BÙI XUÂN ĐỒNG NGUYỄN HUY VĂN , ‫؛؛؛‬٠‫ﰐ‬ ‫ﺓ‬.‫؛‬ ٠ DÙNG TRONG CÔNG n g h ệ S.NH HỌC e O ậ *KcotỶ í Baam, Netherlands • CCF (Culture Collection of Fungi, Department of Sciences) Prague, Czech • CMI (Commonwealth Mycological Institute) - Kew, Surrey, England • IFM (Institute for Food Microbiology) - Chibaken, Japan (British Conimonwenlth Collections of Microorganisms) London, England • ITCC (Indian Type Culture Collection) ~ New Delhi India • ICP (Laboratoire de Cryptogamie, Museum national d’Histoire naturelle) - Paris, France • NRRL (Northern Regional Research Laboratoiy, u s Department of Agriculture) - Peorin, U.S.A Việt Nam, sở sau cổ thể cung cấp chủng thuộc loài vi nấm nói : - Bảo tàng giống vi sinh vật, Đại học quốc gia, Hà Nội - Bộ môn Thực vật, Đại học Dược, Hà Nội Chúng ta cấn ý chủng vi nấm giữ bảo tàng hay sở giữ giống thường cấy truyền nhiều lần, giảm hoạt tính sinh học, hiệu suất lên men aflatoxin không cao chủng phân lập từ chất tự nhiên hay từ sản phẩm nông nghiệp Để chọn lọc chủng loài Aspergillus flavus A.parasiticus từ lạc nhân, cổ thể tiến hành theo sơ đồ thí nghiệm bàng 1.5 Bàng 1,5, Sơ đồ thí nghỉệm chọn iọc chủng vi nấm thuộc loàỉ Aspergillus flavus A,parasiticus để lên men aflatoxin Thí nghiệm thuộc nhóm loài (T kháng sinh) Phương Thí nghiệm : Phân lập chủng : Môi trưòng Czapek pháp : Ulater Mục đích MÔI trướng Mục đích : Đjnh AspergiHus ílavus loại để chọn chủng thuộc loài A.dayus A parasỉĩicus I I MÔI trường : MÔI trường Czapek Phương pháp : Định loại h١inh thái Thí nghiệm Mục đích : Lên men chủng thuộc loài MÔI trưòng : Môi trường Czapek sủa đổi Phương pháp Thí nghiệm Mục đích : Lên A.fìam4s /4 parasiricus men lỏng bình nón : Sơ chọn chủng : sắc ký cột nhỏ tạo thành atlatoxln Phương pháp Thí nghiệm Mục đích : Chọn ; Phương pháp chừig tạo thành atlatoxin cho hiệu suất cao Chiết xuất atlatoxin dung môi Đjnh lượng atlatoxln sắc ký mỏng Thí nghiệm Mục đích cao : Lên Phương pháp 10 men kiểm tra chừig tạo thành atlatoxln cho hiệu suất : Như ỏ thí nghiệm nghiên cứu k h ả n ăn g tạo th n h acid hữu cơ, hoạt tín h enzim m ột số sả n phẩm tra o đổi c h ất khác C húng ta cân ý tro n g chi P énicillium ^ m ột sô loài cđ khả n ăn g tạo th n h m ycotoxin, đặc biệt m ycotoxin có khả n ă n g gây ung thư gan loài p isỉa n d ic u m tạo th n h islandotoxin luteoskyrin, loài p u rtica e tạo th n h patulin, v.v Đ ể đ ịnh loại loài thuộc chi P én icilliu m dùng rộ n g rài tro n g công n ghệ sinh học {P.griseofulvumy p.chrysogenum , P ,notatum , p roqiieforti) urticae), sau loài tạ o th n h độc tố xác đ ịnh chủng nấm nguy hiểm {P islandicum , p thuộc chi nấm đ ịn h c h ủ n g n ấm đd lượt thuộc nhóm này, cần xác loài, phân nhóm , sau đđ xác đ ịn h loài chủng nấm đố (các bảng 3.17, 3.18, 3.19) Bảng 3,Ĩ7, K lióa đ ịn h lo ỉ nhóm loài (s e c tio ) ph ân nh óm (s u b s e c tio ) (T h e o t Chổi Chổi Có Pénicillium L in k ex Fr củ a c h i P id o p lỉts k o 1972, B X Đ n g 1976) vòng (Sectio MONOVERTICILLATA) 2 vòng-nhiêu vòng thể túi hạch nấm Không túi hạch nấm Có thể túi Subscctio MonoucrìiciHata-Ascogcnd Có hạch nấm Suhscctìo Monowcnicillaîa sdcrogcna Chổi vòng có 1-2 nhánh Suhsccrio MonovcrĩicìUaìa-Ramìgena Chổi vòng, không Giá bào có nhánh từ trần dài phần lổn 100 /[...]