MỤC LỤC LỜI MỞ ĐẦU I TỔNG QUAN VỀ NƯỚC TRÁI CÂY Lịch sử Khái niệm Phân loại .6 II KỸ THUẬT KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG NƯỚC TRÁI CÂY THÀNH PHẨM .7 Một số kỹ thuật kiểm soát chất lượng nguyên liệu sản xuất 1.1 Kỹ thuật kiểm soát chất lượng trái nguyên liệu .7 1.2 Kỹ thuật kiểm soát chất lượng nước 1.3 Kỹ thuật kiểm soát chất lượng đường .14 1.4 Kỹ thuật kiểm soát chất lượng phụ gia 17 Các kỹ thuật kiểm soát chất lượng nước trái thành phẩm 18 2.1 Phân tích cảm quan phương pháp cho điểm 18 2.2 Phân tích tiêu hóa lý sản phẩm .22 2.3 Phân tích tiêu vi sinh vật sản phẩm 77 III KẾT LUẬN 152 Tài liệu tham khảo 152 Phụ Lục .155 Phụ Lục .455 LỜI MỞ ĐẦU Xu hướng lên vài năm gần sử dụng loại nước trái nước trái chứa sữa, để bổ sung dưỡng chất cho thể Việc tiêu thụ đầy đủ trái rau trở thành vấn đề đáng quan tâm tồn giới, đóng vai trị quan trọng việc đạt trì sức khỏe tốt Nghiên cứu chứng minh loại trái rau có chứa thành phần quan trọng, giúp giảm nguy phát triển số bệnh mãn tính Những lợi ích cho sức khỏe khoáng chất, vitamin vi chất dinh dưỡng biết đến từ lâu Nước trái có chứa loạt vi chất dinh dưỡng, bao gồm số lượng đáng kể khoáng chất, kali, canxi magiê Vitamin có đặc biệt cần thiết cho sức khỏe không sản xuất thể Hiện nay, thị trường xuất ngày nhiều loại nước trái đóng chai (lon), dần chiếm ưu so với loại thức uống có gas Theo kết nghiên cứu thị trường năm 2004, thị trường nước giải khát không gas tăng 10%/năm sản lượng nước có gas tăng 5%/năm Cho thấy người ngày quan tâm đến sức khỏe, ngày ý đến sản phẩm từ thiên nhiên, đăc biệt loại nước trái rau củ, sản phẩm chứa nhiều dưỡng chất, vitamin, vi chất dinh dưỡng… Nhờ vào ưu điểm mặt dinh dưỡng tiện lợi sử dụng mà sản phẩm ngày đa dạng, nhiều chủng loại, đưa đến cho người tiêu dùng nhiều lựa chọn Câu hỏi đặt làm để sản phẩm đưa đến cho người tiêu dùng đạt chất lượng mà đảm bảo cho sức khỏe?? Thì việc kiểm sốt chất lượng từ nguyên liệu đầu vào đến kiểm soát chất lượng thành phẩm cần thiết Trong “Tìm hiểu kỹ thuật kiểm sốt chất lượng thành phẩm nước trái đóng chai (lon)” Trong q trình tìm hiểu làm khơng tránh khỏi sai sót, mong q Thầy(Cơ) bạn thơng cảm, đóng góp ý kiến để làm hồn thiện hơn! I TỔNG QUAN VỀ NƯỚC TRÁI CÂY Lịch sử Việc sản xuất nước trái thực có từ lâu, chí lâu đời nghành nơng nghiệp Khi chín, hầu hết trái mềm dần đến độ mà việc lưu trữ hay vận chuyển chúng tạo nhiều nước (tuy nhiên nước thường lên men phần) Phần nước có lẫn nhiều thịt tách dễ dàng khỏi hạt, vỏ thường chúng có mùi vị thơm ngon phần xác lại Những người săn bắt hái lượm dùng trực tiếp chúng hay thu nhặt trái chín mềm vào thùng khơng bị rị rỉ để sử dụng sau Viêc vận chuyển sớm muộn tạo nước trái Tuy nhiên vào ngày trời lạnh, việc bảo quản tốt đến vài trước bị lên men nên làm thay đổi đáng kể chất lượng nước trái Thông qua nhiều lần thử, người học cách tạo nước trái từ nhiều nguyên liệu khác quan trọng họ biết tránh trái nhìn bắt mắt lại chứa chất độc Kĩ thuật làm công cụ lao động phát triển thúc đẩy việc làm dụng cụ ngâm giầm trái nước trái Những dụng cụ để cất giữ thức ăn, kể để đựng nước tạo từ nhiều nguồn vật liệu dệt từ sợi thực vật, làm từ gỗ, đất sét, da hay ruột động vật Vì chất dễ bị háng nước trái mà yêu cầu đặt sử dụng vịng khơng q 24h với trời ấm lâu thời tiết lạnh Rất lạnh hay đóng băng giải pháp thay để điều chỉnh tính chất vi khuẩn bên nước trái Sự lên men nước trái sở cho sản xuất rượu, họ thấy nước trái sau có bọt cách bí ẩn có tính chất khác ban đầu Ngồi lưu trữ thêm vài ngày chúng chuyển dần sang chua chí có mùi vị khó chịu có váng Thứ giấm nguyên thủy dùng làm chất bảo cho trái rau củ khác Với phát triển nghành nông nghiệp (hơn 10 triệu năm trước), vụ mùa trồng trọt gần đáp ứng nhu cầu lương thực, chí họ trồng loại cho trái thích hợp với việc sản xuất nước trái nói riêng thức uống nói chung Nước trái sau ép không dùng bị lên men, điều tiếp tục xảy công nghệ bảo quản đời Thực khái niệm bảo quản bảo quản trái dùng để sản xuất nước trái dạng nguyên thủy cần sản xuất nước trái Thậm chí ngày việc bảo quản cách đơn giản để đảm bảo cho chất lượng nước trái Các khái niệm Theo TCVN 7946-2008 ( tương đương với CODEX STAN 247-2005): 2.1 Nước (fruit juices): Là dịch lỏng chưa bị lên men lên men thu từ phần ăn quả, cịn