MỞ ĐẦU LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI Thực vật có vai trò vô quan trọng sinh giới nói chung người nói riêng Thực vật cung cấp cho người nguồn lương thực, thực phẩm, nhiên liệu phục vụ hoạt động, nguyên liệu để sản xuất,… thực vật nguồn cung cấp dược liệu quý Tuy nhiên nay, với phát triển kinh tế, xã hội nhu cầu thuốc ngày tăng cao Bên cạnh việc khai thác từ thiên nhiên ngày gia tăng với tính chất tận diệt dẫn đến việc suy giảm đa dạng phong phú dược liệu tự nhiên Để đáp ứng nhu cầu sử dụng dược liệu cần có giải pháp phát triển nguồn dược liệu cách bền vững Ba kích (Morinda officinalis How) loài dược liệu quý, với nhiều hoạt chất sinh học có lợi cho sức khỏe người nên nhu cầu khai thác từ tự nhiên, sử dụng xuất loài làm dược liệu ngày gia tăng, dẫn đến tình trạng suy giảm nhanh chóng số lượng khu vực phân bố tự nhiên Năm 2002, ba kích đưa vào danh sách thực vật hoang dã hạn chế khai thác sử dụng (Nghị định số 48/2002/NĐCP) Và loài thực vật có tên Sách đỏ Việt Nam 2007 [32] Vì vậy, loài bảo vệ, nghiên cứu nhân giống, tiến đến xây dựng mô hình trồng phát triển hiệu tương lai Hiện nay, ba kích trồng chủ yếu vùng có đặc trưng sinh thái định, chủ yếu theo hình thức tự phát Trên thực tế, ba kích di thực thành công số tỉnh phía Bắc Bắc Trung tỉnh Thanh Hóa, tỉnh Quảng Ninh (Cô Tô),… ba kích tím phát trồng tỉnh Quảng Nam (Tây Giang, Đông Giang), thành phố (TP) Đà nẵng (chân đèo Hải Vân, Sơn Trà, Bà Nà,…), tỉnh Đăk Lăk (Buôn Ma Thuật, Krông Năng,…) Tuy nhiên việc phát triển tự phát dược liệu nói chung, ba kích tím nói riêng chưa có nghiên cứu đầy đủ ảnh hưởng nhân tố sinh thái đến khả sinh trưởng, phát triển chất lượng củ ba kích tím hướng bền vững Thành phố (TP) Đà Nẵng có diện tích rừng lớn với tổng diện tích rừng đất lâm nghiệp TP Đà nẵng 62.929,5ha (Quyết định 5924/QĐUBND ngày 27/08/2013 Ủy ban nhân dân (UBND) TP Đà nẵng), điều kiện thuận lợi để phát triển nguồn dược liệu Cùng với định hướng phát triển nông nghiệp công nghệ cao cấu nông nghiệp TP Đà Nẵng xây dựng định hướng quy hoạch phát triển vùng dược liệu (theo định số 3176/QĐ-UBND ngày 24/04/2012 UBND TP Đà Nẵng) Tuy nhiên chưa có công trình khảo sát, điều tra ảnh hưởng nhân tố sinh thái đến sinh trưởng, phát triển dược tính dược liệu nói chung, ba kích tím nói riêng TP Đà nẵng Vì vậy, việc nghiên cứu có tính hệ thống điều kiện cần thiết để mở rộng sản xuất loài dược liệu TP Đà Nẵng cấp thiết Xuất phát từ sở đây, tiến hành nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu ảnh hưởng số nhân tố sinh thái đến sinh trưởng ba kích tím (Morinda officinalis How) in vitro phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, thành phố Đà Nẵng” 2 MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI 2.1 Mục tiêu tổng quát Xác định số nhân tố sinh thái phù hợp với sinh trưởng ba kích tím, làm sở để xây dựng mô hình trồng ba kích tím phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng 2.2 Mục tiêu cụ thể - Xác định số vùng sinh thái phù hợp với sinh trưởng ba kích tím giai đoạn vườn ươm phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng - Xác định số nhân tố sinh thái phù hợp với sinh trưởng ba kích tím trồng tự nhiên phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng - Xây dựng mô hình trồng ba kích tím phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI 3.1 Ý nghĩa khoa học - Kết nghiên cứu cung cấp sở liệu khoa học mới, có tính hệ thống nhân tố sinh thái thích hợp để trồng ba kích tím phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng 3.2 Ý nghĩa thực tiễn - Kết nghiên cứu sở để xây dựng phát triển mô hình trồng phát triển sản xuất ba kích tím TP Đà Nẵng dùng làm nguyên liệu cho sản xuất dược liệu, chăm sóc sức khỏe cộng đồng - Kết nghiên cứu cung cấp sở để quy hoạch vùng trồng dược liệu TP Đà Nẵng CẤU TRÚC CỦA LUẬN VĂN Luận văn gồm có trang, 13 bảng số liệu, 24 hình ảnh Cấu trúc luận văn chia thành phần sau: - Phần mở đầu (4 trang) - Chương Tổng quan tài liệu ( trang) - Chương 2: Đối tượng, địa điểm, thời gian phương pháp nghiên cứu ( trang) - Chương 3: Kết nghiên cứu thảo luận ( trang) - Kết luận kiến nghị (2 trang) - Tài liệu tham khảo ( tài liệu) - Phần phụ lục ( phụ lục) Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 KHÁI QUÁT VỀ ẢNH HƯỞNG CỦA NHÂN TỐ SINH THÁI ĐỐI VỚI SỰ SINH TRƯỞNG CỦA THỰC VẬT Sinh trưởng thực vật chịu tác động nhân tố sinh thái (nhiệt độ, ánh sáng, nước, dinh dưỡng,…) 1.1.1 Vai trò số nhân tố sinh thái sinh trưởng thực vật Sinh trưởng kết tổng hợp chức sinh lý trình trao đổi chất liên quan chặt chẽ với yếu tố MT Vì ảnh hưởng điều kiện sinh thái đến sinh trưởng phức tạp rõ rệt Hiểu biết mối quan hệ giúp điều khiển sinh trưởng trồng theo ý muốn dựa hiểu biết mối quan hệ điều kiện sinh thái đến trình sinh trưởng [17] a Vai trò nhiệt độ Nhiệt độ yếu tố ảnh hưởng lớn đến sinh trưởng Cây sinh trưởng khoảng nhiệt rộng, loại trồng khác tồn điểm nhiệt độ tối thấp tối cao khác Trong giới hạn nhiệt độ sinh trưởng có nhiệt độ tối thích cho sinh trưởng, nhiệt độ sinh trưởng xảy thuận lợi nhất, nhiệt độ tối thích tốc độ sinh trưởng giảm Nhiệt độ tối thấp nhiệt độ tối cao cho sinh trưởng điểm nhiệt độ mà ngừng sinh trưởng Giới hạn nhiệt độ sinh trưởng thay đổi theo thích nghi trồng vùng sinh thái khác [17] Sinh trưởng quan khác nằm khoảng nhiệt khác Những quan mặt đất thích nghi với nhiệt độ không khí cao so với quan mặt đất, nhiệt độ cao sinh trưởng rễ thân cành [17] Sự chênh lệch nhiệt độ ban ngày ban đêm có ảnh hưởng lớn đến sinh trưởng Ban ngày nhiệt độ cao thuận lợi cho quang hợp tích lũy chất hữu cơ, ban đêm nhiệt độ hạ thấp hạn chế hô hấp tiêu phí chất hữu cơ, giảm thoát nước nên sinh trưởng nhanh [17] b Vai trò ánh sáng Ánh sáng yếu tố vô quan trọng cho sinh trưởng cần cho trình quang hợp Nhờ trình quang hợp mà tổng hợp chất hữu làm nguyên liệu để xây dựng nên thể tích lũy lượng để tiến hành sinh trưởng Tùy theo nhu cầu ánh sáng sinh trưởng mà người ta chia thực vật thành hai nhóm ưa sáng ưa bóng Cây ưa sáng sinh trưởng mạnh điều kiện ánh sáng đầy đủ, ưa bóng sinh trưởng tốt điều kiện bóng râm thích hợp [17] Ánh sáng tác động lên trồng nguồn lượng phản ứng quang hóa Ánh sáng nhân tố