Header Page of 126 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRÀ THANH SƠN NGHIÊN CỨU TỔNG HỢP LEVOFLOXACIN CÔNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN QUỐC VƯỢNG Phản biện 1: GS TS ĐÀO HÙNG CƯỜNG TỪ HỢP CHẤT TRUNG GIAN (-)-(3S)-METHYLBENZOXAZINE QUANG HOẠT Phản biện 2: GS TSKH TRẦN VĂN SUNG Chuyên ngành: Hoá hữu Mã số: 60 44 27 Luận văn ñược bảo vệ Hội ñồng chấm luận văn tốt nghiệp thạc sĩ khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 26 tháng 08 năm 2011 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm Thông tin - Học liệu, Đại học Đà Nẵng Đà Nẵng - Năm 2011 Footer Page of 126 - Thư viện trường Đại học sư phạm, Đại học Đà Nẵng Header Page of 126 khuẩn ñã kháng thuốc hệ trước, ñó levofloxacin thuốc ñược tiêu thụ mạnh thị trường Các MỞ ĐẦU fluoroquinolon hệ bao gồm clinafloxacin, gemifloxacin, ĐẶT VẤN ĐỀ moxifloxacin, sitafloxacin, có tác dụng rõ rệt chống vi khuẩn kị khí Các fluoroquinolon nhóm kháng sinh hiệu cao ñang giữ ñược hoạt tính chống vi khuẩn gram âm vi ñược sử dụng rộng rãi giới Từ axit nalidixic chất kháng khuẩn gram dương fluoroquinolon hệ 3, ñược sử dụng sinh ñầu tiên thuộc nhóm quinolon hệ ñược phát cho vi khuẩn ñã kháng thuốc Lesher vào năm 1962 [1] ñến ñã phát triển ñến fluoroquinolon Ciprofloxacin levofloxacin loại thuốc tiêu thụ mạnh hệ Các thuốc kháng sinh nhóm quinolon ñược phân loại thành dòng thuốc họ fluoroquinolone thị trường thuốc thế hệ dựa vào hoạt tính kháng khuẩn chúng[2] Các quinolon giới Vào năm 2004, hai loại thuốc ñã thu khoảng 3,3 tỉ ñô la hệ bao gồm axit nalidixic, axit oxolinic, axit piromidic, Mỹ chiếm tới 65% tổng thu dòng thuốc họ fluoroquinolone cinoxacin, flumequine, ñược dùng ñiều trị nhiễm trùng Riêng với ciprofloxacin tháng ñầu năm 2008 ñã bán 242 ñường tiết niệu không biến chứng, ñã hạn chế sử dụng số vi triệu ñô la Mỹ levofloxacin năm 2008 ñã thu 1,4 tỉ khuẩn kháng thuốc Các quinolon hệ hay fluoroquinolon ñặc ñô la Mỹ Điều ñó chứng tỏ nhu cầu loại thuốc thị trưng có thêm nguyên tử flo vào cấu trúc quinolon, ñược ñưa trường thuốc vô lớn thị trường vào năm 1980 ciprofloxacin, enoxacin, Ciprofloxacin levofloxacin ñang ñược sử dụng Việt nadifloxacin, norfloxacin, ofloxacin, có dược lực tiến hệ Nam theo ñường nhập biệt dược thuốc (riêng ñầu tăng cường hoạt tính kháng vi khuẩn gram âm hiếu khí, có tác levofloxacin nhập dạng thuốc với giá thành dụng toàn thân tác dụng phụ, ñược sử dụng ñiều trị nhiễm cao) ñó chủ ñộng ñược nguồn thuốc Hơn nước ta trùng ñường tiết niệu, viêm ñài bể thận có biến chứng vùng nhiệt ñới nóng ẩm nên dễ mắc nhiều bệnh truyền nhiễm vi biến chứng, bệnh lây qua ñường tình dục, viêm tuyến tiền liệt, nhiễm khuẩn khả bùng phát dịch bệnh lớn Trong ñợt dịch trùng da mô mềm ñó ciprofloxacin ofloxacin ñược sử tiêu chảy cấp Cục quản lý dược Bộ y tế ñã phải yêu cầu nhập gấp dụng rộng rãi Các fluoroquinolon hệ bao gồm số loại kháng sinh, ñó có kháng sinh thuộc nhóm levofloxacin, tosufloxacin, fluoroquinolon ñể ñiều trị Các chất kháng sinh thuốc grepafloxacin, có phổ hoạt tính rộng ñối với vi khuẩn gram âm gerneric ñã hết hạn bảo hộ quyền (ciprofloxacine vào tháng 10 vi khuẩn gram dương, ñược ñịnh lâm sàng bao gồm viêm phổi năm 2008 Levofloxacin vào tháng 6-2009) nên có tính pháp lý cho cộng ñồng, viêm xoang cấp ñợt cấp viêm phế quản mãn việc nghiên cứu sản xuất Các qui trình tổng hợp chúng ñã ñược tính, nhiễm trùng ñường tiết niệu bệnh lậu, ñược sử dụng với vi nghiên cứu công bố tạp chí patent (mặc dù không ñầy Footer Page of 126 pazufloxacin, spafloxacin, Header Page of 126 ñủ) với mức ñộ nghiên cứu phòng thí nghiệm Đó khai lượng lớn chương trình hoá dược sở ñể nghiên cứu qui trình tổng hợp thuốc kháng sinh qui mô pilốt, tiến tới xây dựng qui trình sản xuất thuốc kháng sinh ñể cung cấp biệt dược cho ngành dược phẩm góp phần ñảm bảo an ninh thuốc nước nhà Đáp ứng yêu cầu cấp thiết này, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - Thu thập tài liệu, lựa chọn qui trình, chuẩn bị vật tư hóa chất thiết bị thực ñề tài chương trình “Nghiên cứu khoa học công nghệ trọng ñiểm - Sử dụng phương pháp tổng hợp hữu cơ quốc gia phát triển công nghiệp hoá dược ñến năm 2020” Bộ Công phương pháp Gould-Jacobs, Grohe-Heitzer, Gester-Hayakawa, Chu- Thương ñã xét duyệt thực ñề tài “Nghiên cứu qui