ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA SINH HỌC ĐỖ THỊ HIỀN ĐÁNH GIÁ CÁC CHỈ SỐ HÓA SINH CỦA KHỐI TIỂU CẦU POOL LỌC BẠCH CẦU VÀ ỨNG DỤNG TRONG ĐIỀU TRỊ Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số : 60420114 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN TRIỆU VÂN PGS.TS NGUYỄN QUANG HUY HÀ NỘI, 2016 MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chƣơng - TỔNG QUAN 1.1 MÁU VÀ CÁC THÀNH PHẦN CỦA MÁU 1.1.1 Máu 1.1.2 Các thành phần máu 10 1.2 CÁC CHẾ PHẨM MÁU 11 1.3 Tình hình điều chế thành phần máu Việt Nam 13 1.4 Cấu trúc chức tiểu cầu 15 1.4.1 Cấu trúc tiểu cầu 15 1.4.2 Chức tiểu cầu 16 1.4.2.1 Chức dính 17 1.4.2.2 Chức ngƣng tập 17 1.4.2.3 Chức chế tiết 18 1.4.2.4 Khả hấp thụ vận chuyển chất 18 1.5 Sinh hóa tiểu cầu 19 1.5.1 Các trình chuyển hóa tiểu cầu không hoạt hóa 19 1.5.1.1 Chuyển hóa carbohydrate tiểu cầu 19 1.5.1.2 Chuyển hóa lipid tiểu cầu 20 1.5.2 Các trình chuyển hóa tiểu cầu hoạt hóa 20 1.6 Các loại khối tiểu cầu phƣơng pháp sản xuất khối tiểu cầu 20 1.6.1 Khối tiểu cầu sản xuất từ máu toàn phần 20 1.6.1.1 Tách từ huyết tƣơng giàu tiểu cầu 20 1.6.1.2 Phƣơng pháp tách tiểu cầu từ buffy coat (tách từ lớp bạch - tiểu cầu) 21 1.6.2 Khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu Error! Bookmark not defined 1.6.3 Khối tiểu cầu gạn tách từ ngƣời hiến (khối tiểu cầu apheresis) Error! Bookmark not defined 1.6.4 Khối tiểu cầu chiếu xạ Error! Bookmark not defined 1.6.5 Khối tiểu cầu bổ sung dung dịch bảo quản tiểu cầuError! Bookmark not defined 1.7 Bảo quản tiểu cầu Error! Bookmark not defined 1.7.1 Nhiệt độ bảo quản Error! Bookmark not defined 1.7.2 Lắc trình bảo quản Error! Bookmark not defined 1.7.3 Túi bảo quản khối tiểu cầu Error! Bookmark not defined 1.7.4 Tình hình nhiễm khuẫn khối tiểu cầu trình bảo quản Error! Bookmark not defined 1.7.5 Sự thay đổi yếu tố khối tiểu cầu trình bảo quản Error! Bookmark not defined 1.7.5.1 Hoạt độ lactat dehydrogenase Error! Bookmark not defined 1.7.5.2 Lactat, độ pH glucose Error! Bookmark not defined 1.7.5.3 Ion Calci Error! Bookmark not defined 1.7.5.4 Kiểm tra độ vẩn xoáy tiểu cầu Error! Bookmark not defined 1.8 Sử dụng khối tiểu cầu điều trị bệnh Error! Bookmark not defined 1.10 Đánh giá độ ổn định chế phẩm khối tiểu cầuError! Bookmark not defined 1.11 Tác hại bạch cầu, cytokin, chất trung gian gốc tự an toàn truyền máu Error! Bookmark not defined 1.11.1 Cytokin máu bảo quản Error! Bookmark not defined 1.11.2 Các chất trung gian máu bảo quảnError! Bookmark not defined 1.11.3 Các men bạch cầu máu bảo quảnError! Bookmark not defined 1.11.4 Các chất tự máu bảo quản Error! Bookmark not defined 1.11.5 Gây phản ứng miễn dịch đồng loài Error! Bookmark not defined 1.11.6 Giải pháp nhằm giảm tác dụng phụ khối tiểu cầu Error! Bookmark not defined Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Error! Bookmark not defined 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.1.1 Thiết bị, dụng cụ nguyên vật liệu Error! Bookmark not defined 2.1.2 Thời gian nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu: mô tả cắt ngang Error! Bookmark not defined 2.2.2 Kỹ thuật sản xuất khối tiểu cầu pool lọc - bạch cầu từ lớp Buffycoat máu toàn phần Error! Bookmark not defined 2.2.3 Sơ đồ điều chế, lấy mẫu để kiểm tra tiêu:Error! Bookmark not defined 2.2.4 Kiểm tra chất lƣợng khối tiểu cầu Error! Bookmark not defined 2.2.5 Đánh giá kết truyền khối tiểu pool lọc bạch cầuError! Bookmark not defined Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬNError! Bookmark not defined 3.1 Đánh giá số hóa sinh khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu Error! Bookmark not defined 3.2 Đánh giá số số huyết học, sinh hóa KTC pool lọc bạch cầu trình bảo quản Error! Bookmark not defined 3.2.1 Chỉ số tiểu cầu Error! Bookmark not defined 3.2.2 Chỉ số pH Error! Bookmark not defined 3.2.3 Chỉ số Glucose Error! Bookmark not defined 3.2.4 Chỉ số LDH Error! Bookmark not defined 3.2.5 Độ vẩn xoáy tiểu