LI CM N Bn khoỏ lun ny c thc hin ti phũng thớ nghim cỏc hp cht thiờn nhiờn, B mụn Hoỏ Hu C, khoa Hoỏ, trng HQGHN Em xin chõn thnh cm n Ban ch nhim khoa Hoỏ hc, cỏc thy cỏc cụ b mụn Hoỏ hu c, khoa Hoỏ trng HKHTN-HQGHN, cỏc thy cỏc cụ b mụn Hoỏ sinh thc nghim Vin KHTN v CNQG, v cỏc phũng mỏy ph, phũng cng hng t ht nhõn, phũng ph hp th nguyờn t thuc Vin hoỏ hc-Trung tõm khoa hoỏ t nhiờn v cụng ngh Quc gia, cựng ton th anh ch nghiờn cu sinh, hc viờn cao hc phũng hp cht thiờn nhiờn v cỏc bn cựng khoỏ ó giỳp em quỏ trỡnh lm vic ti khoa M U Vit Nam cú khớ hu nhit i m nờn h thc vt rt phong phỳ vi hn 12000 loi cõy chia lm 2500 chi v 300 h õy l ngun ti nguyờn thiờn nhiờn quý giỏ, cung cp ngun nguyờn liu cho ngnh hng liu, m phm v hoỏ dc Cỏc nh nghiờn cu ó tng hp c rt nhiu hp cht cú tỏc dng cha bnh, song cỏc hp cht ny cú mt s hn ch nht nh, nh l gõy nhng phn ng ph khụng mong mun Mt khỏc, Vit Nam l nc ang phỏt trin, thu nhp bỡnh quõn u ngi thp, cỏc loi thuc cha bnh hu ht nhp t nc ngoi v cú giỏ thnh cao, gõy nờn khú khn cho ngi s dng Do ú, nh nc ó cú ch trng tng cng sn xut thuc nc, hn ch nhp khu, h giỏ thnh sn phm Mt cỏc ngun nguyờn liu sn xut thuc c ly t thiờn nhiờn Vỡ vy ang c c bit quan tõm l nghiờn cu cỏc hp cht c tỏch t sn phm thiờn nhiờn Trong s cỏc loi cõy cn quan tõm nghiờn cu cõy vi (Cleistocslyx Operculatus Roxb) nc ta cõy vi mc nhiu ni, trung nhiu Trung , c nhõn dõn dựng nu nc ung, kớch thớch tiờu hoỏ Lỏ vi v n vi lm thuc cha mn nhn, l loột, gh Mi õy vin ụng y cng th ỏp dng vi lm thuc cha cỏc bnh ng rut, viờm hng, bnh ngoi da T nm 1991 tr li õy, mt s cụng trỡnh nc v trờn th gii nghiờn cu cõy vi cho thy hm lng flavonoit cha cõy cao v mt s cht cú hot tớnh khỏng HIV c bit mt nghiờn cu gn õy nht cho thy nc chit ca n Vi l thnh phn ca thuc tr tim Nh vy, cựng vi s thun li v nguyờn liu thỡ õy l nhng lý khớch l chỳng tụi nghiờn cu cõy vi Vit Nam PHN I TNG QUAN 1.1 Khỏi quỏt v h Sim Myrtaceae Cõy vi cú tờn khoa hc l Cleistocalyx operculatus Roxb, thuc chi Cleistocalyx, h Sim Mytaceae Cỏc cõy thuc h Sim thng mc xen ln vi cỏc cõy g khỏc thnh rng nhit i, ớt mc thun loi H Sim phõn b cỏc vựng rng nhit i v nhit i, ch yu chõu M v chõu c H Sim l mt h ln gm 90 chi v 3000 loi, cõy thuc h Sim cú c im thc vt nh sau : Cõy g ln, cõy nh hoc cõy bi Lỏ n, hoc mộp cú khớa rng, lỏ thng mc i v cú tuyn m Hoa mc thnh cm nỏch hay u cnh, cú hỡnh xim hoc hỡnh chựm Hoa u lng tớnh i hỡnh ng dớnh hon ton vo bu hay ch dớnh mt ớt Lỏ i gm 4-5 cỏnh xp lp