BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT TỶ LỆ BẢO HỘ ĐỐI VỚI VIRUS LỞ MỒM LONG MÓNG (LMLM) SEROTYPE O TRÊN ĐÀN HEO TẠI CÁC HUYỆN TÂN PHÚ, ĐỊNH QUÁN VÀ THỐNG NHẤT THUỘC TỈNH ĐỒNG NAI Họ tên sinh viên : DƯƠNG HÙNG SƠN Ngành : Thú Y Lớp : Thú Y Vĩnh Long Niên khóa : 2002 - 2007 Tháng 03/2008 KHẢO SÁT TỶ LỆ BẢO HỘ ĐỐI VỚI VIRUS LỞ MỒM LONG MÓNG (LMLM) SEROTYPE O TRÊN ĐÀN HEO TẠI CÁC HUYỆN TÂN PHÚ, ĐỊNH QUÁN VÀ THỐNG NHẤT THUỘC TỈNH ĐỒNG NAI Tác giả DƯƠNG HÙNG SƠN Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Bác sỹ ngành Thú Y Giáo viên hướng dẫn: GVC TS LÊ ANH PHỤNG Tháng 03/2008 i LỜI CẢM TẠ Con xin thành kính dâng lên ba mẹ nuôi nấng dạy dỗ trưởng thành Xin chân thành cảm ơn TS Lê Anh Phụng KS Lương Hải Phong hướng dẫn tận tình cho suốt thời gian thực luận văn tốt nghiệp Đặc biệt, xin chân thành cảm ơn tập thể Anh Chị em Phòng Chẩn đoán xét nghiệm Chi cục Thú y Đồng Nai hỗ trợ thời gian thực tập tốt nghiệp Xin chia sẻ niềm vui với bạn lớp Tại Chức Thú Y 02 Vĩnh Long ii TÓM TẮT LUẬN VĂN Đề tài: “Khảo sát tỷ lệ mẫu huyết có hiệu giá kháng thể đạt bảo hộ virus LMLM serotype O đàn heo huyện Tân Phú, Định Quán, Thống Nhất thuộc tỉnh Đồng Nai” thực Trạm Chẩn Đoán Xét Nghiêm Thú Y thuộc Chi Cục Thú Y Đồng Nai, Xã Tam Phước huyện Long Thành Đồng Nai Thời gian từ tháng 07/2007 đến tháng 011/2007 Qua 720 mẫu huyết heo (heo thịt: 480 mẫu, heo nái : 240 mẫu) lấy từ sở chăn nuôi sau tiêm phòng vaccin LMLM serotype O từ tuần đến tháng Bằng kỹ thuật ELISA (enzyme linked immuno sorbent assay) tiến hành kiểm tra tỷ lệ mẫu huyết có đủ bảo hộ virus LMLM serotype O hay không, để đánh giá khả tạo kháng thể đàn heo sở chăn nuôi, nhằm phục vụ tốt cho công tác phòng chống dịch bệnh Tỷ lệ mẫu huyết có hiệu giá kháng thể đủ bảo hộ virus LMLM serotype O đạt tỷ lệ chung 51,40% Trên địa bàn huyện (Tân Phú, Định Quán Thống Nhất) không đạt tỷ lệ bảo hộ quần thể Chi Cục Thú Y Đồng Nai qui định (trên 70%) Qua khảo sát 40 trại có 16 trại đạt miễn dịch quần thể đạt tỷ lệ 45%, huyện Định Quán có số trại đạt bảo hộ cao (50%), huyện Thống Nhất (40%) thấp thuộc huyện Tân Phú đạt (25%) Khi khảo sát ảnh hưởng qui mô chăn nuôi đến tỷ lệ mẫu huyết đạt bảo hộ, kết thống kê cho thấy có khác biệt Tỷ lệ mẫu huyết đủ bảo hộ nhóm heo nái heo thịt toàn khu vực khảo sát khác biệt kết thống kê Tương tự tỷ lệ mẫu huyết đủ bảo hộ nhóm heo nái; nhóm heo thịt huyện khác biệt kết thống kê Khi khảo sát tỷ lệ mẫu huyết đủ bảo hộ nhóm heo nái heo thịt huyện khác biệt kết thống kê Tuy nhóm heo không ảnh hưởng đến kết khảo sát dễ nhận thấy nhóm heo nái có tỷ lệ mẫu huyết đạt bảo hộ cao nhóm heo thịt iii MỤC LỤC Trang Trang tựa i Lời cảm tạ ii Tóm tắt iii Mục lục iv Danh sách chữ viết tắt …vii Danh sách bảng viii Danh sách biểu đồ ix