trình công Mitscher nghệ tổng hợp số loại kháng sinh nhóm fluoroquinolon”, cụ thể - Tiến hành phản ứng ñiều kiện nhiệt ñộ, dung môi, tác nghiên cứu qui trình công nghệ tổng hợp ciprofloxacin nhân, lượng mole tác nhân xúc tác khác ñể tìm ñiều kiện tối levofloxacin Viện Hóa học Việt Nam ñơn vị chủ trì Theo ưu cho phản ứng thuyết minh ñề cương ñề tài, sản phẩm levofloxacin ñược dự ñịnh tổng hợp qua nhiều bước ñi qua hợp chất trung gian (-)-(3S)-7,8difluoro-3,4-dihydro-3-methyl-2H-[1,4]benzoxazine (gọi tắt hợp chất trung gian (-)-(3S)- methyl-benzoxacine quang hoạt) - Sử dụng phương pháp kết tinh, sắc ký cột ñể tách sản phẩm phản ứng - Sử dụng phương pháp tách ñồng phân quang học ñể tinh chế sản phẩm quang học trung gian sản phẩm cuối Để ñóng góp vào việc thực ñề tài, khuôn khổ - Sử dụng phương pháp phân tích phổ việc xác ñịnh cấu luận văn thạc sĩ ñặt vấn ñề: “Nghiên cứu tổng hợp trúc sản phẩm IR, NMR, MS, HPLC ño suất quay cực [α]D levofloxacin từ hợp chất trung gian (-)-(3S)- methylbenzoxacine Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI quang hoạt” LUẬN VĂN ĐỐI TƯỢNG VÀ MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu: Kết nghiên cứu quy trình tổng hợp thuốc kháng sinh levofloxacin từ hợp chất trung gian (-)-(3S)-methylbenzoxazine Hợp chất levofloxacin: axit (-)-(3S)-9-fluoro-2,3-dihydro-3- quang hoạt ñề tài luận văn có ý nghĩa khoa học thực tiễn methyl-10(-4-methyl-1-yl-1-piperazinyl)-7-oxo-7H-pyrido[1,2,3-de]- góp phần thực thành công ñề tài nghiên cứu quy trình công nghệ 1,4-benzoxazine-6-carboxylic tổng hợp thuốc kháng sinh levofloxacin Kết làm tiền ñề cho 2.2 Mục ñích nghiên cứu: việc nghiên cứu triển khai sản xuất thuốc kháng sinh levofloxacin qui Nghiên cứu quy trình tổng hợp thuốc kháng sinh levofloxacin Mục ñích cuối ñề tài luận văn nghiên cứu quy trình tổng hợp thuốc kháng sinh levofloxacin làm tiền ñề cho nghiên cứu triển Footer Page of 126 mô lượng lớn sau BỐ CỤC CỦA LUẬN VĂN Luận văn gồm 78 trang, ñó có 13 bảng, 27 hình 15 sơ Header Page of 126 ñồ Phần mở ñầu trang; kết luận kiến nghị trang; tài liệu tham khảo trang Nội dung luận văn chia làm ba chương: - Chương Tổng quan (25 trang) 2.2 Hóa chất thiết bị - Chương Nghiên cứu thực nghiệm (19 trang) 2.3 Thực nghiệm - Chương Kết thảo luận (23 trang) 2.3.1 Tổng hợp diethyl (-)-(3S)-7,8-difluoro-3-methyl-2,3-dihydro- CHƯƠNG TỔNG QUAN 4H[1,4]-benzoxazine-4-yl]-methylene malonate 1.1 Giới thiệu chung nhóm quinolon [7], [9], [10], [12], [16], 2.3.1.1 Tổng hợp diethyl (-)-(3S)-7,8-difluoro-3-methyl-2,3-dihydro- [17], [18], [20], [22], [24], [25], [26], [28] 4H[1,4]-benzoxazine-4-yl]-methylene malonate sử dụng xúc tác bazơ Phản ứng tổng quát: 1.2 Mối quan hệ hoạt tính cấu trúc [7], [17] 1.3 Cơ chế tác dụng thuốc [11], [21], [23], [27] C OO C H F 1.4 Tác dụng phụ thuốc kháng sinh nhóm fuoroquinolone C H5 O 10 F 1.5 Hợp chất levofloxacin [22] NH 1O 1.6 Hoạt tính kháng vi khuẩn levofloxacin C OOC 2H FW : 21 6 B a zo CO OC 2H F CO OC 2H F N O FW : 55 1.7 Các phương pháp tổng hợp levofloxacin 1[13],[14], [17], [21], TổngPhản hợp chất sử dụng nhânbenzoxacin với hệ xúc5tác CơSơ sởñồlý2.2 thuyết: ứng7cộng loạitácgiữa vớibazơ die [24], [25] Cơ sở lý thuyết: Phản ứng cộng loại benzoxacin với 1.8 Các phương pháp tách ñồng phân quang học ñược sử dụng tổng hợp levofloxacin diethyl-ethoxymethylene malonate Qui trình tổng hợp chung : Bazơ (12mmol) ñược thêm vào CHƯƠNG NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 2.1 Nội dung nghiên cứu dimethylformamide (DMF) (45ml) 0oC Sau ñó dung dịch (-)(3S)-7,8-difluoro-3,4-dihydro-3-methyl-2H-[1,4]-benzoxazine Trên sở lý thuyết nghiên cứu phương pháp tổng hợp (1,85g, 10mmol) diethyl ethoxymethylene malonat (2,3g, tài liệu nghiên cứu qui trình tổng hợp thuốc 12mmol) DMF (5ml) ñược nhỏ giọt vào hỗn hợp kháng sinh levofloxacin từ hợp chất trung gian (-)-(3S)- 0oC Hỗn hợp phản ứng ñược nâng dần lên nhiệt ñộ phòng khuấy methylbenzoxazine quang hoạt qua bước sơ ñồ 2.1 tiếp Sau ñó dung dịch NH4Cl bão hòa ñã ñược thêm vào ñến trung tính hỗn hợp sản phẩm ñược chiết etyl axetat F C OOC H5 C 2H O 10 F 1O NH C OOC H5 C OO C2 H5 F F KOt-Bu/D M F (N aO t-Bu /DMF ; Na H/D MF) CO OC 2H (C H 3C O)2 O /H2 SO Dịch chiết ñược rửa nước muối bão hòa, làm khô Na2SO4, 50 -6 0o C 1% quay cất loại dung