SÁNG KIẾN KINH NGHIỆM ** ** Chủ Đề: XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CƠ SỞ, ĐỀ CƯƠNG THẨM ĐỊNH, XỬ LÝ SỐ LIỆU BÁO CÁO THẨM ĐỊNH CHO THUỐC KEM CLONBASE Họ tên: ĐỖ LƯU HỒI NIỆM Bộ phận cơng tác: Phòng Kiểm tra Chất lượng Chức vụ: Trưởng phòng Kiểm tra Chất lượng Cà Mau, ngày 18.03.2014 Cty CP Dược Minh Hải Cn Đỗ Lưu Hồi Niệm Trang 1/ PHẦN I: ĐẶT VẤN ĐỀ - Nhằm phát triển đa dạng sản phẩm theo chiến lược cơng ty, ngày nhiều mặt hàng nghiên cứu đăng kí, mặt hàng thuốc kem “Clonbase” sản phẩm điển hình - Thuốc kem “Clonbase” có hoạt chất Clobetasol propionate, nhiên hoạt chất khơng có danh mục dược điển Việt Nam IV Vì cần tham khảo dược điển nước ngồi, dược điển Anh 2007 chọn có điều kiện thử phù hợp với điều kiện có phòng Kiểm tra Chất lượng cơng ty - Điều trước tiên, tơi phải xây dựng phương pháp thử định tính định lượng hoạt chất Clobetasol propionate có thuốc kem “Clonbase” cho sở dựa tảng dược điển Anh 2007 Sau đó, từ tiêu chuẩn sở xây dựng nên đề cương thẩm định phương pháp phân tích cho sản phẩm - Các nhân viên phòng tiến hành thực theo đề cương đưa ra, thu thập số liệu Dùng phầm mềm excel xử lý số liệu thu để xác định phương pháp thử có xác hay khơng - Nếu số liệu thu có ý nghĩa, tiến hành báo cáo vào hồ sơ đăng kí PHẦN II: NỘI DUNG II.1 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN: (chỉ tiêu định tính định lượng) II.1.1 Định tính: A Trên sắc ký đồ phần định lượng, dung dịch thử phải cho pic có thời gian lưu phù hợp với thời gian lưu pic tương ứng với dung dịch chuẩn Clobetasol propionate Cty CP Dược Minh Hải Cn Đỗ Lưu Hồi Niệm Trang 2/ B Phương pháp sắc ký lớp mỏng: − Bản mỏng: Silicagel GF254 − Dung mơi khai triển: hỗn hợp chloroform - acetone - alcohol (100 : 10 : 5) − Dung dịch thử: chuyển lượng kem khoảng 0,75 mg Clobetasol propionate vào ống ly tâm có nắp Thêm 10 ml methanol, đậy nắp Đun nóng 60 oC bếp cách thuỷ khoảng phút, lấy lắc mạnh Lặp lại bước đun nóng lắc mạnh Để nguội đến nhiệt độ phòng, thêm 3,5 ml nước lắc Ly tâm dung dịch 3500 vòng/ phút 10 phút Chuyển khoảng 5,0 ml dịch phía vào bình lắng gạn 100 ml, thêm 1,0 g natri cloric 10,0 ml nước, lắc Chiết với 5,0 ml chloroform, thu lớp bốc đến khơ Hồ tan cắn 0,5 ml chloroform thu dung dịch thử − Dung dịch đối chiếu: hồ tan lượng Clobetasol propionate chuẩn methanol để thu dung dịch có nồng độ khoảng 0,55 mg/ ml − Cách tiến hành: chấm riêng biệt lên mỏng 10 µl dung dịch Triển khai sắc ký đến dung mơi 12 cm, lấy mỏng ra, để khơ ngồi khơng khí quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 254 