kích thích, điều khiển trình sinh trưởng phát triển suất cho trồng Ngoài ánh sáng tác động đến nảy mầm hạt [22] c Vai trò nước Nước thành phần thiếu tất tế bào sống, chiếm tới 80 – 95% khối lượng mô sinh trưởng Nước tham gia vào hầu hết hoạt động sống sinh vật: MT sống sinh vật thủy sinh, dung môi hòa tan nhiều chất tế bào MT cho phản ứng sinh hóa học diễn thể sống Nước nguyên liệu cho trình tổng hợp trình sinh lí thể sinh vật, thành phần bảo vệ cấu trúc sống tế bào thông qua hidrat hóa [22] Nước yếu tố sinh thái tối cần thiết cho sinh trưởng cây, sinh trưởng mạnh tế bào bão hòa nước Sự thiếu bão hòa nước dẫn đến làm giảm sinh trưởng Trong đời sống cây, thiếu nước giai đoạn ảnh hưởng đến sinh trưởng [17] d Vai trò số nhân tố sinh thái đất Đất nơi sinh sống người sinh vật cạn Là móng, địa bàn cho hoạt động sống Là nơi thiết đặt hệ thống nông lâm nghiệp để sản xuất lương thực, thực phẩm nuôi sống người muôn loài Một tính độc đáo đất độ phì nhiêu Đối với hệ sinh thái tính chất độc đáo đất, giúp cho hệ sinh thái tồn tại, phát triển [13] Đất MT để người sinh vật cạn sinh trưởng phát triển, địa bàn cho trình biến đổi phân hủy phế thải khoáng hữu cơ, nơi cư trú cho động thực vật đất, địa bàn cho công trình xây dựng, địa bàn để lọc nước cung cấp nước [13] Đất vật thể thiên nhiên, hình thành trình phong hóa lớp đá, tác động trình biến đổi địa chất khí hậu lâu dài Trái đất Sự sinh trưởng thực vật chịu tác động nhân tố sinh thái đất (pH, độ ẩm, nhiệt độ, nước, không khí, chất dinh dưỡng, thành phần cấp hạt đất,…) * Các chất dinh dưỡng đất - Phân đa lượng: Phân đa lượng cung cấp nguyên tố dinh dưỡng chủ yếu cần thiết cho trồng Trong đất, hàm lượng nguyên tố khoáng thường dạng không dùng trực tiếp thường bổ sung vào đất thông qua việc bón phân +Vai trò phân đạm: Đạm yếu tố quan trọng hàng đầu thể sống thành phần protein – chất biểu sống Đạm nằm nhiều hợp chất cần thiết cho phát triển diệp lục enzim Đạm có thành phần axit nucleic, ADN, ARN nhân tế bào, nơi khu trú thông tin di truyền, đóng vai trò quan trọng việc tổng hợp protein Đạm yếu tố trình đồng hóa cacbon, kích thích phát triển rễ việc thu hút yếu tố dinh dưỡng khác [22] + Vai trò phân lân: Trong cây, lân chủ yếu nằm dạng hữu cơ, phần nhỏ nằm phân vô cơ, có tác dụng tốt trình phân bào, tổng hợp chất béo protein; thúc đẩy hoa hình thành quả, định suất phẩm chất thu hoạch; hạn chế tác hại việc bón thừa đạm; thúc đẩy việc rễ, đặc biệt rễ bên; làm tăng độ vững thân, chống lốp đổ [22] + Vai trò phân kali: Tỉ lệ Kali thân thường cao Kali hạt, rễ củ Ở phận hoạt động mạnh tỉ lệ Kali cao phận già Kali xâm nhập vào phiến lục lạp, lôi sản phẩm phụ trình quang hợp làm cho trình quang hợp liên tục Kali làm tăng áp suất thẩm thấu tế bào nên tăng khả hút nước rễ, điều khiển hoạt động khí khổng, giảm khả thoát nước rễ, điều khiển hoạt động khí khổng, giảm khả thoát nước lúc khô hạn Kali tạo điều kiện thuận lợi cho việc phát triển bó mạch nên làm cho vững hơn, chống đổ ngả, chịu rét suất cao Làm giảm tác hại việc bón nhiều đạm, thiếu kali quang hợp giảm, hô hấp tăng nên suất giảm, chất