Đánh giá chất lượng ký thuật vi thể trên tiêu bản nhuộm HEMA TOXYLIN – EOSIN ở một số cơ sở giải phẫu bệnh trên địa bàn Hà Nội

39 545 0
Đánh giá chất lượng ký thuật vi thể trên tiêu bản nhuộm HEMA TOXYLIN – EOSIN ở một số cơ sở giải phẫu bệnh trên địa bàn Hà Nội

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

T VN Cho ti chn oỏn mụ bnh hc c coi l tiờu chun vng vic xỏc nh bnh Trong khong hai thp niờn tr li õy, vi s phỏt trin nhanh ca khoa hc cụng ngh lnh vc thm dũ chn oỏn nh ni soi, siờu õm, chp ct lp vi tớnh, chp cng hng t, nuụi cy t bo, bo qun v ghộp mụó to iu kin cho sinh thit chn oỏn mụ bnh hc phỏt trin c v s lng ln quy mụ Trong ú, b ba chn oỏn gm siờu õm ni soi sinh thit ó tr thnh mi nhn quan trng S phỏt trin ny ó ngy cng khng nh v th ca lnh vc chn oỏn mụ bnh hc, gúp phn chn oỏn sm nhiu tn thng v nú rt hu ớch cho chn oỏn v iu tr cng nh phũng bnh Mt xột nghim mụ bnh hc thng c tin hnh theo mt chui k thut liờn hon bao gm: 1).Ly bnh phm, ct lc; 2).C nh bnh phm; 3).Gi xột nghim; 4).Vựi bnh phm; 5).Ct mnh v dỏn; 6).Nhum; 7).c kt qu Mi khõu u cú nhng yờu cu riờng v liờn quan rt mt thit vi nhau, nh hng trc tip n kt qu chn oỏn mụ bnh hc Trong cỏc khõu k trờn thỡ khõu u v cui c thc hin bi cỏc bỏc s chuyờn khoa, cỏc khõu cũn li u c thc hin bi cỏc k thut viờn gii phu bnh lm vic labo Tựy theo mc ớch v yờu cu ca xột nghim m vic x lý k thut tng khõu cú nhng im khỏc v cú nhng quy trỡnh riờng K thut nhum Hematoxylin Eosin (HE) l k thut ph bin nht cỏc k thut mụ hc cng nh mụ bnh hc, vỡ hu ht cỏc chn oỏn mụ bnh hc u ch cn v (hoc) phi da vo k thut ny Vỡ vy nú c gi l k thut thng quy cho mi loi xột nghim mụ bnh hc labo gii phu bnh Hin nay, xột nghim mụ bnh hc cỏc c s y t trung ng trung bỡnh cú ti gn 50% trng hp sai sút cỏc loi cỏc khõu k thut v lm gim cht lng chn oỏn, ú khong 10% xột nghim õm tớnh hoc chn oỏn sai vỡ lý k thut (3) Xut phỏt t tớnh thc tin ca k thut nhum HE nhm m bo cht lng chn oỏn mụ bnh hc, l mt sinh viờn sp tt nghip, mt C nhõn K thut Y hc tng lai nờn qua bi khúa lun ny em mong mun rng: Thc hin thnh tho mt chui k thut liờn hon t bnh phm nhng tiờu bn nhum H - E Bc u ỏnh giỏ cht lng vi th v mt s yu t nh hng n tiờu bn nhum H - E Chng TNG QUAN TI LIU 1.1 i cng v xột nghim gii phu bnh vi th: L mt b phn quan trng ca khoa hc tn thng, xột nghim gii phu bnh vi th cú mc ớch phỏt hin v nghiờn cu nhng tớnh cht, c im ca tn thng thuc phm vi t chc v t bo mt chng mc nht nh, nú cho phộp tỡm hiu nhng nguyờn nhõn gõy nhng tn thng y, gúp phn gii thớch c ch sinh bnh cng nh nhng quy lut phỏt sinh v phỏt trin ca tn thng Trong bnh hc, õy l mt loi xột nghim cú tớnh chớnh xỏc cao v tin cy khỏ ln nu nh k thut tin hnh ỳng quy tc v ngi c cú nhng kinh nghim nht nh ó t lõu, xột nghim gii phu bnh vi th ó tr thnh ngi tr th c lc cho nh lõm sng hc v cng khụng th thiu c i vi nh nghiờn cu y hc Trờn thc t, i tng xột nghim gii phu bnh vi th rt phong phỳ, phm vi ỏp dng ngy cng c m rng, cỏc nc cng nh Vit Nam, c bit lnh vc phỏt hin bnh Ngy nay, hu nh mi chuyờn khoa lõm sng v phn ln nhng chuyờn khoa cn lõm sng u cú s dng nhng kt qu xột nghim gii phu bnh vi th vo cụng tỏc ging dy, nghiờn cu khoa hc hoc phc v bnh nhõn 1.2 Tng Quan v Hematoxylin Eosin Hematoxylin: l mt phm nhum t nhiờn, chit xut bng ete t lừi cõy Haematoxylon campechianum mc vựng nhit i Campeche Mexico Bn thõn Hematoxylin khụng cú c tớnh nhum, m nú phi tri qua quỏ trỡnh oxy húa bin thnh Hematein mi nhum c: ú l hin tng Hematoxylin ó chớn S oxy húa ny xy dung dch nhum t ngy n tun m di ỏnh sỏng mt tri hoc bng cỏc tỏc nhõn gõy oxy húa nh: iodat sodium, permanganat, potassium, oxytmereua Trong quỏ trỡnh chớn Hematoxylin (C16H14O6) mt nguyờn t H tr thnh Hematein (C16H12O6) cú s sp xp kiu quinoit vũng di õy: Hình 1.Công thức Hình 2.Công thức Hematin Hematoxylin S oxy húa liờn tc ca Hematein s cú hỡnh thnh mt hp cht khụng mu, chớnh vỡ vy m mt s ngi cho rng quỏ trỡnh oxy húa chm mt cỏch t nhiờn tt hn l s oxy húa bng cht húa hc Phn ng cht húa hc s gõy nờn s oxy húa Hematein tc khc v quỏ trỡnh oxy