cầu Error! Bookmark not defined 3.2.6 Độ vô khuẩn Error! Bookmark not defined 3.3 Kết sử dụng khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu để điều trị khoa lâm sàng Error! Bookmark not defined 3.3.1 Tình hình sử dụng khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu khoa lâm sàng Error! Bookmark not defined 3.3.2 Đặc điểm tuổi giới: Error! Bookmark not defined 3.3.3 Tỷ lệ truyền khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu theo nhóm tuổi Error! Bookmark not defined 3.3.4 Đặc điểm theo nhóm bệnh Error! Bookmark not defined 3.3.5 Đặc điểm số lƣợng tiểu cầu bệnh nhân trƣớc truyền Error! Bookmark not defined 3.3.6 Đặc điểm xuất huyết bệnh nhân trƣớc sau truyền KTC pool lọc bạch cầu Error! Bookmark not defined 3.3.7 Số lƣợng tiểu cầu trung bình bệnh nhân trƣớc sau truyền Error! Bookmark not defined 3.3.8 Đánh giá hiệu truyền tiểu cầu theo số CCI sau truyền 24 Error! Bookmark not defined 3.3.9 Theo dõi phản ứng truyền máu Error! Bookmark not defined KẾT LUẬN Error! Bookmark not defined KIẾN NGHỊ, ĐỀ XUẤT Error! Bookmark not defined TÀI LIỆU THAM KHẢO 21 PHỤ LỤC Error! Bookmark not defined DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Các chế phẩm máu đƣợc tách từ máu toàn phần 12 Hình 1.2 Tổng số lƣợng máu toàn phần tiếp nhận chế phẩm máu điều chế từ năm 2004 - 2015 14 Hình 1.3 Tỷ lệ số đơn vị chế phẩm máu đƣợc điều chế từ đơn vị máu toàn phần tiếp nhận từ năm 2004 - 2015 14 Hình 1.4 Cấu trúc tiểu cầu dƣới kính hiển vi điện tử [15] 16 Hình 1.5 Ảnh chụp tiểu cầu bình thƣờng trạng thái hoạt động dƣới KHV điện tử [15] 16 Hình 2.1 Mô hình túi máu toàn phần sau ly tâm.Error! Bookmark not defined Hình 2.2 Túi máu toàn phần trƣớc (A) sau ly tâm (B) Error! Bookmark not defined Hình 2.3 Túi máu đƣợc tách thành phần sau ly tâm Error! Bookmark not defined Hình 2.4 túi buffy coat túi huyết tƣơng đƣợc pool vào kít PB Error! Bookmark not defined Hình 2.5 Túi buffy coat pool sau ly tâm, lọc bạch cầuError! Bookmark not defined túi khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu Error! Bookmark not defined Hình 3.1 Tỷ lệ sử dụng KTC pool lọc bạch cầu khoa lâm sàng Error! Bookmark not defined Hình 3.2 Tỷ lệ truyền khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu theo nhóm tuổi Error! Bookmark not defined DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Kết số tiêu chất lượng KTC pool lọc bạch cầu sau điều chếError! Bookmark not defined Bảng 3.2 So sánh kết nghiên cứu so với tác giả khác Error! Bookmark not defined Bảng 3.3 Kết đánh giá tiêu số lượng tiểu cầu trình bảo quản Error! Bookmark not defined Bảng 3.4 Kết số pH theo thời gian bảo quản Error! Bookmark not defined Bảng 3.5 So sánh kết nghiên cứu so với tác giả khác 42 Bảng 3.6 Glucose thay đổi theo thời gian bảo quản Error! Bookmark not defined Bảng 3.7 Kết số LDH theo thời gian bảo quản Error! Bookmark not defined Bảng 3.8 So sánh kết nghiên cứu LDH so với tác giả khác 45 Bảng 3.9 Độ vẩn xoáy thay đổi thời gian bảo quản Error! Bookmark not defined Bảng 3.10 Đặc điểm tuổi giới Error! Bookmark not defined Bảng 3.11 Đặc điểm theo nhóm bệnh Error! Bookmark not defined Bảng 3.12 Đặc điểm số lượng tiểu cầu bệnh nhân trước truyền Error! Bookmark not defined Bảng 3.13 Đặc điểm xuất huyết bệnh nhân trước sau truyền KTC pool lọc bạch cầuError! Bookmark not defi Bảng 3.14 Số lượng tiểu cầu trung bình bệnh nhân trước sau truyền Error! Bookmark not defined Bảng 3.15 Kết truyền tiểu cầu theo số CCI sau truyền 24 giờError! Bookmark not defined Bảng 3.16 Kết theo dõi phản ứng truyền máu truyền KTC pool lọ c bạch cầuError! Bookmark not defined MỞ ĐẦU Lịch sử truyền máu đƣợc bắt đầu vào năm đầu kỷ XVII, nhiên đến nhà bác học Karl Landsteiner phát hệ nhóm máu ABO ngƣời vào đầu kỷ XX truyền máu thật phát triển Bƣớc đột phá truyền máu đại điều chế, định sử dụng thành phần máu lâm sàng Với tiến khoa học kỹ thuật hiểu biết đầy đủ miễn dịch huyết học, ngƣời ta tách riêng đƣợc thành phần hồng cầu, tiểu