vo nhau, ớt cú ng di nguyờn Nh xp thnh mt hay nhiu dóy ri hon ton hoc dớnh gc thnh ng ngn : bao phn ớnh lng hay gc a mt khụng cú hay nu cú thỡ hỡnh vnh khn, che kớn phớa gc vũi Bu hon ton h hay h mt phn, cú 4-5 ụ hay nhiu hn; vũi n kộo di, u trũn, rt ớt chia 3-4 thu; bu thỡ noón xp thnh hai hay nhiu dóy Qu nang hoc tht, cú si v thng c bc kớn bi ng i Trong qu thng cú ht, ht cú ni nh, phụi thng hay cong, ụi nc vi hai lỏ mm khụng xa 1.2 Tng quan v chi Cleistocalyx [6,9] Chi Cleistocalyx l mt chi tng i ln ca h Sim Ngoi c im chung ca h sim, cỏc loi cõy thuc chi Cleistocalyx cũn cú c im thc vt riờng : qu nc, chớn khụng n Vũi khụng cú lụng, ụ qu khụng cú vỏch ngang chia thnh ụ nh, ng i nguyờn hay rỏch bt nh, i nguyờn thnh m, qu mp cú mt ht Cm hoa xim hay chu Sau õy l gii thiu mt s cõy i din thuc chi Cleistocalyx thng thy Vit Nam 1.2.1 Cleistocalyx circumcissa Tờn Vit Nam l Trõm ễ c im thc vt : Cõy i mc cao 15m, nhỏnh mnh, lỏ cú phin xoan thon, di 4-7cm, chút cú m, cú m gõn ph, rt mnh, n cao 13mm, rng 3mm, phn ca i v cỏnh hoa lm thnh mt lp rng sm vi nh, noón gm bung, qu mp Phõn b : rng Biờn Ho 1.2.2 Cleistocalyx nigrans Tờn Vit Nam : Trõm lỏ en c im thc vt : Cõy i mc nh, nhỏnh vng Lỏ cú phin bu dc, mu nõu en trờn mt lỳc khụ, gõn ph cỏch 2-3mm, cung di 1cm Chựm t tỏn cao 6cm ngn nhỏnh, hoa trng, n di 5mm, hoa cỏnh rng lt, tiu nh nhiu Qu mp trũn, lỳc khụ en, to hn 1cm, mt ht Phõn b : rng Bỡnh Dng, Th c 1.2.3 Cleistocalys nervosum Tờn Vit Nam : Trõm np vi c im thc vt : Cõy i mc trung, nhỏnh non dp, khụng lụng Lỏ cú phin bu dc thon, di 12-13cm, cú m nõu, gõn ph vo 10 cp, gõn cỏch bỡa 3-5mm Phỏt hoa nỏch lỏ rng, cao 5-8cm, i hỡnh a hi ng, np cao; hoa cú cỏnh, cao 3mm, cú nhiu tiu nhy Phỡ qu trũn hay di, to 7-14mm, hoc en chúi, nc ngt, mt ht Phõn b : rng v Bc Trung Nam 1.2.4 Cleistocalyx rehnervinus Tờn Vit Nam : Vi gõn mng c im thc vt : Cõy i mc nh, nhỏnh trũn xỏm, to 2-3mm Lỏ cú phin bu dc n trỏi xoan, to 9-14x5.5-7cm chút lỏ rng, ỏy trũn gõn ph mn, cỏch 4-8mm, gõn cỏch bỡa 2-3mm Phỏt hoa lỏ v ngn Hoa nh khụng cng, cao 7mm, i rng thnh chúp, tiu nhy nhiu Trỏi trũn, to 1.5mm, lựm bi 1.2.5 Cleistocalyx consperipuactatus Tờn Vit Nam : Vi nc c im thc vt : Cõy g thng xanh, cao 20-25m V dy 6-8mm, mu xỏm trng hay nõu en nht Cnh non mu nõu xỏm, hỡnh vuụng, lỳc gi hỡnh ct trũn Lỏ n, mc i, hỡnh bu dc dng trng ngc di 6-12cm, rng 2.5-5.5cm, u trũn tự Hoa mc cm, sinh u cnh Hoa lng tớnh, i ớnh thnh th dng m, lỳc n hoa rng dng vũng Nhiu