môi thu ñược chất dầu màu vàng Chất dầu ñược N O O F 13 15 12 F 10 KOH /DMF/AcOH Footer Page of 126 14 N NH 2' N O 3' 13 10 15 F CO OH F tách qua cột silica gel với hệ dung môi n-hexane: EtOAc (4,5:0,5) O O F O 2' H Cl/AcOH N 11 1' CO OC H2 C H3 C OOH 12 N D MSO 11 1' (DMAc; N 4' O 6' PGM E; 7' 5' isob utan ol; D MAc) N 14 Sơ ñồ 2.1 Tổng hợp levofloxacin từ hợp chất trung gian cho sản phẩm chất dạng dầu màu vàng nhạt Header Page of 126 10 Nghiên cứu phản ứng tổng hợp diethyl (-)-(3S)-7,8-difluoro-3- ñược hút chân không 100 mbar khoảng 120oC methyl-2,3-dihydro-4H[1,4]-benzoxazine-4-yl]methylene malonate Hỗn hợp phản ứng ñược ñể nguội ñưa sử dụng bước sau mà không sử dụng bazơ khác cần tinh chế Các phản ứng ñược tiến hành quy trình chung 3.2.1.1 sử 2.3.2 Tổng hợp vòng trung gian pyridobenzoxazine: Ethyl (-)-(3S)- dụng bazơ khác KOt-Bu, NaH, NaOt-Bu Và 9,10-difluoro-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[1,2,3-de][1,4]- tường hợp không sử dụng xúc tác bazơ Các kết thu ñược ñược benzoxazine-6-carboxylate Phản ứng tổng quát: trình bày bảng 2.1 * Phản ứng tiến hành chân không thấp (~100mbar) nhiệt F ñộ 120-140oC F COOC 2H5 COOC2 H5 N O 2.3.1.2 Qui trình tổng hợp diethyl (-)-(3S)-7,8-difluoro-3-methyl-2,3- O (CH 3CO)2 O /H2 SO4 50-60o C 15 F 12 F 10 2' N 11 1' COOCH2 CH3 13 O 14 dihydro-4H[1,4]benzoxazine-4-yl]methylene malonate không sử Sơ ñồ 2.3 Tổng hợp chất sử dụng tác nhân (AcO)2O /H2SO4 dụng sử dụng xúc tác bazơ: Cơ sở lý thuyết: Là phản ứng axyl hóa ñóng vòng Trong bình cổ 500ml, hỗn hợp dung dịch (-)-(3S)-7,8difluoro-3,4-dihydro-3-methyl-2H-[1,4]ben-zoxazine Qui trình tổng hợp chung: Hỗn hợp dung dịch (-)-(3S)-7,8- (100g, difluoro-3,4-dihydro-3-methyl-2H-[1,4]benzoxazine (1eqv.) 0,540mol) diethyl ethoxy-methylenemalonat (140g , 0,648mol) diethyl ethoxymethylene malonat (1.2-2eqv.) ñược nâng ñến 120oC ñược nâng ñến 120oC khuấy nhiệt ñộ sau ñó khuấy nhiệt ñộ khoảng 1-1,5 sau ñó ñược hút o ñược hút chân không 100 mbar khoảng 120 C chân không 100 mbar nhiệt ñộ khoảng 1-2 Hỗn hợp phản ứng ñược ñể nguội ñưa sử dụng bước sau mà không Hỗn hợp phản ứng ñược ñể nguội sau ñó ñược hòa tan anhydrit cần tinh chế axetic (V1ml) ñược làm lạnh xuống 0oC Hỗn hợp (AcO)2O : Phổ 1H NMR (CDCl3): 7,75(s, 1H); 6,79-6,76(m, 2H); 4,3-4,04(m, H2SO4 ( 2: 1, V/V) ( V2ml) ñược thêm dần vào ñưa ñến nhiệt ñộ 7H 3xCH2 3-CH); 1,38-1,26 (m, 9H 3xCH3) phòng hỗn hợp phản ứng ñược khuấy nhiệt ñộ phòng khoảng 2.3.1.2 Qui trình tổng hợp diethyl (-)-(3S)-7,8-difluoro-3-methyl-2,3- nâng nhiệt ñộ lên 50oC ñến 60oC giữ khoảng nhiệt ñộ dihydro-4H-[1,4]benzoxazine-4-yl]methylene malonate không sử khoảng ñược ñể nguội, hỗn hợp nước ñá lạnh ñược dụng sử dụng xúc tác bazơ thêm vào hỗn hợp ñược trung hòa K2CO3 bột ñến trung tính Trong bình cổ 500ml, hỗn hợp dung dịch (-)-(3S)-7,8difluoro-3,4-dihydro-3-methyl-2H-[1,4]benzoxazine (100g, 0,540mol) diethyl ethoxymethylenemalonat (140g , 0,648mol) o ñược nâng ñến 120 C khuấy nhiệt ñộ sau ñó Footer Page of 126 Tủa trắng ñược lọc rửa nhiều lần nước sau ñó isopropanol ete sấy khô thu ñược sản phẩm bột trắng xốp với hiệu suất khoảng 80-90% 2.3.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng dung môi ñến hiệu suất phản ứng Header Page of 126 11 12 Các phản ứng ñược tiến hành theo qui trình chung mục 2.3.1 Cơ sở lý thuyết: Phản ứng thuỷ phân este mục 2.3.2 ñiều kiện không dung môi sử dụng dung môi 2.3.3.1 Qui trình chung thủy phân axit toluene, DMF Kết phản ứng ñược trình bày bảng 2.2 2.3.2.2 Nghiên cứu ñộ ổn ñịnh quy trình Ethyl este ñã ñược tạo huyền phù trong axit axetic (1mol chất 8: 2,5ml axit) (Vml) sau ñó HCl ñặc (35%) (3xVml) ñã ñược Các phản ứng ñược tiến hành theo qui trình chung mục 2.3.2 với thêm vào hỗn hợp ñã ñược ñun hồi lưu ñến kiểm tra SKLM lượng mol chất phản ứng tác nhân tăng dần từ 0,01mol, 0,1mol, thấy ethyl este ñã bị thủy phân hoàn toàn Hỗn hợp phản ứng ñược ñể 0,3 mol 0,4mol benzoxacine Kết phản ứng ñược trình bày nguội sau ñó nước ñá lạnh ñược thêm vào Sản phẩm tủa trắng ñã bảng 2.3 ñược lọc, rửa với nước, ethanol diethyl ether sau ñó sấy khô cho Dữ liệu phổ hợp chất : IR (KBr): 3427, 3034, 2998, 2919, 1721, -1 1677, 1601, 1563, 1481, 1353, 1256, 1180, 1072 805, 645, 425 cm ; sản phẩm dạng bột trắng hiệu suất phản ứng vào khoảng 91% 2.3.3.2 