Header Page of 126 Công trình ñược hoàn thành BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG MẪN THỊ THU HẰNG Người hướng dẫn khoa học: GS.TSKH TRẦN VĂN SUNG Phản biện 1: PGS.TS Lê Tự Hải NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ HỢP CHẤT HÓA HỌC TRONG MỘT SỐ DUNG MÔI Phản biện 2: PGS.TS Võ Viễn CỦA THÂN CÂY CAU CHUỘT NÚI (PINANGA DUPERREANA) THUỘC HỌ CAU (ARECACEAE) Ở TỈNH HÒA BÌNH CỦA VIỆT NAM Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 27 Luận văn ñã ñược bảo vệ trước hội ñồng chấm Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 13 tháng 11 năm 2012 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Có thể tìm hiểu luận văn tại: Đà Nẵng – 2012 Footer Page of 126 - Trung tâm Thông tin – Học liệu, Đại học Đà Nẵng Thư viện trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng Header Page of 126 MỞ ĐẦU chưa ñược nghiên cứu Còn công trình nghiên cứu nước Tính cấp thiết ñề tài ñược công bố chưa nhiều Từ xưa ñến nay, người ñã biết khai thác nguồn tài nguyên sinh Vì vậy, việc tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học, ứng dụng học quý giá ñể làm thực phẩm, thuốc chữa bệnh, vật liệu phương pháp ñại cộng hưởng từ hạt nhân, phổ khối, ñể xác nhiên liệu cho sống thường ngày Cùng với phát triển ñịnh cấu trúc nghiên cứu hoạt tính sinh học số hợp chất có khoa học kỹ thuật, việc khai thác sử dụng thuốc quý giá trị loài thuộc chi nói Việt Nam hướng không ñơn dựa vào kinh nghiệm mà có sở nghiên cứu có nhiều triển vọng khoa học Một ñường hữu hiệu ñể phát chất Mục tiêu nghiên cứu có hoạt tính tiềm năng, phát triển thành thuốc chữa bệnh cho người, gia súc trồng ñi từ hợp chất thiên nhiên Người ta sử dụng hợp chất thiên nhiên cách trực tiếp ñể làm thuốc, sử dụng làm mô hình ñể nghiên cứu tổng hợp hoạt chất theo phương pháp phát triển thành thuốc Chúng ñược Luận văn ñặt mục tiêu tìm hiểu thành phần hóa học thăm dò hoạt tính sinh học - Chiết tách, phân lập xác ñịnh cấu trúc hóa học chất từ dịch chiết n-hexan có thân cau chuột núi - Thử hoạt tính sinh học dịch chiết chất tách dùng nguồn nguyên liệu trực tiếp, gián tiếp cung cấp ñược chất ñầu cho công nghệ bán tổng hợp nhằm tìm kiếm chất mới, Đối tượng phạm vi nghiên cứu dược phẩm có hoạt tính, tác dụng chữa bệnh tốt hơn, hiệu Trong luận văn ñi sâu vào tách, tinh chế xác ñịnh Các số liệu gần ñây cho thấy rằng, có khoảng 60% dược phẩm ñược cấu trúc số thành phần hóa học dịch chiết n-hexan dùng chữa bệnh nay, ñang thử cận lâm sàng ñều có nguồn thân Cau Chuột Núi gốc từ thiên nhiên Tuy nhiên, phần lớn ñược sử dụng làm thuốc dân gian chưa ñược nghiên cứu ñầy ñủ có hệ thống mặt hóa học hoạt tính sinh học mà chủ yếu dựa kinh nghiệm dân gian Vì - Thân Cau Chuột Núi thu hái tỉnh Hòa Bình - Điều tra sơ bộ, thu thập, xử lý nguyên liệu - Chiết mẫu thực vật dung môi có ñộ phân cực khác chưa phát huy hết ñược hiệu nguồn tài nguyên quý giá - Thử hoạt tính sinh học dịch chiết thu ñược Trong vô số loài thực vật Việt Nam, có nhiều loài thuộc chi - Chiết tách , tinh chế hợp chất từ dịch chiết Pinanga họ Cau (Arecaceae) có giá trị