VI KHUẨN HELICOBACTER PYLORI Mã bài: XN2 18.27 Thời lượng: LT: 2tiết TH:0 GIỚI THIỆU: Năm 1979, Warren ( Australia) đưa nhận xét tiêu giải phẫu bệnh lý bệnh nhân viêm loét dày tá tràng có loại vi khuẩn hình xoắn nằm lớp niêm mạc Năm 1981, Marshall (Australia) bắt đầu phân lập vi khuẩn thức công bố vi khuẩn vào năm 1983 Năm 1989, Goodwin nghiên cứu cấu trúc tế bào đề nghị đặt tên H.pylori MỤC TIÊU: Sau học xong này, học sinh có khả năng: Trình bày đặc điểm sinh vật học khả gây bệnh vi khuẩn H.pylori Nêu phương pháp chẩn đoán vi khuẩn học vi khuẩn H.pylori NỘI DUNG Đặc điểm sinh vật học 1.1 Hình thể tính chất bắt màu H.pylori có hình xoắn cong dạng sừng bò hình chữ U, C, kích thước 0,5µm x 3-5µm Trong bệnh phẩm có hình cong, mảnh, hình dấu hỏi, hình chữ S Trên môi trường nuôi cấy lâu ngày hình cầu Có chùm lông đầu, di động mạnh, vỏ, không sinh nha bào, bắt màu gram âm 1.2 Tính chất nuôi cấy Nuôi cấy H.pylori khó Môi trường nuôi cấy phải giàu chất dinh dưỡng thạch pylori (thạch có huyết ngựa) thạch não tim có 7% huyết ngựa Thường dùng môi trường thạch máu có thêm vitamin số kháng sinh amphotericin (2µg/ml); trimethoprim (5µg/ml)… để ức chế nấm số vi khuẩn khác Vi khuẩn thích hợp nhiệt độ 37 0C khí trường 7% CO2 Vi khuẩn phát triển nhiệt độ từ 30-40 0C Một số môi trường khác Thayer Martin, môi trường sữa-lòng đỏ trứng nuôi cấy có hiệu tốt Mặc dù vi khuẩn sống pH thấp dày nuôi cấy vi khuẩn thích hợp pH từ 6,7 - Trên môi trường nuôi cấy, khuẩn lạc xám nhạt, đường kính 1mm, có sau 48-72 giờ, tan máu 1.3 Tính chất sinh vật hoá học - Men urease (+++); tính chất quan trọng để phân biệt với Campylobacter - Catalase (+), oxydase (+) - Nitrat (-) - Nhậy cảm với cephalothin - Đề kháng với acid nalidixic 1.4 Sức đề kháng H.pylori có sức đề kháng cao số vi khuẩn đường ruột khác Qua nghiên cứu cho thấy thực chất H.pylori vi khuẩn ưa acid chúng bị tiêu diệt nhanh môi trường có pH 3,1-3,5 chúng tồn lâu dày có pH 2,5 -3,0 Có tượng H.pylori có khả tiết men urease mạnh, phân giải urê dày tạo thành amoniac bao quanh vi khuẩn làm cho vi khuẩn chịu môi trường acid dày 1.5 Kháng nguyên phân loại − Kháng nguyên lông H: Có chất protein − Kháng nguyên thân O: Có chất lipopolysaccharid chịu nhiệt, kháng nguyên có tính độc với tế bào túc chủ − Kháng nguyên men: Một số kháng nguyên men có vai trò quan trọng liên quan đến khả gây bệnh urease, catalase, hismatase, adhezin giúp vi khuẩn bám vào tế bào niêm mạc Hiện tìm thấy 12 loài giống Helicobacter, có loài ký sinh người có H.pylori gây bệnh Khả gây bệnh H.pylori gây viêm loét dày tá tràng tiết men làm suy thoái màng nhầy bảo vệ dẫn đến viêm loét Theo nghiên cứu Úc Pháp, có khoảng 95% bệnh nhân viêm loét dày tá tràng 80% bệnh nhân ung thư dày có nhiễm H.pylori H.pylori tiết độc tố gây độc phá huỷ tế bào độc tố gây tăng tiết dịch vị Gần người ta phát thấy kháng nguyên CagA làm tăng tiết interleukin 8, yếu tố làm