Chương X GEN TRỊ LIỆU VỚI PHƯƠNG THỨC TIÊM CHỦNG POLYNUCLEOTID MỞ ĐẦU Do giới hạn trị liệu ung thư thông thường (phẫu thuật, xạ trị hóa trị) với việc nâng cao không ngừng kiến thức chế phân tử điều hòa miễn dịch dẫn đến gia tăng ý tới việc phát triển trị liệu miễn dịch ung thư Các phương pháp trị liệu miễn dịch chủ động tìm cách loại trừ TB khối u cách tạo đáp ứng miễn dịch (ĐUMD) kháng trực tiếp KN liên kết khối u Các kỹ thuật chuyển gen đã mở rộng thêm hội lĩnh vực việc gợi phương pháp để kích thích ĐUMD Trong mảng kỹ thuật phát triển ứng dụng lâm sàng vaccin acid nucleic hay polynucleotid bật với tư cách phương pháp hiệu cho việc cảm ứng ĐUMD đặc hiệu KN khối u Thay tiêm chủng với protein, việc tiêm chủng với polynucleotid (polynucleotid immunization – PNI) lại dựa chuyển giao phân tử DNA hay RNA mã hóa KN cần quan tâm Có số lợi phương thức chuyển giao Có lẽ điều quan trọng đáp ứng kháng thể ĐUMD tế bào tạo sau tiêm chủng với polynucleotid Sự tổng hợp in vivo KN mã hóa cho phép protein xử lý trình diện MHC lớp I, thúc đẩy việc sản sinh CTL giới hạn MHC lớp I Vì CTL tác nhân trung gian quan trọng ĐUMD kháng u nên việc kích hoạt KN khối u quan trọng thành công cách tiếp cận vaccin ung thư Hơn nữa, trái ngược với vaccin protein điều chế túc chủ động vật có vú, tổng hợp KN in vivo cho phép protein cuộn lại cải biến sau dịch mã cách thích hợp Các vaccin sở DNA biểu trực tiếp KN thời gian dài, hỗ trợ cho ĐUMD kháng u bền bỉ mà mặt lý thuyết bảo vệ cho bệnh nhân khỏi bị tái phát Các yếu tố phụ trợ khác để phát triển chiến lược tiêm chủng dựa sở DNA plasmid dễ làm tương đối rẻ tiền lại có tính ổn định Như đề cập chi tiết trên, vaccin DNA điều chế túc chủ vi khuẩn nên tính kích thích miễn dịch di truyền có diện dinucleotid CpG chưa methyl hóa Những trình tự kích thích đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu mà không bị ảnh hưởng chuyển giao lặp lại vaccin Điều trái ngược với vaccin sở virus ĐUMD cảm ứng vec tơ hay tồn từ trước làm giảm đáng kể hiệu vaccin Xét độ an toàn vaccin polynucleotid ưa chuộng vaccin virus rủi ro tái tổ hợp với virus dạng hoang dã rủi ro đột biến ghép thấp Sau chót là, vaccin DNA hay RNA có tiềm sẵn sàng chuyển giao nhiều epitope nhiều KN mũi tiêm đơn Một yếu tố quan trọng khối u có xu hướng tẩu thoát khỏi phát miễn dịch biến thể hết KN Mặc dầu với lợi tiềm tàng nghiên cứu tiền lâm sàng đầy khích lệ, vaccin polynucleotid cho ung thư đạt hoạt tính mức tối thiểu lâm sàng Vì nhiều KN khối u chưa đột biến nên việc cảm ứng ĐUMD KN đòi hỏi hệ miễn dịch phải có khả nhận dạng dựng lên đáp ứng hiệu “tự kháng nguyên” Các nghiên cứu bước đầu cho thấy, việc thiết lập quy trình điều trị ung thư người khó khăn việc nâng cao tiềm hiệu lực lâm sàng vaccin polynucleotid trở thành tâm điểm nghiên cứu lĩnh vực Do tính linh hoạt vaccin sở DNA hay RNA dẫn đến phát triển nhiều phương pháp chuyển giao miễn dịch trị liệu ung thư Vì DNA hay mRNA dùng để cải biến tế bào ex vivo trường hợp tế bào dendritic thâm nhiễm hay tế bào khối u bị chiếu xạ cho trị liệu vaccin nên chương tập trung đặc biệt vào chuyển giao in vivo DNA hay RNA