sử dụng cao, ñược dùng làm - Xác ñịnh cấu trúc hóa học hợp chất phân lập ñược thuốc chữa nhiều bệnh theo kinh nghiệm dân gian Nhưng công - Thử hoạt tính sinh học hợp chất thu ñược trình nghiên cứu thành phần hoá học, hoạt tính hợp chất thuộc chi nói nước ít, có Phương pháp nghiên cứu 4.1 Các phương pháp nghiên cứu lý thuyết: - Phương pháp nghiên cứu hợp chất thiên nhiên, Footer Page of 126 Header Page of 126 - Tổng quan tài liệu ñặc ñiểm thực vật, thành phần hóa học, tác dụng sinh học dịch chiết chất có thân Cau - Nguyên liệu ñã xử lý ñược chiết hồi lưu với dung môi khác hexan, cloroform, metanol, etanol, nước thu ñược phần chiết Chuột Núi , phương pháp chiết tách xác ñịnh thành phần hóa học - Thử hoạt tính sinh học dịch chiết hợp chất thiên nhiên hoạt tính sinh học chúng - Phân lập, tách tinh chế chất phương pháp sắc ký cột, 4.2 Các phương pháp nghiên cứu thực nghiệm - Xử lý mẫu: nguyên liệu thân cau chuột núi ñược cắt nhỏ sắc ký lớp mỏng, sắc ký lỏng trung áp, sắc ký lỏng hiệu cao, phương pháp kết tinh phân ñoạn - Các phương pháp khảo sát cấu trúc: kết hợp phương pháp ño sấy khô, xay nhỏ - Phương pháp chiết: ngâm, chiết dung môi có ñộ phân phổ hồng ngoại (IR), phổ tử ngoại (UV), MS, phổ cộng hưởng từ hạt cực khác Như n-hexan , etylaxetat methanol, n-butanol ñể thu nhân chiều (1D NMR): 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, cộng hưởng từ ñược dịch chiết hạt nhân hai chiều (2D NMR): COSY, NOESY phương pháp - Thử hoạt tính sinh học dịch chiết khác ñể tìm ñặc trưng cấu trúc tiêu biểu số hợp chất - Phương pháp xác ñịnh thành phần hóa học, ñịnh danh, tách phân lập ñược phân lập, xác ñịnh cấu trúc cấu tử phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS) , sắc ký cột (SKC), sắc ký mỏng 13 (SKBM), H-NMR, C-NMR, DEPT, COSY, HMBC, HSQC, IR, MS Nội dung nghiên cứu 5.1 Nghiên cứu lý thuyết - Các phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học: thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm, kháng oxi hoá, kháng tế bào ung thư Ý nghĩa khoa học thực tiễn ñề tài Từ kết nghiên cứu, luận văn ñã thu ñược số kết với ñóng góp thiết thực sau: - Từ nguồn tài liệu khác tìm hiểu hợp chất thiên nhiên, - Những kết thành phần hóa học hoạt tính sinh học phương pháp chiết tách xác ñịnh thành phần hóa học hợp loài nghiên cứu thuộc chi Pinanga ñóng góp vào kho tàng chất thiên nhiên hoạt tính sinh học chúng hợp chất thiên nhiên Việt Nam giới - Sơ lược họ Cau tác dụng số thuộc họ Cau - Sơ lược cau chuột núi, thành phần hóa học ứng dụng phận cau chuột núi: - Tìm hiểu ñặc trưng cấu trúc bật hợp chất có hoạt tính khả biến ñổi cấu trúc ñể có hoạt tính tốt - Tạo sở khoa học cho việc sử dụng nguồn thực vật Việt + Đặc ñiểm, phân bố Nam cách hiệu + Công dụng cau chuột núi ñối với ñời sống Cấu trúc luận văn - Đặc ñiểm cau chuột núi 5.2 Nghiên cứu thực nghiệm - Xử lý mẫu: nguyên liệu thân cau Chuột Núi ñược rửa sạch, sấy khô ñem xay nhỏ Footer Page of 126 Luận văn bao gồm Chương – TỔNG QUAN Chương – CÁC NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM Chương – KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Header Page of 126 CHƯƠNG 1.3.6 Một số công dụng khác TỔNG QUAN VỀ MỘT SỐ LOÀI 1.4 CÁC NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC VÀ TRÊN THẾ GIỚI TRONG HỌ CAU (ARECACEAE) VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC Đã tổng quan tài liệu nước giới MỘT SỐ LOÀI CÂY TRONG HỌ CAU (ARECACEAE) vấn ñề liên quan ñến luận văn như: 1.4.1 Cây cau (Areca catechu L.) 1.1 KHÁI QUÁT VỀ HỌ CAU 1.4.2 Cây Cọ Dầu (Elaeis guineensis Jacq.) 1.1.1 Đặc ñiểm chung hình thái họ Cau (Arecaceae) 1.4.3 Cây Dừa (Cocos nucifera L.) 1.1.2 Phân loại họ Cau 1.4.4 Cọ Hạ Long (Livistona halongensis) 1.1.3 Một số chi họ Cau 1.4.5 Cọ Xẻ (Livistona chinensis) 1.1.4 Phân bố họ Cau 1.4.6 Các nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh 1.1.5 Quá trình tiến hóa họ Cau 1.2 MỘT SỐ CHI TRONG HỌ CAU 1.2.1 Chi cọ học số loài Chi Cau Chuột 1.5 NHẬN XÉT CHUNG Họ cau họ thực vật lớn giới Việt Nam 1.2.2 Chi Dừa Trong số loài họ cau có Việt Nam có loài 1.2.3 Chi Cau Chuột (Pinanga Blume) ñược nghiên cứu hoạt tính sinh học thành phần hóa học Theo tài a Đặc ñiểm chung chi Cau Chuột liệu có ñược Việt Nam có cau, dừa b Cau Chuột núi nốt ñược nghiên cứu nhiều hóa học hoạt tính sinh học c Cau Chuột Nam Bộ Các lại chưa ñược nghiên cứu hoạt tính dược lý d Cau Chuột Bà Na lẫn thành phần hóa học Vì lý ñó nên việc ñặt vấn ñề nghiên cứu e Cau Chuột Ba Vì cách hệ thống thành phần hóa học hoạt tính sinh học số f Cau Chuột ngược loài họ cau cần thiết, có ý nghĩa khoa học thực tiễn cao g Cau Chuột bốn nhánh Đặc biệt nghiên cứu loài phát cho khoa học loài h Cau Chuột Trung Bộ ñặc hữu Việt Nam 1.3 GIÁ TRỊ SỬ DỤNG MỘT SỐ LOÀI TRONG HỌ CAU 1.3.1 Trồng làm cảnh 1.3.2 Dùng làm thuốc chữa bệnh Các kết nghiên cứu ñóng góp vào việc chứng minh tính ña dạng sinh học thảm thực vật Việt Nam Đối với Cau Chuột núi, ñối tượng nghiên cứu luận văn 1.3.3 Lấy sợi này, loài phát cho khoa học Nghiên cứu cách ñầy 1.3.4 Ăn quả, lấy ñường tinh bột ñủ thành phần hóa học hoạt tính sinh học Cau Chuột núi 1.3.5 Cho dầu béo góp phần tăng thêm giá trị di sản giới Footer Page of 126 Header Page of 126 10 Một số hoá chất khác ñược sử dụng CH3COOH, HCl, CHƯƠNG CÁC NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM pyridin, anhydrit acetic 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU b Thiết bị Các thiết bị xác ñịnh cấu trúc chất: 2.1.1 Nguyên liệu Nguyên liệu ñể nghiên cứu luận văn là: Mẫu - Pinanga duperreana ñược thu hái Hòa Bình vào tháng năm 2009 CN Ngô Văn Trại, Viện Dược liệu, Bộ Y tế xác ñịnh tên khoa Phổ khối HP 5989B MS Engine, LC/MSD Agilent Viện Hóa học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam - Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H–NMR, 13 C–NMR ño máy Bruker Avance–500 MHz, chất nội chuẩn TMS cho 1H–NMR học tín hiệu dung môi (DMSO) cho 13C–NMR Viện Hóa học, Viện Mẫu tiêu ñược lưu giữ phòng tổng hợp hữu cơ, Viện Hoá học – Viện KHCN Việt Nam số 18 Hoàng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội Thân sau thu hái ñược rửa sạch, phơi, sấy khô xay Khoa học Công nghệ Việt