Chương .17 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 17 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 17 iv DANH SÁCH NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT CSGM: sở giết mộ CPE: Cyto pathogenic Effect (tác động gây bệnh tế bào) E.I: Ethylene imine ELISA : Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay FMD: Foot And Mouth Disease (bệnh lở mồm long móng) LMLM: bệnh lở mồm long móng PBS: Phosphate Buffer Saline PCR: Polymerase chain reaction VE: Vesicular Exanthema disease ( bệnh bọng nước ban đỏ) VP: Viral protein VS: Vesicular stomatitis disease (bệnh viêm miệng bọng nước) v DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1: Phân bố type virus LMLM nước Đông Nam Á .3 Bảng 2.2: Mối quan hệ môi trường với tồn virus ………………………8 Bảng 2.3: phân biệt với bệnh gây mụn nước động vật ………………………… 11 Bảng 3.1 Bố trí mẫu huyết cần cho xét nghiệm ………………………………18 Bảng 3.2 Phân bố vị trí mẫu huyết đối chứng cho xét nghiệm……………… …………… … 22 Bảng 4.1 Tỷ lệ mẫu huyết heo đạt bảo hộ virus LMLM serotype O sau tiêm phòng toàn khu vực khảo sát …………………….24 Bảng 4.2 Tỷ lệ mẫu huyết heo đạt bảo hộ virus LMLM serotype O huyện ………………………………………………….25 Bảng 4.3 Tỷ lệ trại đạt bảo hộ quần thể ………………………………………………27 Bảng 4.4 Tỷ lệ mẫu huyết heo đạt bảo hộ virus LMLM serotype O theo qui mô chăn nuôi ………………… 28 Bảng 4.5 Tỷ lệ mẫu huyết đạt bảo hộ virus LMLM serotype O heo nái heo thịt………………………………………… 29 Bảng 4.6 Tỷ lệ huyết heo nái đạt bảo hộ virus LMLM serotype O …………………………………………… 31 Bảng 4.7 Tỷ lệ mẫu huyết heo thịt đạt bảo hộ virus LMLM serotype O huyện ……………………………………………………… 32 Bảng 4.8 Tỷ lệ mẫu huyết đạt bảo hộ virus LMLM serotype O sau tiêm phòng heo nái heo thịt huyện………………… 34 vi DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.1 Tỷ lệ mẫu huyết heo có hiệu giá kháng thể đạt bảo hộ virus LMLM serotype O sau tiêm phòng huyện………… ….26 Biểu đồ 4.2 Tỷ lệ trại chăn nuôi heo đạt bảo hộ quần thể ………………………… 27 Biểu đồ 4.4 Tỷ lệ mẫu huyết heo có hiệu giá kháng thể đạt bảo hộ virus LMLM serotype O theo qui mô chăn nuô…… ….28 Biểu đồ 4.4 Tỷ lệ mẫu huyết đạt bảo hộ virus LMLM serotype O heo nái heo thịt ……………………………………… 30 Biểu đồ 4.5 Tỷ lệ mẫu huyết heo nái đạt bảo hộ virus LMLM serotype O sau tiêm phòng huyện ………………………… …… 31 Biểu đồ 4.6 Tỷ lệ mẫu huyết heo thịt đạt bảo hộ virus LMLM serotype O sau tiêm phòng ……………………………………………….33 Biểu đồ 4.7 Tỷ lệ mẫu huyết đạt bảo hộ virus LMLM serotype O heo nái heo thịt huyện ……… ………… 34 vii Chương MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Tình hình chăn nuôi gia súc gia cầm ngày phát triển mạnh mẽ năm gần Tuy nhiên, vào khoảng tháng 11/2004, đại dịch cúm gia cầm xảy ảnh hưởng không nhỏ đến kinh tế nước ta người tiêu thụ chuyển