húa c tip tc nờn hỡnh thnh mt hp cht khụng mu, lm cho dung dch nhum khụng lõu bn Hematein bn thõn ớt a cỏc t chc, vỡ vy nờn phi dựng mt cht gn mu thng l aluminium di th alun (alun ammoniac, potassium hay st): cht sn c hỡnh thnh cú tớch in dng mnh v nh vy ging nh nhng phm nhum baz mnh nờn c nh trờn cỏc acid nucleic, c bit acid nucleic ca nhõn Cỏc s khỏc v c tớnh nhum ph thuc vo cỏch pha ch dung dch Hematoxylin v thnh phn gn mu Bng di õy nờu lờn ỏi tớnh ca Hematoxylin tựy theo cht gn mu: Thnh phn Cht gn mu (Kim loi) Nhõn V myelin Si chun Dõy keo Aluminium, st, tungsten Chromium, ng, st St, It Molybden Si thn kinh m, si biu mụ Trc thn kinh Mucin T huyt Mitochondri Tungsten Chỡ Aluminium Tungsten St Eosin: Thuc nhum hay dựng nhum bo tng l Eosin Nú cú c tớnh d tan nc v cú mu hunh quang vng - xanh lỏ cõy nht [2], [3] Hỡnh Cụng thc ca Eosin Vi ngun gc v c tớnh c bit nh vy nờn k thut nhum Hematoxylin c tin hnh nh sau: 1.3 K thut c nh, pha, vựi bnh phm, ỳc bloc, ct v dỏn mnh, nhum tiờu bn H&E: 1.3.1 K thut c nh C nh l lm bt ng nhng cu trỳc ca t chc cng nh ca t bo nhng tn ti ti mc ti a hỡnh thỏi ca chỳng Núi khỏc i, c nh mt t chc l git cht nhng thnh phn ca t chc ú nhng bo qun chỳng mt tỡnh trng gn vi lỳc sng nht Tr mt s trng hp cn nhum ti hay cn nghiờn cu v men, nuụi cy t bo thỡ núi chung, mi bnh phm cn c nh sau ly c th Nu nh ta c nh bnh phm khụng tt thỡ s lm gim cht lng xột nghim cũn c nh hng thỡ khụng th sa cha c Bnh phm sau ly c th s gõy thoỏi húa, hoi t gi to nhn nh, cỏc t bo s b tiờu hy bi men ni bo, hỡnh thỏi ca chỳng tr nờn mộo mú v s sinh nhng hỡnh nh gi to gõy nhm ln chun oỏn Mt khỏc, vic c nh chm s gõy tiờu hy cỏc bo quan, khụng cú li cho cỏc nghiờn cu v men hc ng thi cng khụng m bo cho vic gn mu tt nhum Mt bnh phm c c nh tt phi m bo nhng nguyờn tc sau: Mi bnh phm phi c c nh sau ly Khụng c lm dp nỏt bnh phm Bnh phm khụng ct quỏ dy lng dung dch c nh cn thit Thi gian c nh dung dch thớch hp Khụng bnh phm dớnh vo thnh l Chỳ ý nhng trng hp c nh c bit: - Glycogen: c nh bng dung dch Grendre - M: c nh bng dung dch formol 10%, ct lnh v nhum Soudan Mt s dung dch c nh thụng dng: Dung dch formol m trung tớnh 10%: Formaldehyde 37% - 40% 100ml Nc ct .900ml Sodium phosphate monobasic (NaH2PO4) .4g Sodium phosphate dibasic anhydrous (NaH2PO4 khan) .6.5g Dung dch formol 10%: Formandehyde 37% - 40% 100ml Nc ct hai ln 900ml Dung dch c nh Bouin: Dung dch nc bóo hũa acid picic 75ml Formaldehyde 37% - 40% 20ml Acid acetic lnh, nguyờn cht 5ml Dung dch Grende: Cn 95% bóo hũa acid picric .80ml Formandehyde 37% - 40% 15ml Acid acetic lnh, nguyờn cht 5ml 1.3.2 Pha Khụng c lm gip nỏt bnh phm: pha khụng c dựng kp cú mu, li dao pha phi sc, mng v di, ct mt chiu khụng c ray i ray li trờn mt v trớ ca bnh phm v bnh phm pha phi c t trờn mt ming lie, g hoc plastic Cỏc mu bnh phm dựng k thut mụ hc thng c ct dy t - mm Vi bnh phm mm (nóo,) cú th c nh vi gi cho cng sau ú mi pha li Trong trng hp chuyn ỳc bng mỏy, bnh phm khụng c ct dy hn chiu cao ca lũng khuụn nha 1.3.3 Vựi bnh phm Cu trỳc t bo hoc mụ ch nhỡn thy c di kớnh hin vi chỳng c ct thnh nhng lỏt mng c micromet cho ỏnh sỏng i qua Khi ú ta mi quan sỏt c chi tit ca t bo, hỡnh dng hay cỏch sp xp ca chỳng C nh mi ch git cht t bo v gi cho cỏc thnh phn ca chỳng c bt ng trng thỏi tnh Nu em ct thnh cỏc lỏt ct mng, mi liờn quan gia cỏc t bo cng nh cu trỳc mụ b bin i, thm b o ln tỏc ng c hc Mun vy ngi ta phi to khuụn cho bnh phm, ngha l phi lm cho mt cht no ú ngm sõu vo t bo hoc mụ m ct khụng lm bin dng cu trỳc ca chỳng Cú nhiu cht c dựng cho phng phỏp ny nhng cht hay c dựng hn c l parafin Hin cú nhiu loi parafin vi cỏc im núng chy khỏc nhng loi thớch hp nht dựng k thut mụ hc l parafin cú nhit núng chy t 56 - 58oC Nu dựng nhit núng chy ca parafin cao hn bt buc ngi ta phi chnh nhit ca t parafin lờn na, hu qu lm cho bnh phm chớn, khú ct v bt mu ti Ngoi ra, parafin cũn c pha thờm mt s cht ph gia lm tng cht lng ca nú nh: histoplas, paraplas Song parafin khụng tan nc (bnh phm li cú nhiu nc) v cn nờn bnh phm phi c