Nam - Phổ hồng ngoại (FT–IR) ño dạng viên nén KBr trên máy thành bột ñể chiết với dung môi n–hexan, diclometan n- quang phổ IMPACT 410 hãng Nicolet, Hoa Kì Viện Hóa butanol (BuOH) học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam 2.1.2 Hóa chất, thiết bị nghiên cứu - Đèn tử ngoại (UV BIOBLOCK) bước sóng λ = 254nm 365nm a Hóa chất dùng ñể soi mỏng ñặt phòng tổng hợp hữu cơ, Viện Hóa Sắc kí lớp mỏng sử dụng mỏng nhôm tráng sẵn silicagel học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Merck 60GF254, ñộ dày 0,2mm mỏng ngược pha RP–18 Sắc ký - Phổ khối phân giải cao HR – ESI – MS ñược ño máy Varian cột thường: silicagel cỡ hạt 197 – 400 mesh (0,040 – 0,063mm) cho cột FT – ICR – MS Hoa Kỳ Viện Hóa học, Viện Khoa học ñầu Sắc ký cột nhanh: silicagel cỡ hạt 70 – 200 mesh cho cột Công nghệ Việt Nam Dung môi ñược cất lại qua cột Vigreux trước sử dụng Phân lập chất phương pháp sắc kí cột với chất hấp phụ silicagel cỡ hạt 0,040 – 0,063mm Merck Thuốc thử phun lên mỏng chủ yếu sử dụng Vanilin 1% dung dịch metanol – H2SO4 ñặc, sau ñó sấy nhiệt ñộ khoảng - Ngoài dùng số trang thiết bị khác máy quay cất chân không hãng Buchi, Thụy Sĩ, máy sấy, máy siêu âm, dụng cụ thuỷ tinh, v.v Cộng Hòa Liên Bang Đức 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Phương pháp chiết mẫu thực vật 2.2.2 Phương pháp tách tinh chế chất 110 C Dung môi dùng chạy cột triển khai sắc kí lớp mỏng bao gồm n–hexan, CH2Cl2, EtOAc MeOH loại tinh khiết ñã ñược cất lại qua cột Vigereux trước sử dụng ñể loại bỏ tạp chất, chất làm mềm 2.2.3 Phương pháp xác ñịnh cấu trúc hóa học chất 2.2.4 Phương pháp thăm dò hoạt tính sinh học a Hoạt tính gây ñộc tế bào b Phương pháp thử hoạt tính kháng oxi hóa Footer Page of 126 Header Page of 126 11 12 2.2.5 Phương pháp lựa chọn chất hấp phụ dung môi chạy cột sắc kí a Chọn chất hấp phụ Nguyên liệu(Thân Cau Chuột núi sấy khô, xay nhỏ ñược 2600 gam bột khô) b Lựa chọn dung môi chạy cột sắc kí MeOH/ H2O 85: 15 (V/V) 2.2.6 Tỉ lệ lượng mẫu chất cần tách với kích thước cột a Tỉ lệ lượng mẫu chất cần tách với lượng silicagel sử Cất loại bớt dung môi dụng Dịch chiết có nước b Tỉ lệ chiều cao lượng silicagel ñường kính cột sắc kí 2.2.7 Cách nạp silicagel vào cột Chiết dung môi có ñộ phân cực khác n – hexan, diclometan, BuOH a Nạp silicagel dạng sệt b Nạp silicagel dạng khô 2.2.8 Cách nạp mẫu vào cột Các cặn chiết Các dịch chiết a Phương pháp khô b Phương pháp ướt 2.3 CÁC NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 2.3.1 Sơ ñồ thực nghiệm Chạy cột sắc ký cột kết hợp sắc kí mỏng ñể tách chất Thử hoạt tính sinh học Quá trình thực nghiệm chung ñược mô tả hình 2.4 Phổ (IR, MS, 1H – NMR, 13C – NMR …) ñể xác ñịnh cấu trúc phân tử Thử hoạt tính sinh học Thành phần hóa học hoạt tính sinh học Hình 2.4 Sơ ñồ thực nghiệm Footer Page of 126 Header Page of 126 13 14 CHƯƠNG Thân Cau Chuột núi (2600 gam bột khô) KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Ngâm chiết (M/W = 85 /15) lần 3.1 KẾT QUẢ THỬ HOẠT TÍNH SINH HỌC Chúng tiến hành kiểm tra hoạt tính sinh học bao gồm hoạt Dịch nước tính chống