lành lặn, có độ chín thích hợp tươi hay bảo quản điều kiện thích hợp kể phương pháp xử lý bề mặt sau thu hoạch áp dụng theo điều khoản thích hợp hành Một vài loại nước xử lý với hạt, hạt vỏ, phần lớn khơng có nước quả, cho phép có lượng nhỏ khơng thể loại bỏ thực hành sản xuất tôt (GMP) Nước xử lý thích hợp, cần trì tính chất vật lý, hóa học, cảm quan đặc tính dinh dưỡng nước tự nhiên Nước đục hay khôi phục lại1 chất thơm thành phần hương dể bay từ loại biện pháp vật lý phù hợp Có thể bổ sung thịt tế bào2 từ loại biện pháp vật lý thích hợp Nước thu từ loại Nước hỗn hợp loại thu cách trộn lẫn hai nhiều loại nước nước puree từ loại khác Nước thu theo cách sau: - Nước thu trực tiếp phương pháp chiết biện pháp vật lý - Nước thu từ việc hoàn nguyên nước cô đặc với nước 2.2 Nước cô đặc: Là sản phẩm phù hợp với thuật ngữ nêu 2.1, loại bỏ lượng nước vừa đủ biện pháp vật lý để làm tăng độ Brix đến giá trị 50 % cao giá trị Brix thiết lập nước hoàn nguyên từ loại quả, Phụ lục Trong trình sản xuất nước đặc, sử dụng biện pháp thích hợp kết hợp đồng thời với khuếch tán tế bào thịt nước miễn chất rắn chiết nước cho vào nước ban đầu trước tiến hành cô đặc Nước đặc khơi phục lại1 chất thơm thành phần hương dễ bay từ loại quả, biện pháp vật lý thích hợp Có thể bổ sung thịt tế bào2 từ loại biện pháp vật lý thích hợp 2.3 Nước trích ly Nước trích ly sản phẩm thu khuếch tán thành phần sau với nước: Cho phép bổ sung hương thơm mùi vị để khôi phục lại thành phần lên đến mức chuẩn từ loại Đối với cam quýt, thịt tế bào tép nước chứa bên vỏ - toàn thịt có nước khơng thể tách trực tiếp biện pháp vật lý, - toàn khử nước Các sản phẩm đặc hồn ngun Hàm lượng chất rắn thành phẩm cần đáp ứng Brix tối thiểu nước hoàn nguyên qui định Phụ lục 2.4 Puree sử dụng sản xuất nước nectar Puree sản xuất nước nectar sản phẩm chưa bị lên men lên men thu biện pháp thích hợp, ví dụ cách nghiền, xay, lọc phần ăn hay phần vỏ mà chưa ép nước Quả phải lành lặn, có độ chín thích hợp tươi bảo quản biện pháp vật lý áp dụng cách xử lý theo điều khoản thích hợp hành Puree khơi phục lại1 chất thơm thành phần hương dễ bay từ loại tất phải thu lại biện pháp vật lý thích hợp Có thể bổ sung thịt tế bào2 từ loại biện pháp vật lý thích hợp 2.5 Puree cô đặc sử dụng sản xuất nước nectar Puree cô đặc sử dụng sản xuất nước nectar thu biện pháp vật lý để loại bỏ lượng nước vừa đủ từ puree để làm tăng độ Brix tới giá trị 50 % cao giá trị Brix thiết lập nước hoàn nguyên từ loại quả, dẫn Phụ lục Puree đặc khôi phục lại chất thơm thành phần hương dễ bay từ loại tất phải thu lại biện pháp vật lý thích hợp 2.6 Nectar Nectar chưa bị lên men lên men cách thêm nước, có bổ sung khơng bổ sung đường [Đường theo quy định TCVN 7968:2008 (CODEX STAN 212-1999)], mật ong và/hoặc xirô [được quy định TCVN 7968:2008 (CODEX STAN 212-1999)], và/hoặc chất phụ gia tạo liệt kê Tiêu chuẩn chung phụ gia thực phẩm (GSFA) Tất chất thơm, thành phần hương dễ bay hơi, thịt tế bào2 phải khôi phục lại cho loại thu lại biện pháp vật lý thích hợp bổ sung Ngoài ra, sản phẩm phải đáp ứng yêu cầu qui định nectar nêu Phụ lục Nectar hỗn hợp thu từ hai hay nhiều loại khác Phân loại Nước trái nước từ dịch trái cây, nên có giá trị dinh dưỡng cao nơi tập trung thành phần glucid, acid hữu cơ, vitamin Người ta thường phân loại nước trái theo nhiều cách: Dựa vào quy mô chế biến - Nước trái quy mơ gia đình: nước trái chế biến gia đình nhằm mục đích giải khát cung cấp nguồn dinh dưỡng cần thiết cho thể vitamin, khoáng, đường, bổ sung chất xơ ngồi cịn có tác dụng nhiệt, tiêu hóa thức ăn, lợi tiểu Ưu điểm: • • Giàu dinh dưỡng Có thể chế biến cho phù hợp với nhu cầu Nhược điểm: • Hình thức màu sắc khơng sinh động • Sản phẩm để lâu bị lắng tạo cặn loại nước ép • Cần quan tâm đến vấn đề trái theo mùa để chọn loại trái cho phù hợp - Nước trái quy mô công nghiệp: nước trái quy mơ gia đình, sản xuất nước trái quy mô công nghiệp với mục đích giải khát, dinh dưỡng chữa bệnh Tuy nhiên mặt dinh dưỡng thấp trình chế biến, số chất dinh dưỡng nên dùng chủ yếu với mục đích giải khát Nước trái đóng chai(lon) tiện lợi, thích hợp cho sống bận rộn ngày Ưu điểm: • • • • • • Thuận tiện, tiết kiệm thời gian cho người sử dụng Thích hợp cho nhiều đối tượng Giá thành tương đối rẻ Hình thức đa dạng, sinh động hấp