dần sang thực phẩm có nguy gây bệnh Sự chuyển đổi từ thịt gia cầm sang thịt heo ngày phát triển lớn mạnh Nhằm giám sát, quản lí tình hình dịch bệnh gia súc gia cầm nói chung bệnh LMLM heo nói riêng Chi Cục Thú Y Đồng Nai tiến hành lấy mẫu huyết để xét nghiệm hàm lượng kháng thể sau tiêm vaccine LMLM serotype O heo sở chăn nuôi Để bước xây dựng đồ dịch tể bệnh LMLM heo làm sở để xây dựng vùng an toàn dịch bệnh tỉnh Đồng Nai Xuất phát từ thực tế trên, đồng ý Bộ môn Vi sinh - Truyền nhiễm, Khoa Chăn nuôi Thú y, Trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh, Trạm Chẩn đoán Xét Nghiệm thuộc Chi Cục Thú Y Đồng Nai hướng dẫn TS Lê Anh Phụng KS Lương Hải Phong, tiến hành thực đề tài: “Khảo sát tỷ lệ bảo hộ virus lở mồm long móng (LMLM) serotype O đàn heo huyện Tân Phú, Định Quán Thống Nhất thuộc tỉnh Đồng Nai” 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích - Đánh giá tỷ lệ bảo hộ đàn heo sau tiêm phòng vaccin LMLM serotype O, cung cấp thông tin cho việc phòng bệnh LMLM heo - Thiết lập sở liệu phục vụ cho công tác phòng chống dịch địa bàn thuộc tỉnh Đồng Nai 1.2.2 Yêu cầu Sử dụng kĩ thuật ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) để kiểm tra khả đáp ứng miễn dịch virus lở mồm long móng serotype O Bảng 4.8 Tỷ lệ mẫu huyết có kháng thể đạt bảo hộ virus LMLM serotype O heo nái heo thịt huyện Số mẫu huyết STT xét nghiệm Huyện Tân Phú Định Quán Thống Nhất Heo nái Heo thịt 30 35 175 60 70 350 Mẫu huyết đạt bảo hộ Heo nái Heo thịt Số mẫu Tỷlệ Số mẫu Tỷlệ (+) 15 21 98 (%) 50,00 60,00 56,00 (+) 26 33 177 (%) 43,33 47,14 50,60 Biểu đồ 4.7 Tỷ lệ mẫu huyết có kháng thể đạt bảo hộ virus LMLM serotype O heo nái heo thịt huyện Qua bảng 4.8 biểu đồ 4.7, nhận thấy tỷ lệ mẫu huyết đạt bảo hộ virus LMLM serotype O heo nái huyện Tân Phú (50 % ) cao heo thịt (43,33%) So sánh mặt thống kê khác biệt heo nái heo thịt ý nghĩa (P>0,05) Huyện Định Quán tỷ lệ mẫu huyết đạt bảo hộ heo nái 60% cao heo thịt (47,14%) So sánh mặt thống kê khác biệt heo nái heo thịt ý nghĩa (P>0,05) Ở huyện Thống Nhất số mẫu huyết heo nái đạt bảo hộ virus LMLM serotype O sau tiêm phòng 56% cao heo thịt 35 (50,6%) So sánh mặt thống kê cho thấy tỷ lệ mẫu huyết đạt bảo hộ heo nái heo thịt ý nghĩa (P>0,05) Nhìn chung tỷ lệ mẫu huyết đạt bảo hộ virus LMLM serotype O heo nái heo thịt sau tiêm phòng huyện thấp, không đạt yêu cầu bảo hộ quần thể Chi Cục Thú Y Đồng Nai qui định (phải 70%) Trong huyện nhận thấy tỷ lệ huyết đủ khả bảo hộ heo nái cao heo thịt tỷ lệ không cao (từ 50% đến 60%), heo nái tiêm phòng nhiều lần đời heo thịt tiêm phòng thời gian nuôi ngắn Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 36 4.1 KẾT LUẬN Trong thời gian thực đề tài từ tháng 07 năm 2007 đến tháng 11 năm 2007, khảo sát 720 mẫu huyết đạt