oxy hóa hoạt tính gây ñộc tế bào ung thư người dịch Chiết với dung môi: n – hexan, chiết n – hexan dịch chiết diclometan thân cau Chuột núi diclometan, butanol Kết ñược ñưa ñây 3.1.1 Hoạt tính chống oxi hoá 2,2 gam 5,1 gam Kết thử hoạt tính chống oxi hoá ñược ñưa bảng 3.1 50 gam Bảng 3.1 Kết thử hoạt tính chống oxi hoá Hình 2.5 Sơ ñồ chiết mẫu thân Cau Chuột núi Phần cao n–hexan (lỏng) màu nâu ñược tiếp tục chạy cột sắc kí % ức chế hoạt ñộng enzym Peroxydara PDTN PDTD 19 19 14 12 0 > 128 > 128 Nồng ñộ chất thử (µg/ml) ñồng thời kết hợp với chạy GC – MS ñể xác ñịnh ñịnh danh thành 128 32 0,5 IC50 (µg/ml) phần hoá học 2.3.2 Chạy cột sắc kí phần cao n- hexan Các phân ñoạn lại chấm mỏng thấy không khả thi nên chưa ñược nghiên cứu Theo kết bảng 3.1 ta thấy dịch chiết n –hexan 5,1 gam cao n – hexan H.PD2/13 (m = 175 mg) diclometan thân cau Chuột núi thu tỉnh Hòa Bình Việt Nam hoạt tính chống oxi hóa Các chất có IC50 > 128 µg/ml H.PD /13(m = 400 mg) Chạy cột Silicagel Hệ dung môi: Chạy cột Silicagel Hệ dung môi: ñược coi hoạt tính chống oxi hóa 3.1.2 Hoạt tính gây ñộc tế bào Kết thử hoạt tính gây ñộc tế bào dịch chiết từ thân H.PD2.3 /3(m = 15 mg) Cau Chuột núi ñược ñưa bảng 3.2 Chạy cột Silicagel Hệ dung môi: PDH 1.1 Bảng 3.2 Kết thử hoạt tính gây ñộc tế bào PDH3 PDH2 Hình 2.7 – Phân lập tinh chế chất từ phân ñoạn dịch chiết n – hexan Footer Page of 126 Số TT Tên mẫu IC50 (µg/ml) KB LU MCF–7 Hep G2 PDTN > 128 > 128 > 128 > 128 PDTD > 128 > 128 > 128 > 128 Header Page of 126 15 Theo kết bảng 3.2 ta thấy, dịch chiết n – hexan, diclometan hoạt tính ức chế dòng tế bào ung thư thử nghiệm Tuy tiến hành tách xác ñịnh cấu trúc chất hóa học từ dịch chiết n – hexan thân Rất chất tách ñược thể hoạt tính 3.2 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT TÁCH ĐƯỢC Từ 5,1 gam dịch chiết n – hexan thân cau Chuột núi, sau chạy sắc ký cột nhắc lại nhiều lần với hệ dung môi rửa giải n – hexan : EtOAc với ñộ phân cực (% EtOAc) tăng dần thu ñược chất kết tinh hình kim màu trắng ký hiệu PDH3 chất dạng dầu ký hiệu PDH2 Các số liệu phổ chất ñược ñưa ñây 3.2.1 Số liệu phổ chất tách ñược a Chất PDH2 PDH2, chất dạng dầu với hệ dung môi n–hexan : EtOAc = : - Phổ IR: υKBr (cm-1) 3443 (OH), 3010 3050 (=CH-), 2921 2872 (- CH2, - CH3), 1664 1510 ( - - C C ), 1460 (- CH2, - CH3), 1043 (C=O) Phổ 1H – NMR (500 MHz, CDCl3): δ ppm : 5, 32 – 5,39 (m, 1,7H), 2,77 (1H, m), 2,35 (2H, m), 2,05 (2H, m), 1,64 (2,7H, m), 1,25 – 1,32 (19H, m), 0,88 (5H, d) Phổ 13C – NMR (125 MHz, CDCl3): 16 b Chất PDH3 PDH3, chất rắn màu trắng, Rf = 0,69 ( n – Hexan : diclometan = 1/4 ), hiệu suất 0,0039% so với mẫu khô, hỗn hợp - sitosterol (PDH3a) stigmasterol (PDH3b) Phổ 1H – NMR (500 MHz, CDCl3): H 5,34 – 5,35 (2H, m), 5,15 (1H , dd, J = 8,6; 15,1), 5,02 (1H, dd, J = 8,7; 15,1), 3,49 – 3,54 (2H, m), 2,20 – 2,30 (4H, m), 1,95 – 2,06 (5H, m), 1,81 – 1,86(5H, m), 1,68 – 1,72 (2H, m), 1,29 – 1,45 (20H, m), 1,09 – 1,20 (4H, m), 1,02 (3H, d, J = 6,63), 1,01 (3H, s), 0,91 (3H, d, J = 6,25), 0,78 (3H, d, J = 7,43), 0,83 – 0,89 (6H, m), 0,69 (3H, s) Phổ 13C – NMR (125 MHz, CDCl3): C 140,68; 138,30; 129, 29; 121, 71; 71,8; 56,87; 56,77; 55,97; 51,24; 50,15; 45,90; 42,32; 42,21; 42,13; 40,47; 39,78; 39,69; 37,25; 36,50; 34,06; 32,40; 31,91; 31,77; 31,49; 24,72; 24,70; 22,68; 21,07; 19,79; 19,04; 14,08; 14,04 Phổ ESI-MS ion dương chất PDH3 cho pic m/z = 414,8 [M]+ β – Sitosterol (C30H50O) m/z = 395,8 [M+1 - H2O] + tính theo stigmasterol (C30H48O) Pic m/z= 395,8 pic bản, hình thành tạo thành dẫn xuất dien liên hợp (3,5-dien) sau phân tử chất PDH3 bị tách phân tử nước, khối lượng phân tử chất PDH3 414 412 phù hợp với công thức C29H50O C29H48O hai phytosterol 3.2.2 Xác ñịnh cấu trúc chất tách ñược a Chất PDH2 δ ppm : 126,92 (=CH); 1270 (=CH); 129,0 (=CH); 129,2 (=CH); 75,9 (CH-OH); 30,9; 30,5; 28,0 – 28,7; 26,2; 24,6; 23,7; 21,7; 21,6 (tất –CH2); 13,0 (-CH3) Qua số liệu phổ IR NMR thấy chất PDH2 hỗn hợp gồm hai ancol béo bậc hai, ancol chứa nối ñôi Hai ancol có cấu trúc gần giống Footer Page of 126 Hình 3.1 Phổ IR chất PDH2 Header Page of 126 18 17 Hình 3.2 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân H–NMR (500 MHz, DMSO) Hình 3.5 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR chất PDH2 chất PDH2 Hình 3.6 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR chất PDH2 Hình 3.3 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H–NMR (500 MHz, DMSO) chất PDH2 Hình 3.7 Phổ 13C-NMR phổ DEPT chất PDH2 b Chất PDH3 PDH3 ñược phân lập dạng chất rắn màu trắng Phổ 1H – NMR cho thấy tín hiệu metyl singlet Hình 3.4 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR chất PDH2 Footer Page of 126 nhóm metyl triplet H 0,87 H 1,01 với metyl doublet 0,69; H 1,02 (3H, d, J = 6,63), 0,91 (3H, d, J = 6,25) 0,78 (3H, d, J = 7,43) Ngoài ra, Header Page 10 of 126 20 19 tín hiệu proton olephin H 5,34 – 5,35 (2H, m), 5,15 (1H, dd, J = 8,6; 15,1), 5,02 (1H, dd, J = 8,7 : 15,1) tín hiệu nhóm metin mang oxi H 3,49 – 3,54 (2H, m) ñược quan sát thấy Các tín hiệu proton lại cộng hưởng chồng chập khoảng H 13 0,80 – 2,34 Phổ C – NMR phổ DEPT cho tín hiệu cộng hưởng 29 cacbon, ñó có cacbon bậc bốn, 11 cacbon bậc ba, cacbon bậc hai nhóm metyl Phổ 13C – NMR tín hiệu cacbon olefin ( C C 140,69; 138,30;129,29;121,72) nhóm metin mang oxi 71,84 Tín hiệu nhóm metyl xuất C 21,21; 21,08; 19,37; 18,98 14,08 Tín hiệu nhóm metin metilen lại nằm khoảng C 22,68 – 56,87 So sánh số liệu phổ NMR hợp Hình 3.8 Phổ IR hỗn hợp stigmasterol β – Sitosterol chất thu ñược với tài liệu tham khảo [32], ñã xác ñịnh ñây hỗn hợp hai chất - sitosterol (PDH3a) stigmasterol (PDH3b) Trên phổ 1H – NMR hỗn hợp hai chất này, tỉ lệ ñường tích phân proton H 5,34 (H – 6), 5,15(H – 22), 5,02(H – 23) 3,51 (H -3) 2:1:1:2 Do ñó xác ñịnh tỉ lệ tương ñối - sitosterol (PDH3a) stigmasterol (PDH3b) hỗn hợp thu ñược 1: Trong giới thực vật - sitosterol stigmasterol hai phytosterol hay ñi Chúng hay tạo thành tinh thể hỗn hợp ñồng kết tinh với tỷ lệ 1: Do hai chất kết tinh dạng tinh thể không tách khỏi ñược qua phương pháp sắc ký Tuy nhiên, ngày với phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân H 13C – NMR