kh nc bng cn cú nng thp (80 o) n cao (cn tuyt i) ri kh cn bng xylen Tuy nhiờn, vi nhng mỏy chuyn bnh phm va lc, va ly tõm thỡ vic loi ht nc, cn v xylen bnh phm thng t kt qu tt bnh phm c chuyn qua t - ln parafin Vic tm parafin cho bnh phm cũn c t cỏc bỡnh hỳt chõn khụng (cú mỏy chuyn) cng lm cho parafin ngm vo bnh phm nhanh v tt hn Do cỏc c s gii phu bnh cha cú mỏy chuyn nờn chỳng tụi gii thiu c hai quy trỡnh vựi bnh phm bng tay v bng mỏy chuyn: 1.3.4 Quy trỡnh chuyn tay: p dng cho cỏc bnh phm cú chiu dy di mm Cn 90o - 15 phỳt Cn 95o - 15 phỳt Cn 100o I - 15 phỳt Cn 100o II - 15 phỳt Cn 100o III - 15 phỳt Xylen I - 15 phỳt Xylen II - 30 phỳt Xylen III - 30 phỳt Parafin I - 30 phỳt Parafin II - gi Parafin III - gi p dng cho bnh phm cú chiu dy t mm n di mm Cn 80o - gi Cn 90o - gi Cn 95o - gi Cn 100o I - gi Cn 100o II - gi Cn 100o III - gi Xylen I - gi Xylen II - gi Xylen III - 10 gi Parafin I - gi Parafin II - gi Parafin III - 10 gi 1.3.5 Quy trỡnh chuyn mỏy: p dng cho cỏc mnh sinh thit v cỏc mnh mụ nh Thi gian c nh ti thiu l gi 1) Ra nh nc chy 2) Cn 80o - 10 phỳt 3) Cn 95o x ln x 15 - 20 phỳt 4) Cn 100o x ln x 15 phỳt/ ln 5) Cn 100o/ xylen t l 1:1 - 15 phỳt 6) Xylen x ln x 15 phỳt/ ln 7) Parafin x ln x 15 ln/ phỳt 8) Parafin hỳt chõn khụng t 15 - 20 phỳt Nu khụng cú hỳt chõn khụng thỡ (7) tng thờm mi ln phỳt 9) ỳc bloc p dng cho cỏc mụ thụng thng 1) Cn 80o - gi 2) Cn 95o x ln x gi/ ln 3) Cn 100o x ln x gi/ ln 4) Xylen x ln x gi/ ln 5) Parafin x ln x gi/ ln 6) Parafin hỳt chõn khụng gi 7) ỳc bloc 1.3.6 ỳc bloc Bnh phm sau qua quỏ trỡnh ỳc bloc t yờu cu thỡ cú th gi vụ thi hn Mun ỳc bloc phi lm cho parafin xung quanh cng nh bờn bnh phm c li mt cỏch thun nht t c iu ny, ngi ta dựng nhng khuụn bng kim loi trao i nhit din nhanh chúng v nc lnh cú ỏ ỳc bnh phm phi thao tỏc cho nhit ca parafin v bnh phm khụng chờnh lch nhiu Nu parafin hay bnh phm ngui quỏ s to mt vin trng xung quanh bnh phm, bloc ngui hay ct bnh phm cú th bt bloc Trờn thc t ngi ta vo khuụn hay chn kim loi 10 Hỡnh 3.2.16.Tiờu bn nhum H E X 40; tiờu bn b xc, rỏch, gp, bong 25 Chơng Bàn luận 1.1 S liờn quan mt thit mt chui k thut liờn hon t vic ly bnh phm, pha bnh phm, c nh, chuyn, ỳc n ct mnh v nhum HE mt tiờu bn mụ bnh hc 1.1.1 Ly bnh phm Cỏc bnh phm lm xột nghim mụ bnh hc bao gm nhiu loi, t cỏc bnh phm ln nh bnh phm sau m, bnh phm t thit, bnh phm sinh thit bng phu thut hay tiu phu n cỏc bnh phm nh hn nh sinh thit bng kim sinh thit, cỏc sinh thit bm qua ni soiCỏc bnh phm ln thng c pha bi cỏc bỏc s gii phu bnh hc, s cũn li u c ly bi cỏc bỏc s thuc nhiu chuyờn khoa nh tiờu húa (sinh thit d dy, i trc trng, sinh thit gan); hụ hp (sinh thit phi chc kim xuyờn thnh ngc); sn ph (cht no t cung) Hai yờu cu c bn ca vic ly bnh phm l ly trỳng v ly tht khụng n gin + Ly trỳng l ly trỳng vựng tn thng iu ú cú ngha l trc tiờn phi xỏc nh rừ c vựng tn thng hoc ớt nht cng l nhng vựng cú bin i khỏc thng so vi vựng lnh + Ly l ly c bnh phm cho c s (hay tiờu chun) chn oỏn mụ bnh hc So vi vic ly trỳng thỡ yờu cu ny ũi hi ngi ly bnh phm phi cú s hiu bit rt rừ v mụ bnh hc Cựng mt loi bnh nhng tng vựng mụ, tng giai on bnh s cú nhng hỡnh nh khỏc v mụ bnh hc Hn na, mc dự mt u ỏc tớnh cú biu hin rừ trờn lõm sng nhng nu li sinh thit vo cựng hoi t thỡ mụ bnh hc khụng th kt lun c 26 + T hai yờu cu ca vic ly bnh phm l ly trỳng v ly , ngi ta ó quy nh rt rừ cho tng loi bnh phm phi ly nhng vựng no, ti thiu l bao nhiờu mnh Nu ly bnh phm khụng t yờu cu thỡ cỏc khõu cũn li ca xột nghim mụ bnh hc tr nờn vụ ớch, lóng phớ v nhng sai sút khõu ly bnh phm ụi l nhng sai sút khụng th sa cha c 1.1.2 C nh bờnh phm: Formol 10% l dung dch c nh c s dng rng rói v ph bin nht, dựng cho mi li xột nghim mụ bnh hc thụng thng bi vỡ chỳng cú c im c bn sau: + L mt cht kh oxy + Khụng kt ta Protein, nhng c nh hon ton cỏc gel gelatin bng cỏch lm cho chỳng khụng hũa tan + C nh cỏc lipid phc tp, ú cú c ty lp th v b Golgi + Khụng tỏc dng trc tip lờn trờn Glucid nhng bo qun c chỳng khụng lm tan cỏc thnh phn cu to cú Protid ca t bo + L cht c nh cú tc xuyờn thm khỏ nhanh + Khụng lm co (nhng lm co mnh chun b vựi nn) nhng lm cng mnh + Cu trỳc t bo c bo qun tt + Lm tng s kim tớnh ca cỏc cu trỳc nhum qua mnh ct vựi nn 1.1.3 Chuyn v ỳc bnh phm: + Mỏy chuyn bnh phm t ng c ci t chy theo chng trỡnh, t c nh, ty nc bng cn ri ty cn bng xylen v cui cựng l thay xylen bng parafin mi trm, mỏy u t ng o u ti ch v trc chuyn sang trm k tip sau u c ly tõm loi bt húa cht Do vy ó trỏnh c hin tng bnh phm b sng 27 + Mỏy ỳc nn hot ng theo nguyờn tc luụn gi c nhit ca khuụn ỳc, bnh phm v parafin núng chy sut quỏ trỡnh ỳc bnh phm (500C 600C) Khi chuyn khuụn ó ỳc sang modun lm lnh l vic ỳc nn hon tt S dng mỏy ny trỏnh c mt sai sút rt hay gp cỏch ỳc nn thụng thng l mt s liờn kt ng nht gia bnh phm v parafin ng thi rt thun li cho vic sp t bnh phm khuụn ỳc, c bit l cỏc bnh phm nh Mt khỏc, vic s dng caseette thay cho khuụn ỳc kim loi khụng nhng d thao tỏc, bo qun m cũn giỳp cho vic ct mnh rt thun li, c bit l vic ct phỏ to mt ct mnh m 1.1.4 Ct mnh v dỏn bnh phm: Trong quỏ trỡnh lm mt tiờu bn mụ bnh hc thỡ õy l mt khõu rt quan trng v khú, ũi hi ngi k thut viờn khụng nhng phi nm vng, lm ỳng cỏc quy trỡnh thao tỏc trờn mỏy, hiu rừ nguyờn lý hot ng ca mỏy m cũn phi rốn cho c tớnh cn thn, kiờn trỡ v nhn ni mi cú th cú c nhng mnh ct p, ỳng yờu cu k thut Trong nhiu trng hp, mc dự cỏc thao tỏc u lm ỳng theo quy trỡnh v yờu cu k thut nhng khụng cú c mnh ct t yờu cu nh ó lm giai on mt Loi tr cỏc sai sút k thut cỏc khõu khỏc nh c nh, chuyn ỳcthỡ lý chớnh l thao tỏc hnh mỏy Cỏc mỏy ct mnh u s dng mt vụ lng to a nn chuyn ng theo chiu thng ng t trờn xung di v mi mt chu k quay li tnh tin mt bc tng ng vi mc dy mng ó t trc v cú th thay i c Theo thit k, hu ht cỏc mỏy ct u cú chớnh xỏc cao, chng rung v phn ci tin ch yu l tng linh ng cho cỏc h iu chnh nh dao ct, b gỏ dao, h thng iu chnh ba chiu cho nghiờng ca dao, mõm c nh nnNh vy mc dự t mc ct mng nht nhng ch cn hnh tay quay thiu ng b (nhanh quỏ hoc chm quỏ hoc thiu dt khoỏt) 28 s to mt mnh ct dy v khụng u Mt khỏc, nghiờng ca li dao cng nh hng rt nhiu n kt qu ct mnh v nghiờng ny li khụng hng nh m thay i tựy theo loi mụ ct mm hay cng Do vy, vic hnh mỏy ct ũi hi tớnh kinh nghim rt cao Qua mi mt ln ct u phi rỳt kinh nghim v tỡm cỏch khc phc S tin b tng giai on (t giai on n giai on 3) nghiờn cu ca chỳng tụi ó phn no minh chng cho iu ú Dỏn mnh ct lờn tiờu bn, n gin nhng cng l mt khõu quan trng Dung dch dỏn tiờu bn thng dựng hin l dung dch Albumin Nu tiờu bn trờn bn h quỏ lõu, quỏ núng, thiu ng b tói mnh ct hoc cht lng dung dch dỏn khụng tt (khụng lc k hoc bo qun khụng tt) s nh hng rt nhiu n cht lng tiờu bn Dỏn mnh khụng t yờu cu k thut s dn ti bong mnh ct hoc to nhng tn thng gi, lm bn tiờu bn vv 1.1.5 Nhum tiờu bn Trong c ba giai on ct mnh u tin hnh mt mc ct ging nhng dy mng ca cỏc mnh ct rt khỏc Vi cựng mt quy trỡnh nhum nh nhau, cỏc tiờu bn dy thng rt m c Hematoxylin ( nhõn) v Eosin (bo tng) Cú l cỏc mnh ct dy thỡ cỏc yu t gn mu c gn vo mụ trờn mnh ct nhiu hn v chng chộo lờn ú chỳng cú mu m hn v khụng th cú s tng phn gia nhõn v bo tng c Mt khỏc, s bt mu cng rt khỏc cỏc mụ khỏc cng nh cỏc tn thng khỏc Mụ ung th thng cho mu nhõn m hn cỏc mụ khỏc 4.2 Mt s yu t chớnh ca K thut vi th liờn quan nh hng n tiờu bn nhum Hematoxylin v Eosin - C nh bnh phm khụng tt lm gim hn cht lng xột nghim v c nh hng l khụng th sa cha c 29 - Li v c nh bnh phm rt hay xy i vi cỏc trng hp Labo xột nghim gii phu bnh khụng trc tip thc hin Ch yu l phỏt húa cht cho cỏc khoa/phũng - ỳc bloc: cỏc li cú th xy nh: nhit parafin khụng m bo (Thay th bp in un parafin thay th trng hp khụng cú mỏy ỳc) lm parafin rt cng gõy nh hng rt nhiu n cu trỳc mụ v khú khn rt ln quỏ trỡnh ct v dỏn mnh gõy nh hng trc tip n cht lng tiờu bn - Quỏ trỡnh ỳc cú th gõy li bnh phm khụng ỳng mt phng, nm sõu blocs gõy ct thiu mụ, mt mụ - Mt s tiờu bn cú mnh ct dy, phm nhum bt mu rt m v khụng cú s tng phn rừ gia nhõn v bo tng Kt qu ny li mt ln na khng nh rng k thut ct mnh nh hng rt nhiu n quỏ trỡnh nhum - Mnh ct hay