Qui trình chung thủy phân bazơ H NMR (CDCl3): 8,42(s, 1H 5-CH); 7,79-7,75 (m, 1H); 4,51- Ethyl este ñã ñược hòa tan dimethylformamide 4,45 (m, 3H 2-CH2, 3-CH); 4,36(q, 2H OCH2-); 1,61(d, 3H (DMF)(1mol chất 8, 1,5 ml DMF) Sau ñó hỗn hợp ñược làm lạnh 3-CH3); 1,40(t, 3H nhóm ethyl); xuống 0oC dung dịch KOH 1N (1,1ml, 0,011mol) ñã ñược nhỏ 13 C NMR (CDCl3): 173,03 (7-CO); 165,23(6-COO); giọt vào hỗn hợp ñược khuấy nhiệt ñộ phòng khoảng 135,02; (kiểm tra SKLM ñể ñảm bảo chất ñã ñược thủy phân hoàn) Sau ñó 124,26(2xC); 110,74; 105,89(105,73); 69,00; 61,25; 55,03; 18,06; 14,36 hỗn hợp phản ứng ñược làm lạnh xuống 0oC, axit axetic (6ml, [α]D = - 81,320 (c = 0,25; CH3COOH) ño máy JASCO P2000 0,1mol) ñã ñược thêm vào từ từ hỗn hợp phản ứng ñược khuấy Polarimeter nhiệt ñộ phòng khoảng Sau ñó nước ñá lạnh ñược thêm vào 2.3.3 Nghiên cứu quy trình thuỷ phân nhóm ethyl este, tổng hợp Sản phẩm tủa trắng ñã ñược lọc, rửa với nước, etanol dietyl ete vòng trung gian pyridobenzoxazine axit (-)-(3S)-9,10-difluoro-3- sau ñó sấy khô cho sản phẩm bột trắng hiệu suất phản ứng vào methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[1,2,3-de]-[1,4]benzoxazine-6- khoảng 89% carboxylic Phản ứng tổng quát: Dữ liệu phổ hợp chất : 150,43(148,43)(10-CF); O F 1' 2' F KOH /DM F/AcOH 13 C OOH F 10 N 11 O 14 15 12 O IR (KBr): 3411, 3038, 2988, 1721, 1626, 1569, 1563, 1481, 1353, O H Cl/AcOH N 11 143,45-141,22)(9-CF); CO OC H CH 12 F 10 15 13 145,95; 14 Sơ ñồ 2.4 Tổng hợp chất sử dụng tác nhân HCl/AcOH Footer Page of 126 1304, 1112, 1058, 967, 809, 708, 632, 409 cm-1; H NMR (CDCl3): 14,76 (s, 1H); 9,07(s, 1H, CH-4); 7,79(td, 1H, CH-7); 5,02(td, 1H C-3); 4,68(dd, 1H, CH2-2); 4,50(dd, 1H, CH2-2); 1,48(d, 3H 3-CH3) 13 C NMR (CDCl3): 176,46(7-CO); 165,59(6-COO); 148,01((147,91); Header Page of 126 13 14 147,07; 142,58(140,70); 135,96(135,87); 125,30; 121,35; 107,72; ete (120ml) ñược thêm dung dịch phức boron trifluoride diethyl 103,63(103,48); 68,90; 55,03; 17,77 ether (14 ml), hỗn hợp ñã ñược khuấy nhiệt ñộ phòng o [α]D = -82,81 (c= 0,989; NaOH(0,05N)) ño máy JASCO P2000 Sau ñó kết tủa hình thành ñược lọc rửa với diethyl ether Polarimeter sấy khô Chất rắn thu ñược ñược hòa tan dimethylsulfoxide 2.3.3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng lượng dung môi tác nhân ñến (DMSO) (20ml) triethylamine (2,85ml) N-methylpiperazine phản ứng (1,5ml) ñược thêm vào hỗn hợp ñược khuấy nhiệt ñộ phòng Các phản ứng ñược tiến hành theo qui trình chung mục 2.3.3.1 khoảng 18 Sau loại dung môi áp suất giảm, cặn với lượng hỗn hợp AcOH: HCl tăng dần so với chất phản ứng Kết thu ñược ñược thêm diethyl ether cho bột màu vàng Bột vàng phản ứng ñược trình bày bảng 2.4 ñược lọc rửa diethyl ether sau ñó ñược tạo huyền 2.3.3.4 Nghiên cứu ñộ ổn ñịnh quy trình: methanol (80 ml) triethylamine (5ml) ñược thêm vào Sau Các phản ứng ñược tiến hành theo qui trình chung mục 2.3.3.1 ñược ñun hồi lưu 25 dung môi ñược loại áp suất với lượng mol chất phản ứng tác nhân tăng dần từ 0,04 mol, 0,08 giảm, cặn thu ñược ñược ñược hòa tan HCl 10% ( 100ml) ñược mol, 0,16 mol 0,2 mol chất Kết phản ứng ñược trình rửa chloroform lần trung hòa ñến pH 11 dung dịch bày bảng 2.5 NaOH 4N, lại ñiều chỉnh pH 7,3 với HCl 1N, hỗn hợp ñược 2.3.4 Tổng hợp axit (-)-(3S)-9-fluoro-2,3-dihydro-3-methyl-10-(4- chiết cloroform (400mlx3), dịch chiết ñược làm khô qua methyl-1-yl-1-piperazinyl)-7-oxo-7H-pyrido[1,2,3-de]-1,4-benzoxa- Na2SO4, bay chân không, chất rắn thu ñược ñược kết tinh từ zine-6-carboxylic (levofloxacin) Phản ứng tổng quát: ethanol: diethyl ether cho 2,4 g sản phẩm levofloxacin rắn màu O F 13 12 NH 2' N 14 F N 11 O O 15 COOH F 10 vàng nhạt với hiệu suất 66,5% 3' DMSO (DMAc; PGME; isobutanol; DMAc) N 4' 7' 1' 13 12 10 N 6' 15 COOH 11 1O 5' N 14 2.3.4.2 Quy trình tổng hợp chất sử dụng trực tiếp axit với Nmethylpiperazine dung môi khác nhau: Hỗn hợp dung dịch chất (2,81g, 10mmol) N-methylpiperazine (2,5g, 25mmol) dung môi(1,4ml) ñược ñun nhiệt ñộ 120oC 2,5 sau ñó ñể nguội ñến 60oC isopropanol Sơ ñồ 2.5 Tổng hợp chất dung môi khác (30ml) ñã ñược thêm vào, hỗn hợp ñược khuấy nhiệt ñộ phòng Cơ sở lý thuyết: Phản ứng nhân thơm C-10 nhóm 10-F Kết tủa ñược lọc rửa isopropanol ether thu ñược bột N-methylpiperazine màu vàng Sản phẩm thô ñã ñược tinh chế qua