dẫn Tùy theo hướng đối tượng khách hàng Màu sắc, hương vị lôi Dựa vào phương pháp chế biến - Nước trái tự nhiên: sản phẩm chế biến từ loại trái không pha thêm đường phụ gia Nước trái tự nhiên dùng để uống trực tiếp chế biến loại nước ngọt, rượu mùi Nước loại chua uống phải thêm đường Có loại nước ép dịch nghiền (puree) - Nước trái hỗn hợp: sản phẩm chế biến từ hai hay nhiều loại pha trộn với Lượng nước pha thêm không 35% so với nước - Nước trái pha đường: sản phẩm chế biến cách phối chế nước trái tự nhiên với syrup - Nước trái cô đặc: chế biến cách cô đặc nước ép tự nhiên theo phương pháp đun nóng (bốc hơi) hay phương pháp lạnh đơng (tách nước đá) Nước trái đặc có lợi đỡ tốn bao bì, kho hàng, vận chuyển bị vi sinh vật làm háng Theo phương pháp bảo quản - Nước trái trùng: dạng sản phẩm đóng vào bao bì kín trùng nhiệt (có thể trùng trước sau rót vào bao bì) - Nước trái nạp khí CO2: dạng nước trái nạp khí CO2 để ức chế hoạt động vi sinh vật Theo trạng thái sản phẩm - Nước trái dịch trong: loại chế biến cách tách dịch bào khỏi mô phương pháp ép, sau lắng lọc triệt để - Nước trái dạng đục: loại chế biến cách tách dịch bào khỏi mô phương pháp ép, sau lắng lọc phần Nước trái nghiền: dạng sản phẩm chế biến cách nghiền mịn mô dịch bào pha thêm đường, acid thực phẩm số phụ gia khác II CÁC KỸ THUẬT KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG NƯỚC TRÁI CÂY THÀNH PHẨM Như nói đầu bài, để có sản phẩm nước trái có chất lượng mà đảm bảo sức khỏe cho người tiêu dùng việc kiểm sốt chất lượng từ ngun liệu đến thành phẩm quan trọng Trước kiểm soát chất lượng thành phẩm, em giới thiệu sơ qua số kỹ thuật kiểm soát chất lượng nguyên liệu sản xuất nước trái Một số phương pháp kiểm soát chất lượng nguyên liệu sản xuất 1.1 Kỹ thuật kiểm soát chất lượng trái nguyên liệu Bảng 1: Một số tiêu chuẩn cho trái chọn làm nguyên liệu Yếu tố Tiêu chuẩn Ảnh hưởng Độ chín Chín Chất lượng tối ưu Độ cứng Mức độ thích hợp Hiệu suất vị Độ chua pH thích hợp Mùi vị, tỉ lệ đường/acid Màu Đã phát triển đầy đủ Cảm quan sản phẩm Kích thước/hình dáng Đồng Thuận tiện cho chế biến Thành phần hóa học đặc trưng Đã phân tích trước Phương pháp chế biến chất lượng Dư lượng thuốc trừ sâu Được kiểm soát theo pháp lý Sự an tồn tính pháp lý sản phẩm Yếu tố lạ bên Mức độ cho phép Giới hạn hợp lý Số lượng vi sinh vật Hàm aflatoxin Khơng có lượng Dưới mức cho phép Sự an toàn ổn định cho nước trái An toàn cho nước trái Trái nguyên liệu thường lựa chọn theo kinh nghiệm (cảm quan sản phẩm) Ngun liệu phải đồng kích thước, hình dạng, màu sắc, độ chín Kích thước độ lớn: ngun liệu cần đạt kích thước trung bình giống phát triển bình thường, cá thể có kích thước nhỏ to phải loại Độ chín: đưa vào sản xuất, nguyên liệu cần đạt đến giai đoạn chín tồn phần Ở độ chín này, lượng dịch bào nhiều thành phần hóa học chứa dịch nhiều Mức độ nguyên vẹn: Trong thu hoạch, vận chuyển, bảo quản, nguyên liệu bị xây xát, dập nát, thối rữa nơi vi sinh vật xâm nhập phát triển trái Chính vậy, trước chế biến cần loại bỏ trái bị thối rữa hoàn toàn, cắt bỏ phần hỏng Chỉ tiêu phân loại thủ cơng - Phân loại thủ công Lựa chọn nguyên liệu tay băng tải vận chuyển, công nhân đứng dọc hai bên băng tải lựa chọn theo kinh nghiệm tiêu nguyên liệu đặt Băng tải lăn có khả lật phía quỹ đạo nhờ đễ dàng phát vết hư Kích thước băng tải: 60-80cm Tốc độ băng tải: 0.12 – 0.15m/s Nguyên liệu phải dàn máng để lựa chọn khơng bỏ sót - Phân loại máy Máy phân loại dựa vào kích thước hình dạng: Nguyên liệu theo băng tải qua cửa có kích thước thay đổi từ nhỏ đến lớn kích thước xác định khoảng cách lăn băng tải Nhờ vào chiều quay lăn mà có kích thước kích thước cửa đẩy máng hứng + Máy phân loại dựa vào khối lượng: nhờ vào cân cảm ứng Máy phân loại cỡ kiểu rây lắc: máy có nhiều tầng rây, có cỡ mắc khác nhau, tầng mắc rộng nhất, tầng cuối mắc nhỏ Hệ thống rây chuyển động phận chấn động Máy dùng để phân loại trái có kích thước nhỏ mơ, mận, + Máy phân loại cỡ kiểu trục tròn: phận phân loại cặp trục hình cơn, thường dùng để phân loại trái trịn cam, chanh, bưởi Ngoài chất lượng trái cịn phân tích phương pháp hóa lý, vi sinh để xác định tiêu chất lượng rau Một số tiêu chuẩn nghành quy định phân tích rau “10TCN 711:2006” “10TCN 712:2006” 1.2 Kỹ thuật kiểm soát chất lượng nước Nước sử