67%); Dispiro2.0.2.5 undecan, 8-methylene (14,15%); O-menth-8-ene-4-methanol,α,αdimethyl-1-vinyl-(1S,2S,4R) (6,15%); Cadina-3,9-diene (6,00%); Alpha-caryophyllen (4,12%) Trong dịch chiết n-hexan, cloroform,etylaxetat: Số lượng cấu tử, cấu tử có hàm lương cao dịch chiết dung môi là: Dung môi Số lượng cấu tử Cấu tử hàm lượng cao Hàm lượng (%) n-hexan 49 Hexadecanoic 18,12 Clorofom 35 Hexadecanoic 18,42 Etylaxetat 28 Phthalic anhydride 25,07 Metanol 20 Hexadecanoic 16,98 KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu theo hướng sâu hơn: chạy sắc ký cột ñể tách ñược cấu tử tinh khiết từ tinh dầu dịch chiết ngải cứu, ño cộng hưởng từ hạt nhân ñể xác ñịnh cấu trúc hợp chất Làm giàu cấu tử chính, thử hoạt tính sinh học nghiên cứu phản ứng chuyển hóa chúng Có thể nghiên cứu theo hướng mở rộng ñể xác ñịnh thành phần chất có hoa ngải cứu, so sánh với thành phần chất có ngải cứu Từ ñó, lựa chọn ñược nguồn nguyên liệu thích hợp ñể tiếp tục nghiên cứu hoạt tính sinh học phục vụ cho y học Footer Page 13 of 126  ... 3,35 cho thấy thành phần tinh dầu ngải cứu Quảng Nam 20 cyclobuta1,2:3,4dicyclopetene,decahydro- C15H24 15,678 0,36 công thức cấu tạo số hợp chất hóa học tinh dầu ngải cứu có khoảng 52 cấu tử (bảng... Quảng Nam - Xây dựng quy trình chiết tách số hợp chất hóa học từ dịch chiết ngải cứu - Xác ñịnh thành phần hóa học, công thức cấu tạo số Footer of 126 hợpPage chất 2chính dịch chiết Chương 3- Kết... quan (21 trang) Nam Chương 2- Những nghiên cứu thực nghiệm (13 trang) Mục ñích nghiên cứu - Xác ñịnh hàm lượng, tiêu hóa lý số hợp chất hóa học tinh dầu ngải cứu tỉnh Quảng Nam - Xây dựng quy