b xc cng gõy nh hng rt nhiu, iu ny rt hay xy cỏc v dao ct v k thut ct - Dỏn mnh: mt s tiờu bn mt s c s t l pha albumin quỏ cao, nhiu ty khụng ht, gõy bt mu lm xu tiờu bn nhum Dung dch dỏn mnh cng nh thao tỏc dỏn mnh l mt nguyờn nhõn gõy bong mnh ct cng nh to tn thng gi - Mt s yu t lm bn tiờu bn nh: vi khun, nm (do dung dch dỏn mnh bo qun khụng tt, khụng ngõm lam kớnh) - H quỏ lõu trờn bn h hoc mt s c s bn h quỏ núng cú th gõy gión cu trỳc mụ - S gp np mnh ct (mnh ct b nhn nhỳm) hoc b rỏch l thao tỏc tói mnh ct trờn bn h khụng t yờu cu (Vin Quõn i trung ng 108 tói trờn thit b chuyờn dng ng dung dch dỏn: nhanh & hiu qu hn so vi tói trc tip trờn lam kớnh) 30 - Quỏ trỡnh nhum tiờu bn l bc cú vai trũ quyt nh rt ln n cht lng tiờu bn, vic ct bt mt s khõu quy trỡnh nhum s gõy nh hng nhiu Mt s c s b qua bc ty nc cui cựng v dựng mỏy sy sy khụ s lm cho tiờu bn b ỏm Túm li: cú c mt tiờu bn mụ bnh hc l mt chui cỏc khõu k thut liờn hon m cỏc khõu ú u cú s liờn quan mt thit vi nhau, nh hng ti cht lng tiờu bn Trong cỏc khõu ú, bờn cnh vic tin hnh theo ỳng quy trỡnh k thut thỡ yu t ngi úng vai trũ ht sc quan trng v quyt nh n vic to mt tiờu bn p, hn ch ti a cỏc sai sút ch quan chn oỏn mụ bnh hc 31 Kết luận i vi em- mt sinh viờn chuyờn ngnh K thut Y hc sp trng ó nm vng v lý thuyt cỏc quy trỡnh k thut c bn - thc hin thnh tho mt chui k thut chuyn, ct, nhum t bnh phm nhng tiờu bn nhum H E thỡ em nhn thy rng k thut khú nht l ct mnh V thc hin c k thut vi th nhum H E t yờu cu k thut thỡ thi gian ti thiu phi lm vic liờn tc labo ba thỏng, di s hng dn ca cỏc anh ch k thut viờn cú kinh nghim Mt s yu t nh hng n k thut lm tiờu bn nhum H E: - S thnh tho thao tỏc, c bit l trờn mỏy ct mnh v lm c vic ny, yu t ngi l rt quan trng - C nh bnh phm khụng tt lm gim hn cht lng xột nghim v c nh hng l khụng th sa cha c - Li v c nh bnh phm rt hay xy vỡ vi cỏc Labo xột nghim phỏt húa cht cho cỏc khoa/phũng, cỏc khoa/phũng khụng chỳ ý hoc coi nh vai trũ ca vic c nh v dựng thay bng nc mui sinh lý, nc ct gõy hoi t bnh phm - ỳc bloc: cỏc li cú th xy nh: nhit parafin khụng m bo (Thay th bp in un parafin thay th trng hp khụng cú mỏy ỳc) lm parafin rt cng gõy nh hng rt nhiu n cu trỳc mụ v khú khn rt ln quỏ trỡnh ct v dỏn mnh gõy nh hng trc tip n cht lng tiờu bn - Quỏ trỡnh ỳc cú th gõy li bnh phm khụng ỳng mt phng, nm sõu blocs gõy ct thiu mụ, mt mụ - Mt s tiờu bn cú mnh ct dy, phm nhum bt mu rt m v khụng cú s tng phn rừ gia nhõn v bo tng Kt qu ny li mt ln 32 na khng nh rng k thut ct mnh nh hng rt nhiu n quỏ trỡnh nhum - Mnh ct hay b xc cng gõy nh hng rt nhiu, iu ny rt hay xy cỏc v dao ct v k thut ct - Dỏn mnh: mt s tiờu bn mt s c s t l pha Albumin quỏ cao, nhiu ty khụng ht, gõy bt mu lm xu tiờu bn nhum Dung dch dỏn mnh cng nh thao tỏc dỏn mnh l mt nguyờn nhõn gõy bong mnh ct cng nh to tn thng gi - Dỏn mnh ct khụng t yờu cu k thut dn n bong mnh ct, lm mnh ct nhn nhỳm, rỏch cng nh cú th to cỏc tn thng gi, nh hng rt nhiu n cht lng tiờu bn - Mt s yu t lm bn tiờu bn nh: vi khun, nm (do dung dch dỏn mnh bo qun khụng tt, khụng ngõm lam kớnh) - H quỏ lõu trờn bn h hoc mt s c s bn h quỏ núng cú th gõy gión cu trỳc mụ - S gp np mnh ct (mnh ct b nhn nhỳm) hoc b rỏch l thao tỏc tói mnh ct trờn bn h khụng t yờu cu (Vin Quõn i trung ng 108 tói trờn thit b chuyờn dng ng dung dch dỏn: nhanh & hiu qu hn so vi tói trc tip trờn lam kớnh) - Quỏ trỡnh nhum tiờu bn l bc cú vai trũ quyt nh rt ln n cht lng tiờu bn, vic ct bt mt s khõu quy trỡnh nhum s gõy nh hng nhiu Mt s c s b qua bc ty nc cui cựng v dựng mỏy sy sy khụ s lm cho tiờu bn b ỏm nc 33 KIN NGH Khi tiến hành thc hin k thut vi th cần phải thng xuyờn chỳ ý kim tra cht lng húa cht sinh phm, trang thit b tt, thao tỏc k thut ỳng để chất lợng chẩn đoán Giải phẫu bệnh ngày nâng cao Đề nghị cần nghiên cứu thêm ảnh hởng khác v nghiờn cu sõu hn v cỏc yu t nh hng đến kết chẩn đoán mô bệnh học Lời cam đoan Tôi xin cam đoan đề tài nghiên cứu Các số liệu, kết đề tài trung thực cha đợc công bố công trình nghiên cứu Nếu có sai sót xin hoàn toàn