nm Vết sắc ký đồ dung dịch thử dung dịch đối chiếu phải giống màu sắc giá trị Rf II.1.2 Định lượng: A Điều kiện sắc ký: - Cột thép khơng gỉ :RP – 18 (4.6 x 250 mm, µm) - Pha động : hỗn hợp acetonitril – dung dịch A – Methanol (95 : 85 : 20) - Detector : UV 240 nm - Tốc độ dòng : ml/ phút Cty CP Dược Minh Hải Cn Đỗ Lưu Hồi Niệm Trang 3/ - Thể tích tiêm : 10 µl - Dung dịch A: dung dịch NaH2PO4 0,05 M; điều chỉnh đến pH 5,5 natri hydroxyd 50% B Chuẩn bị: - Dung dịch chuẩn: hồ tan xác khoảng 50,0 mg Clobetasol propionate methanol vừa đủ 50 ml Hút ml dung dịch thêm methanol vừa đủ 50 ml, lọc qua màng lọc có kính thước 0,45 µm - Dung dịch thử: Cân xác lượng kem có chứa khoảng 1,0 mg Clobetasol propionate vào bình định mức 50 ml Thêm methanol đến vạch, lắc siêu âm 10 phút Ly tâm khoảng 3.500 vòng/ phút 10 phút Thu dịch trong, lọc qua màng lọc có kính thước 0,45 µm C Tiến hành: - Tính thích hợp hệ thống: tiêm dung dịch chuẩn lặp lại lần, có RSD khơng q 2,0% số đĩa lý thuyết khơng 5.000 - Tiêm riêng biệt dung dịch chuẩn dung dịch thử vào hệ thống sắc ký Ghi nhận diện tích pic - Kết quả: Dựa vào diện tích đáp ứng pic thu từ dung dịch chuẩn dung dịch thử, độ pha lỗng dung dịch chuẩn dung dịch thử, hàm lượng chuẩn để tính lượng hoạt chất Clobetasol propionate có chế phẩm II.2 XÂY DỰNG ĐỀ CƯƠNG Tên sản phẩm: thuốc kem “Clonbase” Hoạt chất: Clobetasol propionate, hàm lượng: 50 mg, khối lượng: 100 g Cty CP Dược Minh Hải Cn Đỗ Lưu Hồi Niệm Trang 4/ Phương pháp thử: dùng phương pháp HPLC so với chuẩn đối chiếu (Đề cương đính kèm) II.3 THỰC HIỆN QUY TRÌNH: (nhân viên thực hiện) II.4 XỬ LÝ SỐ LIỆU: Từ số liệu thu thực quy trình, tiến hành xử lý (Bảng xử lý số liệu đính kèm (phiếu phân tích thẩm định quy trình liệm nghiệm)) II.5 BÁO CÁO KẾT QUẢ Tính tuyến tính Khảo sát phụ thuộc tuyến tính diện tích pic nồng độ hoạt chất cách pha dãy dung dịch chuẩn có nồng độ khoảng từ 7,995 - 27,983 µg/ ml (40% - 140%) Dữ liệu thực nghiệm: Mức khảo sát (%) Lượng cân chuẩn 40 0,4 100 120 140 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4 bđm 50 ml, thêm vừa đủ ddpm, lọc qua 0,45m Tiêm sắc ký Nồng độ (µg/ ml) Diện tích pic 80 50,17 mg hòa tan thêm dung dịch pha mẫu (ddpm) vừa đủ 50 ml, hút … Thể tích hút (ml) Pha lỗng 60 7,995 11,993 15,990 19,988 23,985 27,983 1423101,0 2122710,5 2724729,0 3512325,0 4221654,5 4861323,0 Do hệ số hồi quy b phương trình khơng có ý nghĩa Nên có phương trình hồi quy: = 173503.16154x Hệ số tương quan R = 0,99906 (u cầu R2 ≥ 0.995) Kết luận: tính tuyến tính phạm vi từ 40 -140% CLONBATE Nhận