cho bệnh tiến triển đến ung thư Chẩn đoán vi khuẩn học 3.1 Chẩn đoán trực tiếp 3.1.1 Bệnh phẩm: Bệnh phẩm phải mảnh sinh thiết từ vùng viêm ổ loét dày tá tràng 3.1.2 Nhuộm soi: Nhuộm gram giemsa, thường dùng kỹ thuật nhuộm gram để xem tính chất bắt màu H.pylori nơi có điều kiện nhuộm huỳnh quang miễn dịch lam kính 3.1.3 Nuôi cấy: Nghiền bệnh phẩm nuôi cấy vào môi trường thạch pylori, thạch não tim số môi trường khác, để nhiệt độ 37 0C khí trường 10% CO2, sau 48-72 nhuộm soi khuẩn lạc xác định tính chất sinh vật hoá học vi khuẩn 3.1.4 Test urease: - Test urease bệnh phẩm: Dựa vào khả sinh urease mạnh H.pylori: cho vào môi trường urê có phenol làm thị pH mẩu bệnh phẩm, lắc đều, để nhiệt độ 370C/10-15 phút Urease vi khuẩn chuyển ure thành amoniac làm tăng pH môi trường, môi trường chuyển từ màu vàng sang màu đỏ Đây loại test nhanh, độ nhậy cao 89-98% - Test urease thở: Phát có mặt men urease trường hợp viêm niêm mạc dày bị nhiễm H.pylori thông qua việc gắn chất đồng vị phóng xạ 14C (carbon) vào dầy, có men urease nhanh chóng phân giải urê 14C thành amoniac dioxyd phóng xạ 14C Chất phóng xạ nhanh chóng vào máu tới phổi, phát chúng qua thở bệnh nhân 3.1.5 Kỹ thuật khuếch đại gen PCR (polymerase chain reaction): Kỹ thuật cho phép phát đoạn gen đặc hiệu H.pylori mảnh sinh thiết dày, dịch dày, nước bọt phân bệnh nhân 3.2 Chẩn đoán gián tiếp Tìm kháng thể huyết bệnh nhân Phương pháp có giá trị cao chẩn đoán dịch tễ học Phòng bệnh điều trị 4.1 Phòng bệnh Hiện chưa có vaccin phòng bệnh Đây bệnh phụ thuộc nhiều vào điều kiện kinh tế xã hội Chủ yếu nâng cao đời sống, vệ sinh môi trường, vệ sinh ăn uống 4.2 Điều trị - Dùng kháng sinh diệt khuẩn: Amoxicillin, penicillin, cephalothin, erythromycin, tetracyclin, gentamycin, nên dùng phối hợp loại kháng sinh có hiệu - Điều trị viêm loét tăng tiết dịch vị H.pylori gây LƯỢNG GIÁ Trả lời ngắn câu sau: - Nêu phương pháp xét nghiệm thường dùng chẩn đoán H.pylori: A…………………………… B……………………………… - Ba loại kháng nguyên H.pylori: A………………………B…………………… C…………………… - Vi khuẩn H.pylori có khả tiết men ………… mạnh - Vi khuẩn H.pylori……………… môi trường nuôi cấy thông thường - Trên môi trường nuôi cấy, H.pylori thích hợp pH…………………… - Vi khuẩn H.pylori gây bệnh………………………………… - Vi khuẩn H.pylori ………………………… với cephalothin Chọn câu trả lời - Test urease bệnh phẩm đọc kết bởi: A Đường kính vòng vô khuẩn D Bệnh phẩm bị hoà tan B Sự thay đổi mầu khuẩn lạc E Đo pH môi trường C Sự thay đổi màu môi trường - Bệnh phẩm chẩn đoán H pylori là: A Máu D Sinh thiết ổ loét dày B Phân E Tuỳ theo tổn thương C Dịch não tuỷ - Vi khuẩn H pylori có tính chất sau: A Hình cong sừng bò B Bắt mầu gram (+) C Nhiệt độ thích hợp 27 C D Men urease (-) E Khuẩn lạc có môi trường sau nuôi cấy 24giờ - Đặc điểm sau vi khuẩn H pylori A Môi trường nuôi cấy giầu chất dinh dưỡng B Gây viêm loét dày tá tràng C Có thể gây ung thư dày D Không di động E Không có vỏ