dụng để chế biến nước trái phải đáp ứng yêu cầu theo QCVN 01:2009/BYT chất lượng nước ăn uống ban hành kèm theo Thông tư số 04/2009/TT-BYT ngày 17/6/2009 Bộ trưởng Bộ Y tế Dưới bảng giới hạn số tiêu quan trọng tiêu chuẩn, kỹ thuật với phương pháp xác định việc kiểm tra chất lượng nước: STT Tên tiêu Đơn vị Giới hạn tối đa cho phép Phương pháp thử Tiêu chuẩn áp dụng I Chỉ tiêu cảm quan thành phần vô Màu sắc TCU 15 Mùi vị - Độ đục Khơng có mùi, vị lạ NTU pH - Trong khoảng 6,5-8,5 Độ cứng, tính theo CaCO3 mg/l 300 mg/l 250 TCVN 6185 - 1996 (ISO 7887 - 1985) SMEWW 2120 TCVN 6185:2008 Cảm quan, SMEWW 2150 B 2160 B TCVN 6184 - 1996 (ISO 7027 - 1990) SMEWW 2130 B TCVN 6184:2008 TCVN 6492:1999 TCVN SMEWW 4500 - H+ 6492:2011 TCVN 6224 - 1996 SMEWW 2340 C TCVN 6224:1996 TCVN6194 - 1996 (ISO 9297 - 1989) SMEWW 4500 Cl- D TCVN 6194:1996 TCVN 6177:1996 Hàm lượng Clorua Hàm lượng Sắt tổng số (Fe2+ + Fe3+) mg/l 0,3 TCVN 6177 - 1996 (ISO 6332 - 1988) SMEWW 3500 Fe Hàm lượng Mangan tổng số mg/l 0,3 TCVN 6002 - 1995 (ISO 6333 - 1986) TCVN 6002:1995 Hàm lượng Nitrat mg/l 50 TCVN 6180 - 1996 (ISO 7890 -1988) TCVN 6180:1996 10 Hàm lượng Nitrit mg/l TCVN 6178 - 1996 (ISO 6777-1984) TCVN 6178:1996 11 Hàm lượng Sunphát mg/l 250 TCVN 6200 - 1996 (ISO9280 - 1990) TCVN 6200:1996 12 Chỉ Pecmanganat mg/l số TCVN 6186:1996 TCVN ISO 8467:1993 (E) 6186:1996 II Vi sinh vật 13 Coliform tổng số Vi khuẩ n/10 0ml TCVN 6187 - 1,2 :1996 TCVN (ISO 9308 - 1,2 - 1990) 6187_1:200 SMEWW 9222 14 Vi E.coli khuẩ Coliform chịu nhiệt n/10 0ml TCVN6187 - 1,2 : 1996 TCVN (ISO 9308 - 1,2 - 1990) 6187_1:200 SMEWW 9222 1.2.1 Màu sắc (dựa theo TCVN 6185-2008): a) Phương pháp trực quan: Nguyên tắc phương pháp xác định cường độ màu nâu ánh vàng mẫu cách so sánh mắt dựa vào dãy dung dịch so sánh với dãy kính chuẩn cố định Biểu thị màu sắc theo đơn vị mg/lít Pt3 tương ứng với cường độ màu theo dung dịch so sánh b) Phương pháp trắc phổ: Nguyên tắc phương pháp Mô tả đặc điểm cường độ màu mẫu nước cách đo độ giảm cường độ (độ hấp thụ) ánh sáng Các màu khác tạo độ hấp thụ cực đại bước sóng khác xạ tới bước sóng có độ hấp thụ cực đại phải xác định trước đo độ giảm cường độ (độ hấp thụ) bước sóng Theo tiêu chuẩn này, màu nước xác định máy đo quang máy đo phổ ba bước sóng khác Các bước sóng phân bố dải phổ nhìn thấy λ (1) = 436 nm λ (2) = 525 nm λ (3) = 620 nm Bước sóng λ = 436 nm (Hg 436 nm) thường sử dụng, λ (2) λ (3) chênh lệch so với giá trị quy định trên, tùy thuộc vào loại kính lọc sử dụng Để mơ tả đặc điểm tốt hơn, tiến hành phép đo số bước sóng gắn với độ hấp thụ cực đại 1.2.2 Xác định độ đục (dựa theo TCVN 6184:2008) Đơn vị chuẩn (của màu) mg/l : Màu sắc tạo dung dịch chứa 1mg platin lít {( dạng hidro hexacloplatinat (IV)}, với có mặt 2mg coban (II) clorua ngậm phân tử nước lít 0,59 phản ánh thực tế phép thử có khoảng lệch 95 % dùng để thử nghiệm cho dù giới hạn bị vượt Hệ số 0,59 thu công thức sau: 0,59 = 1,64 1,96 × 9) Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải rõ: a) thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử nghiệm dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn coi tùy chọn với chi tiết cố mà ảnh hưởng đến kết quả; e) kết thử nghiệm thu được, kiểm tra độ lặp lại nêu kết cuối thu 2.3.7 Định lượng Coliform kỹ thuật đếm khuẩn lạc (dựa theo TCVN 6848:2007) 1) Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn đưa hướng dẫn chung định lượng Coliform Tiêu chuẩn áp dụng cho: - thực phẩm thức ăn chăn nuôi, - mẫu môi trường khu vực sản xuất chế biến thực phẩm kỹ thuật đếm khuẩn lạc môi trường đặc sau ủ 30 °C 37 °C CHÚ THÍCH Nhiệt độ cần thỏa thuận bên có liên quan Trong trường hợp sữa sản phẩm sữa, nhiệt độ ủ 30°C Kỹ thuật khuyến cáo sử dụng số lượng khuẩn lạc cần tìm dự kiến lớn 100 mililit gam mẫu thử 2) Nguyên tắc 2.1 Chuẩn bị hai môi trường đặc chọn lọc, lấy lượng mẫu thử theo quy định sản phẩm ban đầu chất lỏng, lấy lượng huyền phù ban đầu theo quy định sản phẩm dạng khác Chuẩn bị cặp đĩa môi trường chọn lọc khác điều kiện, dùng dung dịch pha loãng thập phân mẫu thử huyền phù ban đầu 2.2 Ủ đĩa 30 °C 37 °C (như thỏa thuận) 24 h 2.3 Đếm khuẩn lạc đặc trưng cần, số khuẩn lạc khẳng định lên men lactoza 2.4 Số Coliform có mililit gam mẫu thử tính từ số khuẩn lạc đặc trưng thu đĩa chọn [xem TCVN 