cầu, bạch cầu hạt trung tính, huyết tƣơng tƣơi, tủa lạnh yếu tố VIII, -globulin, albumin yếu tố đông máu Trong điều trị, việc sử dụng chế phẩm máu vừa mang tính khoa học, vừa có lợi ích kinh tế, bệnh nhân đƣợc cung cấp thành phần máu mà họ thiếu, không truyền thành phần không cần gây phản ứng miễn dịch, lãng phí thành phần máu không cần thiết Tiểu cầu thành phần máu đóng vai trò quan trọng trình đông cầm máu Truyền khối tiểu cầu trƣờng hợp xuất huyết giảm số lƣợng giảm chức tiểu cầu liệu pháp điều trị quan trọng, ngăn chặn trình chảy máu, cứu sống ngƣời bệnh [32] Bên cạnh lợi ích cứu sống ngƣời bệnh, khối tiểu cầu có tác dụng phụ Một nguyên nhân có mặt bạch cầu khối tiểu cầu Để đảm bảo tính hiệu an toàn cao điều trị bệnh, chất lƣợng chế phẩm tiểu cầu ngày đƣợc trọng cải tiến Từ năm 1950, giới sản xuất khối tiểu cầu từ máu toàn phần Ngày nay, việc sản xuất khối tiểu cầu đƣợc cải tiến liên tục nhằm làm giảm thiểu phản ứng phụ, nâng cao chất lƣợng truyền khối tiểu cầu nhƣ lọc bạch cầu, khối tiểu cầu bổ sung dung dịch bảo quản Ngoài khối tiểu cầu đƣợc sản xuất từ máu toàn phần, việc sản xuất khối tiểu cầu gạn tách từ ngƣời hiến máu thành tựu lớn mở đầu cho thời kỳ điều chế thành phần máu gạn tách với thiết bị tự động đại Ở nƣớc ta, việc sản xuất khối tiểu cầu năm 1994 Viện Huyết học Truyền máu Trung ƣơng hệ thống hở Từ đến nay, trung tâm truyền máu lớn nhƣ: Viện Huyết học - Truyền máu Trung ƣơng, Bệnh viện Truyền máu Huyết học thành phố Hồ Chí Minh, Trung tâm truyền máu Chợ Rẫy, Trung tâm truyền máu Huế, Trung tâm Truyền máu Cần Thơ… qua nhiều bƣớc cải tiến sản xuất khối tiểu cầu ba phƣơng pháp sau: - Gạn tách tự động khối tiểu cầu từ ngƣời hiến (khối tiểu cầu apheresis) - Sản xuất khối tiểu cầu pool (là nhiều túi tiểu cầu đơn có nhóm máu hệ ABO, Rh đƣợc dồn lại túi tiểu cầu cho đủ yêu cầu số lƣợng chất lƣợng để truyền cho bệnh nhân theo định bác sỹ) từ máu toàn phần phƣơng pháp huyết tƣơng giàu tiểu cầu - Sản xuất khối tiểu cầu pool phƣơng pháp Buffy coat Các khối tiểu cầu đáp ứng đƣợc giá phù hợp số lƣợng nhƣng chất lƣợng chƣa đảm bảo cao tồn dƣ bạch cầu Khi khối tiểu cầu tồn dƣ nhiều bạch cầu có bất lợi bạch cầu gây nhƣ sau: 1) Kháng nguyên HLA (kháng nguyên bạch cầu) gây phản ứng miễn dịch chống bạch cầu, đặc biệt làm tăng nguy thải ghép cho bệnh nhân tiến hành ghép tạng sau [43] 2) Sốt, rét run, mẩn ngứa, dị ứng, mày đay trình bảo quản khối tiểu cầu, bạch cầu bị thoái hóa, giải phóng nhiều chất hóa học trung gian nhƣ histamin, serotonin, prostaglandin… cytokin nhƣ IL-1, IL-6, IL-8…, enzym nhƣ protease, lactat dehydrogenase, acid phosphatase, elastase…[15] 3) Có thể gây tổn thƣơng phổi cấp tính (TRALI) [32] Vì vậy, cần loại bỏ bạch cầu chế phẩm khối tiểu cầu [28] Đứng trƣớc tình trạng này, hãng Terumo sản xuất kít - PB dùng để sản xuất khối tiểu cầu lọc bạch cầu, loại túi bắt đầu đƣợc đƣa vào Việt Nam Viện Huyết học - Truyền máu Trung ƣơng từ năm 2015 sử dụng loại túi để sản xuất khối tiểu cầu đƣợc lọc bạch cầu nhằm đáp ứng nhu cầu điều trị cho bệnh nhân Để trì nâng cao chất lƣợng hiệu điều trị cho bệnh nhân cần truyền chế phẩm khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu việc đánh giá chất lƣợng theo dõi điều trị cần thực thƣờng xuyên Vì thực đề tài nghiên cứu “Đánh giá số hóa sinh khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu ứng dụng điều trị” với mục tiêu nhƣ sau: Đánh giá số hóa sinh khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu Đánh giá bước đầu kết sử dụng khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu để điều trị bệnh Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương Chương - TỔNG QUAN 1.1 MÁU VÀ CÁC THÀNH PHẦN CỦA MÁU 1.1.1 Máu Máu dịch lỏng màu đỏ, lƣu thông hệ thống tuần hoàn đƣợc tạo thành từ 10 quản sau lấy xuất suy giảm dần chức tế bào thành phần protein huyết tƣơng, yếu tố đông máu giảm Do để sản xuất chế phẩm máu có chất lƣợng, máu toàn phần phải đƣợc điều chế vòng sau sau lấy từ ngƣời hiến máu vào hệ thống