chịu trách nhiệm Hà Nội, tháng 06 năm 2011 Tác giả khóa luận Nguyễn Văn Minh Tài liệu tham khảo Tiếng việt Trờng Đại học Y khoa, Bộ môn Giải phẫu bệnh(1976): Kỹ thuật hiển vi thông thờng Nhà xuất Y học Hà Nội, Trờng Đại học Y Hà Nôi , Bộ môn Giải phẫu bệnh (2004): Tài liệu tập huấn dành cho cán giải phẫu bệnh, Lờ Hong Anh (2009): Nghiờn cu mt s yu t nh hng ca dung dch c nh ti cht lng nhum H E v PAS Nguyễn Đức Thái (2008): Kỹ thuật chuyển đúc cắt nhuộm yếu tố ảnh hởng, V Th Thu Ho (2005): K thut nhum Hematoxylin Eosin chn oỏn Mụ bnh hc Nguyn Th Hi (2007): K thut v mt s yu t nh hng ti kt qu nhum ba mu Masson trờn mnh ct English Enda B.Prophet, Bob Mills, Jacquelyn B.Arrington, Leslie H.Sobin, M.D: Laboratory Methods in Histotechnology LI CM N Em xin chõn thnh cm n Ban giỏm hiờ ờu, Phũng o to i hc Trng i hc Y H Nụ ời Bụ mụn Gii phu bờ ờnh - Trngi hc Y H Nụ ời ó giỳp v to mi iu kiờ ờn em c hc tõ ờp, rốn luyờ ờn v tu dng ti trng Vi tt c lũng kớnh trng v bit n sõu sc, em xin chõn thnh cm n CN Nguyn Hu Quc - ngi thy ó hng dn, ch bo tõ ờn tỡnh v úng gúp nhiu ý kin quý bỏu em cú th hon thnh tt khúa luõ ờn ny Em xin chõn thnh cm n cỏc thy cụ, anh ch Bụ mụn Gii phu bờ nờ h - Trng i hc Y H Nụ iờ ó nhiờ tờ tỡnh giỳp em sut quỏ trỡnh hc tõ ờp v nghiờn cu Em xin chõn thnh cm n cỏc thy cụ, anh ch cỏc Labo xột nghim Gii Phu Bnh Cỏc bnh vin: Vin K2; Vin Lao Phi Trung ng; Vin Quõn i Trung ng 108 ó nhiờ ờt tỡnh giỳp em sut quỏ trỡnh tỡm hiu v nghiờn cu thc hin khúa lun Cui cựng xin by t lũng bit n sõu sc ti cha m, nhng ngi thõn gia ỡnh ó to mi iu kiờ ờn v tinh thn v võ ờt cht cho Cm n nhng ngi bn ó luụn ng hụ v ụ ờng viờn tụi quỏ trỡnh hc tõ ờp v thc hiờ ờn khúa lun ny H Nụ ời, ngy thỏng 06 nm 2011 Sinh viờn Nguyn Vn Minh MC LC T VN Chng 1: TNG QUAN TI LIU .3 1.1 i cng v xột nghim gii phu bnh vi th: 1.2 Vai trũ ca k thut chn oỏn t bo hc Error! Bookmark not defined 1.3 Tng Quan v Hematoxylin Eosin 1.4 K thut c nh, pha, vựi bnh phm, ỳc bloc, ct v dỏn mnh, nhum tiờu bn H&E: 1.4.1 K thut c nh 1.4.2 Pha 1.4.3 Vựi bnh phm 1.4.4 Quy trỡnh chuyn tay: 1.4.5 Quy trỡnh chuyn mỏy: 10 1.5 ỳc bloc 10 1.6 K thut ct v dỏn mnh .11 1.7 Phng phỏp nhum Hematoxylin - Eosin (H&E) 12 1.7.1 Thuc nhum: .12 1.7.2 Nguyờn tc: 13 1.7.3 Phng phỏp nhum Hematoxylin - Eosin (Hematoxylin Instant).13 1.7.4 Kt qu: 14 Chơng 2: đối tợng phơng pháp nghiên cứu 15 2.1 i tng nghiờn cu 15 2.1.1 Mu xột nghim: tiờu bn nhum H - E .15 2.2 Phng phỏp nghiờn cu .15 2.2.1.Thit k nghiờn cu: Mụ t ct ngang cú phõn tớch kt hp hi cu 15 2.2.2 Ni thc hin ti 15 2.2.3 Phng tin nghiờn cu: 16 2.2.4 Quy trỡnh nghiờn cu 16 2.2.5 Nhn nh kt qu 16 Chng 3: KT QU NGHIấN CU 17 3.1 Bng kt qu 17 3.2 ỏnh giỏ kt quv mt s hỡnh nh minh .19 3.2.1 Labo Xột nghim Gii phu Bnh Bnh vin Lao phi Trung ng: 19 3.2.2 Labo Xột nghim Gii phu Bnh Bnh vin K2 .21 3.2.3 Labo Gii phu bnh Trng i Hc Y H Ni: .23 3.2.4 Labo Xột nghim Gii phu Bnh Bnh vin 108: 25 Chơng 4: Bàn luận .28 4.1 S liờn quan mt thit mt chui k thut liờn hon t vic ly bnh phm, pha bnh phm, c nh, chuyn, ỳc n ct mnh v nhum HE mt tiờu bn mụ bnh hc .28 4.1.1 Ly bnh phm .28 4.1.2 C nh bờnh phm: .29 4.1.3 Chuyn v ỳc bnh phm: 29 4.1.4 Ct mnh v dỏn bnh phm: .30 4.1.5 Nhum tiờu bn 31 4.2 Mt s yu t chớnh ca K thut vi th liờn quan nh hng n tiờu bn nhum Hematoxylin v Eosin .31 Kết luận .34 [...]... thuật hiển vi thông thờng Nhà xuất bản Y học Hà Nội, 2 Trờng Đại học Y Hà Nôi , Bộ môn Giải phẫu bệnh (2004): Tài liệu tập huấn dành cho cán bộ giải phẫu bệnh, 3 Lờ Hong Anh (2009): Nghiờn cu mt s yu t nh hng ca dung dch c nh ti cht lng nhum H E v PAS 4 Nguyễn Đức Thái (2008): Kỹ thuật chuyển đúc cắt nhuộm và các yếu tố ảnh hởng, 5 V Th Thu Ho (2005): K thut nhum Hematoxylin Eosin trong chn oỏn Mụ bnh... đoán mô bệnh học Lời cam đoan Tôi xin cam đoan đây là đề tài do chính tôi nghiên cứu Các số liệu, kết quả trong đề tài là trung thực và cha đợc công bố trên một công trình nghiên cứu nào Nếu có gì sai sót tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm Hà Nội, tháng 06 