VÀI PHƯƠNG PHÁP CỐ ĐỊNH VÀ NHUỘM TẾ BÀO HAY DÙNG Cử nhân hoá học : Nguyễn Trọng Chăm Bộ môn GPB trường ĐHY Hà Nội Phiến đồ chọc hút : (vú, hạch, tuyến giáp v.v ) 1.1 Chuẩn bị dụng cụ : - Lam kính - Bút viết kính không tan dung dịch cố định hay dung dịch nhuộm (bút chì, bút viết kính - Diamond Point Glass Marker, bút viết không tan Non Permenant v.v - Bể giá nhuộm - Bơm tiêm - Sổ máy vi tính để lưu giữ kết - Quạt gió cỡ nhỏ (máy sấy tóc) - Lamelles cỡ Nhuộm Pha chế dung dịch: + Hematoxylin Harris: Hematoxylin g Cồn tuyệt đối 50 ml Alum potassium hay ammonium 100g Nước cất 1000 ml Oxyt thuỷ ngân 2,5 g Acid acetic lạnh 20 ml Dùng bình chứa 2000 ml để hoà tan alum nước cất cách đun nóng Hoà tan hematoxylin cồn vào cốc nhỏ Lắc mạnh để hematoxylin tan hết trộn dung dịch vào Đun sôi dung dịch nhanh Lấy dung dịch khỏi bếp cho oxyt thuỷ ngân vào Tiếp tục đun lại dung dịch có màu tím thẫm Lấy dung dịch khỏi bếp làm lạnh đột ngột Sau cho acid acetic vào Lọc trước dùng Nhuộm +Dung dịch Orange G: Orange G 0,5 g Cồn 95 100 ml Acid phosphotungstic 0,015 g + Hỗn hợp EA50 Verte lumière jaunâtre 0,375 g Brun Bismarck 0,4 g Eosin jaunâtre 2,5 g Nước cất 50 ml Cồn 960 609 g Methanol absolu 160 g Dung dịch acid phosphotungstic cồn etanol 50 (1,7 g ml) ml Lithium carbonat bão hòa ml Acid acetic glacial ml Ngoài phương pháp nhuộm nói trên, người ta nhuộm Gram (phát vi khuẩn Gram dương Gram âm) trực khuẩn kháng cồn kháng toan (BK BH) hay nhuộm Kwik - Diff Hoặc nhuộm Wright – Giemsa Và ngày người ta nhuộm thành công hoá tế bào miễn dịch (Cytoimmunochemical) XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN! [...]... vậy, phương pháp nhuộm Giemsa không thấy rõ các chi tiết của nhân, màng nhân, chất nhiễm sắc v.v Nhuộm 3.2 Nhuộm hematoxylin-eosin Là phương pháp nhuộm phối hợp 2 phẩm nhuộm : Hematoxylin nhuộm nhân tế bào và Eosin nhuộm bào tương tế bào Tiến hành : - Tiêu bản rửa nước chảy 1’ - Nhuộm nhân trong dung dịch Alum Hematoxylin tuỳ ý từ 3-5’ - Rửa nước chảy 5’ - Biệt hoá trong dung dịch cồn acid vài giây... tắc: Kết hợp một phẩm nhuộm nhân bằng hematoxylin Harris và một phẩm nhuộm bào tương bởi Orange G và một phẩm nhuộm chủ yếu là Verte lumière , nâu Bismarck và Eosin (hỗn hợp đa sắc EA50 của Papanicolaou) Từ khá lâu, phương pháp này được chọn để nhuộm các tế bào ung thư Nhuộm 3.3.2 - Các bước tiến hành: - Tiêu bản nhúng liên tục trong cồn 900, 800, 500 rồi nước cất 2 lần x 30’ mỗi bể - Nhuộm nhân trong... đã đánh dấu và làm như 1.4 Nhuộm 3.1 Nhuộm Giemsa Là phương pháp hay dùng nhất do thao tác đơn giản, thời gian tiến hành nhanh và