lượng sản phẩm [22] - Phân vi lượng: Các nguyên tố vi lượng Zn, Mn, Cu, I, Mo, Co, … có hàm lượng nhỏ từ 10-4 – 10-5 trọng lượng chất khô Cây yêu cầu không nhiều nguyên tố có vai trò quan trọng đời sống Vai trò chủ yếu vi lượng hình thành kích thích hoạt hóa hệ thống men Các nguyên tố vi lượng xúc tiến, điều tiết toàn hoạt động sống cây: quang hợp, hô hấp, hút khoáng, hình thành, chuyển hóa vận chuyển hợp chất hữu Tuy nguyên tố vi lượng cần thiết hàm lượng cao đất làm ngộ độc [22] - Phân hữu cơ: Sau vùi vào đất, loại chất hữu phân giải có khả cung cấp chất dinh dưỡng cho Phân hữu gồm loại phân chuồng, phân xanh, phân hữu khác (than bùn, phân rác TP, phân gia cầm,…) Tác dụng phân cải tạo hóa tính, lý tính sinh tính đất [22] 1.1.2 Các nghiên cứu ảnh hưởng nhân tố sinh thái đến sinh trưởng thực vật a Trên giới Trên giới có nhiều tác giả nghiên cứu ảnh hưởng nhân tố sinh thái đến sinh trưởng thực vật Theo Thomas (1985), chất lượng có mối quan hệ logic với tình trạng chất khoáng Nitơ phốt cung cấp nguyên liệu cho sinh trưởng phát triển Tình trạng dinh dưỡng thể rõ qua màu sắc [40] Dazhi cộng (1999) Viện thực vật Nam Trung Quốc, so sánh ức chế sinh trưởng loài nhiệt đới cường độ ánh sáng, là: Castanopsis fissa, Vối thuốc, Cryptocarya concinna Thông đuôi ngựa từ rừng nhiệt đới Dinghushan Sau cấy đến năm tuổi chậu che sáng mức độ 16%, 40% 100% thời gian 16 tháng Chiều cao đường kính Thông đuôi ngựa Cryptocarya concinna trường hợp không che sáng lớn trường hợp che sáng Tất loài số cành giảm cường độ ánh sáng giảm Các loài Castanopsis fissa, Cryptocarya concinna điều kiện che sáng có số nhiều điều kiện ánh sáng hoàn toàn, Vối thuốc ngược lại Hai loài Castanopsis fissa Vối thuốc biến đổi sinh khối mặt đất ít, sinh khối rễ giảm cường độ ánh sáng giảm (Long S.P and Hallgren, 1993) Ekta Singh (2000) sau nghiên cứu sinh thái hạt giống sinh trưởng gỗ non kết luận cường độ ánh sáng có ảnh hưởng rõ rệt tới nảy mầm, sống sót trình sinh trưởng [39] Nhiều nghiên cứu sinh trưởng in vitro cho thấy nhân tố sinh thái ảnh hưởng đến sinh trưởng in vitro Nghiên cứu Juárez cộng thích nghi Nho Đỏ (Vitis vinifera L.) in vitro đem trồng nhà lưới giá thể khác có tưới dung dịch dinh dưỡng: Nho Đỏ trồng chậu 320 cm nhà kính với giá thể than bùn đá Trân Châu trộn với theo tỉ lệ (0-100, 25-75, 50-50, 75-25, 100-0%) có tưới dung dịch dinh dưỡng với nồng độ 50% 100% pha theo công thức Steiner Kết quả: 53.3% 66.7% sống sót giá thể chứa nhiều chất hữu 73.3%- 93.3% sống sót giá thể chứa tỉ lệ than bùn thấp, tỉ lệ đá Trân Châu cao có tưới dung dịch dinh dưỡng với nồng độ 50%, 100% Sau tuần trồng thử nghiệm sinh trưởng giá thể 25% than bùn : 75% đá trân châu, có tưới dung dịch dinh dưỡng 50% đạt chiều cao 16,8 cm, đường kính gốc 2,4 mm, diện tích 196,84 cm2, đạt sinh khối 1055,7mg Cây sinh trưởng giá thể với 100% than bùn không tưới phân cao 6,5cm, đường kính gốc 0,9 mm, diện tích 10,54 cm2, sinh khối 78,8 mg [35] 10 3.4 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH TRƯỞNG CỦA CÂY BA KÍCH TÍM NUÔI CẤY MÔ VÀ GIÂM HOM TRỒNG TRONG ĐIỀU KIỆN TỰ NHIÊN