cột silica gel sử 2.3.4.1 Qui trình tổng hợp sử dụng boron trifluoride Huyền phù carboxylic acid (2,81g, 10mmol) diethyl Footer Page of 126 dụng dung môi rửa giải MC:MeOH (4:1) cho 3,29g chất (levofloxacin) với hiệu suất 91% Header Page of 126 15 16 2.3.4.3 Nghiên cứu ảnh hưởng lượng tác nhân amine (Bảng 2.6) ete (2x50ml) thu ñược 50 gam chất (levofloxacin) dạng bột màu Các phản ứng ñược tiến hành theo qui trình chung mục 2.3.4.2 trắng với hiệu suất 92,3 % sử dụng dung môi DMSO với tỉ lệ mol chất phản ứng (chất 9): Dữ liệu phổ hợp chất : Tác nhân amine hóa (N-methylpiperazine) khác 1:3,5; 1: 3; IR(KBr), cm-1 : 3429, 3272, 3079, 2943, 2858, 2808, 1721, 1621, 1:2,5; 1: 2; 1: 1,5 (mol) Kết phản ứng ñược trình bày 1521, 1450; bảng 2.6 2.3.4.4 Nghiên cứu ảnh hưởng lượng dung môi ñến hiệu suất 3,45- 3,36(m, 4H); 2,56-2,55(m, 4H); 2,37 (s, 3H); 1,61 (d, 3H) phản ứng (bảng 2.7) 13 Các phản ứng ñược tiến hành theo qui trình chung mục 2.3.4.2 H-NMR (CDC13): 8,62 (s, 1H); 7,70 (d, 1H,); 4,53-4,35(m, 3H,); C NMR (CDCl3): 177,05(7-CO); 167,18(6-COOH); 156,97(154,99)(9- CF); 144,75; 139,38; 133,16; 124,71; 120,22; 107,63; 105,14(104,95); với tỉ lệ mol chất phản ứng tác nhân không ñổi Sử dụng dung 68,16; 55,62 55,50 (4xC); 50,56; 46,33; 18,31; môi DMSO với lượng thay ñổi từ 7ml - 0,7ml cho 10mmol chất phản ESI-MS, m/z: 362[M+1]+; = - 87,64o (c= 0,655; NaOH (0,05mol/l)) ứng Kết phản ứng ñược trình bày bảng 2.7 ño máy JASCO P2000 Polarimeter 2.3.4.5 Nghiên cứu ảnh hưởng dung môi khác ñến hiệu 2.4 Xác ñịnh hàm lượng sản phẩm quang học levofloxacin suất phản ứng ( Bảng 2.8) phương pháp HPLC Các phản ứng ñược tiến hành theo qui trình chung mục 2.3.4.2 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN sử dụng dung môi khác DMSO, PGME, isobutanol, DMAc Levofloxacin ñã ñược tổng hợp từ hợp chất trung gian (-)-(3S)- Kết phản ứng ñược trình bày bảng 2.8 methylbenzoxazine quang hoạt theo sơ ñồ 3.1 sau: 2.3.4.6 Nghiên cứu ñộ ổn ñịnh quy trình: Các phản ứng ñược tiến hành theo qui trình chung mục 2.3.4.2 F với lượng mol chất phản ứng tác nhân tăng dần từ 0,01 mol, 0,05 C2H5O 10 F mol, 0,1 mol 0,15 mol chất Kết phản ứng ñược trình COOC2H5 NH 1O bày bảng 2.9 COOC2H5 - 120o C 1h - 120o -140o C; 100mbar; 1h COOC2H5 COOC2H5 F F (CH3CO)2O /H2SO4 N O 50-60o C 81% Qui trình với lượng 50 gam sản phẩm: Trong bình cổ lít, O hỗn hợp dung dịch chất (42,15g, 0,15 mol) N – F 13 methylpiperazine (3,75 g, 0,375 mol) dung môi DMSO (21 ml) ñược ñun nhiệt ñộ 1200C sau ñó ñể nguội ñến 600C isopropanol (4,5 lít) ñã ñược thêm vào, hỗn hợp ñược khuấy nhiệt ñộ phòng Kết tủa ñược lọc, rửa isopropanol (3x 50ml) Footer Page of 126 F 10 12 11 N 15 1' 2' COOCH2CH3 F COOH N NH HCl/AcOH 2' hôi luu, 92% 14 F N O F O O O 3' 13 10 12 N 11 1' DMSO, 110o C N4' 1O 6' 91% 7' trung gian (-)-(3S)-methylbenzoxacin quang hoạt 5' Sơ ñồ 3.1 Tổng hợp levofloxacin từ hợp chất 15 COOH N 14 Header Page of 126 17 18 3.1 Qui trình tổng hợp diethyl (-)-(3S)-7,8-difluoro-3-methyl-2,3dihydro-4H[1,4]-Benzo-xazine-4-yl]methylene-malonate Bước ngưng tụ benzoxacin với diethylethoxymethylene malonate ñược nghiên cứu tiến hành theo phương pháp: sử Trong qui trình tổng hợp levofloxacin 1, phản ứng Gould-Jacobs dụng tác nhân bazơ KOt-Bu, NaOt-Bu NaH; hai phản ñã ñược sử dụng ñể tổng hợp hệ vòng pyridobenzoxacin 8, ñó phản ứng trực tiếp benzoxacin với diethylethoxymethylene malonate ứng ngưng tụ dẫn xuất aniline với dẫn xuất Trong phương pháp sử dụng tác nhân bazơ, bazơ KOt-Bu, NaOt- ethylenemalonate ñã ñược theo sơ ñồ 3.2 Bu có tác dụng lấy proton nhóm NH tạo anion làm tăng hoạt Cơ chế phản ứng Gould –Jacobs bao gồm bước: bước tính nucleophin benzoxacin giúp phản ứng ngưng tụ với diethyl ngưng tụ bước axyl hóa ñóng vòng Ở bước ngưng tụ, ñôi ñiện tử ethoxymethylenemalonate xảy chiều Nhưng việc sử dụng tác không tham gia liên kết nhóm -NH benzoxacine ñóng vai nhân ñòi hỏi ñiều kiện phản ứng nghiêm ngặt khó kiểm soát trò nucleophile công vào phần mang ñiện dương phân tử chúng bazơ mạnh sử dụng dư thủy phân nhóm este electron (ethylenemalonate ñã ñược thế) loại ñi phân tử alcohol tác nhân sản phẩm Hơn nữa, sử dụng tác nhân bazơ hình thành liên kết C-N, ñây trình thuận nghịch Vì phản phải sử dụng dung môi ñắt tiền ñể hòa tan tác nhân phản ứng ứng ñược tiến hành chân