... Định loại ch ủ n g vi nấm đến cá c loài Aspergillus yZavu،٢ Link e x F r và Á parasiticus Speare Sau »khi định loại chủng vi nấm đến nhdm loài flovus), khâu cuối cùng trong vi c định loại một định loài của chủng vi nấm đó Nhóm loài Aspergillus flavus gổm 9 loài và 2 lo،ài Aspergillus flavus và A.parasiticus trong nhòm khóa phân loại trong bảng 1.7 (nho'm loài Aspergillus chủng vi nấm là xác thứ Để... sản phấm trao đổi chất của vi nấm, vì những thành phần này cd những chức năng sinh lý và cấu trúc quan trọng ở tế bào vi nấm 24 Các ngiiyên tố khoáng cần thiết đối với sự sinh trưởng, phát triển của vi nấm gổm các nguyên tố đa lượĩỉg (P, s, K, Mg, Ca) và các nguyên tố vi lượng (Fe, Mn, Zn, Cu, Co, Ni, V.V.) p thường chiếm tỷ lệ cao nhất trong thành phần khoáng của tế bào vi nấm, tham gia vào cấu tạo... đổi của các chất dinh dưỡng trong môi trường, hiệu suất tạo thành aílatoxin trong quá trinh lên men ; chất thải công nghiẽp chủ yếu là chất lỏng, nên vi c xử lý ít khd khăn, vì những ưu điểm trên, nên cũng như công nghệ sản xuất các hợp chất cổ tác dụng sinh học khác (enzim, vitamin, acid amin, kháng sinh, một số acid hữu cơ, V.V.), còng nghệ lên men aflatoxin ở các nước đều dùng kỹ thuật lên men lỏng... ngày thứ nám vào các ống thạch nghiêng các khuẩn lạc màu lục, vàng lục trong tủ cấy Để tiếp các ống thạch nghiêng đâ cấy nấm vào tủ ấm ở nhiệt độ trên Theo dõi nấm mọc trong các ống thạch nghiêng từ ngày thứ hai đến ngày thứ mười để kiểm tra độ thuần khiết của chủng vi nấm Loại các chủng vi nấm bị nhiễm vi khuẩn hay các loài vi nấm không thuộc nhóm loài Aspergíllus flavus Ghi nhãn cho mỗi ống thạch... vào trong các bình ndn cò dung tích 100 - 200 ml, tiệt trùng trong nổi hấp ở 120١^٠C trong 20 min Trước khi phân phối môi trường vào trong các hộp lổng, bổ sung kháng sinh (tetracyclin 0,5g cho 1 lit môi trường) để ức chế sự phát triển của vi khuẩn Dùng phần môi trường không bổ sung kháng sinh để làm thạch nghiêng trong các ống thử cổ đường kính 12 15 mm Kỹ íhuậí phân iập : Để phân lập các chủng vi nấm. .. hình cầu, hVih tia tỏa tròn Bao giờ cũng có tê bào chán (foot-cell) ờ gốc glá bào tử trần Nếu chủng vi nấm có các đặc điểm phân loại ở trong bảng 1.6, chủng đó thuộc chi Aspergillus D ịn h loại ch ủ n g vi nấm đến nhóm loài A spergillus flavu s Cho đến hiện nay, chuyên luận phân loại chi Aspergillus của Raper và Fennell (1966) vẫn được dùng làm tài liệu chính để định loại các loài của chi vi nấm này Chi... yếu để định loại các loài vi nấm này Nguồn dinh dưỡng nitơ - Các loài nấm khác nhau cố nhu cẵu khác nhau về nguồn dinh dưỡng nitơ, và thường cổ khả năng sử dụng cả các nguồn nitơ hữu cơ và các nguồn nitơ vô cơ Cd những loài vi nấm sinh trưởng, phát triển tốt trong môi trường cd muối amon, ngược lại một số loài vi nấm khác phát triển tốt hơn ở môi trường cd nitrat Nhiều loài trong đd cd các loài A ,flavus... theo dõi hàng ngày để biết chác chắn chủng nấm không bị nhiễm vi khuẩn hay các loài vi nấm khác Sau ngày nuôi cấy thứ 6 , dùng ngaycác ống thạch nghiêng này để lên men aflatoxin Làm địch treo bào tử trấn trong nước cất tiệt trùng, khoảng 100 bào tử trong 1 ml Cấy ngay dịch treo bào tử vào môi trường lên men, cấy 5 ml dịch treo trong 100 ml môi trường chứa sẵn trong bình nđn có dung tích 500 ml Lác ngang,... chi vi nấm khác, nên để định loại chắc chắn các chủng của các loài Aspergills flavus và Aparasiticus cần tiến hành lần lượt các bước sau (sau khi đã cấy truyền chủng vi nấm từ ống thạch nghiêng sang các hộp lổng) : - Xác định các đặc điểm hinh thái của khuẩn lạc - Xác định các đặc điểm của bào tử trần và bộ máy mang bào tử trấn - Định loại chủng vi nấm đến chi Aspergillus - Định loại chủng vi nấm đến... (không bị lẫn vi khuẩn hoặc các loài vi nấm khác), chúng ta phải phân lập khuẩn lạc của các loài thuộc nhdm loài này từ trên mặt môi trường thạch trong hộp lổng đặt các hạt lạc, từ ngày thứ hai, và chậm nhất là ngày thứ nám kể từ khi đặt lạc vào môi trường Thường từ cuối ngày thứ hai trở đi, khuẩn lạc của một số loài vi nấm tăng trưởng nhanh đã che phủ một phấn khuẩn lạc của các loài vi nấm khác, gây