TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN TRẦN THỊ BÍCH NHƢ NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG KẾT HỢP CỦA MALACHITE GREEN VÀ NHIỆT ĐỘ LÊN MỘT SỐ CHỈ TIÊU SINH LÝ VÀ MEN CHOLINESTERASE CỦA CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP CAO HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN 2010 i TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN TRẦN THỊ BÍCH NHƢ NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG KẾT HỢP CỦA MALACHITE GREEN VÀ NHIỆT ĐỘ LÊN MỘT SỐ CHỈ TIÊU SINH LÝ VÀ MEN CHOLINESTERASE CỦA CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP CAO HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN CÁN BỘ HƢỚNG DẪN PGs.Ts NGUYỄN THANH PHƢƠNG 2010 i LỜI CẢM TẠ Tôi xin trân trọng gởi lời cảm ơn sâu sắc đến thầy Nguyễn Thanh Phƣơng tận tình hƣớng dẫn, động viên cung cấp nhiều kiến thức quý báo đồng thời tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành luận văn Xin đƣợc gửi lời cảm ơn chân thành đến Cô Đỗ Thị Thanh Hƣơng lời khuyên quí báu hƣớng dẫn nhiệt tình trình học tập thực đề tài Chân thành cảm ơn chị Nguyễn Hƣơng Thùy bạn Nguyễn Thị Kim Hà, Nguyễn Văn Toàn cán bộ môn Dinh dƣỡng Chế biến Thủy sản giúp đỡ nhiều suốt trình thực thí nghiệm Xin đƣợc gửi lời cảm ơn đến em sinh viên lớp liên thông Nuôi trồng Thủy sản Khóa 33 Nuôi trồng Thủy sản Liên thông Khóa 35 nhiệt tình giúp đỡ trình thực đề tài Chân thành cảm ơn dự án “Nghiên cứu đƣợc thực dƣới tài trợ kinh phí dự án - PhysCAM” (Nghiên cứu Đào tạo sinh lý động vật Thủy sản Đồng Bằng Sông Cửu Long, 2007-2010 DANIDA, Đan Mạch tài trợ) hỗ trợ kinh phí phƣơng tiện cho thực đề tài Cám ơn bạn lớp Cao học Nuôi Tồng Thủy sản K15 giúp đỡ, động viên suốt khóa học Cuối xin đƣợc bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè ngƣời than chia sẻ, giúp đỡ động viên suốt thời gian học tập nghiên cứu trƣờng Xin chân thành cảm ơn i TÓM TẮT Nghiên cứu ảnh hƣởng kết hợp nhiệt độ MG thông qua xác định khả chịu nhiệt cá tra thay đổi tiêu huyết huyết học men ChE điều kiện nhiệt độ khác Từ tiến hành thí nghiệm tìm hiểu ảnh hƣởng kết hợp nhiệt độ MG lên thay đổi số tiêu huyết học men ChE cá tra (P.hypophthalmus) Thí nghiệm xác định ngƣỡng chịu đựng nhiệt độ thay đổi tiêu sinh lý hoạt tính men ChE trình tăng giảm nhiệt Kết cho thấy điều kiện bình thƣờng hoạt tính men ChE não cao huyết tƣơng ChE chịu ảnh hƣởng nhiệt độ theo xu hƣớng nhiệt độ tăng hoạt tính tăng nhiệt độ giảm khả ức chế hoạt tính ChE mạnh Các tiêu huyết học điều kiện bình thƣờng có xu hƣớng thấp so với điều kiện nhiệt độ cao nhƣng số tiêu (hemoglobin, MCV, MCH, MCHC) lại cao so với điều kiện giảm nhiệt Đồng thời xác định ngƣỡng nhiệt độ cá tra 42 oC ngƣỡng dƣới 12 oC Trong nghiên cứu khoảng nhiệt độ (22 0C, 28 0C 34 0C) đƣợc chọn khoảng nhiệt độ thích hợp nhiệt độ bƣớc đầu có ảnh hƣởng đến tiêu huyết học hoạt tính enzyme ChE não máu cá tra Thí nghiệm ảnh hƣởng kết hợp nhiệt độ (22 C, 28 0C 34 C) MG (0,15ppm 02ppm) lên số tiêu huyết học hoạt tính enzyme ChE lên cá tra có trọng lƣợng từ 15-20gam Thí nghiệm đƣợc bố trí theo kiểu khối hoàn toàn ngẫu với nghiệm thức lần lặp lại Mật độ cá thí nghiệm 30 con/bể, thể tích nƣớc 200 lít, có bố trí sục khí suốt thời gian thí nghiệm.Thời gian thí nghiệm kéo dài 14 ngày với lần thu mẫu lần thu con/bể Kết thí nghiệm cho thấy biến đổi tiêu huyết học điều kiện tiếp xúc với MG khoảng nhiệt độ 22 o C, 28 oC 34 o C biến động theo nhiều xu hƣớng khác Số lƣợng hồng cầu, tỉ lệ huyết sắc tố, MCH, MCV giảm tiếp xúc với MG khoảng nhiệt độ khác nhƣng số lƣợng bạch cầu hemoglobin giảm sau 72 tiếp xúc lại tăng vào khoảng thời gian gần kết thúc thí nghiệm Nhiệt độ làm ảnh hƣởng đến độc tính MG, nhiệt độ tăng kết hợp với nồng độ MG cao khả ức chế ChE não mạnh Riêng hoạt tính ChE máu có biểu theo nhiều xu hƣớng khác theo nhiệt độ nồng độ MG khả ức chế ChE máu cần có thời gian tiếp xúc dài so với não ii Abstract Study effect of MG and temperatune to some physiological parameters and the active of enzyme ChE of tra fish through determine the threshold of tolerated temperature, the changes of the physiological indicators and the active of enzyme ChE upon temperature of Tra fish (Pansianodon hypophthalmus) at the fry stage From which determine the changes of some physiological indicators, enzyme ChE of Tra fish (Pangasianodon hypophthalmus) in different temperature ranges with different concentrations of MG Determine the threshold of tolerated temperature, the changes of the physiological parameters and the active of enzyme ChE upon temperature of Tra fish (Pansianodon hypophthalmus) fingerlings (15-20g) Results showed that in normal conditions, the enzyme activity in brain higher in plasma and ChE influenced by temperature When the temperature increase, the processing enzyme activity increased and temperature decrease the ability to inhibit the enzyme ChE increases In this study, the effects of temperature (22 0C, 28 0C and 34 0C) on selected the blood parameters and the inhibition of cholinesterase (ChE) activity in bain and blood of Tra fish (P hypophthalmus) Study the effects of MG (0,15ppm and 0,2ppm) and temperature (22 C, 28 0C and 34 0C) on hematology and and enzyme Cholinesterase on Tra fish (P.hypophthalmus) fingerlings (15-20g) were randomly designed in the laboratory of College of Aquacultute and Fisheries, Can Tho Universit Fish were stocked at density of 30 individuals per 200 liters tank.The experiment was three replications in continuously aerated composite tank system and implemented for 14 days Sampling was performed at distinct points of time Each time collect randomly four fish/tank, the last time harvest all fish left The results showed that the quantity of erythrocyte, hematorite value, MCH and MCV decreased after exposed to MG at concentrations and different temperatures, but the quantity of white blood cells and hemoglobin decreased after hours and 72 hours of exposure and increased in the period near the end of the experiment Temperature affects the toxicity of MG, as the temperature increases associated with higher concentrations of MG, the ability to inhibition ChE in brain stronger ChE activity in the blood manifesting in many different trends with temperature and the concentration of MG and institutional ability to inhibit blood exposure time should be longer than the brain iii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam kết luận văn đƣợc hoàn thành kết nghiên cứu thực tế khuôn khổ dự án “Nghiên cứu đƣợc thực dƣới tài trợ kinh phí dự án - PhysCAM” (Nghiên cứu Đào tạo sinh lý động vật Thủy sản Đồng Bằng Sông Cửu Long, 2007-2010 DANIDA, Đan Mạch tài trợ) Các số liệu kết trình bày luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố nghiên cứu liên quan lĩnh vực Dự án có quyền sử dụng kết luận văn để phục vụ cho dự án Trần Thị Bích Nhƣ iv MỤC LỤC LỜI CẢM TẠ i TÓM TẮT ii Abstract iii LỜI CAM ĐOAN iv MỤC LỤC v DANH SÁCH HÌNH vii DANH SÁCH BẢNG viii DANH SÁCH BẢNG viii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT .ix Phần 1: .1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Giới thiệu 1.2 Mục tiêu nghiên cứu .2 1.3 Nội dung đề tài 1.4 Thời gian thực Phần 2: .3 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu Malachite green (MG) .3 2.1.1 Sơ lƣợc MG 2.1.2 Đặc điểm hóa học 2.2 Một số nghiên cứu ảnh hƣởng MG lên số đối tƣợng thủy sản 2.3.1 Ảnh hƣởng MG đến tiêu sinh lý sinh hóa 2.3 Một số nghiên cứu men ChE 11 Phần 3: 14 VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 3.