bảo hộ virus LMLM serotype O đàn heo tiêm phòng sở chăn nuôi địa bàn huyện Tân Phú, Định Quán Thống Nhất thuộc tỉnh Đồng Nai Chúng có kết luận sau đây: (1) Tỷ lệ mẫu huyết heo đủ bảo hộ virus LMLM serotype O sau tiêm phòng 51,40%, chưa đạt yêu cầu bảo hộ quần thể Chi Cục Thú Y Đồng Nai qui định (2) Tỷ lệ mẫu huyết heo đạt bảo hộ virus LMLM serotype O huyện Thống Nhất đạt cao (52,40%), Tân Phú đạt thấp (45,55%) (3) Tỷ lệ trại đạt yêu cầu bảo hộ quần thể (40%), huyện Định Quán đạt cao (50%) Tân Phú đạt thấp (25%) (4) Ở qui mô chăn nuôi 500 đạt bảo hộ cao (76,67%) có khác biệt với qui mô chăn nuôi lại (5) Tỷ lệ mẫu huyết đạt bảo hộ nhóm heo nái (55,83%) cao nhóm heo thịt (49,20%) (6) Tỷ lệ mẫu huyết đạt bảo hộ heo nái huyện Định Quán cao (60%) Tân Phú đạt thấp (50%) (7) Tỷ lệ mẫu huyết đạt bảo hộ heo thịt huyện Thống Nhất cao (50,60%) Tân Phú thấp (43,33%) (8) Tỷ lệ mẫu huyết đạt bảo hộ virus LMLM serotype O heo nái heo thịt huyện: Tân Phú heo nái đạt bảo hộ (50%) cao heo thịt (43,33%), Định Quán heo nái đạt bảo hộ (60%) cao heo thịt (47,14%), Thống Nhất heo nái đạt bảo hộ (56%) cao heo thịt (50,60% ) 5.2 ĐỀ NGHỊ 37 ĐỐ VỚI CHI CỤC THÚ Y ĐỒNG NAI Cần tổ chức tiêm phòng lấy mẫu xét nghiệm sở chăn nuôi không đạt yêu cầu bảo hộ Cần tiến hành lấy mẫu xét nghiệm để định hàm lượng kháng thể sau tiêm phòng vaccin LMLM serotype O hộ chăn nuôi Giám sát chặt chẽ yếu tố như: kỹ thuật tiêm phòng, bảo quản vaccin, đào tạo nâng cao tay nghề cho sở chăn nuôi, thú y viên từ đơn vị mạng lưới cộng tác viên ĐỐI VỚI NHÀ CHĂN NUÔI Cần thực tốt công tác tiêm vaccin phòng bệnh LMLM đàn heo TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Cục Thú Y, 2001 Tiểu luận kế hoạch phòng chống bệnh lỡ mồm long móng 38 Cục Thú Y, Báo cáo năm 1999- 2005 Lê Minh Chí, 1985 Bệnh lở mồm long móng Cục Thú Y Nguyễn Tiến Dũng, 2000 Bệnh lở mồm long móng Tạp chí KHKT Thú Y, tập VII (3): 8-16 Đào Trọng Đạt 2000 Để góp phần vào việc đấu tranh phòng chống bệnh lở mồm long móng Tạp chí Khoa học kỹ thuật Hội thú y Việt Nam, tập VII Phan Đình Đỗ Trịnh Văn Thịnh, 1958 Bệnh truyễn nhiễm gia súc, tập I Nhà xuất Nông Thôn Lê Văn Hùng, 2002 Giáo trình Miễn Dịch Học Thú Y Tủ sách Trường Đại Học Nông Lâm TP HCM Vũ Thị Diêu Hương, 2006 Khảo sát tỷ lệ huyết có hiệu giá kháng thể đủ bảo hộ virus lở mồm long móng serotype O đàn heo địa bàn quận huyện thuộc TP HCM Luận văn tốt nghiệp Khao Chăn Nuôi – Thú Y Trường Đại Học Nông Lâm TP HCM Nguyễn Lương, 1997 Dịch tể học thú y tập II phần chuyên biệt Tủ sách Trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh 10 Trần Thanh Phong, 1996 Giáo trình truyền nhiễm virus heo Tủ sách Trường Đại Học Nông Lâm TP HCM 11 Lê Anh Phụng, 1996 Giáo trình dịch tễ học Thú Y phần chuyên khoa Tủ sách Trường Đại Học Nông