áp dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao xác định hàm lượng lycopen trong một số loại quả và trong huyết thanh người

69 4 0
  • Loading ...
1/69 trang

Thông tin tài liệu

Ngày đăng: 23/11/2016, 03:41

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO NGUYỄN VĂN BÌNH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - NGUYỄN VĂN BÌNH CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ÁP DỤNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG LYCOPEN TRONG MỘT SỐ LOẠI QUẢ VÀ TRONG HUYẾT THANH NGƯỜI LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM 2011 Hà Nội – 2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN VĂN BÌNH ÁP DỤNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG LYCOPEN TRONG MỘT SỐ LOẠI QUẢ VÀ TRONG HUYẾT THANH NGƯỜI Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : GS.TS HÀ DUYÊN TƯ Hà Nội – 2011 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Bản luận văn tốt nghiệp “ Nghiên cứu phương pháp xác định hàm lượng lycopen huyết số thực phẩm sắc ký lỏng cao áp” công trình nghiên cứu thực cá nhân, hướng dẫn khoa học GS.TS Hà Duyên Tư Các số liệu, kết trình bày luận văn trung thực chưa công bố luận văn trước Tác giả Nguyễn Văn Bình PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Carotenoid nhóm sắc tố tự nhiên tạo màu vàng, da cam đỏ tổng hợp từ nhiều nguồn khác Các carotenoid chia làm hai nhóm: Nhóm thứ gồm hợp chất hydrocarbon caroten, lycopen, α-caroten, β-caroten Nhóm thứ hai gồm dẫn xuất hydrocarbon carotenoid xanthophyll, lutein, α-cryptoxanthin, zenxathin Các sắc tố có nhiều chức sinh học quan trọng có vai trò quan trọng việc ngăn ngừa số bệnh ngăn ngừa ung thư, phòng chống bệnh tim mạch, tăng cường đáp ứng miễn dịch Ngày nay, carotenoid sử dụng nhiều làm dược phẩm, chất bổ sung dinh dưỡng, chất tạo màu thực phẩm, mỹ phẩm Trong hợp chất carotenoid lycopen quan tâm tác dụng có lợi cho sức khỏe độ an toàn sử dụng Lycopen hợp chất thuộc nhóm carotenoid có nhiều loại quả, củ, rau Cơ thể người tự tổng hợp mà có khả hấp thụ từ thực phẩm qua dược phẩm có chứa lycopene Lycopen chất chống oxy hóa tự nhiên cần thiết cho tế bào sống, đảm bảo tính bền màng tế bào, ngăn cản tác nhân oxy hóa tạo trình trao đổi chất, đặc biệt giúp cho thể ngăn ngừa chữa trị bệnh mạn tính không lây tim mạch, ung thư, bệnh liên quan đến tuổi già Hiện nay, lycopen sản xuất tạo sản phẩm thương mại nhiều đường tổng hợp đường hóa học, lên men thu nhận từ sinh khối vi sinh vật Những phương pháp tổng hợp đòi hỏi đầu tư lớn nhiều thời gian Do với nhu cầu lycopen cho sản xuất công nghiệp việc thu nhận lycopen từ nguồn thự vật rau, củ, có vai trò quan trọng thuận lợi lớn với nước có nông nghiệp phát triển Việt Nam độ an toàn sử dụng Chính vậy, việc nghiên cứu hàm lượng lycopen thực phẩm huyết cần thiết để xác định, chế biến bổ sung chúng vào thể nhằm giúp thể có sức khỏe tối ưu Hiện nay, có nhiều phương pháp phân tích hàm lượng lycopen thực phẩm huyết tiến hành bao gồm sắc ký lớp mỏng sắc ký lỏng cao áp Để định tính đánh giá cấu trúc lycopen, phương pháp phổ biến quang phổ UV-VIS, phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) khối phổ Ngoài ra, phương pháp xác định điện hóa (ECD) công cụ hữu ích, thay cho phương pháp HPLC (UV-VIS) thông thường, trường hợp đòi hỏi độ nhạy cao (cỡ 10-15) cỡ mẫu nhỏ Tuy nhiên, ngày phương pháp sắc ký lỏng cao áp dùng phổ biến để xác định lượng lycopene huyết thực phẩm đặc tính mà chúng mang lại Xuất phát từ vấn đề trên, đề tài : “Áp dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao xác định hàm lượng lycopen số loại huyết người ” tiến hành nhằm tăng cường khả ứng dụng lycopen việc sản xuất thực phẩm chức 1.2 Mục đích nghiên cứu Xác định hàm lượng lycopen mẫu huyết phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 1.3 Yêu cầu - Khảo sát điều kiện phân tích phù hợp máy sắc ký lỏng hiệu nâng cao - Xác định hàm lượng lycopen mẫu - Xác định hàm lượng lycopen huyết người trước sau bổ sung viên nang dầu gấc PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 CAROTENOID 2.1.1 Khái niệm Năm 1831, Wackenroder cô lập caroten từ cà rốt, 1837 Berzelius đặt tên cho sắc tố màu vàng xanthophyll ông chiết xuất từ mùa thu Cấu trúc hóa học carotenoit Kauren (1948) Kuhn (1954) phát hiện, việc tổng hợp nhân tạo β-caroten lycopen thực lần vào năm 1950 phòng thí nghiệm Kauren Kể từ carotenoid trở thành đối tượng quan tâm nghiên cứu liên ngành hóa học, sinh học, y học, vật lí học nhiều ngành khoa học khác Carotenoid dạng sắc tố hữu có tự nhiên thực vật loài sinh vật quang hợp khác tảo, vài loài nấm vài loài vi khuẩn Hiện người ta tìm 600 loại carotenoid, xếp theo hai nhóm xanthophyll caroten Trong có 50 loại carotenoid diện thực phẩm, huyết người có khoảng 15 loại tìm thấy đóng vai trò quan trọng đời sống người [38] Carotenoid phát nhờ nghiên cứu chuyên gia dinh dưỡng sức khỏe, họ nhận thấy chế độ dinh dưỡng giàu trái rau xanh có liên quan với giảm nguy nhiều bệnh, người ăn chay mắc bệnh ung thư so với người ăn rau quả, trái Nhờ suy luận họ tiến hành nghiên cứu thành phần loại thực phẩm này, họ phát chúng giàu carotenoid nhiều dưỡng chất quan trọng khác Hàng trăm nghiên cứu khẳng định lợi ích trái hoa quả, hàng trăm nghiên cứu khác chứng minh vai trò ích lợi carotenoid thể Hàng loạt nghiên cứu khám phá ăn thực phẩm chứa nhiều carotenoid giảm nguy nhiều loại ung thư, nguyên nhân hàng đầu gây tử vong Carotenoid làm giảm thấp nguy bệnh tim mạch, giảm nồng độ cholesterol máu, giảm tác hại ánh nắng mặt trời da,… Tăng cường sử dụng thức ăn giàu carotenoid giúp giảm nguy nhiều bệnh lý khác Carotenoid có hầu hết loại trái rau quả, đặc biệt với loại trái có màu đỏ gấc, cà chua , ớt, dưa hấu … Bảng 2.1 : Thành phần carotenoid số trái rau (µg/100g mẫu tươi) [2] Thành phần Thực phẩm Lutein Lycopen α-caroten β-caroten Rau muống 867.9 1531.0 Rau ngót 5419.3 Cà chua 27.4 Cà rốt 93.8 3036.0 6597.1 Ớt vàng 120.5 3270.6 3606.7 48.1 265.2 572.9 2750.0 Đu đủ 4.0 9.5 Dưa hấu 13.0 2000.5 6810.1 647.8 402.7 Cam 12.0 29.1 Quýt 21.4 43.0 62.8 1633.1 39.2 Mận 2.1.2 Phân loại carotenoid Carotenoid tên riêng chất mà tên nhóm hoạt chất có công thức tương tự chế tác dụng bảo vệ thể tương tự Carotenoid phân thành hai nhóm xanthophyll caroten Trong nhóm xanthophyll có chứa gốc hydroxyl ( - OH ) kết hợp với acid béo thành carotenol este β - cryptoxanthin, lutein zeaxanthin…, nhóm caroten gồm α - caroten, β - caroten, lycopen … [2],[38] ™ Nhóm caroten loại hydratcacbon chưa bão hòa, không tan nước, tan lipit dung môi hữu Phần trung tâm phân tử gồm 18 nguyên tử cacbon hình thành hệ thống liên kết đơn, đôi xen kẽ, có nhóm CH3 mạch nhánh, carotenoid quen thuộc với Lycopen chiếm 80% chế độ ăn uống người Mỹ, sau β - carotene chủ yếu tiêu thụ dạng thực phẩm từ nước sốt cà chua, pizza ketchup [3],[38] + β - caroten loại carotenoid phổ biến tìm thấy thực phẩm tiền thân chủ yếu vitamin A Có màu vàng, diện nhiều cà rốt, bí ngô, đào, khoai lang đỏ loại trái có màu vàng loại rau có màu xanh đậm Chính màu vàng β - caroten làm cho màu xanh diệp lục tố trở nên đậm loại rau giàu β - caroten [40] Nhiều nghiên cứu chứng minh vai trò ích lợi β - caroten hệ miễn dịch, ngăn ngừa nhiều loại ung thư giảm tác hại ánh nắng mặt trời [5],[40] Khi hấp thu vào thể, β - caroten chuyển hoá thành vitamin A để giúp bảo vệ niêm mạc mắt, tham gia vào phản ứng nhìn mắt tăng cường khả miễn dịch thể Trẻ em thiếu vitamin A dễ bị mù mắt ốm yếu dễ mắc bệnh nhiễm trùng Bản thân β - caroten chất chống ôxy hoá mạnh, giúp khử gốc tự thể ngăn ngừa bệnh mãn tính bảo vệ da tránh tác hại ánh nắng mặt trời, hạ thấp nguy mắc số loại ung thư, góp phần giảm nồng độ cholesterol máu nguy số bệnh tim mạch liên quan [40] Hình 2.1 Công thức cấu trúc β - carotene + Lycopen loại carotenoid có màu đỏ, có nhiều hoa rau màu đỏ cà chua, dưa hấu, ổi đỏ Các nhà khoa học để ý đến Lycopen thấy có liên quan với bệnh ung thư tiền liệt tuyến nam giới Nhóm đàn ông ăn nhiều cà chua có tỷ lệ ung thư tiền liệt tuyến thấp nhiều so với nhóm ăn cà chua thực đơn hàng ngày, tiền liệt tuyến ung thư hàng đầu gây tử vong đàn ông nên phát tạo hội cho đàn ông phòng ngừa bệnh tật mình, có khả ức chế tế bào ung thư mạnh β - caroten [5] Lycopen chứng minh có tác dụng bảo vệ bệnh tim mạch, giúp làm đẹp da, ngăn ngừa nguy loãng xương [6,8] Hình 2.2 Công thức cấu trúc Lycopen ™ Nhóm xanthophyll Là nhóm sắc tố màu vàng sẫm, công thức phân tử chung phân tử C40H56On (n từ 1-6) Xanthophyll thực vật bậc cao, tảo kèm với caroten + Lutein Zeaxanthin lại khoe sắc vàng rực rỡ Lutein Zeaxanthin có nhiều rau có màu vàng, rau cải xoăn, bó xôi chứa nhiều Lutein, cam, bắp ngọt, hạt tiêu lại chứa nhiều Zeaxanthin Chúng hai carotenoid diện mắt người nên chúng gọi carotenoid võng mạc Lutein Zeaxanthin tham gia vào cấu trúc điểm vàng võng mạc mắt bảo vệ điểm vàng khỏi thương tổn ôxy hoá Nhờ có Lutein Zeaxanthin mà trình thoái hoá điểm vàng chứng đục thuỷ tinh thể bị chậm lại Nhóm người ăn nhiều thực phẩm chứa Lutein Zeaxanthin có thị lực sức khoẻ mắt tốt nhiều so với nhóm ăn hai carotenoid nói [7] Lutein dẫn xuất αcaroten ( lutein theo tiếng Latinh luteus có nghĩa màu vàng ), Lutein có nhiều lòng đỏ trứng gà Trong đồng phân lutein (isomer) lutein có fucoxantin (C40H56O6) Xanthophyl chủ yếu tảo nâu Zeaxantin dẫn xuất β-caroten, Zeaxantin lần chiết từ hạt ngô (Zea mays), từ người ta đặt tên cho sắc tố Hình 2.3 Công thức cấu trúc Lutein Zeaxanthin 1.1.3 Tính chất carotenoid Đặc tính cấu trúc định tính chất lí hóa carotenoit : Tất carotenoit có lượng lớn gốc ghét nước, điều định tính ghét nước hợp chất này, chúng không tan nước mà tan lipit dung môi hữu Một số carotenoit hoàn toàn nhóm phân cực, chiết từ dung môi không phân cực (benzen, ete dầu hỏa…) hay phân cực (ete etylic, rượu, axeton…) Trong lục lạp, carotenoit nằm phần ưa lipit liên kết với lipit, protein Một hiểu biết tốt số tính chất vật lý hóa học carotenoids cho phép người phân tích xác định carotenoids cách dễ dàng độ tin 1.1.3.1 Sự hấp thụ ánh sáng màu sắc Với cấu trúc phân tử chứa chuỗi polyen liên hợp hấp thụ ánh sáng chromophonre cung cấp cho carotenoid mầu sắc hấp dẫn giúp cho quang phổ hấp thụ có sở để xác định định lượng Màu sắc cho phép nhà phân tích theo dõi bước khác carotenoid việc phân tích [38] carotenoid hấp thụ mạnh xạ khả kiến khoảng 400 ÷ 600 nm, tạo màu sắc từ vàng đến đỏ cam Hầu hết carotenoid hấp thụ cực đại ba bước sóng, tạo thành phổ có peak, pic có cường độ mạnh Nhìn bảng phân tích kết phần khác dưa hấu, ta thấy phần dưa hấu ( phần có màu trắng) có hàm lượng lycopen thấp 0.018mg/100g , phần chủ yếu có màu trắng dục có phần nhỏ có màu đỏ Từ kết ta thấy dưa phần có mầu đỏ nơi cho hàm lượng lycopen nhiều hàm lượng lycopen gần điểm trung tâm hàm lượng cao phần lõi hàm lượng lycopen chiếm 52% tổng số lycopen, phần chiếm 47%, phần chiếm 1% Hình 4.7 Sắc đồ phân tích mẫu dưa hấu 4.3 Xác định hàm lượng lycopen huyết Các mẫu huyết lấy từ người có biểu bệnh nhiễm mỡ máu có giới tính, có độ tuổi từ 18 tuổi đến 45 tuổi, tiến hành lấy mẫu địa điểm ngày 20 người Kết thẩm định 20 mẫu huyết để xác định nồng động lycopen có máu trước bổ sung lycopen sau bổ sung lycopen tháng thể bảng 4.8 52 Bảng 4.8: Kết phân tích hàm lượng lycopen huyết tương STT code Nồng độ lycopen (µM) Trước bổ sung Sau bổ sung 01 0,13 0,65 02 0,18 1,04 03 0,19 3,26 04 0,17 0,85 05 0,15 0,97 06 0,27 1,1 07 0,21 1,18 08 0,25 0,72 09 0,26 3,65 10 10 0,20 2,44 11 11 0,14 1,63 12 12 0,22 0,84 13 13 0,14 0,67 14 14 0,24 1,35 15 15 0,22 1,92 16 16 0,23 0,92 17 17 0,19 1,16 18 18 0,15 1,22 19 19 0,24 0,82 20 20 0,20 0,83 53 Hàm lượng lycopen (µM) 3.5 2.5 1.5 0.5 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Mẫu phân tích Trước bổ sung Lycopen Sau bổ sung Lycopen Hình 4.8 : Biểu đồ so sánh nồng độ lycopen trước sau bổ sung Bệnh vữa xơ động mạch với biểu lâm sàng suy mạch vành, đột tử, nhồi máu tim, nhồi máu não trước gặp, có xu hướng tăng nhanh theo nhịp độ phát triển xã hội Nguyên nhân bệnh vữa xơ động mạch chủ yếu rối loạn lipit máu Lycopen chất có khả ngăn ngừa phòng chống rối loại lipit máu Để đánh giá khả ngăn ngừa phòng chống rối loại lipit máu cách xác định hàm lượng lycopen có mặt huyết người dưa vào kết phân tích bổ sung hàm lượng lycopen ta thấy Hàm lượng lycopen huyết chưa cho uống bổ sung lycopen trung bình thấp thể qua bảng 4.8, sau cho uống bổ sung lycopen hàm lượng lycopen huyết tăng không ổn định, không ổn định thể có khả hấp thụ khác nhau, không độ tuổi, trọng lượng thể khác Dựa kết nghiên cứu ta thấy để ngăn ngừa bệnh rối loại lipit máu việc sử dụng thực phẩm có chứa hàm lượng lycopen cao cà chua, dưa hấu, gấc … tốt cho sức khỏe 54 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Sau tiến hành tách chiết phân tích hàm lượng lycopen mẫu huyết người kết sau: - Kết khảo sát điều kiện phân tích phù hợp để định lượng lycopen sau: + Đường chuẩn lycopen với phương trình y = 49209x + 12200 hệ số tương quan R2=0.9999 + Giới hạn phát (LOD) phân tích Lycopen HPLC 0.05 ppm Giới hạn định lượng (LOQ) = 3.3 x LOD = 3.3 x 0.05 = 0.165 ppm + Hệ số biến thiên (RSD) 2.11% nằm khoảng – 10% nên phương pháp phân tích có độ tin cao, Độ thu hồi phương pháp 93,5% - Kết phân tích hàm lượng lycopen số sau: + Trong mẫu phân tích, hàm lượng lycopen mẫu khác cụ thể mẫu dưa hấu có hàm lượng lycopen cao 1.406 mg/100g, đu đủ 0,269mg/100g, lưu 0,059mg/100g, long đỏ 0,03mg/100g + Phân tích hàm lượng lycopen giống dưa hấu cho hàm lượng lycopen khác nhau, khác hàm lượng lycopen giống dưa hấu phụ thuộc vào giống dưa, điều kiện trồng trọt, vào vị trí địa lý cụ thể giống dưa hấu Thái Lan trồng Sapa, Lào Cai có hàm lượng cao 1.402mg/100g, giống dưa hấu TN755 trồng Hải Dương cho hàm lượng 1.344mg/100g, giống dưa hấu Hắc mỹ nhân trồng Đại Từ, Thái Nguyên có hàm lượng lycopen thấp 1.285mg/100g + Hàm lượng lycopen phân bố khác dưa hấu cụ thể phần cho hàm lượng lycopen cao phần lõi 1.377mg/100g, tiếp đến phần 1.244mg/100g, phần vỏ 0.018mg/100g 55 - Kết phân tích hàm lượng lycopen huyết trước sau bổ sung viên nang dầu gấc sau: + Khi chưa bổ sung chế phẩm lycopen hàm lượng lycopen huyết người tương đối đồng không cao, hàm lượng lycopen trung bình 20 mẫu phân tích 0,20 µM + Sau bổ sung chế phẩm lycopen hàm lượng lycopen huyết tăng lên hàm lượng lycopen huyết không đều, mẫu cho hàm lượng lycopen cao (mẫu 9) 3,65 µM thấp ( mẫu 1) 0,65 µM Vậy từ kết phân tích ta thấy, để ngăn ngừa phòng chống bệnh lipit máu bổ sung thực phẩm giàu hàm lượng lycopen cà chua, dưa hấu, gấc vào bữa ăn cần thiết 5.2 Kiến nghị Để xây dựng sở liệu carotenoid nói chung lycopen nói riêng thực phẩm Việt Nam, cần thiết phải mở rộng nghiên cứu nhiều đối tượng rau, thực phẩm thông dụng đặc biệt đối tượng sắn có giá thành thấp Tiếp tục nghiên cứu sản xuất sản phẩm thực phẩm có nguồn gốc từ rau, có chứa hợp chất có tác dụng tốt cho phòng chống bệnh Những sản phẩm sử dụng phổ biến cạnh tranh với sản phẩm nhập ngoại 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO A Tiếng việt Nguyễn Văn Ri (2004).Chuyên đề phương pháp tách chất ĐH KHTN-ĐH Quốc gia Hà Nội Lê Hồng Dũng (2004) Áp dụng phương pháp sắc ký lỏng cao áp xác định số carotenoid quan trọng thực phẩm, Viện dinh dưỡng Phạm Luận (1993) Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu cao, Đại học Quốc gia Hà Nội Hoàng Thị Huệ An (2009), Nghiên cứu định lượng Astaxanthin carotenoit kèm đối tượng thuỷ sản phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao, Viện khoa học công nghệ Việt Nam B.Tiếng anh Joseph Levy, Emili Bosin (1995) Lycopene is a more potent inhibitor of human cancer cell proliferation than either α-carotene or β-carotene Dr A Venket Rao, University of Toronto (2007).Tomatoes, Lycopene & Human Health Preventing chronic diseases Mares-Perlman JA, Fisher AI, Klein R, Palta M, Block G, Millen AE, Wright JD (2001) Lutein and zeaxanthin in the diet and serum and their relation to agerelated maculopathy in the third national health and nutrition examination survey Am J Epidemiol Mar 1;153(5):424-32 Samuel E Cox Department of Horticulture ( 2001) Lycopene analysis and horticultural attributes of tomatoes Susanne Rath, Ph.D., and reviewed by Zofia Olempska-Beer, Ph.D, and Paul M Kuznesof, Ph.D (2008) Lycopene extract from tomato 10 Leticial G Rao, Emma Guns, A Venket Rao ( 2003 ) Lycopene: Its role in human health and disease 11 Am J Epidemiol (2002) Serum Lycopene, Other Serum carotenoids, and Risk of Prostate Cancer in US Blacks and Whites Vol.155, No.11 57 12 Lidia María Ravelo-Pérez, Javier Hernández-Borges, Miguel Ángel RodríguezDelgado, Teresa Borges-Mique (2007) Spectrophotometric Analysis of Lycopene in Tomatoes and Watermelons 13 Bone, R.A., Landrum, J.T., Dixon, Z., Chen, Y and Llerena,C.M (2000) Lutein and zeaxanthin in the eyes, serum and diet of human subjects Experimental Eye Research 71, 239-245 14 Giovanucci, E., Rimm, E.B., Stampfer, M.J and Willett, W.C (2002) A prospective study of tomato products, lycopene and prostate cancer risk Journal of the National Cancer Institute 94, 391-398 15 Rao.A.V, Rao L.G (2007) "Carotenoids and human health" Pharmacol Res 55 (3): 207–16 16 Amany M B, Ahmed M Gaafar and Shaker M Arafat (2008) Tomato lycopene is a natural antioxidant and can alleviate hypercholesterolemia 17 Agarwal S, Rao AV (1998) Tomato lycopene and low density lipoprotein oxidation: A human dietary intervention study Lipids 33(10):981-984 18 Barua AB, Furr HC.(1992) Extraction and analysis by HPLC of carotenoids in human serum In: Methods in Enzymology, Vol 213 Academic Press, Inc pp 273281 19 Rao A.V., Honglei Shen (2002), “Effect of low dose lycopene intake on lycopene bioavailability and oxidative stress”, Nutrition research, 22, 1125-1131 20 Halim, Yuwana; Schwartz, Steven J.; Francis, David; Baldauf, Nathan A.; Rodriguez-Saona, Luis E Direct determination of lycopene content in tomatoes (Lycopersicon esculentum) by attenuated total reflectance infrared spectroscopy and multivariate analysis Journal of AOAC International, September 1, 2006 21 Dane Bicanic, Darko Dimitrovski, Svjetlana Luterotti, Ksenija Marković, Charlotte van Twisk, Josephus G Buijnsters, and Otto Dóka.(2009) Correlation of trans-Lycopene Measurements by the HPLC Method with the Optothermal and Photoacoustic Signals and the Color Readings of Fresh Tomato Homogenates 58 22 Rao AV & Agarwal S Role of lycopene as antioxidant carotenoid in the prevention of chronic diseases; A review Nutr Res 1999; 19: 305-323 23 Porrini1 M & Riso P Lymphocyte Lycopene Concentration and DNA Protection from Oxidative Damage Is Increased in Women after a Short Period of Tomato Consumption J Nutr 2000; 130:189–192 24 Colditz GA, et al Increased green and yellow vegetables intake and lowered cancer death in an elderly population Am J Clin Nutr 1985,41: 32-36 25 Kathy J, et al Selenium, lycopene, a-tocopherol, β-carotene, retinol, and subsequent bladder cancer Cancer Res 1989; 49: 6144-6148 26 Giovannucci E, et al Intake of carotenoids and retinol in relation to risk of prostate cancer J Natl Cancer Inst 1995; 87: 1767-1776 27 L A Cohen A Review of Animal Model Studies of Tomato Carotenoids, Lycopene, and Cancer Chemoprevention 2002; 227(10): 864 – 868 28 Forneli F, et al The influence of lycopene on the proliferation of human breast cell line (MCF-7) Toxicol in vitro 2007; 21: 217-223 29 Mossine VV, et al Interaction of tomato lycopene and ketosamine against rat prostate tumorigenesis Cancer Res 2008; 68: 4384-4391 30 Fuhrman B, et al Hypocholesterolemic effect of lycopene and beta-carotene is related to suppression of cholesterol synthesis and augmentation of LDL receptor activity in macrophages Biochem Biophys Res Commun 1997; 233:658-62 31 Rao AV Lycopene, tomatoes, and the prevention of coronary heart disease Exp Biol Med 2002 Nov ; 227(10) : 908-13 32 Arab L & Steck S Lycopene and cardiovascular disease Am J Clin Nutr 2000; 71(suppl): 1691S–1695S 33 Rissanen T, et al Lycopene, atherosclerosis, and coronary heart disease Exp Biol Med 2002; 277: 900-907 34 Hughes DA Effects of carotenoids on human immune function Proceedings of the Nutrition Society 1999; 58: 713-718 59 35 Porrini1 M & Riso P Lymphocyte Lycopene Concentration and DNA Protection from Oxidative Damage Is Increased in Women after a Short Period of Tomato Consumption J Nutr 2000; 130:189–192 36 Clinton SK, et al Cis-trans lycopene isomers, carotenoids, and retinol in the human prostate Cancer Epidemiol Biomarkers & Prev 1996; 5:823–833 37 Boileaul TW, et al Bioavailability of all-trans and cis-isomers of lycopene Exp Biol Med 2002; 227:914–919 38 Della B Rodriguez-Amaya (2001) A guide to carotenoid analysis in foods ILSI Press International Life Sciences Institute One Thomas Circle, N.W Washington, D.C ISBN 1-57881-072-8 39 Clin Chem 2000 Nov;46(11):1818-29 Influence of increased fruit and vegetable intake on plasma and lipoprotein carotenoids and LDL oxidation in smokers and nonsmokers Chopra M, O'Neill ME, Keogh N, Wortley G, Southon S, Thurnham DI 40 Robert M.Russel 2002 Beta-carotene and lung cancer 41 Ludwing Huber, (2007) Validation and qualification in analytical Laboratories second edition Informa Healhcare USA 60 MỤC LỤC PHẦN 1: MỞ ĐẦU PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 CAROTENOID 2.1.1 Khái niệm 2.1.2 Phân loại carotenoid 1.1.3 Tính chất carotenoid 1.1.3.1 Sự hấp thụ ánh sáng màu sắc 2.1.3.2 Độ hòa tan 2.1.3.3 Sự đồng phân hóa oxi hóa 2.1.3.4 Tính không bền 10 2.2 LYCOPEN 11 2.2.1 Nguồn gốc lycopen 11 2.2.2 Cấu trúc hóa học lycopen 13 2.2.3 Tác dụng lycopene với thể 15 2.2.3.1 Tác dụng kháng khối u 15 2.2.3.2 Tác dụng đề phòng bệnh tim mạch 16 2.2.3.3 Lycopene có tác dụng chống lão hoá 16 2.2.3.4 Lycopene chữa rối loạn lipid máu 17 2.2.3.5 Tác dụng điều tiết hệ thống miễn dịch 18 2.2.4 Ứng dụng lycopene 19 2.2.4.1 Trong thực phẩm 19 2.2.4.2 Trong y dược 20 2.2.5 Tình hình nghiên cứu lycopene 21 2.2.5.1 Tình hình giới 21 2.2.5.2 Tình nước 24 2.3 PHƯƠNG PHÁP HPLC 25 2.3.1 Khái quát chung 25 2.3.2 Pha động pha tĩnh HPLC 26 61 2.3.2.1 Pha tĩnh 26 2.3.2.2 Pha động 26 2.3.3 Đại lượng đặc trưng 27 2.3.4 Cách đánh giá peak 30 1.3.5 Cách tính kết 30 PHẦN 3: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 3.1 Vật liệu nghiên cứu 32 3.1.1 Mẫu lycopen 32 3.1.2 Hóa chất 32 3.1.3 Dung dịch chuẩn 33 3.1.4 Dụng cụ Thiết bị 33 3.2 Nội dung nghiên cứu 34 3.3 Phương pháp nghiên cứu 34 3.3.1 Phương pháp chiết tách Lycopen từ mẫu theo phương pháp AOAC 34 3.3.2 Phương pháp chiết tách lycopene từ huyết theo phương pháp AOAC 36 3.3.3 Phương pháp định tính định lượng lycopene 38 3.3.3.1 Xây dựng phương pháp HPLC định lượng lycopen 38 3.3.3.2 Xác định hàm lượng lycopen mẫu 41 3.3.3.3 Xác định hàm lượng lycopen mẫu huyết 41 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42 4.1 Khảo sát điều kiện phân tích 42 4.1.1 Tính phù hợp hệ thống HPLC 42 4.1.2 Khoảng tuyến tính đường chuẩn 43 4.1.3 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) 44 4.1.4 Độ lặp lại phương pháp 45 4.1.5 Độ thu hồi phương pháp 45 4.2 Xác định hàm lượng lycopen mẫu 47 4.2.1 Ảnh hưởng loại khác đến hàm lượng lycopen 47 4.2.2 Ảnh hưởng giống đến thay đổi hàm lượng lycopen 49 62 4.3.3 Ảnh hưởng vị trí khác đến thay đổi hàm lượng lycopen 51 4.3 Xác định hàm lượng lycopen huyết 52 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 55 5.1 Kết luận 55 4.2 Kiến nghị 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 A Tiếng việt 57 B.Tiếng anh 57 63 DANH MỤC CÁC HÌNH TRONG LUẬN VĂN Hình 2.1: Công thức cấu trúc β - carotene Error! Bookmark not defined Hình 2.2: Công thức cấu trúc Lycopen Error! Bookmark not defined Hình 2.3: Công thức cấu trúc Lutein Zeaxanthin Error! Bookmark not defined Hình 2.4: Sơ đồ giảm carotenoid Error! Bookmark not defined Hình 2.5: Công thức cấu trúc lycopen Error! Bookmark not defined Hình 2.6: Những đồng phân phổ biến Lycopen Error! Bookmark not defined Hình 2.7: Mô bên động mạch Error! Bookmark not defined Hình 2.8: Hình ảnh xơ vữa động mạch Error! Bookmark not defined Hình 2.9: Sơ đồ cấu tạo HPLC Error! Bookmark not defined Hình 3.1: sơ đồ chiết tách lycopen từ mẫu Error! Bookmark not defined Hình 3.2: Sơ đồ chiết tách lycopene từ huyết Error! Bookmark not defined Hình 4.1: Đường chuẩn lycopen Error! Bookmark not defined Hình 4.2: Sắc ký đồ chuẩn 0,165 ppm Error! Bookmark not defined Hình 4.3: Sắc đồ mẫu trắng thêm chuẩn lycopen Error! Bookmark not defined Hình 4.4: Sự thay đổi hàm lượng lycopen phụ thuộc vào loại Error! Bookmark not defined Hình 4.5: Sắc đồ mẫu dưa hấu Error! Bookmark not defined Hình 4.6: Biểu đồ thay hàm lượng lycopen phụ thuộc vào giống Error! Bookmark not defined Hình 4.7: Sắc đồ phân tích mẫu dưa hấu Error! Bookmark not defined Hình 4.8: Biểu đồ so sánh nồng độ lycopen trước sau bổ sung Error! Bookmark not defined 64 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT VIẾT TẮT TIẾNG ANH TIẾNG VIỆT λmax λmin AOAC Wavelenght of maximum absorption Wavelenght of minimum absorption Association of Oficial Analytical Chemistry Detectơ PDA Photodiode Array Detector GC Gas Chromatography HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation Spectroscopy HPLC High-Performance Liquid Chromatiography MS Mass Spectroscopy nm Nanometer NMR Nuclear Magnetic Resonance NP-HPLC Normal-Phase High-Peformance Liquid Chromatography Ppm Part per million RP-HPLC Reversed-Phase High-Performance Liquid Chromatography RSD Relative Standrad Deviation (CV) (Coefficienr of Variation) S/N Signal to Noise Ratio TLC Thin Layer chromatography UV-Vis Ultraviolet-Visible 65 Cực đại hấp thụ Cực tiểu hấp thụ Hiệp hội hóa phân tích phủ Detectơ dãy điốt quang Sắc ký khí Phổ HMBC Sắc ký lỏng hiệu cao Phổ khối lượng Nanomet Cộng hưởng rừ hạt nhân Sắc ký lỏng hiệu cao pha thường Phần triệu Sắc ký lỏng hiệu cao pha ngược Độ lệch chuẩn tương đối Hệ số biến thiên Tín hiệu/ nhiễu Sắc ký mỏng Từ ngoại khả kiến DANH MỤC CÁC BẢNG TRONG LUẬN VĂN Bảng 2.1 : Thành phần carotenoid số trái rau Bảng 2.2 : Hệ số hấp thụ riêng carotenoid [2] Bảng 2.3: Hàm lượng lycopen số thực phẩm[19] 13 Bảng Mẫu huyết lấy sau bổ sung lycopen 32 Bảng 4.1: Kết phân tích chuẩn Lycopen HPLC 42 Bảng 4.2: Sự phụ thuộc nồng độ diện tích tương ứng 43 Bảng 4.3 : Kết phân tích độ lặp lại 45 Bảng 4.4 : Kết phân tích độ thu hồi phương pháp 46 Bảng 4.5: Kết phân tích hàm lượng lycopen số 47 Bảng 4.6: Kết phân tích giống dưa hấu khác 49 Bảng 4.7: Kết phân tích phần dưa hấu 51 Bảng 4.8: Kết phân tích hàm lượng lycopen huyết tương 53 66
- Xem thêm -

Xem thêm: áp dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao xác định hàm lượng lycopen trong một số loại quả và trong huyết thanh người , áp dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao xác định hàm lượng lycopen trong một số loại quả và trong huyết thanh người , áp dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao xác định hàm lượng lycopen trong một số loại quả và trong huyết thanh người

Gợi ý tài liệu liên quan cho bạn

Từ khóa liên quan

Nạp tiền Tải lên
Đăng ký
Đăng nhập