cho trị liệu miễn dịch ung thư CHUYỂN GEN ACID NUCLEIC CHO VIỆC TIÊM CHỦNG Việc phát triển vaccin acid nucleic lóe lên quan sát Wollf cộng tiêm DNA trần dẫn đến biểu gen mã hóa tế bào sợi Các nghiên cứu chứng minh tính khả dụng chung phương pháp biểu gen ngoại lai nhiều mẫu từ cá đến động vật cao cấp người Mặc dầu vậy, việc chuyển DNA vào sợi thông qua tế bào caveolae vi ống T trình hiệu DNA trì nhân dạng nhiễm sắc thể, lại biểu thời gian dài, phụ thuộc vào tính sinh miễn dịch protein mã hóa Ulmer cộng tác lần chứng minh khả chuyển giao DNA mã hóa KN virus để tạo nên đáp ứng miễn dịch giới hạn MHC lớp I tế bào CD8+ T nhờ sử dụng plasmid mã hóa protein nucleoprotein A influenza Nghiên cứu tạo lý để phát triển vaccin polynucleotid điều trị bệnh kể ung thư mà tuân theo cách tiếp cận vaccin truyền thống trước dựa chủ yếu vào ĐUMD thể dịch Ngoài việc phòng bệnh, trị liệu tiêm chủng có khả kháng lại bệnh mạn tính Cảm ứng đáp ứng thể dịch tế bào sau chuyển giao acid nucleic không giới hạn Da giầu tế bào trình diện KN (APC) tế bào Langerhan chưa chín biểu bì DC hạ bì Tang cộng chứng minh khả chuyển giao DNA tới da để tạo ĐUMD thể dịch gen mã hóa Trong phương pháp này, DNA chuyển giao sau kết tủa thành vi hạt Các hạt vàng chuyển tới da áp lực tạo thiết bị bắn đạn Quá trình thường hay dùng súng bắn gen không tạo chấn thương cần lượng DNA có ĐUMD thể dịch (khi so sánh với cách chuyển giao cơ) Sự cảm ứng CTL hiệu ứng có khả trung gian thải loại khối u chứng minh mô hình khối u truyền ghép chuột Tiêm chủng da thành công cách tiêm DNA trần hay chuyển giao toàn hệ thống hạt nano bọc DNA hệ thống tiêm không kim Việc phân phối qua mũi vaccin DNA khai thác chủ yếu cho việc tiêm chủng kháng lại bệnh truyền nhiễm, áp dụng cho trị liệu ung thư Thực tế là, đường chuyển giao dẫn đến tổng hợp kháng thể cảm ứng ĐUMD đặc hiệu KN, điều chứng tỏ việc tiêm chủng polynucleotid linh hoạt Điều quan trọng cần lưu ý đường phân phối khác dẫn đến ĐUMD tương đối khác chất hiệu lực người, vấn đề nên tiếp tục khảo sát Mặc dầu cấu thành đặc biệt DNA plasmid mã hóa cho KN khối u xác định, chiến lược vaccin phát triển với mRNA Một bất lợi tiềm ẩn vaccin sở RNA so với vaccin DNA đời sống bán phần RNA ngắn Thế sử dụng mRNA in vivo lại có lợi kháng lại KN ung thư mã hóa gen Her-2/neu theo lý thuyết rủi ro việc hợp gen chuyển vào hệ gen loại trừ Qiu cộng dùng cách bắn gen mRNA để chứng minh biểu gen mã hóa biểu bì chuột cảm ứng kháng thể đặc hiệu kháng nguyên Chuyển giao mRNA mã hóa KN ung thư phôi (carcinoembryonic antigen –CEA) phát thấy kháng thể kháng CEA kháng lại phần thách đố TB khối u biểu CEA Đáp ứng miễn dịch tạo vaccin sở mRNA nói chung quan trọng chiến lược dựa sở DNA có lẽ tính không ổn định mRNA sau chuyển giao Để tháo gỡ hạn chế này, việc sử dụng RNA tự chép lên phương tiện để nâng cao hiệu lực tiêm chủng với sở RNA Những vec tơ hợp trình tự vào RNA mã hóa cho protein RNA replicase có nguồn gốc từ virus (Sindbis hay Semliki Forest virus) Replicase trực tiếp tác động tới tái tế bào chất toàn mà phiên mã mRNA cho KN từ promoter hệ gen (subgenomic) làm cho biểu KN đạt