6404 (ISO 7218)] 3) Môi trường nuôi cấy dịch pha loãng 3.1 Khái quát Xem TCVN 6404 (ISO 7218), ISO/TS 11133-1 ISO/TS 11133-2 việc chuẩn bị, pha chế thử tính mơi trường cấy 3.2 Dịch pha lỗng Xem TCVN 6507 (ISO 6887) (phần có liên quan), TCVN 6263 (ISO 8261) tiêu chuẩn cụ thể liên quan đến sản phẩm cần kiểm tra 3.3 Môi trường đặc chọn lọc: Thạch lactoza mật đỏ trung tính tím tinh thể (VRBL) 3.3.1 Thành phần Dịch thủy phân mô động vật enzym 7g Cao men 3g Lactoza (C12H22O11.H2O) 10 g Natri clorua 5g Muối mật (bile salts) 1,5 g Đỏ trung tính 0,03 g Tím tinh thể 0,002 g Thạch 12 g đến 18 ga Nước 000 ml a Tùy thuộc vào sức đông thạch 3.3.2 Chuẩn bị Tiến hành sau để giữ tính chọn lọc đặc trưng mơi trường Trộn kỹ thành phần mơi trường hồn chỉnh khơ nước để yên vài phút Chỉnh pH cho sau đun sôi pH 7,4 ± 0,2 25 °C Đun đến sôi khuấy cho tan hết Giữ sôi phút Làm nguội môi trường nồi cách thủy (6.5) nhiệt độ 44 °C đến 47 °C Để tránh làm nhiệt, không đun môi trường lâu khơng đun lại Do đó, khơng khử trùng nồi áp lực cần kiểm tra độ vô trùng môi trường thời điểm sử dụng (xem 9.2.2) Sử dụng mơi trường vịng h sau chuẩn bị 3.3.3 Kiểm tra tính đảm bảo chất lượng mơi trường cấy Đối với việc xác định tính chọn lọc hiệu quả, xem ISO/TS 11133-1 Kiểm tra tính thạch lactoza mật đỏ trung tính tím tinh thể (VRBL) theo ISO/TS 111332:2003, Bảng B.1 3.4 Môi trường khẳng định: Canh thang mật lactoza lục sáng 3.4.1 Thành phần Dịch thủy phân casein emzym 10 g Lactoza (C12H22O11.H2O) 10 g Mật bị khơ 20 g Lục sáng (Brilliant green) 0,0133 g Nước 000 ml 3.4.2 Chuẩn bị Hịa tan thành phần mơi trường hồn chỉnh khơ nước cách đun nóng nhẹ, cần, nồi cách thủy (4.5) Chỉnh pH cho sau khử trùng 7,2 ± 0,2 25 °C, cần Chuyển 10 ml môi trường vào ống nghiệm (6.7) chứa ống Durham (6.8) Khử trùng 15 phút nồi hấp áp lực (4.1) 121 °C Các ống Durham không chứa bọt khí sau khử trùng 4) Thiết bị dụng cụ thủy tinh Sử dụng thiết bị thông thường phòng thử nghiệm vi sinh [Xem TCVN 6404 (ISO 7218)] cụ thể sau: 4.1 Thiết bị để trùng khô (tủ sấy) để trùng ướt (nồi hấp áp lực) Xem TCVN 6404 (ISO 7218) 4.2 Tủ ấm, hoạt động 30 °C ± °C 37 °C ± 1°C 4.3 Đĩa Petri, thủy tinh chất dẻo có đường kính từ 90 mm đến 100 mm 4.4 Pipet xả hết, có dung tích danh định ml 4.5 Nồi cách thủy, thiết bị tương tự có khả hoạt động từ 44 °C đến 47 °C 100 °C 4.6 Thiết bị đếm khuẩn lạc, gồm nguồn chiếu sáng dụng cụ đếm học điện tử 4.7 Ống nghiệm, kích thước khoảng 16 mm x 160 mm 4.8 Ống Durham, có kích thước phù hợp với ống nghiệm (4.7) 4.9 Bình chai, để đun sôi bảo quản môi trường cấy 4.10 pH met, xác đến ± 0,1 đơn vị pH 25 °C 4.11 Que cấy vòng, platin-iridi niken-crom, đường kính khoảng mm, loại vịng cấy dùng lần 5) Lấy mẫu Lấy mẫu theo tiêu chuẩn cụ thể thích hợp sản phẩm tương ứng Nếu khơng có tiêu chuẩn bên liên quan cần thỏa thuận với vấn đề 6) Chuẩn bị mẫu thử Chuẩn bị mẫu theo TCVN 6507 (ISO 6887) (phần có liên quan), TCVN 6263 (ISO 8261) tiêu chuẩn cụ thể liên quan đến sản phẩm cần kiểm tra Nếu khơng có tiêu chuẩn cụ thể bên liên quan thỏa thuận với vấn đề 7) Cách tiến hành 7.1 Phần mẫu thử, huyền phù ban đầu dịch pha loãng Chuẩn bị phần mẫu thử, huyền phù ban đầu (dung dịch pha loãng đầu tiên) dung dịch pha lỗng TCVN 6507 (ISO 6887) (phần có liên quan), TCVN 6263 (ISO 8261) tiêu chuẩn cụ thể liên quan đến sản phẩm cần kiểm tra 7.2 Cấy ủ ấm mẫu 7.2.1 Chuẩn bị hai đĩa sản phẩm dạng lỏng và/hoặc pha lỗng chọn Dùng pipet vơ trùng (4.4) cho vào tâm đĩa ml mẫu thử sản phẩm lỏng dung dịch pha lỗng thích hợp Sử dụng pipet vơ trùng cho dung dịch pha lỗng 7.2.2 Rót khoảng 15 ml môi trường VRBL (3.3) 44 °C đến 47 °C vào đĩa Petri Thời gian tính từ kết thúc khâu chuẩn bị huyền phù ban đầu (hoặc dung dịch pha loãng 1/10 sản phẩm lỏng) đến thời điểm rót mơi trường vào đĩa khơng vượt 15 phút Trộn dịch cấy với môi trường hỗn hợp đông đặc lại cách đặt đĩa Petri mặt phẳng ngang, mát Đồng thời chuẩn bị đĩa kiểm tra với 15 ml môi trường để kiểm tra độ vô trùng 7.2.3 Sau đơng đặc hồn tồn, rót khoảng ml môi trường VRBL (3.3) 44 °C đến 47 °C lên bề mặt môi trường cấy Để cho đông lại mô tả 7.2.4 Lật ngược đĩa cấy để vào tủ ấm (4.2) 30 °C 37 °C (như thỏa thuận) 24 h ± h 7.3 Đếm khuẩn lạc Sau thời gian ủ quy định (xem 7.2.4), có thể, chọn đĩa Petri có từ 10 khuẩn lạc trở