Lâm TP HCM 12 Lê Anh Phụng, 2006 Bệnh Truyền Nhiễm Trâu Bò Tủ sách trường Đại Học Nông Lâm TP HCM 13 Thái Thị Thủy Phượng 2000 Bước đầu khảo sát số đặc điểm dịch tễ học biện pháp khống chế bệnh lở mồm long móng heo tỉnh An Giang, Cần Thơ, Đồng Tháp, Vĩnh Long Luận án thạc sĩ khoa học nông nghiệp Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh 14 Thái Thị Thủy Phượng, 2006 Bệnh lở mồm long móng gia súc Nhà xuất nông nghiệp TP HCM 14 Tô Long Thành, 2000 Cơ sở phân loại virus LMLM Tạp chí Khoa học kỹ thuật Hội thú y Việt Nam, tập VII 15 Tô Long Thành, 2000 Những tiến sản xuất vaccin chống bệnh LMLM Tạp chí Khoa học kỹ thuật Hội thú y Việt Nam, tập VII 39 16 Nguyễn Thị Ánh Tuyết, 2005 Tình hình bệnh LMLM trâu bò, heo giết mổ nuôi Tp Hồ Chí Minh đánh giá khả bảo hộ qui trình tiêm phòng Chi Cục Thú Y áp dụng Luận án thạc sĩ Khoa học nông nghiệp Đại học Nông lâm Tp Hồ Chí Minh Tài liệu nước 17 Pirbright laboratories, Anh Qui trình kit “ ELISA kit for FMDV serology (type O)” 18 Donaldson A.I., 1998 Food and mouth disease in swine Selezione Veteriaria, pp 189 - 195 19 Grubman J.M., Baxt B., 2004 Food and mouth disease Clinical Microbiology Reviews Pp 465 – 495 PHỤ LỤC QUI TRÌNH TIÊM PHÒNG VẮC-XIN LMLM CỦA CỤC THÚ Y 40 Ngày 16/5/2006, Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp PTNT ban hành Quyết định số 38/2006/QĐ/BNN Quy định phòng chống bệnh Lở mồm long móng gia súc Để thống việc thực công tác phòng chống bệnh lở mồm long móng (LMLM) nước, Cục thú y hướng dẫn cụ thể số Điều sau: Quy trình tiêm phòng heo Tiêm phòng lần đầu cho heo từ tuần tuổi trở lên tiêm nhắc lại sau tuần Sau sau tháng sau tiêm nhắc lại lần cho heo nái heo đực giống Đối với heo nái cần tiêm nhắc lại trước đẻ 2- tuần để tăng miễn dịch thụ động cho heo Chú ý: vắc xin tiêm phòng nhắc lại mũi tiêm thứ hai phải loại với mũi vắc xin thứ QUI TRÌNH CHẨN ĐOÁN ĐỊNH HIỆU GIÁ THỂ KHÁNG THỂ KHÁNG VIRUS LỞ MỒM LONG MÓNG (SEROTYPE O) 41 THEO BỘ KÍT DO PIRBRIGHT SẢN XUẤT Thành phần kít - kháng thể bắt giữ virus FMD chế từ thỏ (kháng thể bắt giữ) - kháng thể kháng virus chế từ chuột lang (kháng thể phát hiện) - kháng nguyên đối chứng type O - huyết đối chứng dương C++, - huyết đối chứng âm C- - kháng thể chống lại kháng thể chuột lang có gắn enzyeme Horseradish C+ peroxidase (conjugate) CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH TIẾN HÀNH XÉT NGHIỆM Ngày Bước 1: CHUẨN BỊ ĐĨA PHẢN ỨNG ELISA - Đánh dấu ghi theo sơ đồ đĩa - Pha loãng kháng thể bắt giữ virus FMD (Rabbit antiserum serotype O) 1/1000 carbonate Bicarbonate Coating Buffer - Phủ tất 96 giếng ( đĩa phản ứng ELISA) với 50µl với kháng thể bắt giữ (Rabbit Antiserum serotype O) pha loãng - Dùng miếng băng keo mỏng, dán kín đĩa phản ứng lại - Lắc ủ 60 phút 370C giữ qua đêm +40C - +80C hợp nhựa ẩm ướt Bước 2: CHUẨN BỊ ĐĨA CHUYỂN 42 - Đánh dấu ghi theo sơ đồ đĩa - huyết kiểm tra pha loãng 1/50 ELISA Buffer A - Phân phối 60µl huyết pha loãng đến đĩa nhựa hình chữ U 96 giếng chuẩn độ serum mẫu cần thiết Mỗi đĩa bắt buộc phải có Ca (ELISA Buffer A Antigen) OD blank ( có ELISA Buffer A) Chuẩn bị pha loãng C++, C+, C- : 1/16 ELISA Buffer A,sau phân phối 60µl vào giếng (xem sơ đồ 1) - Pha loãng kháng nguyên (Antigen) ELISA Buffer A với tỉ lệ 1/100 - Phân phối 60µl kháng nguyên pha loãng đến tất giếng đĩa ủ huyết kiểm tra (đĩa ủ mẫu) kể giếng Control giếng OD max, trừ giếng Blank Riêng Blank thêm vào 60µl Buffer A - Sau dùng băng keo trong, mỏng dán kín đĩa lại ủ qua đêm +4 0C - +80C hợp nhựa ẩm ướt SƠ ĐỒ ĐĨA : Đĩa chuyển A B C D E F G H C++ C++ C+ C+ CCa Ca Blank C++ C++ C+ C+ CCa Ca Blank S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18 S19 S20 S21 S22 S23 S24 S25 S26 S27 S28 S29 S30 S31 S32 S33 S34 S35 S36 S37 S38 S39 S40 10 Ngày Bước ĐĨA CHUYỂN VÀ ĐĨA PHẢN ỨNG Lấy đĩa chuyển đĩa phản ứng để nhiệt độ phòng khoảng 20 phút 43 11 12 Bước Chỉ có đĩa phản ứng: rửa lần với PBS Washing buffer Chuyển 50µl hỗn hợp huyết - kháng nguyên từ đĩa ủ sang đĩa phản ứng (serum mẫu – Antigen) theo vị trí thích hợp Dùng băng keo mỏng, dán kín đĩa phản ứng cho vào máy ủ lắc 60 phút 370C Sơ đồ đĩa : Phản ứng thường quy A B C D E F G H C++ C++ C+ C+ CCa Ca Blank C++ C++ C+ C+ CCa Ca Blank S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18 S19 S20 S21 S22 S23 S24 S17 S18 S19 S20 S21 S22 S23 S24 S25 S26 S27 S28 S29 S30 S31 S32 10 S25 S26 S27 S28 S29 S30 S31 S32 11 S33 S34 S35 S36 S37 12 S33 S34 S35 S36 S37 S38 S38 S39 S39 S40 S40 Ghi chú: C++: đối chứng dương tính mạnh C+: đối chứng dương tính yếu C-: đối chứng âm tính Ca: đối chứng kháng nguyên Blank: mẫu trắng Bước Rửa đĩa lần với PBS Washing Buffer Cho vào 50µl Guinea Pig Detecting Antibody pha loãng ELISA Buffer B tất giếng Ủ lắc 60 phút 370C Bước Rửa đĩa lần với PBS Washing Buffer Cho vào 50µl Conjugate pha loãng ELISA Buffer B tất giếng Ủ lắc 60 phút 370C 44 Rửa đĩa lần với PBS Washing Buffer Chuẩn bị Substrate/Chomogen OPD + H2O2 (3%), cho vào 50µl tất giếng Bước Dừng phản ứng sau 15 phút với 50µl H 2SO4 1,25M kéo dài thời gian đến 25-30 phút giá trị OD max chưa đạt yêu cầu trước dừng phản ứng Bước Đọc đĩa với máy đọc ELISA kết nối với máy vi tính với bước sóng 492nm Control Ca: giá trị cao Ca (PI) C++ (PI) : dương mạnh C+ (PI) : dương yếu C- (PI) : âm tính Giới hạn 1.9 25 100 84 49 Giới hạn 0.8 -25 85 50 công thức tính giá trị PI : ODSERUM PI = 100 - x 100 Mean ODMAX KẾT QUẢ THỐNG KÊ 4.1 ty le mau huyet dat bao ho tren cac huyen Mau (+) Tan phu Dinh Quan Mau (-) 41 49 46,25 43,75 54 51 53,96 51,04 Total 90 105 