năm 2011 Tác giả khóa luận Nguyễn Văn Minh Tài liệu tham khảo Tiếng vi t 1 Trờng Đại học Y khoa, Bộ môn Giải phẫu bệnh( 1976): Kỹ thuật hiển vi thông... dựng cho phng phỏp nhum thụng thng l ph bin nht 1.3.8 Phng phỏp nhum Hematoxylin - Eosin (H&E) 1.3.8.1 Thuc nhum: 11 Thuc nhum nhõn hematoxylin: Hematoxylin l mt loi thuc nhum t nhiờn, nú c bit n t nm 1863 Bn thõn Hematoxylin khụng cú c tớnh nhum m phi tri qua quỏ trỡnh oxy húa mt 2 nguyờn t hydro tr thnh Hematein Pha dung dch Hematoxylin nhanh: - Cho phn A v phn B vo mt bỡnh cha hn 1 lớt - Thờm 1... phỏp nhum phi hp thụng dng nht bng cỏch nhum k tip mt phm nhum nhõn baz - hematin v mt phm nhum bo tng acid - eosin Vic nhum nhõn c nhum tng dnngi ta dựng li khi nhng cu trỳc ca nhõn rừ nột nht Ngc li vic nhum bo tnggim dn bng cỏch nhum sm lờn ri loi phm tha bng cn cú nng thp 12 1.3.8.3 Phng phỏp nhum Hematoxylin - Eosin (Hematoxylin Instant) - Tiờu bn ty nn 3 ln Xylen x 2 ln/ phỳt - Chuyn vo cn 100o,... húa Khụng dựng nc mỏy - Lc hoc khuy dung dch vi phỳt cho n khi tan hon ton yờn ớt nht 1 gi Kt qu nhum tt nht sau 12 gi - Lc trc khi dựng Cú kt ta v vỏng trờn b mt l bỡnh thng i vi thuc nhum ny - Thi gian nhum cú th thay i t 4 - 8 phỳt - Nu dựng nhum t bo cú th pha thnh 1.5 - 2 lớt Thuc nhum bo tng: Eosin Vi Eosin bỏn cựng Hematoxylin c pha nh sau: - Mt l Eosin hũa tan trong 1 lớt nc ct 2 ln - Lc cho... tiờu bn, vic ct bt mt s khõu trong quy trỡnh nhum s gõy nh hng nhiu Mt s c s b qua bc ty nc cui cựng v dựng mỏy sy sy khụ s lm cho tiờu bn b ỏm nc 33 KIN NGH Khi tiến hành thc hin k thut vi th cần phải thng xuyờn chỳ ý kim tra cht lng húa cht sinh phm, trang thit b tt, thao tỏc k thut ỳng để chất lợng của chẩn đoán Giải phẫu bệnh ngày càng nâng cao Đề nghị cần nghiên cứu thêm những ảnh hởng khác v... Labo Gii phu bnh vin Lao Phi Trung ng, 463 Hong Hoa Thỏm, Ba ỡnh, H Ni 14 Labo Gii phu bnh Bnh vin K2, Lng Tu, xó Tam Hip, Thanh trỡ, H Ni Labo Gii phu bnh Bnh vin 108, S 1 Trn Hng o, Hai B Trng, H Ni 1.2.3 Phng tin nghiờn cu: Kớnh hin vi quang hc 1.2.4 Quy trỡnh nghiờn cu Lm thun thc k thut ti b mụn n cỏc c s o Quan sỏt, ghi chộp o Theo dừi quy trỡnh k thut vi th nhum H E do k thut vi n ti c s tin... Kết luận 1 i vi em- mt sinh vi n chuyờn ngnh K thut Y hc sp ra trng khi ó nm vng v lý thuyt cỏc quy trỡnh k thut c bn - thc hin thnh tho mt chui k thut chuyn, ct, nhum t bnh phm ra nhng tiờu bn nhum H E thỡ em nhn thy rng k thut khú nht l ct mnh V thc hin c k thut vi th nhum H E t yờu cu k thut thỡ thi gian ti thiu phi lm vic liờn tc trong labo ba thỏng, di s hng dn ca cỏc anh ch k thut vi n cú kinh... trong dung dch Hematoxylin nhanh t 5 - 7 phỳt - Ra nc chy 5 phỳt - Bit húa trong cn acid (acid HCL 0.5% trong cn 70o) vi giõy - Ra nc chy ớt nht 5 phỳt (kim tra di kớnh hin vi xem nhõn nhum ó c cha Nu nht quỏ thỡ nhum thờm, ngc li nu sm quỏ thỡ ty tip trong cn acid v ra nc chy tip 5 phỳt) - Lm xanh bng dung dch lithi carbonat hoc natri carbonat bóo hũa - Ra nc chy 5 phỳt - Nhum bo tng trong Eosin t 3 -... khuụn ó ỳc sang modun lm lnh l vic ỳc nn hon tt S dng mỏy ny trỏnh c mt sai sút rt hay gp trong cỏch ỳc nn thụng thng l mt s liờn kt ng nht gia bnh phm v parafin ng thi rt thun li cho vic sp t bnh phm trong khuụn ỳc, c bit l cỏc bnh phm nh Mt khỏc, vic s dng caseette thay cho khuụn ỳc kim loi khụng nhng d thao tỏc, bo qun m cũn giỳp cho vic ct mnh rt thun li, c bit l vic ct phỏ to mt ct mnh m 1.1.4 ... 1.3.8 Phng phỏp nhum Hematoxylin - Eosin (H&E) 1.3.8.1 Thuc nhum: 11 Thuc nhum nhõn hematoxylin: Hematoxylin l mt loi thuc nhum t nhiờn, nú c bit n t nm 1863 Bn thõn Hematoxylin khụng cú c tớnh... trỡnh chớn Hematoxylin (C16H14O6) mt nguyờn t H tr thnh Hematein (C16H12O6) cú s sp xp kiu quinoit vũng di õy: Hình 1.Công thức Hình 2.Công thức Hematin Hematoxylin S oxy húa liờn tc ca Hematein... nhõn 1.2 Tng Quan v Hematoxylin Eosin Hematoxylin: l mt phm nhum t nhiờn, chit xut bng ete t lừi cõy Haematoxylon campechianum mc vựng nhit i Campeche Mexico Bn thõn Hematoxylin khụng cú c tớnh