lên đến 150 khuẩn lạc Dùng thiết bị đếm khuẩn lạc (4.6) để đếm khuẩn lạc màu đỏ ánh tía có đường kính 0,5 mm lớn (đơi có vùng mật tủa đỏ bao quanh) Các khuẩn lạc coi Coliform điển hình khơng cần phải thử khẳng định tiếp Đối với chi tiết kỹ thuật đếm khuẩn lạc, xem TCVN 6404 (ISO 7218) Cũng đếm khẳng định khuẩn lạc điển hình (ví dụ kích cỡ nhỏ hơn), tất khuẩn lạc có nguồn gốc từ sản phẩm sữa có chứa đường khơng phải lactoza, sau ủ theo 7.4 Việc chuyển hóa đường khơng phải đường lactoza làm cho khuẩn lạc có hình dạng nhìn tương tự Coliform điển hình CHÚ THÍCH Vẻ bề ngồi vùng mật tủa đỏ bao quanh khuẩn lạc phụ thuộc vào loại Coliform chất lượng môi trường 7.4 Khẳng định Cấy năm khuẩn lạc loại khơng điển hình, sẵn có, cho vào ống nghiệm canh thang mật lactoza lục sáng (3.4) Ủ ống nghiệm tủ ấm (4.2) đặt 30 °C 37 °C (theo thỏa thuận) 24 h ± h Các ống Durham cho thấy có sinh khí coi có chứa Coliform Lấy kết đếm phép tính (điều 10) 8) Biểu thị kết Xem TCVN 6404 (ISO 7218) 9) Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ra: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; - phương pháp thử sử dụng viện dẫn tiêu chuẩn này; - tất chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn này, với chi tiết bất thường khác ảnh hưởng tới kết quả; - kết thử nghiệm thu được; - độ lặp lại kiểm tra, nêu kết cuối thu 2.3.8 Phương pháp định lượng Escherichia coli dương tính (dựa theo TCVN 7924-1:2008) 1) Phạm vi áp dụng β-glucuronidaza Tiêu chuẩn qui định phương pháp định lượng Escherichia coli dương tính βglucuronidaza phẩm thực phẩm thức ăn chăn nuôi Phương pháp sử dụng kỹ thuật đếm khuẩn lạc sau giai đoạn phục hồi sử dụng màng lọc ủ 44 °C mơi trường đặc có chứa thành phần tạo sắc để phát enzym βglucuronidaza CẢNH BÁO – Một số chủng Escherichia coli không phát triển 44 °C cụ thể Escherichia coli âm tính β-glucuronidaza Escherichia coli O157 không phát 2) Nguyên tắc 2.1 Cấy lượng xác định mẫu thử lượng xác định huyền phù ban đầu lên màng xenluloza phủ thạch glutamat khoáng cải biến (MMGA), sau ủ 37 °C h Sử dụng dung dịch pha loãng thập phân mẫu thử huyền phù ban đầu cấy vào hai đĩa độ pha loãng, điều kiện 2.2 Để phân lập, chuyển màng từ giai đoạn phục hồi MMGA sang thạch trypton-mật-glucuronid (TBX), ủ 44 °C 18 h đến 24 h 2.3 Số lượng đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) Escherichia coli dương tính βglucuronidaza gam mililit mẫu tính từ số lượng CFU có màu xanh điển hình (xem điều 10) 3) Dịch pha lỗng mơi trường cấy Đối với phòng thử nghiệm hành, xem TCVN 6404:2008 (ISO 7218:2007) 3.1 Dịch pha loãng Xem TCVN 6507-1 (ISO 6887-1) tiêu chuẩn cụ thể liên quan đến sản phẩm cần xác định 3.2 Môi trường cấy 3.2.1 Môi trường phục hồi: Thạch glutamat khoáng cải biến (MMGA) 3.2.1.1 Thành phần Natri glutamat 6,35 g Lactoza 10,0 g Natri focmat 0,25 g L-(-)-xystin 0,02 g L-(-)-axit aspactic 0,02 g L-(+)-arginin 0,024 g Thiamin 0,001 g Axit nicotinic 0,001 g Axit pantothenic 0,001 g Magie sunfat ngậm bảy phân tử nước 0,100 g (MgSO4.7H2O) 0,010 g Sắt (III) amoni xytrata 0,010 g Canxi clorua ngậm hai phân tử nước 0,900 g (CaCl2.2H2O) 2,5 g Dikali hydro phosphat (K2HPO4) g đến 18 g b Amoni clorua 1000 ml Thạch Nước a Hàm lượng sắt 15 % (phần khối lượng) b Tùy thuộc vào sức đông thạch 3.2.1.2 Chuẩn bị Hòa tan amoni clorua nước Cho thêm thành phần khác vào đun đến sôi Nếu cần, chỉnh pH để sau khử trùng pH phải 6,7 ± 0,2, 25 °C Chuyển lượng đến 500 ml môi trường sang vật chứa thích hợp (4.10) Khử trùng 10 nhiệt độ 115 °C nồi hấp áp lực (4.1) 3.2.1.3 Chuẩn bị đĩa thạch Rót lượng từ 12 ml đến 15 ml môi trường vào đĩa Petri vô trùng (4.11) đông đặc Làm khô đĩa thạch [xem TCVN 6404:2008 (ISO 7218:2007)] Các đĩa bảo quản đến ngày °C ± °C Các đĩa thạch cần phải đủ khô để nước không xuất 15 dàn dịch cấy (1 ml) 3.2.2 Môi trường chọn lọc: Thạch trypton-mật-glucuronid (TBX) 3.2.2.1 Thành phần Sản phầm thủy phân casein enzym 20,0 g Muối mật No.3 1,5 g Axit 5-bromo-4-clo-3-indolyl-β-Dglucuronid (BCIG) 144 µmol a Dimetyl sulfoxit (DMSO) ml b Thạch g đến 18 g c 1000 ml Nước a Ví dụ: 0,075 g muối xyclohexylamoni b Dimetyl sulfoxit độc hít tiếp xúc phải Cần sử dụng tủ hút khói Vì độc tính nên nhà sản xuất khuyến cáo dùng dung dịch pha loãng c Phụ thuộc vào sức đơng thạch 3.2.2.2 Chuẩn bị Hịa