túi dẻo [1, 6, 29] Máu toàn phần đƣợc bảo quản nhiệt độ từ 2- 60C, hạn sử dụng máu toàn phần phụ thuộc vào dung dịch bảo quản Nếu dung dịch bảo quản CPD - A1 (citratephosphate-dextrose-adenine) thời gian bảo quản đƣợc 35 ngày [27] Truyền máu toàn phần truyền thành phần tế bào huyết tƣơng, thích hợp cho việc bù đắp lại việc lƣợng lớn hồng cầu thể tích máu nhƣ chảy máu với số lƣợng lớn [22]  Truyền máu phần tách thành phần máu để truyền bao gồm khối hồng cầu, khối tiểu cầu, khối bạch cầu, huyết tƣơng tƣơi,  Truyền chế phẩm có nguồn gốc từ huyết tƣơng bao gồm: yếu tố VIII, yếu tố IX, albumin, γ-globulin,… 1.3 Tình hình điều chế thành phần máu Việt Nam Viện Huyết học - Truyền máu TW Viện chuyên khoa đầu ngành lĩnh vực huyết học, truyền máu nên nhận đƣợc đầu tƣ ngƣời nhƣ thiết bị máy móc, đó, hoạt động từ tiếp nhận máu đến điều chế thành phần máu tăng lên đáng kể từ năm 2005 - năm đầu sau tách thành Viện độc lập trực thuộc Bộ Y tế Sau 10 năm, số lƣợng máu toàn phần tiếp nhận tăng gấp lần số lƣợng chế phẩm máu đƣợc điều chế tăng gấp 10 lần so với năm 2004 Số lƣợng máu tiếp nhận tăng trung bình hàng năm từ 10 đến 15% theo số lƣợng [7] 14 440596 450000 400000 383796 Tổng CPM (đv) MTP tiếp nhận (đv) 324838 296409 350000 300000 257321 250000 251,632 216254 210,849 179,161 179045 200000 160729 157,925 144251 138,132 150000 121193.5 115,289 95,812 89286 88,732 78,214 100000 65,015 52,544 44791 36,541 50000 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 2015 Hình 1.2 Tổng số lượng máu toàn phần tiếp nhận chế phẩm máu điều chế từ năm 2004 - 2015 Nguồn: Viện Huyết học - Truyền máu Trung ương (2015) 2.00 1.86 1.90 1.84 1.87 1.88 1.86 1.88 1.81 1.81 1.80 1.82 1.81 1.75 1.70 1.70 1.60 1.50 1.40 1.30 1.23 1.20 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 2015 Trung bình Hình 1.3 Tỷ lệ số đơn vị chế phẩm máu điều chế từ đơn vị máu toàn phần tiếp nhận từ năm 2004 - 2015 Tỷ lệ chế phẩm máu từ đơn vị máu toàn phần 10 năm trung bình đạt 15 1,81 (hình 1.3.) Từ đơn vị máu toàn phần ban đầu điều chế đƣợc trung bình 1,8 đơn vị chế phẩm máu Tại Việt Nam năm 2015, 78,2% máu toàn phần đƣợc điều chế thành chế phẩm máu Ở quốc gia phát triển, tỷ lệ chiếm 96% [20] Theo khuyến cáo Tổ chức Y tế giới (WHO), lƣợng máu tiếp nhận đạt tối thiểu 2% dân số để đáp ứng nhu cầu máu quốc gia [2] Hiện tại, theo thống kê Ban đạo Quốc gia vận động hiến máu tình nguyện năm 2015, tỷ lệ hiến máu toàn quốc chiếm 1,26% dân số, tỷ lệ đơn vị máu toàn phần tiếp nhận năm 2015 (1.101.781 đơn vị) tăng 18,4% so với năm 2014 (930.869 đơn vị) [3] 1.4 Cấu trúc chức tiểu cầu Tiểu cầu tế bào máu có vai trò quan trọng bậc trình cầm máu đông máu Tiểu cầu mảnh tế bào nhỏ, không nhân, đƣợc sinh từ tủy xƣơng [18] Bình thƣờng có khoảng 2/3 số lƣợng tiểu cầu lƣu hành máu ngoại vi, tƣơng đƣơng 150 - 500 x 109/l; khoảng 1/3 đƣợc tích tụ lách Đời sống tiểu cầu khoảng - 10 ngày [5] 1.4.1 Cấu trúc tiểu cầu Dƣới kính hiển vi điện tử, tiểu cầu tế bào hình đĩa không nhân, kích thƣớc từ 3-8 μm, cấu trúc bao gồm: Màng tiểu cầu, hệ thống vi ống, vi sợi, hạt đặc hệ thống kênh mở, bề mặt tiểu cầu xù xì, bề mặt xuất nụ sùi kéo dài khoảng 14-20 nm, ngƣời ta cho nụ sùi đƣợc tạo glycoprotein, glycolipid, mucosposaccharide protein huyết tƣơng đƣợc hấp thụ, số hình cƣa bề mặt tiểu cầu Các hình cƣa đƣợc xem phần cửa hệ thống kênh mở (hình 1.4 1.5) [11] 16 Bề mặt ống kết nối Kênh mở Glycogen Ty thể Hạt α Hệ thống vi ống Hạt đặc Màng tiểu cầu Hệ thống ống Lớp áo đặc Hình 1.4 Cấu trúc tiểu cầu kính hiển vi điện tử [15] Hình 1.5 Mô ảnh chụp tiểu cầu bình thường trạng thái hoạt động KHV điện tử [15] 1.4.2 Chức tiểu cầu Chức tiểu cầu tham gia trình cầm máu, đông máu nhằm bảo vệ thể khỏi máu thành mạch bị tổn thƣơng Khi tế bào nội mô bị tổn thƣơng tức khắc tiểu cầu dính vào thành mạch, giải phóng thành phần hạt kích thích tiểu cầu khác dính vào gây ngƣng tập, tiểu cầu tạo 17 thành nút tiểu cầu, sau tạo thành khối nơi thành mạch bị tổn thƣơng [13] 1.4.2.1 