TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ************* TRẦN THỊ KIỀU TRANG NGHIÊN CỨU TÁCH PROTEIN CÓ HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA TỪ DỊCH CHIẾT HẢI MIÊN Ircinia mutans THEO PHƯƠNG PHÁP KẾT TỦA BẰNG ETHANOL, ACETONE VÀ AMMONIUM SULFATE ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ CHẾ BIẾN THỦY SẢN Nha Trang, tháng năm 2016 TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ************* TRẦN THỊ KIỀU TRANG NGHIÊN CỨU TÁCH PROTEIN CÓ HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA TỪ DỊCH CHIẾT HẢI MIÊN Ircinia mutans THEO PHƯƠNG PHÁP KẾT TỦA BẰNG ETHANOL, ACETONE VÀ AMMONIUM SULFATE ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ CHẾ BIẾN THỦY SẢN GVHD: TS HUỲNH NGUYỄN DUY BẢO Nha Trang, tháng năm 2016 PHIẾU ĐÁNH GIÁ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Lớp: 54 CBTS Họ tên sinh viên: Trần Thị Kiều Trang Ngành : CÔNG NGHỆ CHẾ BIẾN THỦY SẢN Tên đề tài: “Nghiên cứu tách protein có hoạt tính chống oxy hóa từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans theo phương pháp kết tủa Ethanol, Acetone Ammonium sulfate.” Số trang:66 Số chương: 04 Số tài liệu tham khảo: 53 Hiện vật: đề tài tốt nghiệp, đĩa CD NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Kết luận: Nha trang, ngày 18 tháng năm 2016 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Ký ghi rõ họ tên) i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập Trường đại học Nha Trang đến em hoàn thành báo cáo tốt nghiệp Để hoàn thành báo cáo bên cạnh nổ lực không ngừng thân em nhận quan tâm giúp đỡ quý thầy cô người xung quanh Em xin chân thành cảm ơn: * Ban giám hiệu trường Đại học Nha trang, ban chủ nhiệm khoa công nghệ thực phẩm tạo điều kiện để em thực đề tài * Các thầy cô truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báu cho em Đặc biệt thầy TS.Huỳnh Nguyễn Duy Bảo người trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt thời gian thực đề tài * Các cán quản lí phòng thí nghiệm trung tâm thí nghiệm thực hành, anh chị học viên cao học bạn sinh viên giúp đỡ để em hoàn thành tốt báo cáo * Gia đình, bạn bè người xung quanh khuyến khích, động viên em vượt qua khó khăn suốt thời gian qua Trong suốt trình thực hoàn thành báo cáo cố gắng tránh khỏi thiếu sót mong nhận đóng góp ý kiến quý thầy cô bạn để báo cáo em hoàn chỉnh Em xin chân thành cảm ơn! Nha Trang, ngày 18 tháng năm 2016 Sinh viên thực Trần Thị Kiều Trang ii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC HÌNH vii LỜI MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài .2 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu hải miên 1.1.1 Nguồn gốc .4 1.1.2 Phân loại hải miên 1.1.3 Môi trường sống .5 1.1.4 Đặc điểm sinh học hải miên 1.1.5 Hình thức sinh sản hải miên 1.1.5.1 Sự sinh sản vô tính 1.1.5.2 Sự sinh sản hữu tính 1.1.6 Ứng dụng hải miên .10 1.1.7 Các hợp chất có hoạt tính sinh học hải miên .11 1.1.8 Tình hình nghiên cứu hải miên giới Việt Nam 13 1.1.8.1 Tình hình nghiên cứu hải miên giới 13 1.1.8.2 Tình hình nghiên cứu hải miên Việt Nam .15 1.2 Các hợp chất có hoạt tính chống oxy hóa hải miên 16 1.2.1 Quá trình oxy hóa, chất chống oxy hóa, khả chống oxy hóa protein 16 1.2.1.1 Quá trình oxy hóa 16 1.2.1.2 Chất chống oxy hóa 17 1.2.1.3 Khả chống oxy hóa protein 19 iii 1.2.2 Những hợp chất có hoạt tính chống oxi hóa hải miên 20 1.2.2.1 Nhóm hợp chất phenol .21 1.2.2.2 Nhóm hợp chất sterol .21 1.2.2.3 Nhóm hợp chất flavonoid .22 1.2.2.4 Nhóm hợp chất saponin 22 1.2.2.5 Nhóm hợp chất polypeptide 22 1.2.2.6 Nhóm hợp chất glycoside .23 1.3 Các phương pháp dùng để đánh giá hoạt tính chống oxi hóa 23 1.3.1 Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa dựa vào khả khử gốc tự DPPH 23 1.3.2 Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa dựa vào tổng lực khử 24 1.3.3 Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa lipid mô hình Fenton hệ Lipid/FeCl/H202 24 1.3.4 Đánh giá hoạt tính chống oxy hóa dựa vào khả khử hydroperoxide 25 1.3.5 Phương pháp Ferric Thiocyanate (FTC) .25 1.4 Các phương pháp định lượng protein 26 1.4.1 Định lượng protein theo phương pháp Biure 26 1.4.2 Định lượng protein phương pháp Lowry ( Biure cải tiến) 27 1.4.3 Định lượng protein theo phương pháp Bradford 27 1.4.4 Định lượng protein theo phương pháp quang phổ 28 1.5 Các kĩ thuật chiết tách hợp chất chống oxi hóa có hải miên .29 1.5.1 Nguyên lí chung 29 1.5.1.1 Phá vỡ tế bào 29 1.5.1.2 Chiết rút protein 29 1.5.2 Một số phương pháp chiết tách chất có hoạt tính sinh học hải miên 29 1.5.2.1 Chiết xuất với hỗ trợ siêu âm (Ultrasound-assisted extraction) 29 1.5.2.2 Chiết xuất chất lỏng áp suất cao (Pressurised liquid extraction) 30 1.5.2.3 Chiết xuất chất lỏng siêu tới hạn (Supercritical fluid extraction) 31 1.5.2.4 Chiết xuất với hỗ trợ vi sóng (Microwave-assisted extraction) 32 iv 1.6 Các phương pháp tinh chất có hoạt tính sinh học hải miên .33 1.6.1 Các loại tạp chất 33 1.6.2 Các phương pháp tinh protein 34 1.6.2.1 Kết tủa protein 34 1.6.2.2 Ly tâm 37 1.6.2.3 Thẩm tích 37 1.6.2.4 Phương pháp sắc ký lọc gel 39 1.6.2.5 Phương pháp sắc ký trao đổi ion 40 1.6.2.6 Phương pháp sắc ký lực 40 1.6.2.7 Làm khô bảo quản chế phẩm protein 40 2.1 Nguyên liệu hóa chất 42 2.1.1 Nguyên liệu 42 2.1.2 Hóa chất 42 2.2 Phương pháp nghiên cứu 42 2.2.1 Bố trí thí nghiệm chiết protein từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans theo điều kiện chiết tối ưu Võ thị Kim Thuyền ( 2015) 43 2.2.2 Bố trí thí nghiệm tách protein từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans muối ammonium sulfate 45 2.2.3 Bố trí thí nghiệm tách proein từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans ethanol acetone 47 2.2.4 Bố trí thí nghiệm thử nghiệm làm giàu protein phương pháp lọc li tâm qua màng kDa Amicon® Ultra-0.5 sấy chân không thăng hoa 48 2.3 Các phương pháp phân tích .50 2.3.1 Phương pháp phân tích khả khử gốc tự DPPH .50 2.3.2 Phương pháp phân tích tổng lượng khử .50 2.3.3 Phương pháp Lowry .50 2.4 Các máy móc, thiết bị sử dụng 50 2.5 Phương pháp thu thập xử lý số liệu thực nghiệm 50 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 51 v 3.1 Hàm lượng protein hoạt tính chống oxi hóa dịch chiết hải miên Ircinia mutans .51 3.2 Ảnh hưởng phương pháp kết tủa đến hàm lượng hoạt tính chống oxy hóa protein tách từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans 52 3.3 Ảnh hưởng phương pháp lọc li tâm qua màng kDa Amicon® Ultra-0.5 đến hàm lượng hoạt tính chống oxy hóa protein tách từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans theo phương pháp khác .54 3.4 Ảnh hưởng phương pháp sấy chân không thăng hoa đến hoạt tính chống oxi hóa protein tách từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans theo phương pháp kết tủa khác 58 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN .61 4.1 KẾT LUẬN 61 4.2 ĐỀ XUẤT KIẾN NGHỊ 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO .62 PHỤ LỤC vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT K í hiệu viết tắt Diễn giải DPPH : 2,2 diphenyl-1picrylhydrazyl DPPH-H : 2,2 diphenyl-1picrylhydrazine AS : Ammonium sulfate VTM C : Vitamin C CKTH : Chân không thăng hoa NL/DM : Nguyên liệu / dung môi vii DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1 Các kiểu xương gai hải miên Hình 1.2 Tổ chức thể hải miên Hình 1.3 Các kiểu hệ thống hút thoát nước hải miên Hình 1.4 Sơ đồ phản ứng chất chống oxy hóa gốc tự DPPH 23 Hình 1.5 Phản ứng Biure .26 Hình 1.6 Phản ứng lowry 27 Hình 1.7 Độ hòa tan protein biến thiên theo nồng độ muối 35 Hình 2.1 Hải miên Ircinia mutans 42 Hình 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm chiết protein từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans 43 Hình 2.