tan BCIG dimetyl sulfoxit dung dịch loãng theo khuyến cáo nhà sản xuất Hòa tan tất thành phần nước đun đến sôi Chỉnh pH để sau khử trùng pH phải 7,2 ± 0,2 25 °C, cần Khử trùng 15 nhiệt độ 121 °C nồi hấp áp lực (4.1) 3.2.2.3 Chuẩn bị đĩa thạch Tiến hành theo 5.2.1.3 4) Thiết bị dụng cụ thủy tinh Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm vi sinh thông thường [xem TCVN 6404:2008 (ISO 7218:2007)] cụ thể sau: 4.1 Thiết bị khử trùng khô (tủ) khử trùng ướt (nồi hấp áp lực) 4.2 Tủ ấm, trì nhiệt độ 37 °C ± °C 44 °C ± °C 4.3 Tủ sấy buồng sấy thơng gió, trì nhiệt độ từ 25 °C ± °C đến 50 °C ± °C, tủ thổi không khí 4.4 Tủ lạnh (dùng để bảo quản mơi trường chuẩn bị), trì nhiệt độ °C ± °C 4.5 Màng vô trùng không gây ức chế, xenlulo axetat este hỗn hợp xenlulo, có cỡ lỗ từ 0,45 µm đến 1,2 µm đường kính 82 mm 4.6 Bộ kẹp đầu tù, vô trùng, dài khoảng 12 cm 4.7 Máy đo pH, có độ xác đến ± 0,1 đơn vị pH Ngưỡng đo tối thiểu 0,01 đơn vị pH Máy đo pH gắn với hệ thống cân nhiệt tay tự động 4.8 Pipet xả hết (đầu thổi), miệng rộng dung tích danh định ml, chia vạch 0,1 ml 4.9 Ống đong, có dung tích thích hợp để chuẩn bị mơi trường 4.10 Bình, ống nghiệm chai, có dung tích thích hợp để khử trùng bảo quản mơi trường cấy 4.11 Đĩa petri, đường kính khoảng 90 mm 4.12 Bộ dàn mẫu, thủy tinh chất dẻo, ví dụ: que thủy tinh, đường kính khoảng 3,5 mm, dài 20 cm uốn vng góc đầu dài khoảng cm đầu cuối làm nhẵn cách đốt nóng 5) Lấy mẫu Điều quan trọng mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện Mẫu không bị hư hỏng thay đổi thành phần trình vận chuyển bảo quản Việc lấy mẫu không qui định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo tiêu chuẩn cụ thể liên quan đến sản phẩm Nếu khơng có tiêu chuẩn cụ thể liên quan đến sản phẩm bên tự thỏa thuận vấn đề 6) Chuẩn bị mẫu thử Chuẩn bị mẫu thử theo tiêu chuẩn cụ thể liên quan đến sản phẩm Nếu khơng có tiêu chuẩn cụ thể liên quan đến sản phẩm bên tự thỏa thuận vấn đến 7) Cách tiến hành 7.1 Phần mẫu thử, huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng Xem TCVN 6507-1 (ISO 6887-1) tiêu chuẩn cụ thể liên quan đến sản phẩm cần xác định 7.2 Phục hồi 7.2.1 Dùng kẹp đầu tù vô trùng (4.6), đặt màng xenlulo axetat (4.5) lên bề mặt khô hai đĩa thạch MMGA (3.2.1.3), ý khơng để lẫn bọt khí vào màng lọc Dùng dàn mẫu vô trùng (4.12) để dàn phẳng màng, cần Dùng pipet vô trùng (4.8), lấy ml mẫu thử huyền phù ban đầu cho vào màng Dùng dàn mẫu vô trùng, dàn dịch cấy khắp bề mặt màng, tránh để tràn khỏi màng 7.2.2 Lặp lại quy trình 7.2.1 với dung dịch pha loãng thập phân tiếp theo, cần, dùng pipet vô trùng khác que dàn mẫu vô trùng khác cho dung dịch pha loãng 7.2.3 Để đĩa cấy theo phương nằm ngang nhiệt độ phòng khoảng 15 dịch cấy ngấm sâu vào thạch Ủ ấm đĩa h ± h tủ ấm (6.2) nhiệt độ 37 °C với màng/mặt thạch hướng lên 7.3 Chuyển sang môi trường chọn lọc ủ ấm 7.3.1 Sau phục hồi, dùng kẹp vô trùng (4.6), chuyển sang màng từ MMGA (môi trường phục hồi) sang đĩa thạch đựng môi trường TBX (3.2.2.3) CẢNH BÁO – Màng ẩm ướt dính vào bề mặt thạch Tránh để lẫn bọt khí Khơng sử dụng dàn mẫu 7.3.2 Ủ ấm đĩa từ 18 h đến 24 h tủ ấm (4.2) nhiệt độ 44 °C không 45 °C, với màng/mặt thạch hướng lên Không chồng đĩa ba lớp 7.4 Đếm đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) Sau giai đoạn ủ ấm quy định (7.3.2), đếm CFU điển hình Escherichia coli dương tính β-glucuronidaza đĩa thạch chứa 150 CFU điển hình 300 CFU tổng số (điển hình khơng điển hình) Nếu dịch cấy tách riêng quan sát khuẩn lạc điển hình, đĩa chứa CFU điển hình cần xem xét theo phương pháp tính khác điều 10 8) Biểu thị kết 8.1 Yêu cầu chung Việc tính tốn 8.2 cần tính đến trường hợp thường gặp tiến hành theo thực hành phịng thử nghiệm tốt Cũng có số trường hợp đặc biệt xảy (ví dụ số lượng CFU khác hai đĩa từ dung dịch pha loãng, tỷ lệ khác nhiều từ hệ số pha loãng đĩa từ hai độ pha loãng liên tiếp) Các kết đếm cần người phân tích có lực kiểm tra, giải thích kết bị loại bỏ 8.2 Tính tốn Để có kết đúng, cần đếm CFU điển hình đĩa chứa tối thiểu 15 CFU màu xanh điển hình Tính N, số lượng CFU Escherichia coli dương tính β-glucuronidaza có mặt mẫu thử mililit gam sản phẩm công thức (1): N= ∑ a V× ( + 0,1 2)n×1 d (1) n Σa tổng khuẩn lạc đếm tất đĩa giữ lại sau hai độ pha lỗng liên tiếp, có đĩa chứa tối