không 100mbar ñể loại EtOH sinh ñây phương án không hiệu Các kết thực nghiệm từ phản ứng làm dịch chuyển cân phía sản phẩm Tiếp theo bước ngưng tụ ñược trình bày bảng 2.1 Qua trình bước axyl hóa ñóng vòng ñược tiến hành hỗn hợp thực nghiệm thấy việc sử dụng tác nhân bazơ vừa phức tạp AcOH/(AcO)2O/H2SO4 hệ dung môi thuận lợi cho phản ứng vừa sử dụng tác nhân ñắt tiền mà hiệu suất phản ứng không cao acyl hóa Bản chất trình phản ứng ñóng vòng electron hẳn phản ứng 4* phản ứng trực tiếp không sử dụng bazơ Do loại ñi phân tử EtOH ñể tạo hệ vòng bền vững ñó ñã lựa chọn phương pháp phản ứng trực tiếp không sử O EtO2C F F NH OEt F OEt EtO2C F -EtOH OEt O EtO F Ac2O/H2SO4 H O C F - EtOH N F F COOC2H5 O F COOC2H5 electrocyclization COOC2 H5 -H F N O F hỗn hợp sản phẩm sau phản ứng gồm sản phẩm tác nhân diethyl ethoxymethylenemalonate dư Tác nhân dư không ảnh huớng ñến phản ứng axyl hoá ñóng vòng nên hỗn hợp sản không cần tinh chế Hiệu suất phản ứng ñược tính theo hiệu suất phản O O methylenemalonate ñể cung cấp sản phẩm Với ñiều kiện ngưng tụ phẩm phản ứng thu ñuợc ñã ñược sử dụng cho phản ứng mà N O H N O COOC2H5 F COOC2H5 F O dụng bazơ bước ngưng tụ benzoxacin diethyl ethoxy- O EtO OEt H N F O O N O Sơ ñồ 3.2 Cơ chế phản ứng Gould-Jacobs Footer Page of 126 ứng toàn phần từ tác nhân ñầu benzoxacin ñến sản phẩm cuối pyridobenzoxacin phản ứng Gould-Jacobs Header Page 10 of 126 19 Cấu trúc sản phẩm phản ứng ngưng tụ ñã ñược khẳng ñịnh 20 liên hợp mạnh với nhóm 7-CO 6-COOCH3 nên nằm trường phổ H-NMR (Hình 3.1) dựa vào xuất tín hiệu thấp δH 8,42 (s, 1H) Ở vùng thơm tín hiệu proton δH 7,75(s, 1H nhóm N-CH=) δH 4,30-4,04 (m, 7H) 8-CH δH 7,79-7,75(m, 1H) Quá trình axyl hóa ñóng vòng ñã loại nhóm O-CH2 (1 nhóm CH2 vòng 1,4-benzoxacine; nhóm bỏ nhóm ethyl este nên tín hiệu nhóm ethyl este CH2 nhóm ethyl este) nhóm 3-CH δH 4,36(q, 2H) δH 1,40(t, 3H); tín hiệu proton khác thay 3.2 Qui trình tổng hợp Ethyl (-)-(3S)-9,10-difluoro-3-methyl-7-oxo2,3-dihydro-7H-pyrido[1,2,3-de][1,4]benzoxazine-6-carboxylate Bước phản ứng ngưng tụ phản ứng axyl hóa ñóng vòng, chế bước axyl hóa ñóng vòng ñã ñược trình bày phần phản ứng Gould Jacobs Phản ứng axyl hoá ñóng vòng ñược tiến hành hỗn hợp AcOH/(AcO)2O/H2SO4 khoảng 5060oC cho hợp chất ba vòng pyridobenzoxacine Các kết thu ñược ñược trình bày bảng 2.2 bảng 2.3 Bảng 2.2 trình bày nghiên cứu ảnh hưởng việc sử dụng dung môi bước ngưng tụ ñến hiệu suất toàn phần phản ứng GouldJacobs Để ñánh giá ñược ảnh hưởng dung môi tiến hành ngưng tụ dung môi toluene, N,N-dimethylformamide (DMF) sử dụng trực tiếp tác nhân mà không sử dụng dung môi; ñiều kiện khác phản ứng ngưng tụ phản ứng axyl hóa không ñổi Kết thu ñược bảng 2.2 cho thấy phản ứng ngưng tụ trực tiếp không sử dụng dung môi cho hiệu suất cao sử dụng dung môi toluene DMF Kết thuận lợi cho việc xây dựng quy trình công nghệ tổng hợp chất trung gian lượng lớn Cấu trúc hóa học hợp chất ñược thể rõ nét qua liệu phổ IR, NMR Phổ hồng ngoại FTIR (Hình 3.2) cho thấy dao ñổi Phổ 13C-NMR (Hình 3.4) cho tín hiệu δc 173,03 nhóm xeton 7-CO; 165,23 nhóm este 6-COO; 145,95 nhóm 5CH 3.3 Qui trình tổng hợp axit (-)-(3S)-9,10-difluoro-3-methyl-7-oxo2,3-dihydro-7H-pyrido[1,2,3-de][1,4]benzoxazine-6-carboxy-lic Để tránh phản ứng trao ñổi este–amit bước tiếp theo, nhóm etyl este chất ñã ñược thủy phân Quá trình thuỷ phân ñã ñuợc khảo sát theo phuơng pháp: thuỷ phân axit thuỷ phân kiềm Kết thực nghiệm ñuợc trình bày bảng 2.4 cho thấy phản ứng thuỷ phân phuơng pháp ñều cho hiệu suất tốt Tuy nhiên môi trường bazơ phản ứng tiến hành phức tạp phải sử dụng dung môi ñắt tiền dimethylformamide Vì ñã chọn phương pháp thủy phân sử dụng axit cho phản ứng Ảnh hưởng lượng tác nhân axit ñến hiệu suất phản ứng ñã ñuợc khảo sát bảng 2.4 Kết thực nghiệm cho thấy lượng axit dư không ñủ lớn trình thủy phân xảy chậm Ở tỉ lệ luợng mol tác nhân cho hiệu suất cao Chất 8: AcOH: HCl ññ = 1mol: 250ml, 750ml Dựa tỉ lệ ñã tiến hành thủy phân với luợng mol tác nhân lớn dần thu ñược hiệu suất phản ứng cao tương ñương cho thấy ổn ñịnh quy trình ñộng nhóm CO este 1721 cm-1 Trên phổ 1H-NMR (Hình Sản phẩm thủy phân ñược khẳng ñịnh qua ñi tín hiệu 3.3) sản phẩm này, tín hiệu proton 5-CH bị ảnh hưởng nhóm ethyl este phổ NMR (Hình 3.5), ñiều chứng minh Footer Page 10 of 126 