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tách protein từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans muối ammonium sulfate 45 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tách protein từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans ethanol acetone .47 Hình 2.5 Bố trí thí nghiệm thử nghiệm làm giàu protein phương pháp lọc li tâm qua màng kDa Amicon® Ultra-0.5 sấy chân không thăng hoa 49 Hình 3.1 Hoạt tính khử gốc tự DPPH (a) tổng lực khử (b) dịch chiết từ hải miên Ircinia mutans Số liệu đồ thị giá trị trung bình lần thí nghiệm ± SD 51 Hình 3.2 Hiệu suất tách protein từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans phương pháp kết tủa ethanol, acetone ammonium sulfate Số liệu đồ thị giá trị trung bình lần thí nghiệm ± SD Các ký tự khác thể khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) .52 Hình 3.3 Hoạt tính khử gốc tự DPPH (a) tổng lực khử (b) protein kết tủa từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans phương pháp khác Số liệu đồ thị giá trị trung bình lần thí nghiệm ± SD Các ký tự khác thể khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0.05) 53 3.9 Tổng lực khử protein tách từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans theo phương pháp khác nhau, lọc li tâm qua màng kDa Amicon® Ultra-0.5 Đo 700nm Mẫu 0,2 Pha loãng ( lần) Lần Lần Lần Lần 0,3 0,4 0,5 Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Kết tủa AS 80% 100 0,154 0,159 0,155 0,238 0,24 0,232 0,347 0,349 0,348 0,416 0,414 0,413 Kết tủa acetone 10 0,098 0,099 0,101 0,141 0,139 0,145 0,189 0,187 0,190 0,261 0,258 0,262 Kết tủa ethanol 10 0,106 0,107 0,107 0,165 0,168 0,166 0,224 0,226 0,228 0,342 0,344 0,339 Tương đương số mg VTMC/ml trước pha loãng 0,2 0,3 0,4 0,5 Mẫu Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Kết tủa AS 80% 4,760 4,927 4,793 7,560 7,460 7,360 11,193 11,26 11,227 13,493 13,427 13,393 Kết tủa acetone 0,289 0,292 0,299 0,433 0,426 0,446 7,36 0,586 0,596 0,833 0,823 0,836 Kết tủa ethanol 0,316 0,319 0,319 0,513 0,523 0,516 0,709 0,716 0,723 1,102 1,109 1,093 TB Mẫu Kết tủa AS 80% Kết tủa acetone Kết tủa ethanol Lần Lần Lần TB ĐLC 0,2 2,414 0,293 0,637 0,3 3,730 0,435 1,034 ĐLC 0,4 5,613 0,592 1,432 0,5 6,723 0,831 2,203 0,2 0,043 0,005 0,004 Số mg VTM C tương ứng với 1mg protein Kết tủa AS80% Kết tủa ethanol 0,831 0,392 0,846 0,413 0,833 0,387 0,837 0,397 0,008 0,014 0,3 0,050 0,010 0,010 0,4 0,017 0,005 0,013 0,5 0,021 0,007 0,017 Kết tủa acetone 0,347 0,352 0,372 0,357 0,014 Bảng 3.10 Hàm lượng protein protein tách từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans theo phương pháp khác nhau, lọc li tâm qua màng 3k Da Amicon® Ultra-0.5 sấy chân không thăng hoa Mẫu Kết tủa AS 80% Kết tủa acetone Kết tủa ethanol Lần 0,693 0,562 0,646 Đo 750nm Lần 0,729 0,555 0,617 Lần 0,717 0,537 0,642 Hàm lượng protein có 1mg mẫu sấy Lần Lần Lần 0,697 0,725 0,74 0,542 0,534 0,512 0,607 0,602 0,617 TB 0,721 0,529 0,617 ĐLC 0,022 0,016 0,022 Bảng 3.11 Hoạt tính khử gốc tự DPPH protein tách từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans theo phương pháp khác nhau, lọc li tâm qua màng kDa Amicon® Ultra-0.5 sấy chân không thăng hoa Đo 517nm Pha loãng Mẫu ( lần) Mẫu đối chứng Kết tủa AS 80% 10 0.27 Kết tủa acetone 10 0.256 Kết tủa ethanol 10 0.270 Lần 0,234 0,231 0,245 0,2 Lần 0,234 0,233 0,236 Lần 0,229 0,235 0,237 Lần 0,187 0,214 0,216 0,3 Lần 0,195 0,219 0,220 Lần 0,187 0,212 0,222 Lần 0,152 0,189 0,198 0,4 Lần 0,158 0,189 0,202 Lần 0,155 0,190 0,196 Lần 0,124 0,175 0,163 0,5 Lần 0,136 0,176 0,165 Lần 0,127 0,171 