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 14 3.2 Vật liệu nghiên cứu 14 3.3 Bố trí thí nghiệm 14 3.3.1 Xác định ngƣỡng chịu đựng nhiệt độ thay đổi tiêu sinh lý hoạt tính men ChE theo nhiệt độ cá tra (P hypophthalmus) 14 3.3.2 Xác định ảnh hƣởng MG nhiệt độ lên tiêu huyết học men ChE 15 3.4 Phƣơng pháp phân tích 17 3.4.1 Phƣơng pháp phân tích mẫu 17 3.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu 21 Chƣơng 22 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 4.1 Ảnh hƣởng nhiệt độ lên tiêu huyết học men ChE lên cá tra 22 4.1.1 Nhiệt độ ảnh hƣởng đến hoạt động cá 22 4.1.2.1 Các tiêu huyết học 22 4.1.2.2 Hoạt tính enzyme ChE 24 4.1.3.1 Các tiêu huyết học 26 4.1.3.2 Hoạt tính enzyme ChE 27 4.2 Ảnh hƣởng nhiệt độ MG lên số tiêu huyết học men ChE 30 v 4.2.1Các yếu tố môi trƣờng bể thí nghiệm 30 4.2.2 Biểu lâm sàng cá tiếp xúc với MG 30 4.2.3 Ảnh hƣởng MG nhiệt độ lên tiêu huyết học 32 4.2.3.1 Ảnh hƣởng MG nhiệt độ lên số lƣợng hồng cầu 32 4.2.3.2 Ảnh hƣởng MG nhiệt độ lên tổng bạch cầu 34 4.2.3.3 Tỷ lệ huyết sắc tố (hematocrite) 35 4.2.3.4 Khối lƣợng trung bình huyết sắc tố hồng cầu (MCH) 37 4.2.3.5 Nồng độ huyết sắc tố hồng cầu – MCHC (%) 38 2.3.6 Thể tích hồng cầu – MCV (µm3 ) 39 4.2.3.7 Số lƣợng huyết sắc tố (Hemoglobin) 40 4.2.4 Ảnh hƣởng nhiệt độ MG lên hoạt tính men ChE 42 4.2.4.1 Hoạt tính men ChE não 42 4.2.4.2 Hoạt tính men ChE máu 44 Phần 46 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 46 5.1 Kết luận 46 5.2 Đề xuất 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 Phụ lục A 51 Phụ lục B 55 Phụ lục C 61 vi DANH SÁCH HÌNH Hình Hình Hình Hình Hình Hình Hình Hình Hình Hình Hình 2.1: 2.2: 2.3: 2.4: 3.1: 3.2 4.1: 4.2: 4.3: 4.5: 4.6: Công thức cấu tạo MG (Oxolate) .3 Ba dạng MG Sự biến đổi MG Sự thay đổi số tiêu máu cá (Heteropneustes fossilis) Buồng đếm Neubauer 18 Cách làm kính phết 19 Ảnh hƣởng nhiệt độ tăng lên hoạt tính ChE não máu 25 Hoạt tính men ChE não máu cá tra giảm nhiệt độ 28 Biến động số lƣợng hồng cầu ảnh hƣởng nhiệt độ MG 33 Ảnh hƣởng của nhiệt độ MG lên ChE não 44 Ảnh hƣởng của nhiệt độ MG lên ChE máu 45 vii DANH SÁCH BẢNG Bảng 2.1: Các giá trị LC0 , LC50 and LC100 (mg/l) malachite greens Bảng 2.2: Giá trị LC50 số loài cá khác tiếp xúc với MG .7 Bảng 4.1: Số cá chết tiến hành tăng giảm nhiệt 22 Bảng 4.2: Biến động tiêu huyết học tiến hành tăng nhiệt 24 Bảng 4.3: Hoạt tính men ChE tiến hành tăng nhiệt 25 Bảng 4.4: Biến động tiêu huyết học tiến hành giảm nhiệt 27 Bảng 4.5:Hoạt tính men ChE tiến hành giảm nhiệt 28 Bảng 4.6: Biến động yếu tố môi trƣờng trình thí nghiệm 31 Bảng 4.7:Ảnh hƣởng nhiệt độ MG lên số lƣợng hồng cầu 33 Bảng 4.8:Ảnh hƣởng nhiệt độ MG lên số lƣợng bạch cầu cầu 336 Bảng 4.9:Ảnh hƣởng nhiệt độ MG lên tỉ lệ huyết cầu 36 Bảng 4.10:Ảnh hƣởng nhiệt độ MG lên MCH 37 Bảng 4.11:Ảnh hƣởng nhiệt độ MG lên MCHC 39 Bảng 4.12:Ảnh hƣởng nhiệt độ MG lên MCV 40 Bảng 4.13:Ảnh hƣởng nhiệt độ MG lên hemoglobin 41 Bảng 4.14: Ảnh hƣởng nhiệt độ MG lên hoạt tính enzyme ChE 43Error! Bookmark not defined Bảng 4.15: Ảnh hƣởng nhiệt độ MG lên hoạt tính enzyme ChE 455 viii