45 Thong Nhat 275 250 525 269,79 255,21 Total 370 350 Chi-Sq = 0,596 + 0,630 + 0,000 + 0,000 + 0,101 + 0,106 = 1,433 720 DF = 2, P-Value = 0,488 Chi-Square Test 4.3 cac co so chan nuoi co mau huyet dat bao ho quan the Mau (+) Tan Phu Mau (-) Total 1,60 2,40 3 2,40 3,60 12 18 12,00 18,00 Total 16 24 Chi-Sq = 0,225 + 0,150 + 0,150 + 0,100 + 0,000 + 0,000 = 0,625 Dinh Quan Thong Nhat 30 40 DF = 2, P-Value = 0,732 Chi-Square Test 4.4 Ty le mau huyet dat theo qui mo chan nuoi Mau (+) 100 - 500 Mau (-) 124 206 169,58 160,42 62 88 77,08 72,92 184 56 123,33 116,67 Total 330 150 240 46 Total 370 Chi-Sq = 12,253 + 350 720 2,951 + 12,953 + 3,120 + 29,841 + 31,547 = 92,665 DF = 2, P-Value = 0,000 4.5 Ty le mau huyet dat bao ho tren nhom heo nai va heo thit o toan khu vuc khao sat Mau (+) Mau (-) Total 236 244 480 246,67 233,33 134 106 123,33 116,67 Total 370 350 Chi-Sq = 0,461 + 0,488 + 0,923 + 0,975 = 2,847 heo thit heo nai 240 720 DF = 1, P-Value = 0,092 4.6 mau huyet heo nai dat bao ho tren moi huyen Mau Tan Ph (+) Mau (-) Total 15 15 16,75 13,25 21 14 19,54 15,46 98 77 97,71 77,29 Total 134 106 Chi-Sq = 0,183 + 0,231 + 0,109 + 0,138 + 0,001 + 0,001 = 0,662 Dinh Quan Thong Nhat 30 35 175 240 DF = 2, P-Value = 0,718 Chi-Square Test 4.7 Tren cac huyen mau huyet heo thit dat bao ho Mau (+) Tan Phu Dinh Quan Thong Nhat Mau (-) 26 34 29,50 30,50 33 37 34,42 35,58 177 173 172,08 177,92 Total 60 70 350 47 Total 236 244 480 Chi-Sq = 0,415 + 0,402 + 0,058 + 0,056 + 0,140 + 0,136 = 1,208 DF = 2, P-Value = 0,547 Chi-Square Test 4.8 tren tung huyenty le mau huyet o heo nai va heo thit dat bao ho TAN PHU Mau (+) Heo nai Mau (-) Total 15 15 13,67 16,33 26 34 27,33 32,67 Total 41 49 Chi-Sq = 0,130 + 0,109 + 0,065 + 0,054 = 0,358 Heo thit 30 60 90 DF = 1, P-Value = 0,549 DINH QUAN Mau (+) Heo nai 21 14 18,00 17,00 33 37 36,00 34,00 54 51 heo thit Total Chi-Sq = Mau (-) 0,500 Total 35 70 105 + 0,529 + 0,250 + 0,265 = 1,544 DF = 1, P-Value = 0,214 THONG NHAT Mau (+) Heo nai Mau (-) Total 98 77 91,67 83,33 177 173 183,33 166,67 Total 275 250 Chi-Sq = 0,438 + 0,481 + 0,219 + 0,241 = 1,378 Heo thit 175 350 525 48 DF = 1, P-Value = 0,240 49 ... kháng virus LMLM serotype O 21 Kháng thể Kháng thể kháng virus huyết xét LMLM chế từ thỏ nghiệm ủ với kháng nguyên gốc (virus LMLM serotype O) ủ qua đêm – 80C Cho kháng thể kháng virus LMLM chế... bệnh LMLM heo nói riêng Chi Cục Thú Y Đồng Nai tiến hành lấy mẫu huyết để xét nghiệm hàm lượng kháng thể sau tiêm vaccine LMLM serotype O heo sở chăn nuôi Để bước xây dựng đồ dịch tể bệnh LMLM. .. Thành, 2000) 2.2 Dịch tể học 2.2.1 Tình hình phân bố dịch bệnh LMLM giới năm gần Từ năm 1981-1985, bệnh LMLM xảy 80 nước, năm 1989 bệnh LMLM báo cáo 50 nước thuộc châu lục (theo tài liệu Cục Thú