0,162 Nồng độ DPPH bị khử (mM) Mẫu 0,2 0,3 0,4 0,5 Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Kết tủa AS 80% 0,147 0,147 0,168 0,339 0,307 0,339 0,483 0,458 0,470 0,597 0,548 0,585 Kết tủa acetone 0,102 0,094 0,086 0,172 0,172 0,18 0,274 0,274 0,271 0,332 0,327 0,348 Kết tủa ethanol 0,143 0,139 0,135 0,221 0,204 0,196 0,294 0,278 0,303 0,437 0,429 0,442 TB nồng độ DPPH bị khử(mM) ĐLC Mẫu 0,2 0,3 0,4 0,5 0,2 0,3 0,4 0,5 Kết tủa AS 80% 0,154 0,328 0,470 0,577 0,012 0,018 0,013 0,026 Kết tủa acetone 0,094 0,175 0,273 0,336 0,008 0,005 0,002 0,011 Kết tủa ethanol 0,139 0,207 0,292 0,436 0,004 0,013 0,013 0,007 Số mM DPPH bị khử 1mg protein Kết tủa AS 80% Kết tủa ethanol Kết tủa acetone Lần 2,097 1,555 1,091 Lần 2,123 1,505 1,085 Lần 2,345 1,577 1,134 TB 2,188 1,546 1,103 ĐLC 0,136 0,037 0,027 Bảng 3.12 Tổng lực khử protein tách từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans kết tủa phương pháp khác nhau, lọc li tâm qua màng 3kDa Amicon® Ultra-0.5 sấy chân không thăng hoa Đo 700nm 0,2 Mẫu 0,3 0,4 0,5 Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Kết tủa AS 80% 0,176 0,182 0,177 0,254 0,257 0,251 0,324 0,331 0,327 0,401 0,413 0,404 Kết tủa acetone 0,103 0,107 0,106 0,176 0,164 0,174 0,239 0,238 0,245 0,3 0,302 0,305 Kết tủa ethanol 0,104 0,101 0,102 0,191 0,182 0,182 0,232 0,231 0,235 0,292 0,305 0,301 Tương đương số mg VTMC /ml 0,2 Mẫu 0,3 0,4 0,5 Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lần Kết tủa AS 80% 0,055 0,057 0,055 0,081 0,082 0,08 0,104 0,107 0,105 0,131 0,134 0,131 Kết tủa acetone 0,031 0,032 0,032 0,055 0,056 0,054 0,076 0,076 0,078 0,096 0,097 0,098 Kết tủa ethanol 0,029 0,03 0,059 0,057 0,057 0,074 0,073 0,075 0,094 0,089 0,092 0,031 TB ĐLC Mẫu 0,2 0,3 0,4 0,5 0,2 0,3 0,4 0,5 Kết tủa AS 80% 0,056 0,081 0,105 0,132 0,001 0,001 0,002 0,002 Kết tủa acetone 0,032 0,055 0,077 0,097 0,001 0,001 0,001 0,001 Kết tủa ethanol 0,03 0,058 0,074 0,092 0,001 0,001 0,001 0,003 Số mg VTM C tương ứng với 1mg protein Kết tủa AS 80% Kết tủa ethanol Kết tủa acetone Lần 0,567 0,354 0,313 Lần 0,602 0,342 0,315 Lần 0,577 0,352 0,319 TB 0,582 0,349 0,316 ĐLC 0,018 0,006 0,003 Phụ lục Kết phân tích số liệu phần mềm R 4.1 Hiệu suất tách protein từ dịch chiết hải miên Ircinia mutan kết tủa ethanol, acetone ammonium sulfate bão hòa 80% > group group hieusuat c(79.736,78.270,84.406,46.08,46.25,45.0,61.095,62.173,57.157) > data attach(data) The following objects are masked _by_ GlobalEnv: group, hieusuat > analysis anova(analysis) Analysis of Variance Table Response: hieusuat Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) group 1860.2 930.1 157.65 6.512e-06 *** Residuals 35.4 5.9 Signif codes: ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ > pairwise.t.test(hieusuat,group,p.adj="bonferroni") Pairwise comparisons using t tests with pooled SD data: hieusuat and group 2 6.3e-06 0.00014 0.00105 P value adjustment method: bonferroni > res TukeyHSD(res) Tukey multiple comparisons of means 95% family-wise confidence level Fit: aov(formula = hieusuat ~ group) $group diff lwr upr p adj 2-1 -35.02733 -41.112430 -28.94224 0.0000048 3-1 -20.66233 -26.747430 -14.57724 0.0001130 3-2 14.36500 8.279903 20.45010 0.0008589 > group group hoattinh data attach(data) The following objects are masked _by_ GlobalEnv: group, hoattinh > analysis anova(analysis) Analysis of Variance Table Response: hoattinh Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) group 10.0705 5.0352 722.63 7.067e-08 *** Residuals 0.0418 0.0070 Signif codes: ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ > pairwise.t.test(hoattinh,group,p.adj="bonferroni") Pairwise comparisons using t tests with pooled SD data: hoattinh and group 2 4.5e-07 8.6e-08 0.00035 P value adjustment method: bonferroni > res TukeyHSD(res) Tukey multiple comparisons of means 95% family-wise confidence level Fit: aov(formula = hoattinh ~ group) $group diff lwr upr p adj 2-1 -1.8820000 -2.0911217 -1.6728783 0.0000006 3-1 -2.4833333 -2.6924551 -2.2742116 0.0000001 3-2 -0.6013333 -0.8104551 -0.3922116 0.0002893 4.3 Tổng lực khử protein tách từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans kết tủa ethanol, acetone ammonium sulfate bão hòa 80% > > group group hoattinh data attach(data) The following objects are masked _by_ GlobalEnv: group, hoattinh > analysis anova(analysis) Analysis of Variance Table Response: hoattinh Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) group 0.67152 0.33576 548.13 1.613e-07 *** Residuals 0.00368 0.00061 Signif codes: ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ > pairwise.t.test(hoattinh,group,p.adj="bonferroni") Pairwise comparisons using t tests with pooled SD data: hoattinh and group 2 1.5e-05 1.5e-07 5.9e-06 P value adjustment method: bonferroni > res TukeyHSD(res) Tukey multiple comparisons of means 95% family-wise confidence level Fit: aov(formula = hoattinh ~ group) $group diff lwr upr p adj 2-1 -0.3066667 -0.3686709 -0.2446624 1.24e-05 3-1 -0.6683333 -0.7303376 -0.6063291 2.00e-07 3-2 -0.3616667 -0.4236709 -0.2996624 4.40e-06 4.4 Hàm lượng protein protein tách từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans theo phương pháp khác nhau,trước sau lọc li tâm qua màng kDa Amicon® Ultra-0.5 > group group hamluong data attach(data) The following objects are masked _by_ GlobalEnv: group, hamluong > analysis anova(analysis) Analysis of Variance Table hoattinh ~ Response: hoattinh Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) group 0.67152 0.33576 548.13 1.613e-07 *** Residuals 0.00368 0.00061 Signif codes: ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ > pairwise.t.test(hamluong,group,p.adj="bonferroni") Pairwise comparisons using t tests with pooled SD data: hamluong and group < 2e-16 2.6e-07 3.5e-07 7.6e-05 0.0067 < < < < 2e-16 2e-16 2e-16 2e-16 9.8e-11 0.0025 3.6e-05 1.5e-09 9.2e-09 0.1720 P value adjustment method: bonferroni > res TukeyHSD(res) Tukey multiple comparisons of means 95% family-wise confidence level Fit: aov(formula = hamluong ~ group) $group 2-1 3-1 4-1 5-1 6-1 3-2 4-2 5-2 6-2 4-3 5-3 6-3 5-4 6-4 6-5 > diff 31.5336667 -2.4430000 2.3843333 -1.4443333 -0.8900000 -33.9766667 -29.1493333 -32.9780000 -32.4236667 4.8273333 0.9986667 1.5530000 -3.8286667 -3.2743333 0.5543333 lwr 30.9090398 -3.0676268 1.7597065 -2.0689602 -1.5146268 -34.6012935 -29.7739602 -33.6026268 -33.0482935 4.2027065 0.3740398 0.9283732 -4.4532935 -3.8989602 -0.0702935 upr 32.1582935 -1.8183732 3.0089602 -0.8197065 -0.2653732 -33.3520398 -28.5247065 -32.3533732 -31.7990398 5.4519602 1.6232935 2.1776268 -3.2040398 -2.6497065 1.1789602 p adj 0.0000000 0.0000002 0.0000003 0.0000582 0.0045803 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0017930 0.0000279 0.0000000 0.0000000 0.0934090 group, 4.5 Khả khử gốc tự DPPH protein tách từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans theo phương pháp khác nhau, trước sau lọc li tâm qua màng kDa Amicon® Ultra-0.5 > group group hoattinh data attach(data) The following objects are masked _by_ GlobalEnv: group, hoattinh > analysis anova(analysis) Analysis of Variance Table Response: hoattinh Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) group 28.7657 5.7531 875.88 6.084e-15 *** Residuals 12 0.0788 0.0066 Signif codes: ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ > pairwise.t.test(hoattinh,group,p.adj="bonferroni") Pairwise comparisons using t tests with pooled SD data: hoattinh and group 3.7e-09 3.3e-11 2.5e-14 1.2e-12 1.1e-14 1.1e-05 5.9e-12 5.3e-09 1.7e-12 3.1e-10 1.5e-05 5.8e-11 8.9e-08 0.055 6.9e-09 P value adjustment method: bonferroni > res TukeyHSD(res) Tukey multiple comparisons of means 95% family-wise confidence level Fit: aov(formula = hoattinh ~ group) $group 2-1 3-1 4-1 5-1 6-1 diff -1.2616667 -1.8820000 -3.4396667 -2.4833333 -3.6780000 lwr -1.4839390 -2.1042723 -3.6619390 -2.7056057 -3.9002723 upr -1.0393943 -1.6597277 -3.2173943 -2.2610610 -3.4557277 p adj 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 3-2 4-2 5-2 6-2 4-3 5-3 6-3 5-4 6-4 6-5 -0.6203333 -2.1780000 -1.2216667 -2.4163333 -1.5576667 -0.6013333 -1.7960000 0.9563333 -0.2383333 -1.1946667 -0.8426057 -2.4002723 -1.4439390 -2.6386057 -1.7799390 -0.8236057 -2.0182723 0.7340610 -0.4606057 -1.4169390 -0.3980610 -1.9557277 -0.9993943 -2.1940610 -1.3353943 -0.3790610 -1.5737277 1.1786057 -0.0160610 -0.9723943 0.0000084 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000116 0.0000000 0.0000001 0.0332385 0.0000000 4.6 Tổng lực khử củaprotein tách từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans theo phương pháp khác nhau, trước sau lọc li tâm qua màng kDa Amicon® Ultra-0.5 > group group hoattinh data attach(data) The following objects are masked _by_ GlobalEnv: group, hoattinh > analysis anova(analysis) Analysis of Variance Table Response: hoattinh Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) group 3.5493 0.70987 1876.9 < 2.2e-16 *** Residuals 12 0.0045 0.00038 Signif codes: ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ > pairwise.t.test(hoattinh,group,p.adj="bonferroni") Pairwise comparisons using t tests with pooled SD data: hoattinh and group 7.1e-14 3.1e-09 3.0e-16 3.1e-13 < 2e-16 3.4e-11 4.6e-11 0.0018 1.6e-11 1.0e-14 4.6e-10 6.1e-15 5.2e-12 0.3891 2.2e-12 P value adjustment method: bonferroni > res TukeyHSD(res) Tukey multiple comparisons of means 95% family-wise confidence level Fit: aov(formula = hoattinh ~ group) $group 2-1 3-1 4-1 5-1 6-1 3-2 4-2 5-2 6-2 4-3 5-3 6-3 5-4 6-4 6-5 diff -0.75700000 -0.30666667 -1.19633333 -0.66833333 -1.23666667 0.45033333 -0.43933333 0.08866667 -0.47966667 -0.88966667 -0.36166667 -0.93000000 0.52800000 -0.04033333 -0.56833333 lwr -0.81033689 -0.36000355 -1.24967022 -0.72167022 -1.29000355 0.39699645 -0.49267022 0.03532978 -0.53300355 -0.94300355 -0.41500355 -0.98333689 0.47466311 -0.09367022 -0.62167022 upr -0.70366311 -0.25332978 -1.14299645 -0.61499645 -1.18332978 0.50367022 -0.38599645 0.14200355 -0.42632978 -0.83632978 -0.30832978 -0.87666311 0.58133689 0.01300355 -0.51499645 p adj 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0012848 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.1869043 0.0000000 > 4.7 Hàm lượng protein protein tách từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans theo phương pháp khác nhau, lọc li tâm qua màng 3kDa Amicon® Ultra-0.5 sấy chân không thăng hoa > group group hamluong data attach(data) The following objects are masked _by_ GlobalEnv: group, hamluong > analysis anova(analysis) Analysis of Variance Table Response: hoattinh Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) group 0.67152 0.33576 548.13 1.613e-07 *** Residuals 0.00368 0.00061 Signif codes: ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ > pairwise.t.test(hamluong,group,p.adj="bonferroni") Pairwise comparisons using t tests with pooled SD data: hamluong and group 2 0.00043 - 2e-05 0.00279 P value adjustment method: bonferroni > res TukeyHSD(res) Tukey multiple comparisons of means 95% family-wise confidence level Fit: aov(formula = hamluong ~ group) $group diff lwr upr p adj 2-1 -0.11200000 -0.1522920 -0.07170800 0.0003496 3-1 -0.19133333 -0.2316253 -0.15104134 0.0000159 3-2 -0.07933333 -0.1196253 -0.03904134 0.0022551 4.8 Khả khử gốc tự DPPH protein tách từ dịch dịch chiết hải miên Ircinia mutans theo phương pháp khác nhau, lọc li tâm qua màng kDa Amicon® Ultra-0.5, trước sau sấy chân không thăng hoa > group group hoattinh data attach(data) The following objects are masked _by_ GlobalEnv: group, hoattinh > analysis anova(analysis) Analysis of Variance Table Response: hoattinh Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) group 15.1473 3.02946 464.17 2.699e-13 *** Residuals 12 0.0783 0.00653 Signif codes: ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ > pairwise.t.test(hoattinh,group,p.adj="bonferroni") Pairwise comparisons using t tests with pooled SD data: P hoattinh and group 8.5e-11 5.7e-12 0.00031 2.0e-12 7.1e-06 0.16548 1.6e-12 3.7e-06 0.05339 1.00000 2.6e-13 2.0e-08 7.4e-06 0.00033 0.00081 value adjustment method: bonferroni > > > res TukeyHSD(res) Tukey multiple comparisons of means 95% family-wise confidence level Fit: aov(formula = hoattinh ~ group) $group 2-1 3-1 4-1 5-1 6-1 3-2 4-2 5-2 6-2 4-3 5-3 6-3 5-4 6-4 6-5 diff -1.73333333 -2.17800000 -2.37600000 -2.41633333 -2.81833333 -0.44466667 -0.64266667 -0.68300000 -1.08500000 -0.19800000 -0.23833333 -0.64033333 -0.04033333 -0.44233333 -0.40200000 lwr -1.9548977 -2.3995643 -2.5975643 -2.6378977 -3.0398977 -0.6662310 -0.8642310 -0.9045643 -1.3065643 -0.4195643 -0.4598977 -0.8618977 -0.2618977 -0.6638977 -0.6235643 upr -1.51176900 -1.95643566 -2.15443566 -2.19476900 -2.59676900 -0.22310233 -0.42110233 -0.46143566 -0.86343566 0.02356434 -0.01676900 -0.41876900 0.18123100 -0.22076900 -0.18043566 p adj 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0002321 0.0000056 0.0000029 0.0000000 0.0903050 0.0325990 0.0000058 0.9880469 0.0002440 0.0005920 4.9 Tổng lực khử protein tách từ dịch chiết hải miên Ircinia mutans theo phương pháp khác nhau, lọc li tâm qua màng kDa Amicon® Ultra-0.5, trước sau sấy chân không thăng hoa > group group hoattinh data attach(data) The following objects are masked _by_ GlobalEnv: group, hoattinh > analysis anova(analysis) Analysis of Variance Table Response: hoattinh Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(>F) group 0.61009 0.122018 906.82 4.943e-15 *** Residuals 12 0.00161 0.000135 Signif codes: ‘***’ 0.001 ‘**’ 0.01 ‘*’ 0.05 ‘.’ 0.1 ‘ ’ > pairwise.t.test(hoattinh,group,p.adj="bonferroni") Pairwise comparisons using t tests with pooled SD data: hoattinh and group 6.5e-11 9.9e-14 2.9e-14 3.5e-14 1.3e-14 2.8e-09 1.9e-10 2.8e-10 3.8e-11 0.0041 0.0167 2.6e-05 1.0000 0.0594 0.0138 P value adjustment method: bonferroni > TukeyHSD(res) Tukey multiple comparisons of means 95% family-wise confidence level Fit: aov(formula = hamluong ~ group) $group 2-1 3-1 4-1 5-1 6-1 3-2 4-2 5-2 6-2 4-3 5-3 6-3 5-4 6-4 6-5 > diff 31.5336667 -2.4430000 2.3843333 -1.4443333 -0.8900000 -33.9766667 -29.1493333 -32.9780000 -32.4236667 4.8273333 0.9986667 1.5530000 -3.8286667 -3.2743333 0.5543333 lwr 30.9090398 -3.0676268 1.7597065 -2.0689602 -1.5146268 -34.6012935 -29.7739602 -33.6026268 -33.0482935 4.2027065 0.3740398 0.9283732 -4.4532935 -3.8989602 -0.0702935 upr 32.1582935 -1.8183732 3.0089602 -0.8197065 -0.2653732 -33.3520398 -28.5247065 -32.3533732 -31.7990398 5.4519602 1.6232935 2.1776268 -3.2040398 -2.6497065 1.1789602 p adj 0.0000000 0.0000002 0.0000003 0.0000582 0.0045803 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0000000 0.0017930 0.0000279 0.0000000 0.0000000 0.0934090 [...]... tỏch protein cú hot tớnh chng oxi húa t dch chit hi miờn Ircinia mutans theo phng phỏp kt ta bng ethanol, acetone v ammonium sulfate t ú lm c s hon thin quy trỡnh tỏch chit, tinh ch cỏc cht chng oxy húa t hi miờn ng dng trong lnh vc y hc 2 Mc tiờu ca ti - Kho sỏt hot tớnh chng oxi húa ( kh nng kh gc t do DPPH, tng nng lc kh) v hiu sut tỏch protein t dch chit hi miờn Ircinia mutans - Th nghim lm giu protein. .. chng oxy húa Cht chng oxy húa l mt loi húa cht giỳp ngn chn hoc lm chm quỏ trỡnh oxy húa cht khỏc S oxy húa l loi phn ng húa hc trong ú electron c chuyn sang cht oxy húa, cú kh nng to cỏc gc t do sinh ra phn ng dõy chuyn phỏ hy t bo sinh vt Cht chng oxy húa ngn quỏ trỡnh phỏ hy ny bng cỏch kh i cỏc gc t do, kỡm hóm s oxy húa bng cỏch oxy húa chớnh chỳng [48] * C ch ca quỏ trỡnh oxy húa Cỏc cht chng oxy. .. miờn vo trong i sng thc tin 1.2 Cỏc hp cht cú hot tớnh chng oxy húa trong hi miờn 1.2.1 Quỏ trỡnh oxy húa, cht chng oxy húa, kh nng chng oxy húa ca protein 1.2.1.1 Quỏ trỡnh oxy húa Quỏ trỡnh oxy húa l mt loi phn ng húa hc trong ú electron c chuyn sang cht oxy húa, cú kh nng to cỏc gc t do sinh ra phn ng dõy chuyn phỏ hy t bo sinh vt khi cú mt ca oxy Gc t do l bt c phõn t húa cht no ch cú mt in t duy nht... hin tng nng lc kh ca protein tỏch t dch chit hi miờn Ircinia mutans theo cỏc phng phỏp khỏc nhau, trc v sau khi lc li tõm qua mng 3 kDa Amiconđ Ultra-0.5 S liu trờn th l giỏ tr trung bỡnh ca 3 ln thớ nghim SD Cỏc ký t khỏc nhau th hin s khỏc bit cú ý ngha thng kờ (P < 0.05) 57 Hỡnh 3.7 Hm lng protein cú trong 1mg mu protein sy tỏch t dch chit hi miờn Ircinia mutans theo cỏc phng phỏp khỏc... trỡnh oxy húa Cỏc cht chng oxy húa hot ng theo cỏc c ch khỏc nhau, da vo c ch hot ng cht chng oxy húa c phõn thnh 2 nhúm l cht chng oxy húa s cp v cht chng oxy húa th cp - Cht chng oxy húa s cp: Cht chng oxy húa s cp hot ng theo c ch phỏ v chui phn ng C ch ny c gii thớch nh sau: cỏc gc t do cú cha in t c thõn cha ghộp ụi nờn hot ng kớch hot s oxy húa Khi quỏ trỡnh oxy húa xy ra li to thnh cỏc gc t do v...viii Hỡnh 3.4 Hm lng protein tỏch t dch chit hi miờn Ircinia mutans theo cỏc phng phỏp khỏc nhau trc v sau khi lc li tõm qua mng 3 kDa Amiconđ Ultra-0.5 S liu trờn th l giỏ tr trung bỡnh ca 3 ln thớ nghim SD Cỏc ký t khỏc nhau th hin s khỏc bit cú ý ngha thng kờ (P < 0.05) 55 Hỡnh 3.5 Kh nng kh gc t do DPPH ca protein tỏch t dch chit hi miờn Ircinia mutans theo cỏc phng phỏp khỏc nhau,... 58 Hỡnh 3.8 Hot tớnh kh gc t do DPPH ca protein tỏch t dch chit hi miờn Ircinia mutans theo cỏc phng phỏp khỏc nhau, trc v sau khi sy chõn khụng thng hoa S liu trờn th l giỏ tr trung bỡnh ca 3 ln thớ nghim SD Cỏc ký t khỏc nhau th hin s khỏc bit cú ý ngha thng kờ (P < 0.05) 59 Hỡnh 3.9 Tng nng lc kh ca protein tỏch t dch chit hi miờn Ircinia mutans theo cỏc phng phỏp khỏc nhau, trc v sau khi... nhng nú cú tỏc dng to phc vi ion kim loi c ch xỳc tỏc cho quỏ trỡnh oxy húa, 18 nhng nguyờn t hydro cho cht chng oxy húa s cp, phõn hy hydroperoxide thnh cỏc phõn t khụng phi l gc t do, c ch hot ng ca oxy nguyờn t, hp th tia cc tớm hoc kh oxy Cht chng oxy húa chia lm hai loi l cht chng oxy húa t nhiờn v cht chng oxy húa tng hp Cht chng oxy húa c coi l t nhiờn nu nú c tỏch chit t nguyờn liu t nhiờn hay... chng oxy húa c thu nhn t t nhiờn nh retinoids (vitamin A), tocopherols (vitamine E), ascorbic acid (vitamine C), polyphenols, carotenoids, manganese, zinc, selenium [30] Protein thy phõn cú hot tớnh chng oxy húa thu nhn t quỏ trỡnh thy phõn protein ng thc vt bng enzyme cng c coi l cht chng oxy húa t nhiờn Cht chng oxy húa tng hp l cỏc cht chng oxy húa c to thnh bng con ng húa hc Mt s cht chng oxy húa... t bo l cú cu trỳc ng xõm nhp vo c th bo v c th 20 b Thnh phn chng oxy húa ca protein thy phõn Khụng ch cú peptit v cỏc acid amin thu c t quỏ trỡnh thy phõn protein cú hot tớnh chng oxy húa m bn thõn protein cng cú hot tớnh chng oxy húa Trong phõn t protein ó cha sn nhng on peptite cú hot tớnh sinh hc.Tuy nhiờn, khi nm trong mch protein (hay polypeptide) cỏc hot tớnh ny tn ti di dng tim n, khụng c