Ở PHƯỜNG HÒA KHÁNH NAM, QUẬN LIÊN CHIỂU, TP ĐÀ NẴNG Sau thực thí nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng ánh sáng phân bón đến sinh trưởng ba kích tím tìm điều kiện tối ưu chế độ che sáng phân bón cho sinh trưởng ba kích tím phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng Để đánh giá sinh trưởng ba kích tím nhân giống nguồn nhân giống in vitro giâm hom tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng số nhân tố sinh thái đến sinh trưởng ba kích tím nhân giống nuôi cấy mô ba kích tím nhân giống giâm hom điều kiện tối ưu Vật liệu tiến hành thí nghiệm là: + Cây ba kích tím in vitro tháng tuổi, đạt chiều dài thân trung bình 35cm, số lượng trung bình 20 + Cây ba kích tím nhân giống hom 4,5 tháng tuổi, đạt chiều dài trung bình 35cm, số lượng trung bình 18 Thời gian trồng: từ tháng đến tháng năm 2016 Chúng tiến hành so sánh số tiêu sinh trưởng ba kích tím nhóm TN ĐC Các tiêu mà tiến hành so sánh là: - Chiều dài thân cây, số lượng sau tháng trồng - Khối lượng tươi cây, khối lượng tươi rễ củ, chiều dài lớn rễ lớn nhất, đường kính lớn của rễ lớn sau tháng trồng 60 Kết so sánh sinh trưởng chiều dài thân số lượng ba kích tím in vitro ba kích tím giâm hom thể bảng 3.10 hình 3.12 Kết so sánh khối lượng tươi cây, khối lượng tươi rễ củ, chiều dài lớn rễ lớn nhất, đường kính lớn của rễ lớn sau tháng trồng thể bảng 3.11, hình 3.13 hình 3.14 Bảng 3.10 Chiều dài thân, số lượng ba kích tím nhân giống nuôi cấy mô nhân giống giâm hom trồng điều kiện tự nhiên Thông số Giống nuôi cấy mô Giống giâm hom Chiều dài thân (cm) 423,12 270.72 Số lượng (lá) 106,80 52,70 Bảng 3.10 Một số tiêu sinh trưởng khác ba kích tím in vitro giâm hom sau tháng trồng điều kiện tự nhiên TN 37,1 7,8 27,6 0,5 Khối lượng tươi (g) Khối lượng tươi rễ củ (g) Chiều dài rễ lớn (cm) Đường kính rễ lớn (cm) 61 ĐC 27,4 4,9 23,4 0,4 A,C: Cây ba kích tím in vitro B, D: Cây ba kích tím giâm hom Hình 3.12 Cây ba kích tím in vitro giâm hom sau tháng trồng điều kiện tự nhiên Hình 3.13 Đường kính rễ lớn ba kích tím in vitro (A) ba kích tím giâm hom (B) 62 C D (A) Cây ba kích tím in vitro (C) Bộ rễ ba kích tím in vitro (B) Cây ba kích tím giâm hom (D) Bộ rễ ba kích tim giâm hom Hình 3.14 Cây ba kích tím in vitro ba kích tím giâm hom đào lên sau tháng trồng điều kiện tự nhiên 63 Kết bảng 3.11 bảng 3.12 cho thấy: Sau tháng trồng điều kiện tự nhiên sai khác sinh trưởng chiều dài thân số lượng rõ rệt Cây ba kích tím nhân giống nuôi cấy mô có khả sinh trưởng mạnh Cây ba kích tím in vitro đạt tổng chiều dài thân trung bình là 423,12cm tháng tuổi (sau tháng trồng) với số lượng trung bình 106,80 Xét tăng trưởng chiều dài rễ, đường kính rễ, số lượng rễ ba kích tím in vitro có sinh trưởng vượt trội Sau tháng trồng điều kiện tự nhiên phường Hòa Khánh Nam ba kích tím in vitro có chiều dài rễ lớn đạt 27,6cm, đường kính rễ lớn đạt 0,5cm (hình 3.) Sự tăng trưởng khối lượng ba kích tím in vitro hẳn ba kích tím nhân giống giâm hom Khối lượng tươi ba kích tím in vitro đạt 37,1g với rễ nặng 7,8g Nhiều nghiên cứu cho thấy giống tạo nuôi cấy in vitro Theo Cao Thị