Header Page 11 of 126 21 22 phản ứng thuỷ phân ñã xảy hoàn toàn Trên phổ 1H-NMR sản phân tử axit (quá trình cộng) vị trí octo para trở lên âm phẩm này, xuất tín hiệu proton axit δH14,76 ñiện ñiện tích âm ñược giải tỏa nhóm hút ñiện tử 13 phổ C-NMR tín hiệu nhóm xeton tạo thành vòng với làm bền phức trung gian tạo thành Tiếp theo phức trung gian loại axit nên dịch chuyển xuống trường thấp δc 176 ñi phân tử HF (quá trình loại), sau ñó ñiện tử chuyển dịch Các tín hiệu phổ phù hợp với cấu trúc liệu phổ tài liệu ñã khẳng ñịnh sản phẩm thủy phân axit pyridobenzoxazine carboxylic 3.4 trở hệ thơm bền vững Trong trường hợp sử dụng tác nhân boron trifluoride diethyl ether, hợp chất tạo phức với nhóm 7-CO 6-COOH hút ñiện tử mạnh làm tăng hoạt tính nhóm 10-F sơ ñồ 3.4 Qui trình tổng hợp axit (-)-(3S)-9-fluoro-2,3-dihydro-3- O methyl-10-(4-methyl-1-yl-1-piperazinyl)-7-oxo-7H-pyrido[1,2,3- F de]-1,4-benzoxazine-6-carboxylic (levofloxacin) F EtO C O Et OEt NH O F Ac 2O /H2 SO C - EtO H F C OOC H5 N O O F COOC H5 C OOC H5 -H F F N N O O Sơ ñồ 3.3 Cơ chế ñề nghị phản ứng nhóm F-C10 Nmethylpiperazine F nhau, ñó nhóm 10-F vị trí para với hút ñiện tử sinh O hiệu ứng liên hợp nhóm 7-CO 6-COOH Hai ñiều kiện thuận F lợi làm tăng ñiện tích dương phần C-10 ñịnh hướng F Footer Page 11 of 126 O F electrocyclization carboxylic có nhóm hút ñiện tử 9-F 10-F vị trí octo với Sau tác nhân nucleophin công vào vị trí dương ñiện H O H methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[1,2,3-de][1,4]benzoxazine-6- ứng Cơ chế phản ứng ñược ñề nghị theo sơ ñồ 3.3 N O N F COOC H5 F O thơm có nhóm hút ñiện tử vị trí octo para phản nhóm vị trí octo para ñã làm bền phức trung gian phản OEt COOC H5 F thuận lợi mặt lập thể cho công nucleophin vào mặt nucleophin nhân thơm vào vị trí 10-F Hơn với hút ñiện tử O EtO Bình thường arylhalide không trải qua phản ứng SN2 không ứng SNAr xảy thuận lợi Phân tử axit (-)-(3S)-9,10-difluoro-3- F -EtO H O nhân thơm phải có nhóm hút ñiện tử vị trí octo hoăc para sau nhóm nhân thơm Nhưng trường hợp nhân H N O EtO O Et F Phản ứng flo vị trí 10-F axit N-methylpiperazine phản ứng nhân thơm nucleophin SNAr tuân theo nguyên tắc O EtO 2C F O O BF 3.OEt N O F B OH Et 2O O HN F N O F N O Et 3N, DMSO total yield 66,5% Sơ ñồ 3.4 Phản ứng tạo phức boron trifluoride với axit Vì phản ứng ñược tiến hành ñiều kiện êm dịu hồi lưu metanol Mặc dù bước tạo phức thu ñược sản phẩm hầu Header Page 12 of 126 23 24 toàn lượng bước lại thu ñược sản phẩm với hiệu 2,55(m, 4H) 4xCH2, 2,37(s, 3H) nhóm 2-CH3 Trên phổ 13C- suất không cao, quy trình tổng hợp lại phải qua nhiều bước NMR (Hình 3.10) cặp dublet δc 156,97(154,99)(9-CF) Vì ñi sâu vào nghiên cứu ñiều kiện phản ứng xuất thêm tín hiệu vòng piperazine δc 55,50 phương pháp tổng hợp trực tiếp không qua tạo phức dung môi nhóm N-CH2 46,33 N-CH3; Phổ khối ESI-MS cho pic ion giả dung môi Các công trình nghiên cứu ñã phân tử [M+H]+ m/z 362 Năng suất quay cực [α]D = - 80o (c= dung môi phân cực phản ứng cho hiệu suất cao Để nghiên cứu 0,655; NaOH) phù hợp với số liệu tài liệu ñiều kiện phản ứng cho hiệu suất cao ñã lựa chọn Tóm lại liệu phổ hình 3.8; hình 3.9; hình 3.10; dimethylsulfoxide làm dung môi phản ứng nghiên cứu ñiều hình 3.11, phù hợp với cấu trúc sản phẩm ñối chiếu với kiện phản ứng như: tỉ lệ tác nhân, lượng dung môi phản số liệu tài liệu ñã khẳng ñịnh sản phẩm thu ñược axit (-)- ứng Sau tìm ñược tỉ lệ thích hợp tác nhân lượng dung môi (3S)-9-fluoro-2,3-dihydro-3-methyl-10-(4-methyl-1-yl-1-piperazin- nghiên cứu tìm dung môi thích hợp cho phản ứng Các kết yl)-7-oxo-7H-pyrido[1,2,3-de]-1,4-ben-zoxazine-6-carboxylic thu ñược ñược trình bày bảng 2.6; bảng 2.7; bảng 2.8 3.5 Xác ñịnh hàm lượng sản phẩm quang hoạt axit (-)-(3S)- Bảng 2.6 ñã trình bày nghiên cứu ảnh hưởng số 9-fluoro-2,3-dihydro-3-methyl-10-(4-methyl-1-yl-1-piperazinyl)- dung môi dimethylsulfoxide (DMSO), PGME, isobutanol 7-oxo-7H-pyrido-[1,2,3-de]-1,4-benzoxazine-6-carboxylic DMAc ñến hiệu suất phản ứng Các kết cho thấy tỉ lệ mol axit Quá trình tách ñồng phân quang học phụ thuộc vào khác biệt 9: N-methylpiperazine = 10:35; 10:30; 10:25 (tính theo mol) hiệu lượng, ñộ bền lực diasteromer (dạng cis- suất phản ứng xấp xỉ vào khoảng 91% Và hiệu suất phản ứng trans-) với pha tĩnh Các phối tử gồm