tới mức cao Sự thích nghi hệ replicase RNA dẫn đến phát triển vec tơ DNA plasmid mã hóa RNA tái (replicative RNA transcript), tổ hợp ưu điểm việc dễ dàng điều chế vaccin DNA lợi RNA tái CƠ CHẾ SỰ CẢM ỨNG ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH SAU KHI TIÊM CHỦNG VỚI POLYNUCLEOTID Khả vaccin polynucleotid tạo ĐUMD tế bào mở đường cho việc phát triển chúng với tư cách chất tạo phản ứng cho ĐUMD ung thư Cơ chế cảm ứng ĐUMD sau tiêm chủng chưa sáng tỏ hoàn toàn, chắn có liên quan tới trình xử lý kháng nguyên thông qua đường nội bào ngoại bào để trình diện KN lên MHC lớp I II DNA thâm chuyển tế bào đích (như tế bào sau tiêm chủng cơ) APC không di trú Mặc dầu rõ ràng TB tổng hợp protein mã hóa, có lẽ APC có khả chuyển giao tín hiệu đồng kích thích cần thiết để mồi CTL cách hiệu ứng Nhiều công trình nghiên cứu xác nhận vai trò chủ chốt APC nguồn gốc từ tủy xương việc cảm ứng ĐUMD sau tiêm chủng DNA Các phát cho thấy “hình ảnh mồi chéo” TB sản sinh protein kháng nguyên chuyển tới APC theo phương thức KN trình diện tới MHC lớp I tế bào T, cho phép APC hoạt hóa trực tiếp CTL Trong protein thu nhận ngoại sinh APC thường vào đường lysosome nội bào để phân giải trình diện phân tử MHC lớp II, trường hợp tiêm chủng polynucleotid KN xử lý trình diện với MHC lớp I II để thúc đẩy miễn dịch thể dịch miễn dịch tế bào Ngoài cách thích hợp thâm chuyển APC với acid nucleic chuyển giao In vivo, tổng hợp KN tế bào chất lại thúc đẩy việc trình diện peptide phân tử MHC lớp I Các protein tổng hợp tế bào xử lý nội bào thành peptid proteasom Những peptid tải lên phân tử lớp I mạng lưới nội chất chuyển tới bề mặt tế bào Việc trình diện KN lên MHC lớp I II với có mặt phân tử đồng kích thích thích ứng dẫn tới hoạt hóa tế bào CD4+ CD8+ Vai trò quan trọng CD8+ CTL trung gian phá hủy TB khối u nhận diện peptid KN trình diện MHC lớp I bề mặt TB khối u Những TB giữ vai trò quan trọng việc phá hủy TB khối u kháng cự lâu dài với tái thách đố Tầm quan trọng tế bào CD4+ miễn dịch kháng u đánh giá cao Những tế bào CD4+ T tạo nên trợ giúp cho việc cảm ứng CD8+ CTL đặc hiệu tiết cytokin thúc đẩy hoạt hóa CTL Hơn nữa, chúng hoạt hóa TB hiệu ứng miễn dịch không đặc hiệu đại thực bào hay bạch cầu ưa eosin có tiềm cao việc phá hủy tế bào khối u CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG TỚI CẢM ỨNG ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH Nhiều nét đặc trưng ảnh hưởng vaccin polynucleotid tới chất tiềm ĐUMD mà tham dự từ thành phần acid nucleic đến KN mã hóa vi môi trường mà vaccin biểu Thành phần DNA xem xét vaccin sở plasmid Dinucleotid CpG có tương đối hệ gen động vật có vú Hơn nữa, khu vực giầu CpG thường methyl hóa chế điều hòa phiên mã Trái lại với vấn đề này, chế phẩm vaccin DNA túc chủ vi khuẩn lại diện dạng dinucleotid CpG chưa methyl hóa plasmid Những trình tự chưa methyl hóa nhận dạng hệ thống miễn dịch bẩm sinh diện chất gây bệnh kích thích miễn dịch Đặc biệt trình tự nhận dạng receptor gây nên hoạt hóa hệ miễn dịch bẩm sinh bao gồm DC, đại thực bào, tế bào NK NKT Kết CpG có mặt plasmid chuyển giao oligodeoxynucleotid tinh khiết – chất bổ trợ tiềm đẩy hệ miễn dịch sang hướng đáp ứng dạng Th1 Các oligodeoxynucleotid CpG có hiệu ứng kháng apoptotic với tế bào CD4+ CD8+, mà mở rộng nhóm tế bào T nâng cao ĐUMD phương thức độc lập kháng nguyên Sự có mặt motif CpG góp phần quan trọng tính sinh miễn dịch nói chung vaccin DNA Các vaccin polynucleotid sở virus alpha RNA di truyền tính kích thích miễn dịch Những vaccin thúc đẩy apoptosis TB thâm chuyển, nâng cao tính miễn dịch Khi tái tế bào chất, cấu trúc trung gian RNA sợi kép tạo ra, hoạt hóa protein kinase R sợi kép NF-kappa B, kích thích đường kháng virus bẩm sinh, mà nâng cao ĐUMD Lợi vaccin polynucleotid so với vaccin virus đường miễn dịch kích thích chất không đặc hiệu không bị ảnh hưởng tái phân phối vec tơ Ngoài thành phần acid nucleic, yếu tố quan trọng ĐUMD, mức độ biểu gen chuyển Dó cần phải có promoter mạnh để phiên mã trực tiếp protein mã hóa tối ưu hóa tín hiệu polyadenylat hóa vùng chưa dịch mã góp phần làm tăng biểu gen chuyển Promoter/enhancer cytomegalovirus sử dụng rộng rãi để điều khiển biểu trình tự mã hóa tăng cường cách cài thêm trình tự bổ sung, chẳng hạn hệ thống tạo nên từ virus adeno liên hợp Các vec tơ tối ưu hóa phát triển, đường phân phối gây ảnh hưởng tới kết ĐUMD Như đề cập trên, nhiều cách tiêm chủng polynucleotid dẫn đến cảm ứng ĐUMD tế bào thể dịch, tính chất ĐUMD tạo đường phân phối khác khác chất Nhìn chung, phân phối theo kiểu bắn gen DNA dẫn đến ĐUMD giống T helper (Th2) nhiều hơn, với thành phần thể dịch mạnh lại hiệu lực trị liệu ung thư Tuy nhiên, hiệu ứng cải biến cách phân phối đồng thời với cytokin thúc đẩy Th1 Bản chất ĐUMD bị ảnh hưởng xa liều lượng lịch trình phân phối vaccin Tính kháng nguyên protein mã hóa vấn đề quan trọng việc tạo đáp ứng hiệu Thực tế hầu hết KN khối u tự KN, thách thức đáng gờm tất dạng trị liệu miễn dịch chủ động dựa sở bẻ gãy dung nạp miễn dịch Cải biến tính KN protein hay thúc đẩy hấp thu APC nhà nghề (các DC) khía cạnh quan trọng Môi trường cytokin cục giữ vai trò quan trọng việc làm nảy sinh ĐUMD khác Khi tối ưu hóa tất yếu tố tối ưu hóa ĐUMD sau tiêm chủng polynucleotid Đây vấn đề người ý khảo sát nghiên cứu lĩnh vực Bảng 10.1 Các chiến lược nhằm nâng cao hiệu lực vaccin polynucleotid Các khía cạnh vaccin Nâng cao chuyển giao acid nucleic Sự can thiệp Liposom Vi hạt PLG Điện chuyển (electroporation) Cải biến kháng nguyên để đích APC Hỗn hợp KN với Cd40L, FLT3L, CTLA4 Cải biến kháng nguyển để tăng tính sinh miễn dịch Thay đổi trình xử lý KN Hợp epitope miễn dịch Sử dụng KN từ mẫu khác Tối ưu hóa mã Cải biến vi môi trường Bổ sung thêm cytokin Bổ sung thêm chemokin Giảm apoptosis APC Hợp vec tơ khác vào lịch trình tiêm chủng Các vec tơ virus (adenovirus, vaccinia) Protein CÁC CHIẾN LƯỢC NÂNG CAO ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH Các vaccin thể hứa hẹn việc tạo đáp ứng CTL KN mới, đặc tính sinh miễn dịch yếu KN nên đòi hỏi vaccin phải tiềm chúng sử dụng lâm sàng Vì vậy, nhiều nghiên cứu tập trung vào việc nâng cao ĐUMD tạo tiêm chủng polynucleotid Nhiều cách tiếp cận tập trung vào khía cạnh vaccin, từ việc chuyển giao acid nucleic