Chức dính Bình thƣờng tiểu cầu không dính vào nội mô mạch máu nguyên vẹn tế bào nội mô sản xuất prostaglandin I2 yếu tố ức chế chức tiểu cầu, nhƣng vài giây sau thành mạch bị tổn thƣơng tiểu cầu đƣợc tập trung đến dính vào nơi bị tổn thƣơng [13, 18] Thành phần tham gia tƣợng dính bao gồm:  Collagen: Chất quan trọng để tiểu cầu bám dính, kích thích tiểu cầu ngƣng tập – collagen tồn vùng gian bào thành mạch, thành mạch tổn thƣơng lớp collagen bị bộc lộ  Glycoptotein Ib: protein xuyên màng, protein có vị trí gắn với yếu tố von Willebrand, giúp cho hoạt động chức dính  Glycoptotein IIb/IIIa: phức hợp protein màng phụ thuộc chặt chẽ ion calci, giúp liên kết tiểu cầu qua cầu nối fibrinogen  Von Willebrand: Gắn tiểu cầu qua glycoptotein Ib nhƣ cầu nối tiểu cầu với lớp nội mô bị tổn thƣơng  Các yếu tố khác bao gồm: Fibronectin, thrombospodin, Ca++ 1.4.2.2 Chức ngưng tập Tiểu cầu có khả dính kết lẫn tạo nên cụm tiểu cầu gọi tƣợng ngƣng tập tiểu cầu [18] Sau dính vào lớp dƣới nội mô tiểu cầu thay đổi hình dạng từ hình đĩa sang hình cầu gai hoạt hóa phức hợp glycoptotein IIb/IIIa, phức hợp hoạt động nhƣ thụ thể (receptor) gắn với thụ thể tiểu cầu khác nhƣ cầu nối làm tiểu cầu ngƣng tập lại với tiết ADP, tổng hợp thromboxan A2, hai hoạt động ngƣng tập chế tiết tác động qua lại liên tục tạo nút tiểu cầu khởi động hệ thống đông máu nội sinh [18] 18 Khi tiểu cầu bị kích thích hoạt hóa phospholipase tiểu cầu, enzyme tác động giải phóng acid arachidonic từ màng tiểu cầu Dƣới xúc tác enzyme cyclooxygenase (đƣợc chứa tiểu cầu tế bào nội mạc) từ acid arachidonic cho prostacyclin thromboxan nhờ chất xúc tác prostacyclin synthetase (của tế bào nội mạc) thromboxane sythetase (của tiểu cầu) loạt chất quan trọng chức ngƣng tập tiểu cầu, thành mạch tổn thƣơng tiểu cầu tự hệ tuần hoàn dính vào lớp dƣới thành mạch sau tiết ADP ngƣng tập lại nơi thành mạch bị tổn thƣơng, tiếp đến trình đông máu nội sinh [13, 14, 18] 1.4.2.3 Chức chế tiết Với có mặt collagen thrombin hoạt hóa dẫn đến việc tăng chế tiết hạt tiểu cầu bao gồm ADP, serotonin, fibrinogen, men lysosome, βthromboglobulin, heparin, collagen thrombin hoạt hóa trình tổng hợp prostaglandin tiểu cầu Các chất không làm tăng hoạt hóa tiểu cầu mà có tác dụng tăng tính thấm thành mạch, hoạt hóa protein C, tạo thromboxane A2 prostacyclin Từ chuỗi phản ứng gồm tăng tính thấm thành mạch, giảm Ca++, ức chế ngƣng tập tiểu cầu xảy [13, 14] 1.4.2.4 Khả hấp thụ vận chuyển chất Tiểu cầu có khả hấp thụ chất huyết tƣơng tế bào mô nhƣ serotonin, adrenalin, yếu tố đông máu huyết tƣơng…, nhờ chất cần thiết cho trình đông cầm máu đƣợc vận chuyển đến nơi cần thiết để thực nhiệm vụ [13] 19 1.5 Sinh hóa tiểu cầu Tiểu cầu mảnh nhỏ không nhân mẫu tiểu cầu nên tổng hợp protein tổng hợp tiểu cầu Khi tiểu cầu không hoạt động ly giải đƣờng phosphoryl hóa hai trình chuyển hóa Khi tiểu cầu bị hoạt hóa hai trình chuyển hóa tăng lên rõ rệt, dịch chuyển ion canxi, phosphoryl hóa protein giải phóng arachide xảy [13, 18] 1.5.1 Các trình chuyển hóa tiểu cầu không hoạt hóa Khi không hoạt động: tiểu cầu sử dụng lƣợng lấy từ ATP ATP có đƣợc từ thoái giáng glycose, acid béo, acid amin từ huyết tƣơng từ glycogen tiểu cầu 1.5.1.1 Chuyển hóa carbohydrate tiểu cầu Con đƣờng chuyển hóa tiểu cầu để tạo lƣợng phân giải glucose glycogen, trình phụ thuộc vào nồng độ glucose ngoại bào oxy Tiểu cầu môi trƣờng bảo quản đƣờng đầy đủ khí O2 (hiệu ứng Crabtree) Ngƣợc lại, diện glucose môi trƣờng yếm khí ức chế tạo ATP ty thể làm tăng tạo thành lactat (hiệu ứng Pasteur) Nhờ hai hiệu ứng mà tiểu cầu giữ đƣợc ATP mức định Trong môi trƣờng glucose chuyển hóa glycogen tiểu cầu đáp ứng đƣợc nhu cầu ATP Khi glucose giảm xuống, chuyển hóa yếm khí glycogen không đủ, ATP giảm xuống Sự phân giải glucose môi trƣờng khí tạo pyruvat, chất bị oxy hóa thành CO2 H2O ty thể tiểu cầu Sự phân giải đƣờng yếm khí trình chuyển hóa glucose phosphat thành lactate, có hai đƣờng hình thành glucose phosphat Một phosphoryl hóa