thiểu 15 CFU màu xanh; n1 số đĩa giữ lại độ pha loãng thứ nhất; V thể tích dịch cấy dùng đĩa, tính mililit; n2 số đĩa giữ lại độ pha loãng thứ hai; d hệ số pha loãng tương ứng với độ pha loãng thứ giữ lại [d=1 trường hợp (các mẫu dạng lỏng) mẫu thử cấy trực tiếp] Làm trịn kết đến hai chữ số có nghĩa [xem TCVN 6404:2008 (ISO 7218:2007)] Lấy kết số lượng Escherichia coli dương tính β-glucuronidaza mililit (sản phẩm dạng lỏng) gam (sản phẩm dạng khác) biểu thị theo số nguyên đến hai chữ số có nghĩa (dưới 100) theo số từ 1,0 đến 9,9 nhân lũy thừa 10 8.3 Ước tính số lượng nhỏ 8.3.1 Nếu có hai đĩa [của mẫu thử (sản phẩm dạng lỏng) huyền phù ban đầu (sản phẩm dạng khác) độ pha loãng thứ cấy giữ lại] chứa 15 CFU điển hình, tính N E số CFU Escherichia coli dương tính βglucuronidaza có mặt mẫu thử trung bình đĩa song song theo cơng thức (2): NE = c V ×∑n × (2) d Trong Σc tổng CFU điển hình đếm hai đĩa; V thể tích dịch cấy dùng đĩa, tính mililit; n số đĩa giữ lại (trong trường hợp n = 2); d hệ số pha loãng tương ứng với độ pha loãng thứ giữ lại [d = trường hợp (các mẫu dạng lỏng) mẫu thử cấy trực tiếp] Làm tròn kết đến hai chữ số có nghĩa [xem TCVN 6404:2008 (ISO 7218:2007)] Biểu thị kết sau: - số lượng Escherichia coli dương tính β-glucuronidaza ước tính mililit (sản phẩm dạng lỏng) gam (sản phẩm dạng khác): N E = Y 8.3.2 Nếu hai đĩa [của mẫu thử (sản phẩm dạng lỏng) huyền phù ban đầu (sản phẩm dạng khác) từ độ pha lỗng thứ cấy giữ lại] khơng chứa CFU điển hình nào, biểu thị kết sau: - 1/d Escherichia coli dương tính β-glucuronidaza mililit (sản phẩm dạng lỏng) gam (sản phẩm dạng khác); Trong d hệ số pha loãng huyền phù ban đầu độ pha loãng thứ cấy giữ lại [d = sử dụng sản phẩm dạng lỏng (mẫu thử) khơng cần pha lỗng] 8.3.3 Nếu tất CFU điển hình khơng điển hình hai đĩa độ pha loãng thứ d1 chứa nhiều 300 CFU màu xanh nhìn thấy, hai đĩa độ pha loãng d chứa 300 khuẩn lạc, khơng có CFU điển hình cần đếm, biểu thị kết sau: - 1/d2 nhiều 1/d1, Escherichia coli dương tính β-glucuronidaza có mililit (sản phẩm dạng lỏng) gam (sản phẩm dạng khác); Trong d1 d2 hệ số pha loãng tương ứng với dung dịch pha loãng d d2 8.3.4 Nếu tất CFU điển hình khơng điển hình hai đĩa độ pha lỗng thứ d1 chứa nhiều 300, khơng có CFU điển hình nhìn thấy, hai đĩa độ pha loãng d chứa 300 khuẩn lạc, khơng có CFU điển hình cần đếm, biểu thị kết sau: - 1/d2 CFU Escherichia coli dương tính β-glucuronidaza có mililit (sản phẩm dạng lỏng) gam (sản phẩm dạng khác); Trong d2 hệ số pha lỗng tương ứng với dung dịch pha loãng d 8.4 Phương pháp tính tốn: Các trường hợp đặc biệt 8.4.1 Trong trường hợp, hai đĩa đọ pha loãng d chứa lớn 150 CFU điển hình, hai đĩa độ pha lỗng d chứa 15 CFU điển hình - số lượng CFU điển hình đĩa độ pha lỗng d nằm khoảng từ 150 đến 167 (giới hạn khoảng tin cậy giá trị trung bình 150 CFU), sử dụng phương pháp tính trường hợp chung (8.2); - số lượng CFU điển hình đĩa độ pha loãng d nhiều 167 (giới hạn khoảng tin cậy giá trị trung bình 150 CFU), tính đến kết số đếm độ pha loãng d2 thực tiếp với đếm số lượng nhỏ (8.3) 8.4.2 Trong trường hợp, số đếm CFU điển hình đĩa tất dộ pha loãng cấy có nhiều 150, biểu thị kết sau: - nhiều 150/d Escherichia coli dương tính β-glucuronidaza có mililit (sản phẩm dạng lỏng) gam (sản phẩm dạng khác) Trong d hệ số pha loãng dung dịch pha loãng cấy sau 8.4.3 Trong trường hợp có hai đĩa từ độ pha lỗng thất (nồng đồ cao nhất) chứa 150 CFU điển hình, tính số N’ Escherichia coli dương tính βglucuronidaza có mặt mẫu thử trung bình số khuẩn lạc đếm hai đĩa, sử dụng cơng thức (3): ∑c (3) N= V×n× d Σc tổng số khuẩn lạc điển hình đếm hai đĩa, có đĩa chứa tối thiểu 15 CFU điển hình; V thể tích dịch cấy cấy đĩa, tính mililit; n số đĩa giữ lại (trong trường hợp n = 2); d hệ số pha loãng tương ứng với độ pha loãng giữ lại Làm tròn kết đến hai chữ số có nghĩa [xem TCVN 6404:2008 (ISO 7218:2007)] 8.5 Các giới hạn tin cậy Xem TCVN 6404:2008 (ISO 7218:2007) 9) Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải nêu rõ: - thông tin cần thiết nhận biết đầy đủ mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; - phương pháp thử sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; - tất điều kiện thao tác không qui định tiêu chuẩn này, xem tùy ý, với tình bất thường ảnh hưởng đến kết