đến cải biến KN mã hóa, từ việc làm xáo trộn vi môi trường đến việc tối đa hóa xây dựng ĐUMH dạng Th1 Tính linh hoạt vaccin polynucleic cao acid nucleic KN mã hóa cần quan tâm lại thao tác đánh giá dễ dàng Vì trình chuyển giao acid nucleic tới TB đích chưa hiệu nên cách tiếp cận nhắm tới việc làm tăng hiệu chuyển giao và/hoặc tăng tính ổn định acid nucleic in vivo làm cho KN mã hóa cao rộng hơn, mở rộng độ lớn ĐUMD Để đạt điều cần phải hợp acid nucleic vào liposom bảo vệ khỏi tác động phân giải nuclease nội bào thúc đẩy hấp thu tế bào Sự hấp thu DNA vào vi hạt cationic bao gồm poly (DL-lactide-co- glycolide- PLG) cho phép giải phóng từ từ DNA kết có ĐUMD tiềm so với DNA trần Để tăng cường vận chuyển acid nucleic vào TB đích cách vật lý điện chuyển acid nucleic tới da thể phương tiện hiệu lực làm tăng hiệu ứng chuyển gen Dĩ nhiên áp dụng công nghệ lâm sàng lại phải tối ưu hóa thận trọng đối tượng người Sự dễ dàng thao tác DNA bổ cứu tái tổ hợp cho phép KN mã hóa biến đổi theo cách làm tăng tính sinh miễn dịch; thao tác nhiều đa dạng phương diện Vì hấp thu trình diện thích hợp KN quan trọng việc cảm ứng ĐUMD hiệu nên số nhóm nghiên cứu cải biến KN mã hóa để làm cho chúng hấp thu hiệu APC nhà nghề Các kháng nguyên hòa vào ligand CD40, domain ngoại bào ligand tyrosine kinase giống Fms (Fms-like tyrosin kinase 3- FLT3), kháng nguyên lympho T độc tế bào (cytotoxic T-lymphocyt antigen 4- CTLA4), ví dụ receptor ligand phát thấy bề mặt DC, nên đích KN vào TB làm tăng cường ĐUMD Trong tế bào, KN mã hóa cải biến để thúc đẩy phân giải thông qua đường endosome/lysosome với phương thức tăng cường trình diện lên MHC lớp II nâng cao đáp ứng tế bào CD4+ T Trong cách tiếp cận tương tự nhắm đích theo cách khác trình xử lý tiêu protein KN mã hóa thúc đẩy cách hòa lẫn với trình tự đạo ubiquitin hóa Nhờ hợp trình tự sinh miễn dịch dị loại, chẳng hạn epitope CTL độc tố uốn ván vào KN khối u nhanh chóng cảm ứng CTL kháng lại KN khối u với việc kháng lại thách đố khối u Đối với ung thư virus HPV (human papilloma virus) ung thư cổ tử cung việc tối ưu hóa mã KN chứng tỏ phương thức hữu hiệu làm tăng biểu protein nâng cao ĐUMD Một cách thông thường để nâng cao tính sinh miễn dịch vaccin acid nucleic chuyển giao đồng thời cytokin mã hóa DNA dựa lý lẽ đáp ứng miễn dịch tiềm tạo KN trình diện môi trường cytokin thích hợp Kết cục cytokin thúc đẩy ĐUMD typ Th1, bao gồm yếu tố kích thích quần thể đại thực bào - bạch cầu hạt, interferon – γ, interleukin interleukin 12 đánh giá sâu rộng mô hình tiền lâm sàng bệnh truyền nhiễm ung thư Rõ ràng cách tiếp cận gây ảnh hưởng tới tính chất tầm quan trọng ĐUMD Căn vào lý cho việc chuyển giao hiệu KN tới APC làm tăng cường ĐUMD nên chemokin sử dụng để kéo APC tới vị trí tổng hợp KN Điều hoàn tất cách hòa lẫn KN với chemokin gây viêm chuyển giao đồng thời KN với chemokin Những sửa đổi bổ sung vi môi trường cục tiếp nhận vaccin polynucleotid đồng chuyển giao gen kháng apoptosis để tăng sống sót DC thâm chuyển với DNA phân phối đồng thời DNA mã hóa KN với protein hòa tan hoạt hóa gen bạch cầu phương thức thúc đẩy trình diện chéo KN In