glucose đƣợc vận chuyển qua màng tế bào hexokinase, hai chuyển hóa từ glucose phosphat sản phẩm phân giải từ glycogen, glucose phosphat 20 đƣợc chuyển hóa đƣờng hexose-monophosphate, trình tạo CO2 NADPH, chất đƣợc dùng để tổng hợp acid béo 1.5.1.2 Chuyển hóa lipid tiểu cầu Phospholipid đƣợc tạo thành nhờ kết hợp acid béo 1.5.2 Các trình chuyển hóa tiểu cầu hoạt hóa Khởi đầu gắn kết chất đồng tác (agonist) tiểu cầu đáp ứng với kích thích từ bên Các chất đồng tác hòa tan hay không hòa tan nhƣ collagen Tiểu cầu tổng hợp chất dẫn truyền tín hiệu có chất lipid màng tiểu cầu sau gắn kết chất đồng tác Chức tiểu cầu thay đổi tác động trực tiếp gắn gián tiếp chất dẫn truyền tín hiệu [11] Các thụ thể dành cho chất đồng tác tiểu cầu gắn chặt với glycoprotein, thụ thể biến đổi cấu trúc để đáp ứng với gắn chất agonist khác Khi tiểu cầu bị hoạt hóa, trình chuyển hóa tăng nhiều lần Chuyển hóa ATP tăng từ 3,6 trạng thái nghỉ lên 14,4 ATP phút cho 1011 TC Đồng thời dịch chuyển ion, đặt biệt ion calci từ ngoại bào từ hạt đậm làm cho nồng độ calci bào tƣơng tiểu cầu tăng gây tƣợng hoạt hóa enzyme phụ thuộc calci nhƣ myosin light chain kinase, calpain I hay calpain II, enzym đóng vai trò quan trọng biến đổi hình dạng tiểu cầu bị hoạt hóa Ion Kali đóng vai trò quan trọng việc đảm bảo tính toàn vẹn tiểu cầu, bơm lƣợng nhƣ Na+ K+-ATPase, bơm Ca++ 1.6 Các loại khối tiểu cầu phương pháp sản xuất khối tiểu cầu 1.6.1 Khối tiểu cầu sản xuất từ máu toàn phần Có hai phƣơng pháp sản xuất khối tiểu cầu từ máu toàn phần: 1.6.1.1 Tách từ huyết tương giàu tiểu cầu Ly tâm túi máu toàn phần với lực ly tâm nhẹ, cho đảm bảo có số lƣợng tiểu cầu nhiều huyết tƣơng (huyết tƣơng giàu tiểu cầu) lớp cùng, bạch cầu lớp hồng cầu lắng xuống dƣới 21 Đặt túi máu toàn phần sau ly tâm vào bàn ép máu để tách huyết tƣơng giàu tiểu cầu Ly tâm huyết tƣơng giàu tiểu cầu với tốc độ cao cho huyết tƣơng tất tiểu cầu đƣợc lắng xuống đáy túi Tách phần huyết tƣơng đến khoảng 50 - 60 ml huyết tƣơng túi với phần tiểu cầu lắng đáy túi Để yên khoảng đồng hồ nhiệt độ phòng đƣợc đƣa tiểu cầu bảo quản máy lắc Cứ túi máu toàn phần thể tích 350 ml tách đƣợc khối tiểu cầu gồm từ 45 × 109 đến 85 × 109 tiểu cầu đƣợc treo 50 - 60 ml huyết tƣơng, số lƣợng bạch cầu tối đa cho phép 0,2 x 109[1, 27] 1.6.1.2 Phương pháp tách tiểu cầu từ buffy coat (tách từ lớp bạch - tiểu cầu) Ly tâm túi máu toàn phần với lực ly tâm mạnh, cho túi máu phân thành lớp, huyết tƣơng, lớp buffy coat (lớp chứa bạch - tiểu cầu), lớp cuối hồng cầu Tách lớp huyết tƣơng trƣớc sau tách lớp buffy coat Ly tâm nhẹ túi chứa Buffy coat cho toàn tiểu cầu nằm treo huyết tƣơng lớp lúc tách đƣợc khối tiểu cầu [1, 27] Cứ túi máu toàn phần thể tích 350 ml tách đƣợc khối tiểu cầu gồm từ 45 x 109 đến 85 x 109 tiểu cầu đƣợc treo 50 - 60 ml huyết tƣơng, số lƣợng bạch cầu tối đa cho phép 0,05 x109 bạch cầu [1, 27] Nhƣ vậy, từ hai phƣơng pháp điều chế khối tiểu cầu trên, số lƣợng tiểu cầu thu đƣợc ít, chƣa đủ cho lần truyền, cần phải pool (dồn) TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt 22 Bộ Y tế (2013), Thông tư 26/2013 việc hướng dẫn hoạt động Truyền máu, tr 17 - 27 Bộ Y tế (2011), “Máu sản phẩm máu an toàn”, 1, Cho máu an toàn, NXB Lao động, Hà Nội, tr.30 - 32 Ban Chỉ đạo quốc gia vận động hiến máu tình nguyện (2015), “Báo cáo kết công tác vận động hiến máu tình nguyện toàn quốc năm 2015 phương hướng, nhiệm vụ năm 2016”, Hà Nội Nguyễn Thị Thu Hằng (2005), “Đánh giá độ ổn định thành phần hóa học vaccin viêm gan B vaccin viêm não Nhật Bản sản xuất công ty vaccin sinh phẩm số 1”, Luận văn thạc sỹ dƣợc học, Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội Trƣơng Công Duẩn (2002), “Một số xét nghiệm hình thái tế bào máu tế bào sinh máu”, Nâng cao kỹ bác sỹ xét nghiệm huyết học truyền máu, 2002, tr26 Phạm Tuấn Dƣơng (2014), “Nghiên cứu nồng độ yếu tố VIII số chế phẩm huyết tương Viện Huyết học - Truyền máu TW giai đoạn 2012 - 2013”, luận án bác sĩ chuyên khoa II, Đại học Y Hà Nội, tr.36 