hỗn hợp ñồng phân quang giảm ñi lượng mol amine giảm xuống, tỉ lệ mol tác học (R, S, ofloxacin) chất thêm quang hoạt L-phenylalanine ion nhân là: 10:20; 10:15 (mol) hiệu suất tương ứng giảm dần 80%; trung tâm (Cu2+) kết hợp với tạo thành hợp chất phức theo cấu 63% Như tỉ lệ mol tác nhân thích hợp cho phản ứng axit trúc ñề nghị hình 3.13 9: N-methylpiperazine = 10:25 (mol)=1:2,5 (mol) Trên Sắc ký ñồ phổ HPLC hỗn hợp racemic (Hình 3.14) cho Lượng dung môi ảnh hưởng không nhỏ ñến hiệu suất phản thấy ñồng phân quang học ñã ñược tách tốt với hệ sử dụng ứng Trên bảng 2.7 ta thấy DMSO phản ứng cho hiệu suất tốt thời gian lưu tương ứng ñồng phân 16,6 phút với (-) – Kết hợp bảng : bảng 2.6, bảng 2.7, bảng 2.8 lựa (3S)- levofloxacin 18,7 phút với (+)-(3R)- ofloxacine Sắc ký ñồ chọn ñiều kiện phản ứng phản ứng bảng 2.6 phổ HPLC hợp chất (Levofloxacin) (hình 3.15) cho thấy Cấu trúc sản phẩm ñã ñược khẳng ñịnh qua liệu phổ thu hàm lượng sản phẩm quang học levofloxacin tổng hợp ñạt ñược Các tín hiệu phổ 1H-NMR (Hình 3.9) ñã có mặt 99,086% nhóm methyl piperazine δH 3,45-3,36(m, 4H) 2,56- Footer Page 12 of 126 Header Page 13 of 126 25 26 việc tạo hợp chất phức diasteromer Sắc ký ñồ ñã cho thấy hàm KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ lượng sản phẩm quang hoạt levofloxacin tổng hợp ñạt 99% Lần ñầu tiên Việt Nam qui trình tổng hợp thuốc kháng sinh * Kết luận: Đã nghiên cứu phương pháp tổng hợp hợp chất ethyl (-)- nhóm floroquinolon hệ levofloxacin ñã ñược nghiên cứu Luận (3S)-9,10-difluoro-3-methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[1,2,3- văn ñã ñưa quy trình tổng hợp hợp chất trung gian sản de][1,4]benzoxa-zine-6-carboxylate thông qua phản ứng Gould- phẩm cuối với lượng lớn từ 150g ñến 200g/mẻ với hiệu suất cao ổn Jacobs bao gồm phản ứng ngưng tụ phản ứng axyl hóa ñóng vòng ñịnh Sản phẩm cuối levofloxacin ñạt hàm lượng 99% ñáp ứng yêu với ñiều kiện dung môi, tác nhân, nhiệt ñộ thời gian phản ứng cầu ñề tài Hóa dược cho hiệu suất cao ổn ñịnh * Kiến nghị: Đã nghiên cứu hai phương pháp thủy phân hợp chất etyl este axit bazơ ñể thu ñược axit (-)-(3S)-9,10-difluoro-3- Chúng xin ñề xuất hướng nghiên cứu sau: Đề tài ñã xây dựng ñược quy trình ổn ñịnh tổng hợp methyl-7-oxo-2,3-dihydro-7H-pyrido[1,2,3-de][1,4]benzoxazine-6- levofloxacin từ chất trung gian (-)-(3S)-methylbenzoxazin quang hoạt carboxylic Đã lựa chọn ñược tác nhân ñiều kiện phản ứng tỉ với qui mô 200g/mẻ Kết có ý nghĩa khoa học thực tiễn lệ mol tác nhân, dung môi, nhiệt ñộ phản ứng cho hiệu suất cao ổn góp phần thực thành công ñề tài nghiên cứu qui trình công nghệ ñịnh tổng hợp thuốc kháng sinh levofloxacin, làm tiền ñề cho nghiên cứu Đã nghiên cứu phương pháp tổng hợp axit (-)-(3S)-9- sản xuất thuốc levofloxacin qui mô lượng lớn chương fluoro-2,3-dihydro-3-methyl-10-(4-methyl-1-yl-1-piperazinyl)-7-oxo trình hóa dược Vì kiến nghị tiếp tục nghiên cứu triển -7H-pyrido-[1,2,3-de]-1,4-benzoxazine-6-carboxylic tác khai ñề tài qui mô pilot tiến tới qui mô bán sản suất xây dựng nhân khác hệ dung môi khác hệ qui trình công nghệ sản suất levofloxacin ñáp ứng mục tiêu cuối dung môi Đã chọn lựa ñược tác nhân, dung môi, nhiệt ñộ chương trình Hóa dược thích hợp cho phản ứng ñạt hiệu suất cao ổn ñịnh Cấu trúc sản phẩm tổng hợp ñã ñược khẳng ñịnh phương pháp phổ IR; 1H-NMR; 13 C-NMR; ESI-MS; suất quay cực [α]D phù hợp với liệu tài liệu ñã công bố Hàm lượng sản phẩm quang hoạt levofloxcin ñã ñược xác ñịnh phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC sử dụng cột pha ñảo Zorbax-300SB–C8(4,6x250mm) với pha ñộng chứa chất thêm vào quang hoạt L-phenylalanine ion trung tâm Cu2+ cho Footer Page 13 of 126  ... levofloxacin từ hợp chất trung gian (-)-(3S)- methylbenzoxacine Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI quang hoạt” LUẬN VĂN ĐỐI TƯỢNG VÀ MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu: Kết nghiên. .. quy trình tổng hợp thuốc kháng sinh levofloxacin từ hợp chất trung gian (-)-(3S)-methylbenzoxazine Hợp chất levofloxacin: axit (-)-(3S)-9-fluoro-2,3-dihydro-3- quang hoạt ñề tài luận văn có ý nghĩa... sinh levofloxacin qui Nghiên cứu quy trình tổng hợp thuốc kháng sinh levofloxacin Mục ñích cuối ñề tài luận văn nghiên cứu quy trình tổng hợp thuốc kháng sinh levofloxacin làm tiền ñề cho nghiên