người ta xác ñịnh ñược hạt nhân dạng hỗn hợp Chúng nối ñôi mạch nhánh - sitosterol stigmasterol tồn phổ biến thực vật nấm Trong dầu ñậu tương có tới 25% stigmasterol phần không thủy phân Ngày người ta sử dụng hai phytosterol ñể sản xuất dược phẩm, ñặc biệt thuốc steroit qua số bước, phản ứng enzym phản ứng hóa học Ngoài chúng có nhiều hoạt tính dược lý quý khác Footer Page 10 of 126 Hình 3.9 Phổ MS hỗn hợp stigmasterol β – Sitosterol Header Page 11 of 126 21 22 Hình 3.10 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H–NMR (500 MHz, DMSO) Hình 3.12 Một phần phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR hỗn hợp hỗn hợp stigmasterol β – Sitosterol stigmasterol β – Sitosterol Hình 3.11 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H–NMR (500 MHz, DMSO) hỗn hợp stigmasterol β – Sitosterol Hình 3.13 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR hỗn hợp stigmasterol β – Sitosterol Footer Page 11 of 126 Header Page 12 of 126 23 24 Hình 3.14 Một phần phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C-NMR giãn rộng hỗn hợp stigmasterol β – Sitosterol 71,8 42,35 140,68 121,71 10 11 12 13 14 15 16 17 18 31,91 31,77 50,15 36,50 21,1 39,78 42,32 56,87 24,4 28,87 56,02 12,10 19 19,4 20 21 40,47 21,2 22 23 24 25 26 13 Hình 3.15 Phổ C-NMR phổ DEPT hỗn hợp stigmasterol β – 27 Sitosterol Bảng 3.3: So sánh phổ 13C-NMR hợp chất PDH3 với β – Sitosterol stigmasterol STT Hợp chất PDH3 C δC 37,25 31,70 δH (J=Hz) Footer Page 12 of 126 β – Sitosterol [11] δC δH (J=Hz) 37,27 Stigmasterol [11],[27], [28], [34] δC δH (J=Hz) 37,24 31,92 31,87 28 29 3,51 (1H, m, H-3α) 5,35 (d, J= 5,4 Hz, H-6) 0,70 (3H, s, H-18) 1,01 (3H, s, H-19) 1,02 (3H, d, J=6,7 Hz, H21) 138,30 5,02 (1H, dd, J=8,7, 15,2 Hz, H-22) 129,29 5,16 (1H, dd, J=8,6, 15,2 Hz, H-23) 51,24 31,91 19,04 0,85 (3H, d, J=6,4 Hz, H26) 21,07 0,798 (3H, d, J=6,4 Hz, H27) 25,4 12,2 0,81 (3H, t, J=7,5 Hz, H29) 71,8 42,33 140,76 121,69 31,92 31,92 50,15 36,51 21,1 39,80 42,33 56,78 24,31 29,18 56,08 11,99 19,39 40,5 21,2 138,3 129,3 51,3 31,92 19,0 21,1 12,3 3,49(1H, m, H-3) 5,33(1H, dd, J=5, 2Hz, H-6) 0,69(3H, s, H18) 1,01(3H, s, H19) 71,80 42,18 140,67 121,70 3,49(1H, m, H-3) 5,33(1H, dd, J=5, 2Hz, H-6) 31,87 31,87 50,12 36,40 21,06 39,66 42,18 56,83 24,35 28,92 55,91 12,1 0,69(3H, s, H-18) 19,39 1,01(3H, s, H-19) 40,5 0,92(3H, d, 21,22 J=6,5Hz, H21) 5,03(1H, dd, 138,25 J=15,5Hz, 8,5Hz, H-22) 5,11 (1H, 129,19 J=15,5Hz, 8,5Hz, H-23) 51,21 31,87 0,84(3H, d, 19,0 J=6,5Hz, H26) 0,81(3H, d, 21,06 J=6,5Hz, H27) 25,4 0,85(3H, t, 12,26 J=7,1Hz, H29) 0,92(3H, d, J=6,5Hz, H-21) 5,03(1H, dd, J=15,5Hz, 8,5Hz, H-22) 5,11 (1H, J=15,5Hz, 8,5Hz, H-23) 0,84(3H, d, J=6,5Hz, H-26) 0,81(3H, d, J=6,5Hz, H-27) 0,85(3H, t, J=7,1Hz, H-29) Header Page 13 of 126 25 26 3.3 NHẬN XÉT VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CAU Thành phần hoá học CHUỘT NÚI (PINANGA DUPERREANA) Từ dịch chiết n – hexan thân Cau Chuột Núi (Pinanga Ở Việt Nam giới, ñây lần ñầu tiên P duperreana ñược nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính chống oxy hóa gây ñộc tế bào ung thư người Kết cho thấy thành phần duperrana), ñã tách xác ñịnh ñược cấu trúc hỗn hợp chất thân Cau Chuột núi Chất PDH3 dạng tinh thể hỗn hợp - sitosterol hóa học chứa lớp chất khác nhau, ñó lượng chất (PDH3a) stigmasterol (PDH3b) ñồng kết tinh theo tỷ lệ 1:1 phân cực mạnh chiếm lượng lớn (dự ñoán ñường saponin Stigmasterol β-sitosterol hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh glucosid) khó tách Tuy nhiên, ñây kết nghiên học, tồn phổ biến giới thực vật cứu ban ñầu, dùng làm tư liệu tham khảo cho nghiên cứu chi Pinanga Hỗn hợp Stigmasterol - Sitosterol thân Cau Chuột núi có số tác dụng sinh học như: có tác dụng chống oxi hóa, giảm cholesterol máu làm tăng hàm lượng chất HDL – C (high density KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ lipid – cholesterol) thành phần quan trọng ñể bảo vệ tim mạch, phòng Kết luận chống xơ vữa ñộng mạch, tăng sức ñề kháng cho thể, nghiên cứu Qua trình tiến hành tìm kiếm thông tin ñề tài, ñã stigmasterol chất có tác dụng phòng chống bước ñầu cung cấp ñược thông tin nguồn gốc, ñặc ñiểm, thành phần hoá học Cau chuột núi, vài công dụng thân Cau Chuột núi Trong khuôn khổ ñề tài luận văn thạc sĩ, nghiên cứu ñược thành phần hoá học hoạt tính sinh học Pinanga duperrana với kết ñạt ñược sau: Thăm dò hoạt tính sinh học ung thư ñịnh như: ung thư tuyến tiền liệt, ung thư vú, ruột già,… Đây lần ñầu tiên chất ñược phân lập từ thân Cau Chuột Núi (Pinanga duperrana) thuộc họ Cau Việt Nam Kiến nghị Nghiên cứu thành phần hoá học hoạt tính sinh học Pinanga duperrana, ñây loài cho ñến chưa ñược nghiên cứu Kết khảo sát cho thấy có diện - sitosterol Các dịch chiết n–hexan (PDTN), diclometan (PDTD) từ thân stigmasterol Cau Chuột Núi tín hiệu vui cho người sử Cau Chuột Núi (Pinanga duperrana) ñã ñược thử hoạt tính sinh dụng, nhiên ñể sử dụng cách ñúng ñắn Cau Chuột học Các dịch chiết n –hexan diclometan hoạt tính chống núi cần có khảo sát nhiều oxi hóa Các dịch chiết n – hexan, diclometan hoạt tính ức chế dòng tế bào ung thư thử nghiệm Phân lập phân ñoạn lại dịch chiết n – hexan chạy cột sắc kí kết hợp với GC/MS phần cao n–hexan ñể xác ñịnh thành Đây lần ñầu tiên hoạt tính sinh học dịch chiết phần hoá học Đồng thời thử hoạt tính sinh học chất tách ñược n – hexan, diclometan từ thân Cau Chuột Núi (Pinanga duperrana) ñể có nhìn tổng thể hoá thực vật hoạt tính sinh học ñược nghiên cứu thân Cau Chuột Núi Footer Page 13 of 126  ... họ Cau 1.4.6 Các nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh 1.1.5 Quá trình tiến hóa họ Cau 1.2 MỘT SỐ CHI TRONG HỌ CAU 1.2.1 Chi cọ học số loài Chi Cau Chuột 1.5 NHẬN XÉT CHUNG Họ cau họ thực... PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CAU Thành phần hoá học CHUỘT NÚI (PINANGA DUPERREANA) Từ dịch chiết n – hexan thân Cau Chuột Núi (Pinanga Ở Việt Nam giới, ñây lần ñầu tiên P duperreana ñược nghiên cứu thành... ñược Việt Nam có cau, dừa b Cau Chuột núi nốt ñược nghiên cứu nhiều hóa học hoạt tính sinh học c Cau Chuột Nam Bộ Các lại chưa ñược nghiên cứu hoạt tính dược lý d Cau Chuột Bà Na lẫn thành phần hóa