vivo Phát triển DC để tăng cường ĐUMD định hướng việc chuyển giao plasmid mã hóa FLT3 ligand Cách tiếp cận sử dụng việc tổ hợp vaccin peptid thông thường để nâng cao ĐUMD tế bào Mặc dầu cho tự KN có tính sinh miễn dịch yếu xòe rộng epitope xảy cảm ứng ĐUMD, khái niệm gây miễn dịch (tiêm chủng) tương đồng mẫu chéo (cross-species homologous immunization) gọi tiêm chủng trực sinh hay khác giống (xenogenic or orthologous immunization) chứng tỏ phương pháp hữu hiệu để phá bỏ dung nạp Đối với tiêm chủng polynucleotid, chiến lược sử dụng gen KN khối u từ mẫu khác từ người nhận vaccin để cảm ứng ĐUMD có phản ứng chéo với protein tự thân túc chủ Đối với nhiều protein nghiên cứu ngày mẫu khác giống ngoại lai thể nâng cao tính sinh miễn dịch so với KN tự thân hay tự KN Cách tiếp cận dẫn đến khả miễn dịch có phản ứng chéo bẻ gãy dung nạp tự KN Tiêm chủng khác giống sử dụng thành công mô hình động vật nhằm cảm ứng ĐUMD kháng u chống lại KN khối u nội sinh yếu tố thúc đẩy khối u Các nghiên cứu lâm sàng ung thư tuyến tiền liệt sử dụng vaccin DC/protein chứng minh cảm ứng ĐUMD tự KN, điều gợi lên một áp dụng tiềm phương pháp cho thử nghiệm lâm sàng Do vaccin DNA dễ dàng pha chế loại trừ đáp ứng miễn dịch hướng vào vec tơ nên dẫn đến việc hợp vào loạt chiến lược nhằm tăng cường mồi dị loại Những chiến lược chứng tỏ hiệu lực so với tiêm chủng với DNA số mô hình tiền lâm sàng với nhiều chiến lược khác Hiệu ứng đặc biệt tăng cường mồi sau mồi DNA plasmid cần vec tơ virus sống để thúc đẩy Cách tiếp cận dẫn tới ĐUMD rộng tiềm so với vec tơ đơn lẻ Chiến lược mồi ĐUMD với KN mã hóa DNA plasmid phá vỡ khả ĐUMD đặc hiệu vec tơ nhằm thủ tiêu biểu chất sinh miễn dịch xảy chuyển giao lặp lại vec tơ virus sống Đến lượt mình, tiềm vec tơ virus lại làm tăng vai trò quan trọng khiêm nhường ĐUMD tạo DNA plasmid đơn lẻ Sự biểu liên tục dành vaccin DNA tạo tế bào T lực cao, liên tục phát triển nhờ kích thích vec tơ virus sống Adenovirus vec tơ virus khiếm khuyết chép tổ hợp thành công với DNA mô hình chuột bị ung thư tế bào gan Vec tơ virus vaccinia hứa hẹn DNA plasmid tổ hợp với chất kích thích protein chẳng hạn cho hấp thụ lên hạt PLG để thu hiệu ứng có lợi Mặc dầu vậy, cách tiếp cận muốn đến lâm sàng phức tạp, nhiên nâng cao tiềm vaccin tổ hợp trở ngại vượt qua CÁC NGHIÊN CỨU TIỀN LÂM SÀNG Việc sử dụng mô hình tiền lâm sàng thích hợp vấn đề quan trọng phạm vi phát triển trị liệu ung thư vaccin polunucleotid trường hợp ngoại lệ Nhiều mô hình tiền lâm sàng thực chủ yếu mô hình ung thư chuột Các mô hình tăng lên cách nghiêm ngặt, phản ánh tiến trưởng thành công nghệ đến gần sát thực trạng lâm sàng Trước hết chiến lược vaccin polynucleotid cho ung thư nhắm tới KN khối u nhân tạo ovalbumin β- galactosidase Minh chứng hiệu ứng bảo vệ khối u hệ thống mô hình dẫn tới việc phát triển mô hình khối u KN khối u người CEA MUCI thâm chuyển vào dòng TB khối u chuột đồng gen Những nghiên cứu hữu ích cung cấp chứng sở để chứng minh CTL tạo dành cho KN khối u kháng lại thách đố nguy hiểm khủng khiếp TB khối u Tuy nhiên, khác biệt chéo loài thành phần amino acid người chuột nên vaccin có tính sinh miễn dịch cao với thiết lập lâm sàng Phát triển mô hình chuột chuyển gen biểu KN ung thư người tạo điều kiện nghiêm ngặt tốt cho kịch lâm sàng để tối ưu hóa vaccin polynucleotid Những mô hình cho phép xem xét đòi hỏi đặc biệt để dựng lên ĐUMD hiệu đối mặt với dung nạp với KN khối u Một lĩnh vực khảo sát hiệu tiềm điều trị động vật nuôi báo cáo gần chó phát sinh cách tự nhiên u sắc tố ác tính Các kỹ thuật chuyển gen tốt kịch thực người Đối với việc thiết lập an toàn tính khả thi tiêm chủng polynucleotid kinh nghiệm động vật lớn động vật cao cấp người hữu ích cho việc chứng minh độ an toàn nói chung cách tiếp cận trước TNLS người Những mô hình tiền lâm sàng tỏ vô giá việc tìm hiểu chế phân tử liên quan tới việc tạo ĐUMD kháng u hiệu sau tiêm chủng vaccin polynucleotid Việc phát triển nhiều mô hình chuột với khía cạnh riêng biệt phá vỡ cách chọn lọc hệ miễn dịch (knockout gen) cho phép mô tả rõ yếu tố quan trọng cho việc cảm ứng ĐUMD hiệu Khảo sát chế thải loại khối u qua trung gian vaccin DNA trị liệu mô hình chuột chuyển gen bị ung thư vú chứng minh vai trò điều tiết tế bào CD4+ CD8+, kháng thể, receptor Fc, perforin, interferon –γ, NKT giới hạn Cd1d đại thực bào với vai trò quan trọng bạch cầu trung tính hoạt hóa, ly giải trực tiếp TB ung thư tác động tới hệ mạch khối u NHỮNG TRẢI NGHIỆM LÂM SÀNG VỚI VACCIN POLYNUCLEOTID Mặc dầu việc cảm ứng đáp ứng với tế bào B T KN ngoại lai liên quan tới bệnh truyền nhiễm chứng minh thuyết phục người KN khối u lại có tính sinh miễn dịch tương đối yếu, việc cảm ứng ĐUMD kháng u hiệu KN rõ ràng thách đố to lớn trải nghiệm lâm sàng với vaccin polynucleotid cho kết có tính chất pha trộn Các nghiên cứu lâm sàng củng cố thêm độ an toàn độc tính thấp vec tơ nói chung, tiềm ĐUMD chưa khả quan hiệu kháng u chưa rõ rệt Tuy nhiên, số TNLS hoàn tất Người ta chuyển trực tiếp qua DNA mã hóa KN khối u phân dòng (CEA) ung thư kết tràng giai đoạn muộn Các bệnh nhân tiêm chủng plasmid biểu CEA KN bề mặt virus gây viêm gan B với tư cách đối chứng Mặc dầu mức kháng thể bảo vệ protein gây viêm gan phát số bệnh nhân, chứng đáp ứng trực tiếp kháng lại CEA Rosenberg cộng báo cáo phát tương tự sử dụng DNA plasmid mã hóa KN u sắc tố gp100 TNLS pha I bệnh nhân u sắc tố di Trong thử nghiệm này, 22 bệnh nhân tiêm chủng trong da không thấy có chứng ĐUMD đặc hiệu gp100 Tuy nhiên, có bệnh nhân có đáp ứng phần Tác giả kết luận ĐUMD tạo Điều trái ngược với thử nghiệm lâm sàng trước liên quan tới kháng nguyên gp100 chuyển giao với tư cách gen chuyển vào vaccin sở fowlpox vơi tư cách peptid nhấn mạnh điều cần thiết chiến lược phải nâng cao ĐUMD vaccin DNA plasmid Người ta phát thấy tính sinh miễn dịch vaccin DNA plasmid bệnh nhân u lympho Các nghiên cứu lâm sàng trước sử dụng protein trình diện idiotyp globulin miễn dịch đặc hiệu khối u để tiêm chủng chủ động chứng minh lợi ích lâm sàng tiêm chủng Tuy nhiên, việc pha chế vaccin protein đặc hiệu bệnh nhân vất vả thiếu tính khả thi muốn áp dụng rộng rãi Tiêm chủng DNA có lợi pha chế tương đối nhanh không tốn nhiều tiền Các bệnh nhân tiêm chủng vaccin DNA mã hóa phân tử chimeric