tiết kiệm do giá thành nên được dùng rộng rãi Tuy nhiên để phương pháp này nhuộm đạt kết quả cũng đòi hỏi một số điểm cần chú ý: - Tiêu bản phải để bay hơi hoàn toàn chất cố định - Dụng cụ pha chế phải sạch - Nước cất 2 lần (ở những nơi xa không có nước cất nếu dùng nước... Natricarbonat hay dung dịch ammoniac loãng) - Rửa nước chảy 5’ - Nhuộm bào tương trong dung dịch Eosin 3-5’ - Rửa qua nước - Loại nước bằng cồn tuyệt đối Làm trong bằng xylen Gắn Baume Nhuộm Kết quả: Nhân tế bào màu xanh đến xanh đen Bào tương hồng đến đỏ Hồng cầu đỏ đậm Ưu điểm của phương pháp này là tiêu bản giữ được lâu và thấy rõ được các chi tiết của nhân và tế bào Nhuộm 3.3 - Nhuộm Papanicolaou... suối cần đun sôi và lọc vài lần cũng có thể dùng tạm) Nhuộm Tiến hành: - Nhúng tiêu bản vào nước cất cho ướt đều - Phủ dung dịch Giemsa pha loãng 1/10 15’ - Đổ thuốc nhuộm đi - Rửa nhẹ dưới vòi nước chảy (mặt sau của tiêu bản) - Để khô tiêu bản (có thể dùng quạt gió cho nhanh ) Kết quả : Nhân tế bào màu tím đỏ Bào tương của tế bào xanh da trời Bào tương của bạch cầu ái toan màu vàng nhạt Hồng cầu... chọc hút : (vú, hạch, tuyến giáp v.v ) 1.4 Phương pháp tiến hành: - Bệnh phẩm chọc hút được dàn mỏng trên những lam kính sạch đã được đánh dấu và để khô tự nhiên hoặc dùng quạt gió cho khô nhanh - Cố định bằng một trong những loại dung dịch cố định đã nói ở trên từ 5 - 10’ - Lấy tiêu bản ra cho dung dịch cố định bay hơi hết rồi tiến hành nhuộm tuỳ theo phương pháp lựa chọn Phiến đồ từ các dịch Các dịch... nước cất 30” ) - Chuyển liên tục trong cồn 500, 700, 800, 900 30” mỗi bể - Nhuộm trong dung dịch Orange G 90” - Nhúng trong 2 bể liên tiếp cồn 950 30” mỗi bể - Nhuộm trong dung dịch đa sắc EA50 của Papanicolaou 90’’ - Nhúng qua 3 bể cồn 950 30” mỗi bể - Chuyển vào cồn tuyệt đối - Chuyển vào hỗn hợp cồn/xylen tỷ lệ 1:1 rồi vào xylen và gắn Baume ... trứng v.v tế bào được làm giàu bằng cách ly tâm theo quy trình sau: - Đổ dung dịch cần ly tâm vào những ống ly tâm - Các ống ly tâm khi cho vào máy ly tâm phải để đối xứng nhau - Trọng lượng của các ống ly tâm có dung dịch ly tâm phải bằng nhau - Ly tâm với tốc độ 1.500 vòng/phút, thời gian 15’ - Chờ cho máy dừng hẳn, lấy ống có dịch ly đổ phần dịch trong ở trên đi, lấy cặn dưới đáy ống ly tâm và dàn...Phiến đồ chọc hút : (vú, hạch, tuyến giáp v.v ) 1.2 Các loại dung dịch cố định: - Hỗn hợp cồn tuyệt đối/ether tỉ lệ 1/1 - Cồn 950 - Spray fixative 1.3 Các loại dung dịch nhuộm: - Giemsa dự trữ (stock) - Hematoxylin - Eosin Phiến đồ chọc hút : (vú, hạch, tuyến giáp v.v ) - Dung dịch làm xanh nhân (Lithium carbonat, Natri