Huyền Nguyễn Văn Thiệp chè giống Shan chất tiền (Camellia sinensis) nhân giống phương pháp nuôi mô sinh trưởng tốt chè giâm hom, đường kính gốc sau năm đạt 1,75cm, cao cao chè giâm hom (1,45cm); chiều cao chè nuôi cấy mô đạt 84,45cm, cao chè giâm hom (79,33cm) [50] Như vậy, điều kiện sinh thái phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng ba kích tím nuôi cấy in vitro có khả sinh trưởng hẳn ba kích tím nhân giống hom 64 3.5 XÂY DỰNG QUI TRÌNH TRỒNG CÂY BA KÍCH TÍM NUÔI CẤY IN VITRO TẠI PHƯỜNG HÒA KHÁNH NAM, QUẬN LIÊN CHIỂU, TP ĐÀ NẴNG Sau nghiên cứu ảnh hưởng số nhân tố sinh thái đến sinh trưởng ba kích tím nuôi cấy in vitro phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng xác định điều kiện tối ưu số nhân tố sinh thái đây, mạnh dạn xây dựng qui trình trồng ba kích tím nuôi cấy in vitro phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng Qui trình gồm giai đoạn (hình 4.4) - Giai đoạn tạo giống ba kích tím từ nuôi cấy in vitro - Giai đoạn trồng vườn ươm - Giai đoạn trồng điều kiện tự nhiên 65 Giai đoạn Các bước Nhân nhanh chồi in vitro Giai đoạn nhân giống in vitro Tạo rễ in vitro Nội dung Hình ảnh minh họa MT MS có bổ sung 3,5 mg/L BA 0,2 mg/L IBA Thời gian: đến tháng MT MS có bổ sung 0,2 – 0,25mg/L IBA Thời gian: 30 đến 45 ngày - Khí hậu nhiệt đới ẩm gió mùa Đất có pH tháp (hơi Khảo sát chọn vùng sinh thái chua), cát pha, màu đỏ vàng, độ mùn trung bình đến giàu, địa hình phẳng dốc ít, dễ thoát nước, không bị úng nước Cảm ứng thích nghi Giai đoạn vườn ươm Để nguyên bịch vườn ươm Thời gian: ngày Giá thể: Đất đỏ vàng + xơ dừa + trấu hun (7:2:1) Trồng vào bầu ươm Kích thước bầu: 5x10cm Che sáng 60% Tưới nước lần/ngày, tưới phun sương 4L/m2/lần Thời gian: 30 đến 45 ngày Giai đoạn trồng điều kiện tự nhiên Chuẩn bị trước trồng Bón lót phân chuồng ủ hoai trấu hun Bổ sung 100g lân hữu vi sinh cho gốc Trồng chăm sóc Che sáng 60% Tưới nước ngày vào buổi sáng Hình 4.4 Qui trình nhân giống in vitro trồng ba kích tím in vitro điều kiện tự nhiên 66 Các bước cụ thể qui trình trồng ba kích tím nuôi cấy in vitro sau: * Giai đoạn tạo giống ba kích tím từ nuôi cấy in vitro Quá trình tạo giống ba kích tím từ nuôi cấy in vitro gồm bước: nhân nhanh chồi in vitro tạo rễ in vitro Cây ba kích tím nuôi cấy in vitro hoàn chỉnh sau đưa vào bịch MT tạo rễ từ 30 đến 45 ngày Cây ba kích tím nuôi cấy in vitro hoàn chỉnh có chiều dài thân khoảng 3cm, có đến đủ tiêu chuẩn để sử dụng làm giống đưa vườn ươm Các giai đoạn tạo giống ba kích tím từ nuôi cấy in vitro thể hình 4.1 A, B: Giai đoạn nhân chồi in vitro C, D: Rễ hình thành MT tạo rễ E, F: Cây ba kích tím in vitro hoàn chỉnh sau 30 ngày đưa vào MT tạo rễ Hình 4.1 Các bước giai đoạn nhân giống in vitro ba kích tím 67 * Giai đoạn trồng vườn ươm Giai đoạn tiến hành theo bước sau đây: - Chọn vùng sinh thái: Vùng sinh thái để trồng ba kích tím nhân giống in vitro có nằm vùng khí hậu nhiệt đới ẩm gió mùa (nhiệt độ trung bình năm 26,2oC, độ ẩm tương đối trung bình 81,1%, lượng mưa bình quân năm 2.352mm, số nắng bình quân năm 2.095,8 giờ) Đất khu vực trồng đất cát pha, độ dốc ít, thoát nước tốt, không bị ngập úng, đất chua, độ mùn từ trung bình trở lên, có tầng canh tác dày (trên 70cm) Ít đá sỏi lớn, có phải loại bỏ trình cuốc lật đất Nên trồng ba kích tím nhân giống in vitro giai đoạn vườn ươm khu vực tiến hành canh tác ba kích tím in vitro để huấn luyện thích nghi tốt với điều kiện sinh thái khu vực trồng Quá trình sinh trưởng ba kích in vitro giai đoạn vườn ươm thể hình 4.2 Các bước tiến hành giai đoạn sau: - Chuẩn bị: + Cây giống: ba kích tím nhân giống in vitro hoàn chỉnh, có chiều dài khoảng 3cm, có – lá, cảm ứng thích nghi với điều kiện khí hậu khu vực trồng khoảng ngày + Giá thể: Giá thể sử dụng giai đoạn vườn ươm hỗn hợp đất đỏ vàng (lấy khu vực trồng) bổ sung xơ dừa trấu hun theo (tỉ lệ 7:2:1) trộn + Giàn che: Sử dụng lưới che sáng xanh đen với độ che sáng 60% tàn che có độ che sáng tương đương Che chắn để động vật khác không cắn phá 68 Hình 4.2 Sinh trưởng ba kích tím nhân giống in vitro giai đoạn vườn ươm phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng - Trồng ba kích tím nhân giống in vitro vào bầu ươm: Nhúng ướt tay trước trồng để tránh làm tổn thương Cây ba kích tím in vitro 69 sau lấy khỏi bịch nuôi cấy nhúng nước nhẹ nhàng để loại bỏ MT nuôi cấy (agar) đặt vào bầu ươm, sau bổ sung giá thể để lấp rễ Rễ ba kích tím in vitro lấp sâu khoảng 1cm giá thể Tưới phun sương cho ba kích tím in vitro sau trồng vào bầu cho toàn giá thể đêu ẩm ướt - Chăm sóc: Tưới nước lần ngày, lượng nước tưới 4L/m Tưới vào sáng sớm buổi chiều Tưới nước theo hình thức phun sương Nhổ cỏ ý phòng trừ côn trùng gây hại, nấm bệnh cho * Giai đoạn trồng điều kiện tự nhiên Cây ba kích tím nhân giống in vitro sau trồng chăm sóc vườn ươm khoảng 45 ngày trồng tự nhiên - Chuẩn bị: + Cây giống: ba kích tím nhân giống in vitro trồng vườn ươm 45 ngày, đạt chiều dài thân khoảng 10 cm, có 12 – 14 Cây giống trước trồng điều kiện tự nhiên cần huấn luyện cách cần hạn chế tưới nước, chế độ tưới nước thực giai đoạn huấn luyện ngày/ lần + Rào chắn khu vực trồng: lưới B40 làm hàng rào để ngăn dê, bò, động vật khác vào ăn, cắn phá + Che sáng: Chế độ che sáng phù hợp cho sinh trưởng ba kích tím nhân giống in vitro che sáng 60%, sử dụng lưới nhựa với độ che sáng 60% trồng tán rừng có độ che sáng tương đương + Chuẩn bị đất hố trồng: Phát, đốt dọn thực bì Cuốc lật toàn đất trồng, đập tơi, loại bỏ đá lớn đào hố có kích thước 40x40x40cm 70 - Cách trồng: Trước trồng cần dùng cuốc xới đất hố lên, trộn đất hố với phân bón lót (phân chuồng ủ hoai) Bón bổ sung 100g lân hữu vi sinh cho hố trồng ba kích tím Dùng dao xẻ dọc, lột bỏ vỏ bầu, đặt vào hố, lấp đất mịn, nén chặt đất theo chiều thẳng đứng, tránh làm vỡ bầu, vun đất bột vừa kín bầu - Chăm sóc: Mỗi ngày tưới nước lần vào buổi sáng Thường xuyên vệ sinh khu vực thí nghiệm, làm cỏ, phế thải vật có nguy gây ô nhiễm khu vực thí nghiệm, chống úng cho khu vực thí nghiệm Theo dõi phòng trừ côn trùng gây hại, nấm bệnh kịp thời Hình 4.3 mô tả giai đoạn sinh trưởng ba kích tím nhân giống in vitro trồng điều kiện tự nhiên phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng 71 Hình 4.3 Cây ba kích tím trồng điều kiện che sáng 60%, bón phân lân hữu vi sinh 100g/gốc giai đoạn khác phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng 72 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu đề tài, rút kết luận sau: - Điều kiện khí hậu phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng phù hợp với đặc điểm sinh thái ba kích tím Vùng sinh thái phù hợp với sinh trưởng ba kích có đặc điểm pH thấp (đất chua), đất cát pha, màu đỏ vàng, độ mùn trung bình đến giàu, địa hình phẳng đến dốc ít, dễ thoát nước, không bị úng nước Trong vùng sinh thái khảo sát phường Hòa Khánh Nam vùng sinh thái núi Khánh Sơn phù hợp để trồng thực nghiệm ba kích tím in vitro - Cây ba kích tím in vitro giai đoạn vườn ươm phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng sinh trưởng tốt giá thể gồm đất lấy khu vực thí nghiệm, xơ dừa trấu hun (7:2:1) Chế độ che sáng thích hợp che sáng 60% Tưới nước lần ngày, lần tưới 4L/m2 - Trong điều kiện tự nhiên tại phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng ba kích tím in vitro sinh trưởng tốt đất cát pha, địa hình dốc ít, độ che sáng 60%, bón bổ sung 100g phân lân hữu vi sinh cho gốc, tưới nước vào buổi sáng cho - Trong điều kiện tự nhiên tại phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng ba kích tím nuôi cấy in vitro có khả sinh trưởng tốt hẳn ba kích tím nhân giống hom - Căn kết nghiên cứu nhân giống in vitro ba kích tím TS.Võ Châu Tuấn Huỳnh Minh Tư (2010), kết nghiên cứu đề tài mạnh dạn xây dựng 01 qui trình hoàn chỉnh từ giai đoạn nhân giống in vitro đến giai đoạn trồng ba kích tím in vitro điều 73 kiện tự nhiên phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng gồm giai đoạn Kiến nghị - Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng số nhân tố sinh thái đến sinh trưởng ba kích tím in vitro trồng phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng để có đánh giá đầy đủ - Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng số nhân tố sinh thái đến sinh trưởng ba kích tím in vitro trồng phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng giai đoạn sau - Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng số nhân tố sinh thái đến sinh trưởng ba kích tím in vitro khu vực khác TP Đà Nẵng, địa phương khác - Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng số nhân tố sinh thái đến tích lũy chất hóa học ba kích tím in vitro trồng phường Hòa Khánh Nam, quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng 74 ... tính sinh tính đất [22] 1.1.2 Các nghiên cứu ảnh hưởng nhân tố sinh thái đến sinh trưởng thực vật a Trên giới Trên giới có nhiều tác giả nghiên cứu ảnh hưởng nhân tố sinh thái đến sinh trưởng. .. VỚI SỰ SINH TRƯỞNG CỦA THỰC VẬT Sinh trưởng thực vật chịu tác động nhân tố sinh thái (nhiệt độ, ánh sáng, nước, dinh dưỡng,…) 1.1.1 Vai trò số nhân tố sinh thái sinh trưởng thực vật Sinh trưởng. .. bão hòa nước dẫn đến làm giảm sinh trưởng Trong đời sống cây, thiếu nước giai đoạn ảnh hưởng đến sinh trưởng [17] d Vai trò số nhân tố sinh thái đất Đất nơi sinh sống người sinh vật cạn Là móng,