bao gồm idiotyp đặc hiệu bệnh nhân hòa chuỗi vùng định G2a k globulin miễn dịch chuột Các nhóm bệnh nhân tiêm chủng với DNA mã hóa vaccin chimeric thiết bị Biojector không kim vào da, có bổ sung DNA plasmid mã hóa yếu tố kích thích quần thể đại thực bào - bạch cầu hạt Trong tất nhóm bệnh nhân hầu hết tạo ĐUMD protein carrier Ig chuột, điều chứng tỏ protein mã hóa có tạo có khả tạo ĐUMD Việc cảm ứng ĐUMD với phần Id gen mã hóa xảy ra, nhiên phát số bệnh nhân Cần phải lưu ý TNLS thực cho bệnh giai đoạn muộn nhằm cảm ứng ĐUMD thích hợp Tuy nhiên với kinh nghiệm chắt lọc từ việc chuyển giao DNA trần vào người trị liệu miễn dịch ung thư cho thấy vaccin DNA plasmid hệ chưa đủ hiệu lực để tạo nên ĐUMD có hiệu lực lâm sàng kháng lại tự KN chưa đột biến Trên Bảng 10.1 rõ hạn chế mặt lâm sàng phương pháp hành Hai thử nghiệm lâm sàng pha I vaccin DNA kháng trực tiếp bệnh ác tính liên quan tới HPV báo cáo Việc điều trị bệnh ác tính liên quan tới HPV có lợi kháng nguyên HPV ngoại lai biểu tế bào ác tính DNA plasmid mã hóa epitop HLA-A2 có nguồn gốc từ protein HPV16 E7 đóng gói vi hạt chất dẻo dễ phân hủy PLG chuyển vào Thử nghiệm trị liệu áp dụng cho người bị loạn sản hậu môn cho kết tăng đáp ứng tế bào T (phát đốm miễn dịch liên kết enzym (enzym-linked immunospot – ELISPOT) 10 số 12 bệnh nhân, số đối tượng nhóm liều cao có đáp ứng phần tổ chức học Sử dụng chất phản ứng (reagent) loại chuyển giao da cho phụ nữ bị tạo u nội biểu mô tử cung, kết phát thấy ĐUMD với HPV E7 hầu hết bệnh nhân (73%) đáp ứng tổ chức học đầy đủ 33% phụ nữ Không có tác dụng phụ nghiêm trọng liên quan tới vaccin báo cáo Những nghiên cứu cho thấy vaccin DNA hướng vào kháng nguyên HPV có vai trò quan trọng việc quản lý bệnh ác tính liên quan tới HPV KẾT LUẬN VÀ CÁC ĐỊNH HƯỚNG TƯƠNG LAI Nhịp độ định loại KN khối u tăng nhanh năm qua với kỹ thuật nâng cao không ngừng trắc diện biểu (expression profiling), SEREX phân tích proteomic cho phép xác định đích tiềm cho trị liệu miễn dịch chủ động Việc sử dụng vaccin DNA mô hình tiền lâm sàng cung cấp phương thức đánh giá tương đối nhanh khả ứng dụng tiềm tàng KN ứng cử viên với vai trò trung gian thải loại khối u Ngoài KN liên kết khối u truyền thống, vaccin polynucleotid có vai trò chiến lược vaccin kháng trực tiếp hệ mạch khối u Các nghiên cứu vaccin polynucleotid điều trị bệnh truyền nhiễm mạn tính phải tiếp tục khảo sát để phát triển chiến lược mới, hợp vào vaccin ung thư, chẳng hạn xây dựng nghiên cứu tiền lâm sàng thật “quả cảm”, nghiên cứu lâm sàng nhắm vào bệnh truyền nhiễm để chứng minh DNA mồi virus thúc đẩy tiềm ĐUMD người Mặc dầu chứng lâm sàng hiệu vaccin polynucleotid trị liệu ung thư rõ ràng, cần phải làm rõ nữa, lý cần phải nghĩ tới tiềm chúng việc quản lý bệnh ác tính Vì cách trị liệu độc tính nên việc tiêm chủng polynucleotid cuối áp dụng lâm sàng với tư cách chất bổ trợ có lượng dư thừa tối thiểu trị liệu Điều hữu ích việc phòng ngừa tái phát bệnh Cuối việc sử dụng vaccin polynucleotid mở rộng tới lĩnh vực phòng ngừa ung thư Lợi đáng quý tiêm chủng polynucleotid độ an toàn cao Vì quan tâm lĩnh vực quản lý bệnh ác tính