nh, ri nhau, lỳc chi hoa cong vo Qu mng hỡnh cu hay hỡnh trng, lỳc chớn cú mu nõu tớm Mt nm cú hoa n vo thỏng v gia thỏng Phõn b : Thanh Hoỏ, Ngh Tnh, Bỡnh Tr Thiờn, Qung Nam, Nng, GiaLai-KonTum 1.3 Tng quan v cõy Vi (Cleistocalyx operculatus) 1.3.1 c im thc vt Cõy nh, cao 5-6m cú hn, cnh non, trũn hay hi hỡnh cnh, nhn Lỏ cú cung, di 8-20cm, hỡnh trng, rng 5-10cm Hai mt lỏ cú nhng m mu nõu, cung di 1-1.5cm Hoa gn nh khụng cú cung, mu lc trng nht hp thnh cm hoa hỡnh thỏp to nhng lỏ ó rng Qu hỡnh cu hay hi hỡnh trng, ng kớnh 7-12cm, xự xỡ Ton lỏ, cnh non, v n vi cú mựi thm c bit d chu ca vi [3,5] 1.3.2 Phõn b Cõy vi c trng v mc hoang khp cỏc tnh nc ta, ch yu ly lỏ nu nc ung Vi cũn thy cỏc nc nhit i chõu , Trung Quc [3,4] 1.3.3 ng dng ca cõy vi Vi c trng ly g dựng xõy dng, lm cụng c, v cú cht dựng nhum en Qu vi n c Lỏ vi ti em thỏi nh, sch nha ri cho vo thựng cho n en u thỡ ly ra sch, phi khụ dựng nu lm nc ung rt thụng dng nụng thụn Vit Nam N v hoa thu hỏi vo vo thỏng t hoc thỏng sỏu dng lch cng c pha lm tr ung Kinh nghim dõn gian thng phi hp lỏ vi vi lỏ Hoc hng lm nc ung li tiờu húa Nc sc m c ca lỏ cõy dựng nh thuc sỏt trựng, mn nht, l loột, gh Lỏ, v thõn, hoa cũn dựng lm thuc cha bnh y bng, khú tiờu, mn nht, viờm i trng tớnh, ly trc trựng [3,4,5] Nm 2003, o Th Thanh Hin, trng H Dc H Ni v nhng ngi khỏc ó tin hnh th nghim nghiờn cu mt s tỏc dng ca cõy vi Kt qu cho thy : - Tớnh khỏng khun ca lỏ vi, c bit l lỏ vi cú tỏc dng rt tt trờn vi khun E.coli, l loi vi khun thng gõy bnh ng rut, v hai vi khun Gr(+) v Gr(-) thng gp bnh viờm da iu ny lm sỏng t vic ung nc sc lỏ vi cha bnh tiờu chy v tm nc sc lỏ vi cha bnh viờm da ca nhõn dõn - Nc sc lỏ vi cú tỏc dng li mt rt mnh, kt qu ny gúp phn gii thớch c vỡ nhõn dõn ta thng ung nc sc lỏ vi cha bnh y bng, khú tiờu - Kt qu th tỏc dng c t bo ca mu chit t lỏ vi bc u cho thy c tinh du v cao thụ ton phn u cú kh nng c ch s phỏt trin t bo ung th (ung th gan, ung th mng tim, ung th t cung) iu ny m hng nghiờm cu mi i vi dc liu lỏ vi Nm 1986, Nguyn c Minh, phũng ụng y thc nghim Vin nghiờn cu ụng y ó tin hnh nghiờn cu thm dũ tớnh cht khỏng sinh ca lỏ v n cõy vi i vi mt s vi khun Gram(+) v Gr(-) ó i ti kt lun rng: tt c cỏc giai on phỏt trin ca cõy, lỏ v n vi u cú tỏc dng khỏng sinh, vo ụng, tớnh khỏng sinh cao nht lỏ v hon ton khụng c i vi c th [7] c bit nm 2002, mt nhúm nh khoa hc Trung Quc ó cụng b kt qu ngiờn cu v cõy vi: nc chit ca n vi l thnh phn ca nc ung b dng tr tim, lm gim kh