Ngày đăng: 25/12/2016, 08:57

Từ khóa liên quan

Mục lục

  • T VN

  • Chng 1

  • TNG QUAN TI LIU

    • 1.1. i cng v xột nghim gii phu bnh vi th:

    • 1.2. Tng Quan v Hematoxylin Eosin.

  • Hình 1.Công thức của Hematoxylin

  • Hình 2.Công thức của Hematin

    • 1.3. K thut c nh, pha, vựi bnh phm, ỳc bloc, ct v dỏn mnh, nhum tiờu bn H&E:

      • 1.3.1. K thut c nh

      • 1.3.2. Pha

      • 1.3.3. Vựi bnh phm

      • 1.3.4. Quy trỡnh chuyn tay:

      • 1.3.5. Quy trỡnh chuyn mỏy:

    • 1.3.6. ỳc bloc

    • 1.3.7. K thut ct v dỏn mnh

  • 1.3.8 Phng phỏp nhum Hematoxylin - Eosin (H&E)

    • 1.3.8.1 Thuc nhum:

    • 1.3.8.2 Nguyờn tc:

    • 1.3.8.3. Phng phỏp nhum Hematoxylin - Eosin (Hematoxylin Instant).

    • 1.3.8.4. Kt qu:

  • Chưương 2

  • đối tưượng và phưương pháp nghiên cứu

    • 1.1. i tng nghiờn cu

      • 1.1.1. Mu xột nghim: tiờu bn nhum H - E

    • 1.2. Phng phỏp nghiờn cu

      • 1.2.1. Thit k nghiờn cu: Mụ t ct ngang cú phõn tớch kt hp hi cu.

      • 1.2.2. Ni thc hin ti

      • 1.2.3. Phng tin nghiờn cu:

      • 1.2.4. Quy trỡnh nghiờn cu

      • 1.2.5. Nhn nh kt qu

  • CHưNG 3

  • KT QU NGHIấN CU

    • 3.1 Bng kt qu

    • 3.2 ỏnh giỏ kt quv mt s hỡnh nh minh ha

      • 3.2.1 Labo Xột nghim Gii phu Bnh Bnh vin Lao phi Trung ng:

      • 3.2.2 Labo Xột nghim Gii phu Bnh Bnh vin K2

      • 3.2.3 Labo Gii phu bnh Trng i Hc Y H Ni:

      • 3.2.4 Labo Xột nghim Gii phu Bnh Bnh vin 108:

  • Chưương 4

  • Bàn luận

    • 1.1. S liờn quan mt thit trong mt chui k thut liờn hon t vic ly bnh phm, pha bnh phm, c nh, chuyn, ỳc n ct mnh v nhum HE ra mt tiờu bn mụ bnh hc

      • 1.1.1. Ly bnh phm

      • 1.1.2. C nh bờnh phm:

      • 1.1.3. Chuyn v ỳc bnh phm:

      • 1.1.4. Ct mnh v dỏn bnh phm:

      • 1.1.5. Nhum tiờu bn

    • 4.2 Mt s yu t chớnh ca K thut vi th liờn quan nh hng n tiờu bn nhum Hematoxylin v Eosin

  • Kết luận

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan