báo cáo tốt nghiệp 2016 SẢN XUẤT THUỐC CHUỘT TỪ HOA BÔNG ỔI

30 21 0
  • Loading ...
1/30 trang

Thông tin tài liệu

Ngày đăng: 28/11/2016, 20:10

Xuất phát từ ý nghĩa thực tiễn trên đề tài: “Nghiên cứu xác định thành phần hóa học có trong hoa Bông ổi (Lantana Camara L)” được chọn nghiên cứu với mục đích xác định thành phần hóa học của loài cây này từ đó làm cơ sở khoa học nghiên cứu ứng dụng làm nguyên liệu sản xuất thuốc diệt chuột theo cơ chế chống đông máu.a. Hóa chất Etanol 95̊ ; nhexan; dung dịch NaOH 10%; FeCl3 10%. b. Thiết bị, dụng cụ Bếp điện; đèn cồn; bình cầu: 250ml; ống nối; chén sứ. Ống sinh hàn; các lọ tiêu chuẩn để bảo quản dịch chiết. Bình tam giác (erlen): 250ml; cốc thủy tinh: 100ml, 250ml. Ống nghiệm; pipet; bình thủy tinh. Máy lắc ổn nhiệt: Phòng Công nghệ sinh học Trung tâm Ứng dụng tiến bộ Khoa học và Công nghệ Quảng Bình. Tủ sấy: Trung tâm Ứng dụng tiến bộ Khoa học và Công nghệ Quảng Bình. Máy sắc ký khí khối phổ liên hợp (GCMS): Phòng Công nghệ và thiết bị hóa học Viện hóa học các hợp chất thiên nhiên. Lời Cảm Ơn Trước tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy giáo, PGS TS Nguyễn Đức Vượng, Trưởng khoa Kỹ thuật - Công nghệ, Trường Đại học Quảng Bình Thầy người dạy, cố vấn học tập quan tâm giúp đỡ, dạy dỗ định hướng cho em suốt năm em theo học trường Thầy giảng viên hướng dẫn, tận tình dẫn em suốt trình thực khóa luận tốt nghiệp Em xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc đến thầy cô giáo giảng dạy em bốn năm qua, kiến thức mà em nhận giảng đường đại học hành trang giúp em vững bước tương lai Em muốn gửi lời cảm ơn đến bạn sinh viên lớp Đại học Sư phạm Hóa học K54 (2012-2016) giúp đỡ cho em lời khuyên bổ ích chuyên môn trình nghiên cứu Cuối cùng, em muốn gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè, người kịp thời động viên giúp đỡ em vượt qua khó khăn sống Một lần em xin chân thành cảm ơn! Đồng Hới, tháng năm 2016 Sinh viên Nguyễn Mỹ Duyên MỤC LỤC Mục lục .ii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH v MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài .1 Mục đích nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Giả thuyết khoa học Nhiệm vụ nghiên cứu .2 Các phương pháp nghiên cứu Bố cục khóa luận Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu Bông ổi 1.1.1 Sơ lược nguồn gốc Bông ổi .3 1.1.2 Phân bố sinh thái [6, 12, 15] .4 1.1.3 Bông ổi với y học dân gian 1.2 Các nghiên cứu Bông ổi 1.2.1 Trong nước .5 1.2.2 Ngoài nước .5 1.3 Hợp chất coumarin [1, 2, 3, 10] 1.3.1 Khái niệm chung Coumarin [1, 2] .6 1.3.2 Phân loại [2] 1.3.3 Đặc điểm cấu trúc [1, 3, 10] 1.3.4 Tính chất Coumarin [1, 2, 3] .9 1.3.5 Phương pháp định tính Coumarin [1, 2, 3, 10] 10 1.3.6 Phương pháp định lượng Coumarin [1, 3] 11 1.3.7 Công dụng Coumarin [1, 3] .12 Chương 2: THỰC NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .14 2.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.2 Hóa chất, dụng cụ thiết bị nghiên cứu 14 2.3 Phương pháp nghiên cứu 14 2.3.1 Phương pháp chiết 14 2.3.2 Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS) 15 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .17 3.1 Tách, chiết Coumarin dung môi hữu 18 3.2 Kết định tính coumarin .20 3.2.1 Thuốc thử mở vòng Lacton NaOH 10% 20 3.2.2 Thuốc thử FeCl3 .20 3.3 Kết định tính thành phần hóa học dễ bay dịch n-hexan 21 3.4 Kết định lượng coumarin dịch chiết n-hexan 21 3.5 Ứng dụng sản xuất thuốc diệt chuột 21 3.5.1 Quy trình thực 21 3.5.2 Kết 22 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 23 Kết luận 23 Kiến nghị .23 TÀI LIỆU THAM KHẢO 24 [17] Yi Z, Zhang M, Ling B, Xu D, Ye J, “Inhibitory effects of Lantana camera and its contained phenolic compounds in Eichhornia crassipes growth” 25 DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Kết định tính thành phần hóa học dễ bay dịch n- hexan.21 Bảng 2: Kết định lượng Coumarin dịch chiết n-hexan 21 DANH MỤC HÌNH Hình 1: Cây Bông ổi Hình 2: Hoa Bông ổi Hình 3: Quả Bông ổi Hình 4: Vùng nguyên liệu Bông ổi 14 Hình 5: Quy trình thực 18 Hình 6a: Hoa tươi .19 Hình 6b: Bột hoa sấy khô 19 Hình 7a: Dịch chiết hoa 20 Hình 7b: Kết định tính Coumarin NaOH 10% 20 Hình 8: Kết định tính Coumarin FeCl3 10% 20 Hình 9: Bỏng gạo tẩm dịch .22 Hình 10: Chuột chết sau ăn phải bỏng gạo tẩm dịch 22 MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài - Việt Nam nước nằm khu vực nhiệt đới gió mùa, lượng mưa tương đối lớn, độ ẩm cao (khoảng 80%), nước ta có hệ thống thực vật phong phú với khoảng 12000 loài, có tới 4000 loài nhân dân ta làm thảo dược với mục đích khác phục vụ sống người Việc sử dụng hợp chất thiên nhiên sản phẩm có nguồn gốc thiên nhiên dùng làm dược phẩm chữa bệnh ngày thu hút quan tâm nhà khoa học cộng đồng, ưu điểm chúng độc tính thấp, dễ hấp thu chuyển hóa thể so với dược phẩm tổng hợp Đây lợi to lớn nghành công nghiệp hóa dược mà quan trọng nghành thực phẩm, hương liệu, mỹ phẩm - Trong nhiều năm qua có nhiều công trình nghiên cứu khoa học việc chiết tách hoạt chất có cỏ phục vụ cho việc chữa bệnh tạo chế phẩm sinh học [5] Cây Bông ổi (Lantana camara L) thuộc họ Cỏ roi ngựa (Verbenaceae) thường trồng làm cảnh hoa có nhiều màu khác nhau, có xuất xứ từ nước ngoài, song phân bố rộng rãi toàn Việt Nam khí hậu nước ta vùng nhiệt đới Rễ ổi thường dùng trị phong thấp đau xương, chấn thương bầm giáp Lá trị ghẻ lở, viêm da, dùng đắp vết thương, vết loét dùng để cầm máu Ngoài ra, ổi có chứa hoạt chất Coumarin - chống đông máu ứng dụng làm thuốc diệt chuột [17,18] - Xuất phát từ ý nghĩa thực tiễn đề tài: “Nghiên cứu xác định thành phần hóa học có hoa Bông ổi (Lantana Camara L)” chọn nghiên cứu với mục đích xác định thành phần hóa học loài từ làm sở khoa học nghiên cứu ứng dụng làm nguyên liệu sản xuất thuốc diệt chuột theo chế chống đông máu Mục đích nghiên cứu - Chiết tách dịch hoa Bông ổi xác định thành phần hoá học hợp chất dịch chiết hoa Bông ổi - Tiến hành định tính định lượng Coumarin dịch chiết hoa Bông ổi ứng dụng làm thuốc diệt chuột Đối tượng phạm vi nghiên cứu - Cây Bông ổi, chọn cách ngẫu nhiên địa bàn thành phố Đồng Hới - Hoa Bông ổi lấy khoảng thời gian tháng 10/2015 - 02/2016 Giả thuyết khoa học - Bông ổi thuộc họ Cỏ roi ngựa, có chứa hàm lượng nhóm hợp chất tự nhiên Coumarin lớn [17] Theo nghiên cứu trước cho thấy thành phần Bông ổi chứa nhóm chất Coumarin, mà thực vật Coumarin không tập trung phận mà phân bố nhiều phận khác Hoa Bông ổi chứa thành phần Coumarin - Cây Bông ổi sử dụng nhiều y học dân gian kháng viêm, ức chế vi khuẩn, chống đông máu… - Đề tài xác định thành phần có dịch chiết hoa Bông ổi để từ ứng dụng làm nguyên liệu sản xuất thuốc diệt chuột theo chế chống đông máu Nhiệm vụ nghiên cứu - Tìm hiểu đối tượng cần nghiên cứu Bông ổi - Lập kế hoạch, quy trình nghiên cứu thành phần dịch chiết hoa Bông ổi dung môi etanol, n-hexan - Chiết tách hợp chất có hoa Bông ổi dung môi hữu làm sở cho thực nghiệm - Ứng dụng sản xuất thuốc chuột Các phương pháp nghiên cứu - Nghiên cứu lý thuyết - Các phương pháp nghiên cứu thực nghiệm: + Phương pháp chọn mẫu + Chiết dung môi etanol, n-hexan + Xác định thành phần hợp chất dịch chiết từ hoa Bông ổi dung môi chiết phương pháp sắc kí khí ghép khối phổ (GC-MS) Bố cục khóa luận Đề tài có cấu trúc gồm phần: - Phần mở đầu - Phần nội dung + Chương 1: Tổng quan + Chương 2: Thực nghiệm phương pháp nghiên cứu + Chương 3: Kết nghiên cứu thảo luận - Phần kết luận kiến nghị Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu Bông ổi 1.1.1 Sơ lược nguồn gốc Bông ổi 1.1.1.1 Khái quát [5] + Tên khoa học: Lantana camara L (Verbenaceae) + Họ: Cỏ roi ngựa (Verbenaceae) + Chi: Lantana + Loài: Camara + Tên thường gọi trâm ổi, ổi, ổi nho, trâm anh, mã anh đơn, nhá khí mu (Tày) + Tên tiếng Anh: Lantana wild sage, tick berry + Tên tiếng Pháp: Bois de sauge, lantanier 1.1.1.2 Đặc điểm hình thái [3, 6] Bông ổi loài nhỏ, cao từ 1,5-2 mét, hay chút, thường mọc thành bụi mọc hoang dại, nhiều cành ngang, có lông gai ngắn quặp phía Thân có gai, cành dài hình vuông có gai ngắn lông ráp Lá có mùi thơm ổi nên gọi trâm ổi, ổi hay thơm ổi Lá hình bầu dục, nhọn, mặt xù xì, mép có cưa, mặt có lông ngắn cứng, mặt lông mềm hơn, mọc đối, phiến dài 3-9 cm, rộng 3-6 cm, cuống ngắn Hoa không cuống mọc thành dạng hình cầu, hoa có bắc hình mũi giáo Quả hạch hình cầu nằm dài, mọc thành chùm, non màu xanh chín màu đen Hình 1: Cây Bông ổi Hình 2: Hoa Bông ổi Hình 3: Quả Bông ổi 1.1.2 Phân bố sinh thái [6, 12, 15] Bông ổi, tên khoa học Lantana camara L, thuộc họ Cỏ roi ngựa (Verbenaceae) Cây có nguồn gốc vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Trung, Nam Mỹ Năm 1600 nhà thám hiểm người Hà Lan đem vào Hà Lan trồng, từ Brazil đến quốc gia khác mang hạt giống trồng châu Âu, Vương quốc Anh Bắc Mỹ Sau trồng Hawaii giống hoa, Bông ổi nhanh chóng lan rộng đảo Thái Bình Dương, Úc Nam Á Theo cách tương tự, từ nhanh chóng mọc khu vực ấm Nam Phi chim ăn phân bố hạt Trong kỷ 18 19, Bông ổi nhanh canh tác cách thương mại hóa toàn giới cảnh màu sắc hoa Cũng vào kỷ 19, Bông ổi trồng làm cảnh Việt Nam Đến phổ biến rộng rãi, mọc hoang bãi đất trống, đồi núi, ven biển 1.1.3 Bông ổi với y học dân gian - Toàn Bông ổi chữa viêm da, mẩn ngứa, chàm [5, 6] • Lá tươi dùng làm thuốc cầm máu, chữa lành vết thương • Hoa Bông ổi có khả sát khuẩn, diệt nấm, trị viêm loét • Rễ Bông ổi sắc kết hợp với loại vị thuốc khác chữa rắn cắn - Tác dụng chữa bệnh Bông ổi tùy thuộc vào phận dùng làm thuốc Ở nam Trung Quốc, dịch hoa Bông ổi dùng để tắm chữa ghẻ Ở Indonesia, Philippines, hoa Bông ổi giã đắp vết đứt, lở loét, sưng tấy Loài sử dụng nhiều nơi giới để điều trị loạt chứng rối loạn [12, 15] - Cây Bông ổi Trung Nam Mỹ, người ta dùng tươi nghiền nát đắp lên chỗ sưng để điều trị vết loét, thủy đậu sởi Ở nước châu Á, sử dụng để điều trị vết cắt, loét [12, 15] 1.2 Các nghiên cứu Bông ổi 1.2.1 Trong nước Năm 2007, tác giả Diệp Thị Mỹ Hạnh E Garnier Zarli nghiên cứu khả hấp thụ Pb đất Bông ổi Kết nghiên cứu cho thấy điều kiện ô nhiễm đất đến 4x103 mg kg -1 Pb Lantana sống hấp thụ Pb Hấp thụ Pb hệ rễ Lantana quan trọng lúc đầu, có tương quan tốt nồng độ chì đất lượng chì hấp thụ Lantana Nhưng sau đó, Pb chuyển lên tích lũy thân [7] Năm 2009, tác giả Nguyễn Văn Đậu, Lê Thị Huyền phân lặp năm triterpenes Bông ổi Lâm Thao, Phú Thọ Kết năm triterpens có β-sitosterol, sitosterol 3-O-β-D-glucopiranozit ba triterpen lại dẫn xuất axit oleanolic [4] 1.2.2 Ngoài nước Năm 2008, tác giả người Ấn Độ M Sathish Kumar S Maneemegalai đánh giá khả diệt ấu trùng hai loài muỗi Aedes aegypti (tác nhân gây bệnh sốt vàng da) Culex quinquefasciatus (tác nhân gây bệnh viêm não Nhật Bản) từ phần chiết ethanol, methanol hoa Bông ổi Ấu trùng hai loài muỗi nở sau bảy ngày hấp thu lượng chiết định từ hoa loài Sau 24 số lượng ấu trùng chết ghi lại tính toán tỷ lệ phần trăm tử vong Từ kết thực nghiệm đó, hai nhà khoa học kết luận phần chiết xuất từ hoa Bông ổi có khả diệt ấu trùng hai loài muỗi [13] Năm 2009, nhóm tác giả người Ấn Độ Deepak Ganjewala, Silviya Sam, Kishwar Hayat Khan, nghiên cứu khả chống loại vi khuẩn Bacillus subtillis, Escherichia coli (gây bệnh dịch tả), Staphylococcusaureus, Pseudomonas aeruginosa Kết cho thấy chất từ dịch chiết ethyl acetate hiệu việc chống lại số vi khuẩn Chiết xuất acetone chloroform thành phần quan trọng tác dụng ức chế chống lại vi khuẩn [11] hydroxycinnamic dạng cis (acid coumarinic) Chất tác dụng tia tử ngoại chuyển thành dạng trans (acid coumaric) có huỳnh quang sáng Cách làm: nhỏ giọt dung dịch có coumarin lên giấy thấm, nhỏ tiếp lên giọt NaOH 5%, sấy nhẹ Che 1/2 vết với đồng xu chiếu tia tử ngoại vài phút sau cất đồng xu đi, thấy nửa hình tròn không che sáng nửa vòng tròn bị che Nếu tiếp tục chiếu độ sáng 1/2 bị che sáng dần lên Chuyển coumarin thành dẫn chất hydroxamic cách cho tác dụng với hydroxylamin kiềm, sau cho tác dụng tiếp với muối sắt III, tạo phức có màu Cách làm: cho vài giọt dung dịch coumarin ether vào ống nghiệm, thêm giọt dung dịch bão hòa hydroxylamin hydrochlorid cồn giọt KOH bão hòa cồn Hỗn hợp đun lửa nhỏ phản ứng bắt đầu, thấy có bọt nhỏ Sau nguội, acid hóa hỗn hợp với HCl 0,5N thêm giọt FeCl 1%, có màu tím đỏ Các dẫn chất coumarin có nhóm OH phenol tự cho màu xanh với thuốc thử FeCl3 1.3.6 Phương pháp định lượng Coumarin [1, 3] - Dựa vào phương pháp oxy hóa KMnO4 0,1N sau cất kéo nước áp suất giảm - Ứng dụng phương pháp đo màu sau làm phản ứng màu, ví dụ phản ứng kết hợp với muối diazoni - Dựa vào sắc kí khí ghép khối phổ GC-MS - Dựa vào phổ U.V phổ huỳnh quang (sau tách vết S.K.L.M) - Dựa vào sắc ký lỏng cao áp 1.3.7 Công dụng Coumarin [1, 3] - Tác dụng đáng ý dẫn chất coumarin chống co thắt, làm giãn nở động mạch vành mà chế tác dụng tương tự papaverin Hàng loạt chất coumarin tự nhiên tổng hợp thí nghiệm Người ta nhận thấy coumarin nhóm OH C-7 acyl hóa tác dụng chống co thắt tăng, gốc acyl có đơnvị isopren (ví dụ geranyloxy) tác dụng tốt Ðối với nhóm psoralen, nhóm hydroxy, methoxy hay isopentenyloxy vị trí C-5 hay C-8 tăng tác dụng Ðối với nhóm angelicin, có methoxy C-5 hay C-5 C-6 tăng tác dụng Những dẫn chất acyldihydrofuranocoumarin acyldihydropyranocoumarin tác dụng chống co thắt tốt, nhóm acyl tốt có cacbon kéo dài mạch cacbon tác dụng bị hạ thấp Một số dược liệu ứng dụng để khai thác tác dụng nêu như: rễ loại Tiền hồ - Peucedanum morisonii Bess, hạt cà rốt Daucus sativus, Ammi visnaga (L.) Lam … - Tác dụng chống đông máu coumarin biết từ lâu Nhưng ý tính chất có chất có nhóm OH vị trí có xếp kép phân tử, ví dụ chất dicoumarol lần phát chất sinh ủ đống thuộc chi Melilotus súc vật ăn bị bệnh chảy máu làm giảm tổng hợp prothrombin Hiện dicoumarol chế tạo đường tổng hợp - Tác dụng vitamin P (làm bền bảo vệ thành mạch), ví dụ bergapten, aesculin, fraxin - Tác dụng chữa bệnh bạch biến hay bệnh lang trắng bệnh vẩy nến Tính chất có dẫn chất furanocoumarin psoralen, angelicin, xanthotoxin, imperatorin - Tác dụng kháng khuẩn: Nhiều dẫn chất coumarin có tác dụng kháng khuẩn, đặc biệt chất novobiocin chất kháng sinh có phổ kháng khuẩn rộng có nấm Streptomyces niveus - Một số có tác dụng chống viêm, ví dụ calophyllolid có mù u Calophyllum inophyllum có tác dụng chống viêm 1/3 oxyphenbutazon chất calanolid dẫn chất coumarin có mù u - Calophyllum lanigerum gần phát thấy có tác dụng ức chế HIV - Ta cần ý chất aflatoxin coumarin độc có mốc Aspergillus flavus gây ung thư Chương 2: THỰC NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Hoa Bông ổi thu hái Thành phố Đồng Hới, Quảng Bình Hình 4: Vùng nguyên liệu Bông ổi 2.2 Hóa chất, dụng cụ thiết bị nghiên cứu a Hóa chất - Etanol 955 ; n-hexan; dung dịch NaOH 10%; FeCl3 10% b Thiết bị, dụng cụ - Bếp điện; đèn cồn; bình cầu: 250ml; ống nối; chén sứ - Ống sinh hàn; lọ tiêu chuẩn để bảo quản dịch chiết - Bình tam giác (erlen): 250ml; cốc thủy tinh: 100ml, 250ml - Ống nghiệm; pipet; bình thủy tinh - Máy lắc ổn nhiệt: Phòng Công nghệ sinh học - Trung tâm Ứng dụng tiến Khoa học Công nghệ Quảng Bình - Tủ sấy: Trung tâm Ứng dụng tiến Khoa học Công nghệ Quảng Bình - Máy sắc ký khí - khối phổ liên hợp (GC/MS): Phòng Công nghệ thiết bị hóa học - Viện hóa học hợp chất thiên nhiên 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp chiết Phương pháp chiết phương pháp thu lấy chất từ hỗn hợp dung môi để tách biệt, cô tinh chế cấu tử có hỗn hợp thành cấu tử riêng Có thể chiết từ hỗn hợp dung dịch hay từ chất rắn Phương pháp để chiết Coumarin hoa Bông ổi sử dụng chiết chất lỏng Chiết từ dung dịch trình chuyển từ chất lỏng sang chất lỏng khác Sự chuyển tuân theo định luật phân bố chất tan hướng theo định luật phân bố Nertz: Trong đó: K = CA / CB K - số phân bố CA, CB - nồng độ chất tan dung môi A B Chiết thực hệ số K khác Chiết chất hữu từ dung dịch (phần lớn từ nước) lắc dung dịch với dung môi thích hợp không trộn lẫn với dung môi cũ (thường nước) có khả hòa tan tốt chất hữu dung môi cũ Dung môi phải chọn dung môi có khả hòa tan lớn chất dung môi cũ, dễ tách tinh chế lại thành chất tinh khiết không trộn lẫn vào dung môi cũ, có khác tỉ khối so với dung môi cũ, có khả tạo nhũ tương, nguy hiểm Nếu chất tan xấu nước cần chiết lần, ngược lại phải chiết nhiều lần, có phải dùng phương pháp chiết liên tục Sau thu dung dịch chiết, làm khô chất làm khô tinh chế phương pháp tinh chế thường [9] 2.3.2 Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS) Kỹ thuật sắc ký khí sử dụng để phân tích lượng lớn loại hợp chất hữu khác nhau, hợp chất chất khí chất lỏng, chất rắn Tuy nhiên, loại hợp chất không bền nhiệt, bay (trọng lượng phân tử lớn 300 amu) loại hợp chất ion, kỹ thuật sắc ký phân tích mẫu trực tiếp được, mà cần phải biến đổi hợp chất nói thành dẫn xuất có tính bay hơi, phân tích sắc ký Trong sắc ký khí, pha động chất khí thường gọi khí mang Khí xuất phát từ bình khí nén thành dòng khí điều chỉnh lưu lượng van khóa, để vào cột có chứa pha tĩnh Tại cột này, thành phần khác hỗn mẫu khảo sát tách riêng Mẫu chất khảo sát hợp chất chuẩn chích vào dòng khí mang vị trí đầu cột pha tĩnh, ngang qua pha tĩnh tách thành hợp chất riêng rẽ khỏi cột Các hợp chất khác hỗn hợp mẫu chất ban đầu phận phát ghi nhận (bằng tín hiệu điện tử) giao diện máy biến đổi tín hiệu thành mũi xuất sắc ký đồ Máy in in sắc ký đồ giấy Một phương tiện hữu ích giúp nhà hóa học xác định cấu trúc hóa học hợp chất cần khảo sát máy sắc ký ghép khối phổ, thường gọi tắt GC-MS Dòng khí thoát khỏi máy sắc ký khí cho ngang qua khóa để vào ống, nơi có lỗ phân tử (molecular leak) dẫn đến buồng ion hóa máy khối phổ Người ta có khối phổ đồ cấu phần chứa hỗn hợp chích vào máy sắc ký lúc ban đầu Hệ máy GC-MS khảo sát đơn chất hỗn hợp Trước tiên, máy tách mẫu, phân tích mẫu, kế đó, phận máy tính máy khối phổ so sánh kiện vừa thu với số liệu phổ chuẩn chứa sẵn thư viện máy, đề nghị cấu trúc hóa học chất (đơn chất hỗn hợp) khảo sát Máy in bảng danh sách hợp chất có khả giống với chất khảo sát, hợp chất đề nghị có ghi kèm theo độ tương hợp (compatibility) Độ tương hợp lớn, 90%, cấu trúc hợp chất khảo sát có khả mà máy đề nghị Để khẳng định cấu trúc hóa học hợp chất khảo sát, cần có thêm loại phổ khác như: IR, RMN Máy đo khối phổ ghép vào máy sắc ký khí phải tương đối chặt chẽ có hiệu suất cao Ưu điểm: - Tính bay hơi: Cả hai loại máy phân tích tất hợp chất khí, lỏng, rắn hợp chất có đặc tính áp suất lớn - Độ nhạy: Máy khối phổ có độ nhạy cao, nên phân tích hợp chất từ cột sắc ký khí - Nhiệt độ: Cột sắc ký khí hệ thống nhận mẫu máy khối phổ hoạt động khoảng nhiệt độ giống Máy sắc ký khí hoạt động khoảng nhiệt độ từ nhiệt độ phòng đến 300oC, tùy vào tính chất mẫu phân tích tùy vào pha tính cột sắc ký - Thời gian quét: Máy khối phổ có vận tốc quét nhanh, đủ để ghi nhận hết tín hiệu từ cột sắc ký khí Nhược điểm: - Áp suất: Mỗi máy hoạt động điều kiện áp suất khác nhau, nên kết hợp hai máy với trở ngại lớn Máy sắc ký khí có áp suất đầu 1atm, từ hợp chất khảo sát dẫn vào buồng ion hóa máy khối phổ có áp suất 10-6 torr (1 torr = 1mmHg), hai máy phải có giao diện Giao diện phải chịu giảm áp suất lớn mà không làm hao nhiều mẫu khảo sát, phải tách loại bỏ bớt 90% khí mang khỏi mẫu khảo sát, với mục đích làm mẫu đậm đặc nhiều tốt trước mẫu cho vào buồng ion hóa máy khối phổ - Loại cột sắc ký khí: Chỉ có số loại cột sắc ký sử dụng máy GC-MS Các cột loại polymer hữu bị đứt mảnh nhiệt độ gia tăng, mảnh nhỏ vào khối phổ làm xuất khối phổ đồ mũi đặc trưng, gây nhầm lẫn mảnh ion mẫu khảo sát - Giá thành máy cao - Cần điều chế dẫn xuất cho mẫu khảo sát: Nhiều loại hợp chất khảo sát, tính chất bay hơi, nên cần phải biến đổi thành dẫn xuất bay được, trước thực sắc ký [8] Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tách, chiết Coumarin dung môi hữu * Quy trình thực hiện: Thu hái nguyên liệu Sấy 50 oC Bột hoa ổi Ngâm etanol 95o, lọc Bã, bỏ Dịch Etanol Cô đặc thu hồi dung môi Cao Etanol Chiết N-hexan Dịch nước Dịch N-hexan Cô đặc dung môi Đo GC – MS xác định thành phần dịch chiết Ứng dụng sản xuất thuốc diệt chuột Hình 5: Quy trình thực * Quy trình thực [3, 6, 14, 16]: Cao N-hexan - Hoa Bông ổi thu vào tháng 11/2015, 01/2016 cổng phụ Bệnh viện hữu nghị Việt Nam-Cu Ba, phường Nam Lý, thành phố Đồng Hới Mẫu hoa tươi hái vào ngày khô ráo, không mưa Hoa hái nở, có mùi nồng, loại bỏ hoa bị sâu, rầy, hoa bị khô, hoa tàn Mẫu hoa sau hái đem xử lý sấy khô Hình 6a: Hoa tươi Hình 6b: Bột hoa sấy khô - Hoa Bông ổi sấy khô nhiệt độ 50 oC, tán nhỏ thành dạng bột, bảo quản tránh ẩm mốc, tạp chất làm ảnh hưởng đến chất có thành phần hoa Bông ổi, tránh phản ứng hóa học làm biến đổi chất đó, làm sai lệch ảnh hưởng đến kết nghiên cứu - Mẫu hoa sau sấy khô, đến độ ẩm khoảng 10%, ngâm ngập etanol 95o 45 ngày Bình đậy kín - Lọc dịch etanol, loại bã Cô đuổi dung môi máy lắc ổn nhiệt cường độ 200 vòng/phút 24 nhiệt độ khoảng 60oC để làm giảm độ nhớt tăng hàm lượng dịch Đuổi dung môi bình tam giác đến thể tích khoảng 1/3 bình, chuyển sang cốc thủy tinh, chưng cất cách thủy để làm bay nước Thu cao etanol tiến hành định tính Coumarin - Chiết n-hexan: Pha cao etanol với nước cất bình tam giác; sau thêm n-hexan, lắc, để yên, chiết Sử dụng pipet để lấy dịch n-hexan phía Thao tác cẩn thận để không lẫn nước vào dịch chiết Chiết nhiều lần nhạt màu Lần đầu tiên, pha cao etanol với 150 ml nước cất, thêm 50 ml n-hexan, lắc, để yên, chiết; dịch n-hexaxn phía trên, dịch nước phía dưới, chiết lấy n-hexan Sau lần chiết thứ nhất, thêm tiếp 50 ml nước cất 50 ml n-hexan, lắc, chiết n-hexan Sau lần chiết thứ 2, thêm 50 ml n-hexan, chiết tiếp Thêm tiếp 25 ml n-hexan cho lần chiết thứ 4, 5, Các dịch chiết nhạt màu dần: dịch nước có màu vàng, dịch nhexan dần, có màu nâu xanh - Dịch n-hexan sau chiết cô đuổi thu hồi dung môi bình cầu, đun bếp với nhiệt độ 50 - 60oC Đuổi n-hexan đến thể tích khoảng 1/3 thể tích, sau chưng cách thủy để đuổi hết n-hexan, thu cao n-hexan - Tiến hành gửi đo GC/MS để xác định thành phần hóa học 3.2 Kết định tính coumarin 3.2.1 Thuốc thử mở vòng Lacton NaOH 10% Cho vào ống 0,5 ml dịch chiết, chia làm nhóm, nhóm bổ sung thêm 0,25 ml dung dịch NaOH 10% có kết dương tính với thuốc thử Nhóm thấy có màu vàng xuất chứng tỏ dịch hoa có chứa Coumarin Hình 7a: Dịch chiết hoa Hình 7b: Kết định tính Coumarin NaOH 10% 3.2.2 Thuốc thử FeCl3 Cho vào ống nghiệm 0,5 ml dịch chiết, bổ sung thêm 0,25 ml dung dịch FeCl3 10% có kết dương tính với thuốc thử Ống nghiệm chuyển sang màu xanh thẫm chứng tỏ dẫn xuất Coumarin có nhóm - OH phenol tự Hình 8: Kết định tính Coumarin FeCl3 10% 3.3 Kết định tính thành phần hóa học dễ bay dịch n-hexan Gửi mẫu dịch đến Viện thực phẩm chức - Trung tâm kiểm nghiệm - Lô A2CN1 Cụm CN Từ Liêm - Q Bắc Từ Liêm - Hà Nội Kết định tính thành phần hóa học dễ bay dịch chiết hoa Bông ổi trình bày bảng Bảng 1: Kết định tính thành phần hóa học dễ bay dịch n- hexan STT Tên tiêu STT Tên tiêu Lemond 12 β-cubebene Copaene 13 α- guaiene Feraniol 14 β- bisabolene β- elemene 15 Delta-cadiol β-caryophyllen 16 Delta-cadinene Gemacrene D 17 1,5- heptadien-4 ol 3,3,6 dimethyl γ - elemene 18 Palmitic acid β- famesene 19 Linoleic acid Aromadendrene 20 Stearic acid 10 Neronidol D 21 α- linolenic acid 11 Oleic acid 22 Phytol 3.4 Kết định lượng coumarin dịch chiết n-hexan Gửi mẫu dịch hexan đến Phòng Công nghệ thiết bị hóa học - Viện hóa học hợp chất thiên nhiên - Phòng Công nghệ Thiết bị - 18 Hoàng Quốc Việt - Cầu Giấy - Hà Nội Kết định lượng Coumarin dịch chiết hoa Bông ổi trình bày bảng Bảng 2: Kết định lượng Coumarin dịch chiết n-hexan STT Thông số phân tích Đơn vị Tỉ trọng dung dịch g/cm Hàm lượng Coumarin %w/w 3.5 Ứng dụng sản xuất thuốc diệt chuột Kết phân Phương pháp thử tích 0,8113-0,819 51,03 nghiệm TCVN 189:1993 GC-MS 3.5.1 Quy trình thực Cho 200 gram cát mịn vào chảo đảo đến cát nóng Tiếp theo cho kg thóc vào đảo tay hạt thóc nổ lên Dùng rổ sắt lỗ nhỏ tách riêng cát bỏng gạo với Tiến hành ngâm bỏng gạo với dịch chiết hoa Bông ổi với tỷ lệ khác sau: Cân 150 gram bỏng gạo ngâm với 450 ml dịch chiết hoa Bông ổi Cân 150 gram bỏng gạo ngâm với 150 ml dịch chiết hoa Bông ổi Cân 150 gram bỏng gạo ngâm với 50 ml dịch chiết hoa Bông ổi Dịch ngấm, tiến hành vớt sấy khô đóng gói, bảo quản Sau nhiều lần thử nghiệm, nhận thấy thuốc diệt chuột sản xuất lần cho hiệu cao Hình 9: Bỏng gạo tẩm dịch 3.5.2 Kết Đã thử nghiệm nhà thu xác chuột chết dạng xuất huyết miệng Hình 10: Chuột chết sau ăn phải bỏng gạo tẩm dịch KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua trình nghiên cứu thực nghiệm, rút số kết luận sau: - Đã chiết tách dịch chiết chứa hợp chất hữu có hoa Bông ổi định tính 22 chất có dịch chiết - Đã định tính Coumarin có thành phần dịch chiết dung dịch NaOH 10%, FeCl3 10% định lượng Coumarin dịch chiết chiếm 51,03% - Bước đầu khảo sát thành công thuốc diệt chuột theo chế chống đông máu Kiến nghị - Tiếp tục nghiên cứu theo hướng sâu hơn: chạy sắc kí cột để tách cấu tử Coumarin tinh khiết từ hoa Bông ổi, định lượng chất chứa dịch chiết Có thể nghiên cứu mở rộng xác định thành phần chất có lá, rễ hoa Bông ổi so sánh với thành phần chất có hoa Bông ổi Từ đó, lựa chọn nguồn nguyên liệu tối ưu để tiếp tục nghiên cứu hoạt tính sinh học phục vụ cho y học - Đưa thuốc chuột vào sử dụng thu thập kết đánh giá hiệu diệt chuột TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Bài giảng Dược liệu - Trường Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Trường Đại học Y Dược Hà Nội - Năm 1998 [2] Bài giảng Dược liệu -Ts Nguyễn Viết Kình [3] Giáo trình thực tập dược liệu - Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh - Năm 2005 [4] Diệp Thị Mỹ Hạnh, E Garnier Zarli (2007), Lantana camara L, Thực Vật có khả hấp thu Pb đất để giải ô nhiễm, Tạp chí phát triển Khoa Học Công Nghệ, tập 10, số [5] Đỗ Huy Ích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiền, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2004), Viện Dược Liệu, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập I, Nhà xuất Khoa Học Kỹ Thuật, trang 260 - 262 [6] GS.TS Đỗ Tất Lợi (1995), Những Cây Thuốc Vị Thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa Học Kỹ Thuật, Hà Nội, trang 684, 685 [7] Nguyễn Văn Đậu, Lê Thị Huyền, (2009), Các tritecpen Oleanan từ ổi Lantana camara L, Tạp chí Hóa Học, tập 47, số [8] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nhà xuất Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh [9] PGS.TS Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Các phương pháp tách chiết hợp chất hữu cơ, Nhà xuất Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh Tiếng anh [10] Barua AK, Chakrabarti P, Dutta SP, Mukherjee DK, Das BC (1971), Tetrahedron, 27:1141 [11] Deepak Ganjewala, Silviya Sam, Kishwar Hayat Khan (2008), “Biochemical compositions and antibacterial activities of Lantana camara plants with yellow, lavender, red and white flowers”, EurAsian Journal of BioSciences, 3, pp 69-77 [12] E.L Ghisalberti (2000), “Lantana camara L Verbenaceae”, Fitoterapia 71 pp 467-486 [13] Nayak BS, Raju SS, Ramsubhag A, 2008, “Investigation of wound healing activity of Lantana camara L” in Sprague dawley rats using a burn wound model, International Journal of Applied Research in Natural Products, Vol [14] Keh-Feng Huang and Kao-Wei Huang (2004), Constituents from the stems of Lantana camara (III), J Chin Med 15(2): 109-114 [15] Hidayat Hussain, Javid Hussain1, Ahmed Al-Harrasi, And Zabta Khan Shinwari, December (2011), Chemistry of some species genus lantana, Special Issue (Medicinal Plants: Conservation & Sustainable use), Pak J Bot, 43: pp 51-62 [16] Siddiqui BS, Raza SM, Begum S, Siddiqui S, Firdous S (1995), Phytochemistry, 38:681 [17] Yi Z, Zhang M, Ling B, Xu D, Ye J, “Inhibitory effects of Lantana camera and its contained phenolic compounds in Eichhornia crassipes growth” Trang web [18] Thuocchuabenh.vn [...]... ngâm bỏng gạo với dịch chiết hoa Bông ổi với các tỷ lệ khác nhau như sau: Cân 150 gram bỏng gạo ngâm với 450 ml dịch chiết hoa Bông ổi Cân 150 gram bỏng gạo ngâm với 150 ml dịch chiết hoa Bông ổi Cân 150 gram bỏng gạo ngâm với 50 ml dịch chiết hoa Bông ổi Dịch đã ngấm, tiến hành vớt ra sấy khô và đóng gói, bảo quản Sau nhiều lần thử nghiệm, nhận thấy thuốc diệt chuột được sản xuất ở lần 1 cho hiệu quả... Đồng Hới Mẫu hoa tươi được hái vào ngày khô ráo, không mưa Hoa được hái khi đã nở, có mùi nồng, đã loại bỏ hoa bị sâu, rầy, hoa bị khô, hoa đã tàn Mẫu hoa sau khi hái đem đi xử lý sấy khô Hình 6a: Hoa tươi Hình 6b: Bột hoa sấy khô - Hoa Bông ổi được sấy khô ở nhiệt độ 50 oC, tán nhỏ thành dạng bột, bảo quản tránh ẩm mốc, tạp chất làm ảnh hưởng đến các chất có trong thành phần hoa Bông ổi, tránh các... khảo sát thành công thuốc diệt chuột theo cơ chế chống đông máu 2 Kiến nghị - Tiếp tục nghiên cứu theo hướng sâu hơn: chạy sắc kí cột để tách được các cấu tử Coumarin tinh khiết từ hoa Bông ổi, định lượng các chất chứa trong dịch chiết Có thể nghiên cứu mở rộng xác định thành phần các chất có trong lá, rễ của cây hoa Bông ổi so sánh với thành phần các chất có trong hoa Bông ổi Từ đó, sẽ lựa chọn được... nguyên liệu Sấy 50 oC Bột hoa bông ổi Ngâm etanol 95o, lọc Bã, bỏ Dịch Etanol Cô đặc thu hồi dung môi Cao Etanol Chiết N-hexan Dịch nước Dịch N-hexan Cô đặc dung môi Đo GC – MS xác định thành phần trong dịch chiết Ứng dụng sản xuất thuốc diệt chuột Hình 5: Quy trình thực hiện * Quy trình thực hiện [3, 6, 14, 16]: Cao N-hexan - Hoa của cây Bông ổi được thu vào tháng 11/2015, 01 /2016 tại cổng phụ Bệnh viện... Thiết bị - 18 Hoàng Quốc Việt - Cầu Giấy - Hà Nội Kết quả định lượng Coumarin của dịch chiết hoa Bông ổi được trình bày ở bảng 2 Bảng 2: Kết quả định lượng Coumarin trong dịch chiết n-hexan STT Thông số phân tích Đơn vị 3 1 Tỉ trọng dung dịch g/cm 2 Hàm lượng Coumarin %w/w 3.5 Ứng dụng sản xuất thuốc diệt chuột Kết quả phân Phương pháp thử tích 0,8113-0,819 51,03 nghiệm TCVN 189:1993 GC-MS 3.5.1 Quy... lấy chất từ hỗn hợp bằng dung môi để tách biệt, cô và tinh chế các cấu tử có trong hỗn hợp thành cấu tử riêng Có thể chiết từ hỗn hợp dung dịch hay từ chất rắn Phương pháp để chiết các Coumarin trong hoa Bông ổi là sử dụng chiết chất lỏng Chiết từ dung dịch là quá trình chuyển từ chất lỏng này sang chất lỏng khác Sự chuyển đó là tuân theo định luật phân bố chất tan giữa 2 hướng theo định luật phân... thì có kết quả dương tính với thuốc thử Nhóm 1 thấy có màu vàng xuất hiện chứng tỏ dịch hoa có chứa Coumarin Hình 7a: Dịch chiết hoa Hình 7b: Kết quả định tính Coumarin bằng NaOH 10% 3.2.2 Thuốc thử FeCl3 Cho vào ống nghiệm 0,5 ml dịch chiết, bổ sung thêm 0,25 ml dung dịch FeCl3 10% thì có kết quả dương tính với thuốc thử Ống nghiệm chuyển sang màu xanh thẫm chứng tỏ dẫn xuất Coumarin có nhóm - OH phenol... triển Khoa Học và Công Nghệ, tập 10, số 1 [5] Đỗ Huy Ích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiền, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2004), Viện Dược Liệu, Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam, tập I, Nhà xuất bản Khoa Học và Kỹ Thuật, trang 260 - 262 [6] GS.TS Đỗ Tất Lợi (1995), Những Cây Thuốc và Vị Thuốc Việt... Nam, Nhà xuất bản Khoa Học và Kỹ Thuật, Hà Nội, trang 684, 685 [7] Nguyễn Văn Đậu, Lê Thị Huyền, (2009), Các tritecpen Oleanan từ cây bông ổi Lantana camara L, Tạp chí Hóa Học, tập 47, số 2 [8] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nhà xuất bản Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh [9] PGS.TS Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Các phương pháp tách chiết hợp chất hữu cơ, Nhà xuất bản... tẩm dịch 3.5.2 Kết quả Đã thử nghiệm tại nhà và thu được xác chuột chết dưới dạng xuất huyết ở miệng Hình 10: Chuột chết sau khi ăn phải bỏng gạo tẩm dịch KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 1 Kết luận Qua quá trình nghiên cứu thực nghiệm, chúng tôi rút ra được một số kết luận sau: - Đã chiết tách được dịch chiết chứa các hợp chất hữu cơ có trong hoa Bông ổi và đã định tính được 22 chất có trong dịch chiết - Đã định
- Xem thêm -

Xem thêm: báo cáo tốt nghiệp 2016 SẢN XUẤT THUỐC CHUỘT TỪ HOA BÔNG ỔI, báo cáo tốt nghiệp 2016 SẢN XUẤT THUỐC CHUỘT TỪ HOA BÔNG ỔI, báo cáo tốt nghiệp 2016 SẢN XUẤT THUỐC CHUỘT TỪ HOA BÔNG ỔI

Mục lục

Xem thêm

Gợi ý tài liệu liên quan cho bạn

Từ khóa liên quan

Nạp tiền Tải lên
Đăng ký
Đăng nhập