xét: từ kết thu cho thấy khoảng nồng độ khảo sát (7,995 - 27,983 µg/ml) có tương quan tuyến tính chặt chẽ nồng độ chất định lượng diện tích pic với hệ số tương quan R2 = 0,99906 Cty CP Dược Minh Hải Cn Đỗ Lưu Hồi Niệm Trang 5/ Độ lặp lại: Tiến hành khảo sát độ lặp lại phương pháp cách thực mẫu thử riêng biệt Cách tiến hành: Mẫu Lượng cân Hồ tan Lọc Tiến hành Chuẩn Thử (x 06 mẫu) 50,0 mg 2,0 g (1 mg Clobetasol propionat) 50 mlddpm, hút 1ml vào bđm 50ml với ddpm 50 mlddpm Lọc qua màng lọc 0,45 m Tiêm vào hệ thống sắc ký dung dịch chuẩn thử Dữ liệu thực nghiệm: Mẫu chuẩn: - Khối lượng cân: 50,17 mg - Diện tích pic trung bình: 3476189,0 Mẫu thử STT Lượng cân (mg) Diện tích pic 2000,15 3245307,5 2000,32 3232775,0 2000,65 3268722,0 2000,11 3262950,5 2000,66 3258983,5 2000,96 3279569,5 Trung bình RSD (%) Hàm lượng (%) 93,29 92,92 93,95 93,80 93,66 94,24 93,65 0,503 u cầu độ lệch chuẩn tương đối RSD ≤ 2.0% Kết quả: 0.503% Độ Khảo sát độ phương pháp thêm chuẩn Thêm lượng xác chất chuẩn vào mẫu placebo mức nồng độ 80%, 100% 120% so với hàm lượng nhãn, thực 03 mẫu riêng biệt nồng độ Cách tiến hành: Mẫu Lượng cân chuẩn thêm Mức khảo sát Lượng cân kem Thể tích hút chuẩn Hồ tan Cty CP Dược Minh Hải Cn Đỗ Lưu Hồi Niệm Thử 50,0 mg hồ tan ddpm vừa đủ 50 ml 80% 100% 120% 1999,0 mg 1999,0 mg 1999,0 mg 0,8 ml 1,0 ml 1,2 ml ddpm vừa đủ 50 ml Chuẩn Tiến hành giống độ lặp lại mục 1.4 Trang 6/ Lọc qua màng lọc 0,45 m Tiêm vào hệ thống sắc ký dung dòch chuẩn thử Lọc Tiến hành Dữ liệu thực nghiệm: Mẫu chuẩn - Khối lượng cân: 50,17 mg - Diện tích pic trung bình: 3476189,0 m cân Thể tích Mẫu thử m chuẩn STT chuẩn thêm hút (ml) thêm (µg/ml) 3 (mg) 50,05 50,24 50,17 50,05 50,24 50,17 50,05 50,24 50,17 0.8 0.8 0.8 1.0 1.0 1.0 1.2 1.2 1.2 15.952 16.012 15.990 19.940 20.016 19.988 23.928 24.019 23.985 Diện tích m thu hồi Tỷ lệ phục (µg/ml) hồi (%) 15.819 16.046 15.975 20.318 20.565 20.403 24.455 24.613 24.502 Trung bình RSD (%) 99.16 100.21 99.91 101.90 102.75 102.08 102.20 102.47 102.16 101,43 1,282 Mức khảo sát (%) 80 120 160 2751094.0 2790633.5 2778361.5 3533627.0 3576642.0 3548359.5 4253077.0 4280625.0 4261371.0 u cầu hàm lượng tìm lại trung bình 98.0 – 102.0% Kết quả: 101.43% Độ lệch chuẩn tương đối RSD ≤ 2.0% Kết quả: 1.282% PHẦN III: KẾT LUẬN - Kết khảo sát tính đặc hiệu, tính thích hợp hệ thống sắc ký, tính tuyến tính, độ lặp lại độ cho thấy phương pháp định lượng thuốc kem “CLONBATE” áp dụng kiểm nghiệm sản phẩm - Tiêu chuẩn sở xây dựng cho sản phẩm “Clonbase” phù hợp Cty CP Dược Minh Hải Cn Đỗ Lưu Hồi Niệm Trang 7/