Phạm Tuấn Dƣơng, Võ Thị Diễm Hà, Đỗ Thị Hiền cộng (2014),“Tình hình điều chế chế phẩm máu Viện Huyết học - Truyền máu Trung Ƣơng 10 năm (2003 - 2013)”, Tạp chí Y học Việt Nam, tập 423, tr.56 - 63 Bùi Minh Đức cộng (2008), “Nghiên cứu chất lƣợng hiệu truyền khối tiểu cầu sản xuất máy Haemonetics điều trị bệnh nhân giảm tiểu cầu nặng”, Tạp chí Y học Việt Nam, tập 373, tr 512 - 517 Nguyễn Thị Hồng cộng (2007), “Tình hình sử dụng phản ứng truyền khối tiểu cầu Bệnh viện Bạch Mai năm 2007”, Tạp chí Y học Việt Nam, tập 344, tr 525 - 529 10 Lê Thị Thanh Mai (2006), Nghiên cứu thay đổi số số huyết học, hóa sinh khối tiểu cầu bảo quản 40C 220C Viện Huyết học - Truyền máu TW, Luận văn thạc sỹ y học, trƣờng Đại học Y Khoa Hà Nội 23 11 Hà Hữu Nguyện (2014), “Nghiên cứu kết gạn tách tiểu cầu từ người cho loại máy tách thành phần máu tự động”, Luận văn thạc sỹ y học, trƣờng Đại học Y Khoa Hà Nội 12 Nguyễn Thi ̣Minh Nguyê ̣t c ộng (2015), “Nghiên cƣ́u các phản ƣ́ng sớm truyề n khố i tiể u cầ u bê ̣nh nhân khoa H Viê ̣n Huyế t ho ̣c - Truyề n máu TW năm 2014”, Kỷ yếu hội nghị khoa học điều dưỡng - kỹ thuật viên lần thứ nhấ t năm 2015, tr 23-30 13 Nguyễn Thị Nữ (2005), Cấu trúc, chức tiểu cầu, Chuyên đề nghiên cứu sinh, tr - 11 14 Đỗ Trung Phấn (2006), Bài giảng huyết học - Truyền máu, NXB Y học, tr.287 395 15 Đỗ Trung Phấn (2012), Truyền máu đại cập nhật ứng dụng điều trị bệnh, NXB Giáo dục Việt Nam tr.428 - 434, 532 - 536 16 Đỗ Trung Phấn (2013), Kỹ thuật xét nghiệm huyết học truyền máu, NXB Y học, tr.300 - 301 17 Nguyễn Trƣờng Sơn (2000), Nghiên cứu hiệu suất tách tiểu cầu biến đổi tế bào, hóa sinh trình sản xuất bảo quản khối tiểu cầu ứng dụng lâm sàng, Luận án tiến sỹ y học, Trƣờng Đại học Y Hà Nội, tr.10 - 30 18 Nguyễn Anh Trí (2002), Tiểu cầu, Đông máu ứng dụng lâm sàng, Nhà xuất Y học, tr 19 Đỗ Mạnh Tuấn (2002), “Nghiên cứu chất lượng hiệu sử dụng khối tiểu cầu sản xuất máy tách tế bào tự động Cobe - Spectra Viện Huyết học - Truyền máu”, Luận văn tốt nghiệp bác sĩ chuyên khoa II, Đại học Y Hà Nội 20 Viện Huyết học - Truyền máu TW (2015), Tài liệu hội nghị giao ban Tổng kết hoạt động Truyền máu năm 2015 kế hoạch năm 2016, Hà Nội 21 Phạm Quang Vinh cộng (2012), “Nghiên cứu phản ứng truyền tiểu cầu bệnh nhân bệnh máu Bệnh viện Bạch Mai năm 2011-2012”, Tạp chí Y học Việt Nam, tập 396, tr 437 - 440 24 Tài liệu tiếng Anh 22 AABB (2013), Standards for Blood Banks and transfusion services, Technical Manual, 18th, pp 31 - 57, pp 815 - 817 23 Andreu G, Morel C (2008), “Bacterial contamination of blood products”, Vox Sanguinis, 95 (suppl.1), - 73 24 Ashish Gupta (2011), "In vitro function of random donor platelets stored for days in composol platelet additive solution", Asian Journal Transfusion, 5(2), pp.160-163 25 Bayraktaroglu.Z (2007), "Platelet storage time and cytokine (IL-2R, IL-8, TNF-α) levels", Eastern Mediterranean Health Journal, Vol.13, No.1, pp.7984 26 Cherie Mastronardi, Peter Schubert, Elena Levin et al (2013), “Process improvement by eliminating mixing of whole blood units after an overnight hold prior to component production using the buffy coat method”, Journal of blood transfusion, vol.2013, article ID 154838.[PubMed] 27 Council of Europe Publishing (2012), Guide to the preparation, use and quality assurance of blood components, Eddition 16th, pp 119-120, pp 274 282 28 E.A Fadeyi, S.Adams, S.Sheldon et al (2008), "A preliminary comparison of the prevalence of transfusion reactions in recipients of platelet components from donors with and without human leucocyte antigen antibodies", Vox Sanguinis, Volume 94, pp.324 - 328 29 E.Brodhemin (2010), “The role of automatic identification methods and techniques in blood transfusion”, Automation in blood transfusion, Kluwer Academic Publishers, USA, pp.9-19 30 Elena Levin, Brankica Culibrk, Maria I C Gyongyossy-Issa et al (2008), “Implementation of buffy coat platelet component production: comparison to platelet-rich plasma