nng nhim bnh [18] 1.3.4 Thnh phn húa hc 1.3.4.1 Thnh phn húa hc ca tinh du n hoa vi Nm 1994, Lờ Th Anh o, Nguyn Xuõn Dng, v Hong Vn Lu ó nghiờn cu thnh phn húa hc ca tinh du vi [10] cỏc a phng khỏc ca tnh Ngh An, thu c nhng kt qu nh sau : + Hm lng tinh du dao ng khong 0.1-0.4% Hm lng tinh du vi Qu Phong (0.4%) l cao nht Thp nht l tinh du vi thnh ph Vinh (0.1%) Trong cỏc b phn khỏc ca cõy vi thỡ hm lng du cao nht trung n hoa (0.48%), ú hoa ó n lng tinh du gim dn (0.28%) v ớt nht hoa gi (0.18%) i tng nghiờn cu Lỏ vi a im Hm lng (%) Thnh ph Vinh 0.10 Huyn Hng Nguyờn 0.18 N vi Tõy Nghi Lc 0.20 Hoa mi n Huyn Nam n 0.21 N hoa Huyn Tõn K 0.24 Hoa n sau ngy Huyn Qu Phong 0.40 Hoa gi Thnh ph Vinh 0.48 Thnh ph Vinh 0.28 Thnh ph Vinh 0.18 Bng 1.1: Hm lng tinh du vi cỏc a phng ca Ngh An + Thnh phn húa hc ca tinh du vi c ch bng di õy: Hoa vi Stt Tờn cht (n + hoa ) (%) N vi Hoa gi Lỏ (%) (%) (%) -Thujen 0.1 Vt Vt Khụng cú -Pinen 1.8 3.2 2.4 3.7 Camphen Vt Vt Vt Khụng cú Sabinen 0.2 Khụng cú Khụng cú Vt -Pinen 2.9 0.3 0.2 0.6 -Myrcen 32.3 35.1 38.0 24.6 p-Cymem 0.1 Vt Vt Vt Limonen 2.4 0.2 Vt 0.3 (Z)--oxymen 29.1 34.6 32.5 32.1 10 (E)--oxymen 12.0 13.3 12.3 9.4 11 Tecpinolen 0.1 Khụng Khụng cú Vt 12 Linalool 0.7 0.1 0.5 0.5 13 Perilen Vt Vt 0.1 Vt 14 Neo-allocymen 0.9 1.4 0.5 15 Tecpinen-4-ol Vt Khụng cú Khụng cú Khụng cú 16 -Tecpineol 0.1 Vt 0.3 Khụng cú 17 Nerylaxetat Vt Vt Vt 0.2 18 Geranylaxetat 0.2 0.2 0.1 0.7 19 -Copanen Vt Vt 0.2 Vt 20 -Gurunen Vt Vt 0.2 Khụng cú 21 -Caryophyllen 5.3 4.6 4.2 14.5 22 Bergamoten 1.5 1.2 2.0 Khụng cú 23 -Humuluen 1.1 1.1 0.6 2.7 24 Allo-oxymen 0.3 Vt Vt 0.3 25 Germacen 0.4 0.3 0.1 0.4 26 -Selinen 0.8 0.4 Vt 0.1 27 Ledren Vt 1.0 0.1 1.0 28 Murenoen Vt Vt Vt Vt 29 -Cadinen 0.1 Vt Vt 0.3 30 -Cadinen Vt Vt Vt Vt 31 Calamen 0.4 0.3 Vt 0.6 32 Epiglobilol 0.1 0.1 0.1 Khụng cú 33 (Z)-nerolidol 0.3 Khụng cú Khụng cú 0.2 34 (E)-nerolidol Khụng cú 0.4 0.2 Khụng cú 35 Caryophylenoxit 1.8 0.5 1.2 2.9 36 Globulot 0.2 Khụng cú 0.1 Khụng cú 37 Cembren, MW=272 0.5 0.3 0.3 Khụng cú 4.2 0.7 3.5 3.8 38 Cỏc cht cha nhn bit Bng 1.2 : Thnh phn húa hc ca tinh du vi 10 4.4.2 Phn ng nh tớnh flavonoit * Phn ng to mu vi FeCl3 Ly 0,02g cỏc cn A (C hoc E) ho vo 10ml nc núng c cỏc dung dch A (C hoc E) tng ng Ly riờng 1ml dung dch A (C hoc E) cho vo git FeCl3 v quan sỏt mu * Phn ng to mu xianidin (phn ng shinoda) Ly 0,02g cn A, C, E ho tan vo ng nghim khỏc cú cha 5ml etanol núng c cỏc dung dch A, C, E Thờm vo mi ng nghim ú 0,1g magờ kim loi v 1ml axit clohidric c v quan sỏt mu ca sn phm th * Phn ng to kt ta vi chỡ axetat Pha mu ging nh trờn, sau ú ly riờng 5ml mi dung dch trờn vo ng nghim khỏc nhau, thờm vo mi ng nghim ú git chỡ axetat baz, quan sỏt kt ta Kt qu cỏc phn ng nh tớnh c ch bng di õy : Thuc hin Mu Cn A Cn C Cn E Mg + HCl / etanol Dung dch FeCl3 Khụng phn ng Khụng phn ng Dung dch mu Dung dch mu da cam Dung dch mu xanh lc Dung dch mu Dung dch chỡ axetat baz Khụng phn ng Kt ta mu vng Kt ta mu vng da cam nht xanh lc nht Bng 4.1 Kt qu cỏc phn ng nh tớnh 4.4.3 Sc kớ lp mng kho sỏt cn cloroform 4.4.3.1 Phng phỏp sc kớ lp mng (SKLM) * Ho tan hon ton cht nghiờn cu vi dung mụi dựng chit cho dung dch thu c khụng quỏ loóng, khụng quỏ c Dựng capila ly cht ri chm lờn bn mng, cho vt cht phi trũn, gn cỏch mộp bờn ca bn mng 40 0,7cm, cỏch chõn bn mng 1cm v cỏch 0,5cm, chiu di bn mng l 10cm * Tin hnh SKLM Pha h dung mụi vi t l thớch hp cho vo bỡnh sc kớ cú np nhỏm v lc k t mnh giy lc vo thnh bỡnh bóo ho dung mụi Lng dung mụi ly cn c tớnh toỏn cho trin khai SKLM khụng cho dung mụi ngp vt cht Cho bn mng ó chm cht vo bỡnh sc kớ, bn nghiờng gúc 15 0, yờn bỡnh sc kớ sut quỏ trỡnh trin khai Khi tin tuyn dung mụi cỏch mộp trờn 0,5cm thỡ ly bn mng Lm khụ bn mng, sau ú hin sc ph bng mỏy soi t ngoi ri bng cỏc thuc hin 4.4.3.2 Kt qu kho sỏt SKLM cn C Tin hnh SKLM cn C theo phng phỏp trờn vi cỏc t l dung mụi khỏc Kt qu l tỡm c h dung mụi ti u l cloroform : ete du ho (30-60o) = 9:1 Sc hin lờn cỏc vt sau : 5% Vanilin Stt Rf UV 0,94 tớm 0 0,85 tớm 0,75 sỏng tớm nht 0,65 xỏm en vng sm Nõu nht 0,61 hng 0 0,56 hng tớm 0,49 sỏng tớm sm 0,35 nõu sm en 0,00 hng sỏng tớm nht xanh nht -H2SO4 c 41 5% FeCl3 4.4.4 Phõn lp cỏc cht cn C bng sc ký lng trung ỏp * Chun b ct theo phng phỏp nhi khụ : Cho silicagel vo ct, tin hnh gừ silicagen phõn b u, dựng bm nộn silicagen c nộn cht * Tm cht : Cõn 5g cn C ho tan hon ton bng 10ml MeOH bỡnh cu 100ml Sau ú thờm t t, va lc u n ht 6g Silicagen, loi ht dung mụi thu bt Silicagen ó tm cht * Tin hnh SKC : Cho bt Silicagen ó tm cht vo ct, rc lp mng Silicagen lờn trờn bo v Tin hnh gii bng h dung mụi theo phõn cc tng dn: ete du ho - CHCl3 1:1; 3:7; 2:8; 1:9; 100% CHCl3: CHCl3 - MeOH 9:1; 8:2; 7:3 Kt qu thu c 70 phõn on Cỏc phõn on thu c em tin hnh SKLM vi h dung mụi ete du ho: CHCl3=2:8 Gp cỏc phõn on cú sc ging thnh mt nhúm ỏnh s t C0 ữ C8 Ct loi dung mụi di ỏp sut gim thu c cỏc nhúm cht sau : Nhúm Cỏc phõn on gp Khi lng(gam) Co - 10 0,06 C2 12 - 15 0,08 C3 16 - 21 0,07 C4 23 - 29 0,23 C5 30 - 35 0,56 C6 37 - 47 2,50 C7 49 - 59 2,25 C8 60 - 70 2,62 42 4.4.5 Phõn lp cỏc cht t nhúm C5 bng SK ct nhanh Nhúm C5 l mt hn hp cht rn cú lng l 560mg, mu en sm Hn hp ny tip tc c SKLM vi nhiu h dung mụi v t l khỏc Trong ú h dung mụi ete du ho - CHCl3 1:9 l tt nht, v kt qu c ghi bng sau : 5% Vanilin -H2SO4 STT vt Rf UV 0,73 Xỏm en Vng thm Nõu nht 0,56 Hng Xanh 0,47 Hng Xanh c 5% FeCl3 Tin hnh sc kớ ct nhanh nhúm C5, Silicagel s dng cú kớch thc ht 40-62àm Ct sc kớ cú ng kớnh 1,5cm, chiu di 45cm, t l cht/ silicagel l 1/50 H dung mụi di l ete du ho / CHCl 1:9 Kt qu thu c 32 phõn on, mi phõn on cha 5ml Kho sỏt SKLM cỏc phõn on Gom cỏc phõn on cú sc ging v loi dung mụi Kt qu c ghi bng sau : Nhúm Cỏc phõn on gp Khi lng C5.1 2-14 152mg C5.2 16-32 201mg Nhúm C5.1 sau kt tinh li nhiu ln axeton thu c cht tinh khit C5.1 cú lng 152mg, hỡnh kim, mu vng; t 0nc = 125 10C; SKLM cho Rf = 0,73 vi h ete du ho : CHCl 3=1:9, hin mu xỏm en vi t ngoi, mu vng thm vi vanilin/H2SO4, mu nõu vi FeCl3 Ph IR (KBr) : 3341,81; 3936,03; 1760; 1425,06; 1538,76; 1620,58 (cm ) 43 Ph MS : cho cỏc mnh m/z : 298; 283; 221; 194; 104; 77 Ph 1H-NMR : cho bit cú 18H phõn t Ph DEPT-90 : cho bit cú nhúm CH Ph DEPT-135 : cho bit cú nhúm CH3, khụng cú nhúm CH2 Ph 13C-NMR : cho bit cú 18C phõn t 4.4.6 Phõn lp cỏc cht t nhúm C6 bng SK ct nhanh Nhúm C6 l mt hn hp cht rn cú lng l 250mg, mu da cam Hn hp ny tip tc c SKLM vi nhiu h dung mụi v t l khỏc Trong ú h dung mụi axeton / n-hexan 2:8 l tt nht v kt qu c ch bng di õy : 5% Vanilin -H2SO4 Stt vt Rf UV 0,77 Khụng mu Xỏm Khụng mu 0,65 - Khụng mu - 0,63 - Tớm - 0,53 - Tớm - 0,35 - Tớm nht - 0,27 Hng sm Vng Nõu 0,19 Khụng mu Hng Khụng mu 0,18 Hng sỏng Khụng mu - 98% 5% FeCl3 Tin hnh sc kớ ct nhanh nhúm C6 H dung mụi gii l axeton / nhexan 2:8 Kt qu thu c 60 phõn on, mi phõn on cha 5ml Kho sỏt SKLM cỏc phõn on Gom cỏc phõn on cú sc ging v loi dung mụi Kt qu thu c bng sau : 44 Nhúm Cỏc phõn on cú sc ph ging Khi lng(mg) C6.1.1 2-9 72 C6.1.2 10-16 98 C6.1.3 17-19 128 C6.1.4 20-39 153 C6.1.5 40-60 96 Nhúm C6.1.4 sau kt tinh li nhiu ln metanol cho tinh th mu vng, hin mu hng sm vi t ngoi (UV), mu da cam vi vanilin/H 2SO4, mu nõu vi dung dch 5% FeCl3 Nhit núng chy l 12610C, cú Rf=0,73 Ph IR, cm-1 (KBr), (xem ph lc 2) : 3427; 2949; 2896; 1695; 1639; 1608; 1515 Ph MS, m/z (%), (xem ph lc 1) : 298 (M +, 100); 284 (17); 221 (92); 194 (59); 180 (19); 166 (26) Ph (UV), max (nm) (lg) (xem ph lc 3) : 300,1; 333,8 45 4.4.7 Phõn lp cỏc cht t nhúm C7 bng SK ct nhanh Nhúm C7 l mt hn hp cht rn mu vng nõu, lng 225mg SKLM nhúm C7 vi h dung mụi cloroform : metanol, 200 : Cỏc vt trờn sc nh sau : Stt Rf UV 5% Vanilin - H2SO4 5% FeCl3 0.74 Sỏng Khụng mu Khụng mu 0,69 Sỏng - - 0,57 Sỏng - - 0,54 Hng nht Vng nht Nõu nht 0,41 Sỏng Khụng mu Khụng mu 0,43 Khụng mu Tớm - 0,23 Sỏng Khụng mu - Sc kớ ct nhúm C7 s dng silicagel cú kớch thc ht 40-60àm, ct sc kớ cú ng kớnh 1,5cm v di 45cm, h dung mụi di l cloroform : metanol, 200 : 1, chia lm 60 phõn on, mi phõn on l 5ml Tin hnh SKLM v gom cỏc phõn on cú sc hin trờn bn mng ging nhau, thu c cỏc phõn nhúm sau : Nhúm Cỏc phõn on cú sc ph ging Khi lng (mg) C7.1.1 - 20 60 C7.1.2 23 - 28 181 C7.1.3 29 - 34 101 C7.1.4 40 - 60 156 Nhúm C7.1 sau kt tinh li nhiu ln metanol thu c cht tinh khit, cú lng 95mg Trờn bn mng cú R f = 0,73 vi h dung mụi 46 cloroform : metanol, 100 : 1, khụng mu vi t ngoi v dung dch 5% FeCl 3, mu tớm sm vi thuc hin vanilin/H2SO4 Tinh th C7.1 dng hỡnh kim mu trng, nhit núng chy l 3061oC Tan tt cloroform, etylaxetat Ph IR, cm-1 (KBr) : 3478; 2940 - 2638; 1690; 1624; 820 (cm-1) (xem ph lc 10) Ph MS, m/z (%) : 456 (M+); 438 (0.70; 410(0.6); 248(100); 203(92); 189(17); 175(14); 105(19.9) (xem ph lc 11) Ph H-NMR (xem ph lc 4) : cú tng s hydro (H) l 48 Ph DEP-90 (xem ph lc 6) : cho bit cú nhúm CH Ph DEP-135 (xem ph lc 6) : cho bit cú 10 nhúm CH2 , nhúm CH3 Ph C13CPD (xem ph lc 5) : cho bit cú OC, ng dng chuyn dch húa hc (ppm) nh sau : 182,96; 143,63; 122,66; 79,06; 55,26; 47,67; 46,55; 44,92; 41,64; 41,05; 39,31; 38,78; 38,44; 37,12; 33,84; 33,08; 32,66; 32,47; 30,70; 28,12; 27,72; 27,21; 25,95; 23,59; 23,43; 22,97; 18,33; 17,61; 15,56; 15,33 47 PHN V KT LUN 48 TI LIU THAM KHO Vừ Vn Chi T in cõy thuc Vit Nam NXB Y hc, Tr 1330 T in Bỏch khoa Dc hc NXB t in Bỏch khoa, H Ni, 1999, Tr75 GS TS Tt Li Nhng cõy thuc v v thuc Vit Nam NXB Y hc, 1999, Tr 423 Lng y Lờ Trn c Cõy thuc Vit Nam NXB NN H Ni, 1997, Tr 514-515 Vừ Vn Chi, V Vn Chuyờn v cỏc cng s Cõy c thng thy Vit Nam (II) NXB KH v KT H Ni, 1971, Tr 449-467 Phm Hong H Cõy c Vit Nam (II) NXB Tr, 1994 Nguyn c Minh Tớnh khỏng khun ca cõy thuc Vit Nam NXB Y hc, 1972 Nguyn Tớch, Trn Hp 49 Tờn cõy rng Vit Nam NXB Nụng thụn, 1971 Vin iu tra quy hoch rng cõy g Vit Nam NXB Nụng nghip, 1982 10 Lờ Th Anh o, Nguyn Xuõn Dng, Hong Vn Lu Nghiờn cu thnh phn hoỏ hc ca cõy vi Vit Nam Tp khoa hc, 1997, s 3, Tr 47-51 50 MC LC Trang M U PHN I TNG QUAN 1.1 Khỏi quỏt v h Sim Myrtaceae 1.2 Tng quan v chi Cleistocalyx 1.2.1 Cleistocalyx circumcissa 1.2.2 Cleistocalyx nigrans 1.2.3 Cleistocalyx nervosum 1.2.4 Cleistocalyx rehnervinus 1.2.5 Cleistocalyx consperipuactatus 1.3 Tng quan v cõy vi (Cleistocalyx operculatus Roxb) 1.3.1 c im thc vt 1.3.2 Phõn b 1.3.3 ng dng ca cõy vi 1.3.4 Thnh phn hoỏ hc 1.3.4.1 Thnh phn hoỏ hc ca tinh du n hoa vi 1.3.4.2 Thnh phn hoỏ hc ca n hoa vi 10 1.4 Mt s tritecpen cú hot tớnh sinh hc liờn quan n i tng nghiờn cu 12 1.4.1 Cỏc tritecpen khung oleanan 12 1.4.2 Cỏc hp cht khỏc 15 1.5 Mt s tớnh cht flavonoid liờn quan n i tng nghiờn cu ca ti 16 1.5.1 S phõn b flavonoid thc vt 16 1.5.2 Tớnh cht nh tớnh ca flavonoid 17 51 1.5.3 Tỏc dng sinh hc ca flavonoid 20 PHN II MC TIấU V PHNG PHP NGHIấN CU 25 2.1 Mc tiờu 25 2.2 Phng phỏp nghiờn cu 25 PHN III CC KT QU V THO LUN 26 3.1 Nguyờn liu thc vt 26 3.2 Chit cỏc hot cht sinh hc l vi 27 3.3 Th nh tớnh cỏc flavonoit cỏc cn 28 3.4 Phõn lp cỏc cht cn C 28 3.4.1 Sc ký lp mng kho sỏt cn C 28 3.4.2 Phõn lp cỏc cht tinh khit cn C 29 3.5 Phân tích thành phần cặn chiết etylaxetat (cặn E) 3.6 Khảo sát cấu trúc chất phân lập 31 31 3.6.1 Cấu trúc chất C5 31 3.6.2 Cấu trúc chất C6 33 3.6.3 Cấu trúc chất C7 35 PHN IV THC NGHIM 37 4.1 Mu nguyờn liu 37 4.2 Dng c v hoỏ cht 37 4.3 Thit b nghiờn cu 38 4.4 Nghiờn cu cỏc cht lỏ vi 38 4.4.1 Chit phõn lp cỏc cht lỏ vi 38 4.4.2 Phn ng nh tớnh flavonoit 39 4.4.3 Sc ký lp mng kho sỏt cn cloroform 40 4.4.3.1 Phng phỏp sc ký lp mng (SKLM) 40 4.4.3.2 Kt qu kho sỏt SKLM cn C 41 4.4.4 Phõn lp cỏc cht cn C bng sc ký lng trung ỏp 41 4.4.5 Phõn lp cỏc cht t nhúm C5 bng sc ký ct nhanh 43 4.4.6 Phõn lp cỏc cht t nhúm C6 bng sc ký ct nhanh 44 52 4.4.7 Phõn lp cỏc cht t nhúm C7 bng sc ký ct nhanh 46 PHN V KT LUN 48 TI LIU THAM KHO 49 PH LC 53 54 ... kết nghiên cứu bệnh nhân AIDS Nhật cho thấy Glycyrhizin làm chậm trình phát triển virus HIV Rất kìm hãm trình chép virus HIV in vitro HOOC O O COOH O O OH O OH OH COOH OH OH Glycyrrhizin Theo nghiên. .. trỳc phõn t cỏc cht phõn lp 25 Phn Kt qu v tho lun 3.1 X lý mu v chit X lớ mu Lỏ vi (Cleistocalyx operculatus Roxb) đc thu hỏi Vnh phỳc, vo thỏng nm 2005 Lỏ khụng b sõu c sch, ri phi khụ búng... cú hot tớnh sinh hc liờn quan n i tng nghiờn cu 1.4.1 Các tritecpen khung oleanan 12 Theo kết nghiên cứu Woldemichael G.M [28], axit oleanolic có hoạt tính kháng chủng vi khuẩn B Subtilis (MIC=8