platelet production”, Transfusion, Vol 48, pp.2331-2337 25 31 Gulliksson H (2003), "Defining the optimal storage condition for the longterm storage of platelets", Transfusion medicine, 17, pp.15 32 Hubert Schrezenmeler, Markus M.Muller, Walid Sireis, Markus Wrsneth, Erhard Seifried (2008), “Production, quality control and clinical use of platelet concentrates”, ISBT, pp.38 - 46 33 I.J Bontekoe, P.F van der Meer, G Mast, D.de Korte (2014), "Separation of centrifuged whole blood and pooled buffy coats using the new CompoMat G5: years experience", Vox Sangunis, 107, pp.140-147 34 Lars Eriksson and Claes F Hogman (1990), “Platelet concentrates in an additive solution prepared from pooled buffy coats”, Vox Sanguinis, Volume 59, pp.140 - 145 35 Margriet J Dijkstra - Tiekstra, Willeke Kuiper, Airies C.Setroikromo, and Janny de Wildt-Eggen (2008), “Platelet capacity of various platelet pooling systems for buffy coat - derived platelet concentrates”, Transfusion, Vol.48, pp 2114 - 2121 36 Margriet J Dijkstra - Tiekstra, Willeke Kuiper, Airies C.Setroikromo, and Janny de Wildt-Eggen (2008), “Overnight or fresh buffy coat - derived platelet concentrates prepared with various platelet pooling systems”, Transfusion, vol.48, pp 723 - 730 37 Mathai J, Resmi KR (2006), "Suitability of measurement of swirling as a marker of platelet shape change in concentrates stored for transfusion", Division of Blood transfusion services 38 Monge Ruiz J, Petez Vaquero MA, Azkarate Ania MN, Vesga Carasa MA, Santos Cabrera S, Renovales Garcia A, Ibarra Fontan A and Cardenas Diaz de Espada JM (2013), "Quality of blood components using the ReVeos automated blood processing system", Vox Sangunis, 105, pp.11-12 39 Nadhreen Tynngard, Tomas L.Lindahl, Marie Trinks, Monika Studer and Gosta Berlin (2008), “The quality of platelet concentrates produced by COBE 26 Spectra and Trima Accel during storage for days as assessed by in vitro methods”, Transfusion, (48), 4, pp 715 - 722 40 P.F Van der Meer, R.N.I Pietersz and H.W.Reesink (2001), “Comparison of two platelet additive solutions”, Transfusion Medicine, 11, pp 193 - 197 41 P F van der Meer, R.N I Pietesz and H W Reesink (1999), "Comparison of leukoreducing filters for platelet concentrates", Transfusion, 39, pp.17 42 Sandgren P and KhariJa Saeed (2011), “Storage of buffycoat-derived platelets in additive solution: in vitro effects on platelets of the air bubbles and foam included in the final unit”, Blood Transfusion, Vol (2), pp.182 - 188 43 Shoichi Inaba (1997), “The evaluation of a leukocyte removal filter for platelet transfusion”, Clinical Report, 31 (5), pp 1931 - 1936 44 Tor Hervig, MD, and Torunn Oveland Apelseth, MD (2013), “In-Vivo Evaluation of Platelet Transfusion Efficacy”, Platelet Transfusion Therapy, pp 471 - 473 45 Tulika Chandra, Ashish Gupta, Ashutosh Kuma, Sheeba Afreen (2011), “Morphological and functional changes in random donor platelets stored for days in platelet additive solution” IJBTI – International Journal of Blood Transfusion and Immunohematology, Vol.1, 2011.ISSN - [2230 - 9020], pp.22 23 46 Z.Bayraktarogglu, N.Yilmaz, H.K.Cicek et al (2007), “Platelet storage time and cytokine (IL-2R, IL-8, TNF - α) levels”, Eastern Mediterranean Health Journal, Vol.13 (1), pp 79-83 27 28 ... tiểu cầu pool lọc bạch cầu việc đánh giá chất lƣợng theo dõi điều trị cần thực thƣờng xuyên Vì thực đề tài nghiên cứu Đánh giá số hóa sinh khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu ứng dụng điều trị với... dụng điều trị với mục tiêu nhƣ sau: Đánh giá số hóa sinh khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu Đánh giá bước đầu kết sử dụng khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu để điều trị bệnh Viện Huyết học - Truyền máu... LUẬNError! Bookmark not defined 3.1 Đánh giá số hóa sinh khối tiểu cầu pool lọc bạch cầu Error! Bookmark not defined 3.2 Đánh giá số số huyết học, sinh hóa KTC pool lọc bạch cầu trình bảo quản Error!