THIAMIN NITRAT Thiamini mononitras C12H17N5O4S P.t.l: 327,4 Thiamin nitrat 3-[(4-amino-2-methylpyrimidin-5-yl) methyl]-5-(2-hydroxyethyl)-4methylthiazol nitrat, phải chứa từ 98,0 đến 101,0% C12H17N5O4S, tính theo chế phẩm làm khô Tính chất Bột kết tinh trắng hay gần trắng tinh thể nhỏ không màu Hơi tan nước, dễ tan nước sôi, khó tan ethanol 96% methanol Định tính Có thể chọn hai nhóm định tính sau: Nhóm I: A, C Nhóm II: B, C A Phổ hồng ngoại (Phụ lục 4.2) chế phẩm phải phù hợp với phổ hồng ngoại thiamin nitrat chuẩn (ĐC) B Hòa tan khoảng 20 mg chế phẩm 10 ml nước, thêm ml dung dịch acid acetic M (TT) 1,6 ml dung dịch natri hydroxyd M (TT), đun nóng cách thuỷ 30 phút, để nguội Thêm ml dung dịch natri hydroxyd M (TT), 10 ml dung dịch kali fericyanid 5% (TT) 10 ml n-butanol (TT), lắc mạnh phút Lớp butanol cho huỳnh quang xanh lam rõ, đặc biệt quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 365 nm Làm lại phản ứng dùng 0,9 ml dung dịch natri hydroxyd M (TT) 0,2 g natri sulfit (TT) thay cho 1,6 ml dung dịch natri hydroxyd M (TT), lớp butanol huỳnh quang C mg chế phẩm cho phản ứng đặc trưng ion nitrat (Phụ lục 8.1) Độ màu sắc dung dịch Dung dịch S: Hòa tan 1,0 g chế phẩm nước carbon dioxyd (TT) pha loãng thành 50 ml với dung môi Dung dịch S phải (Phụ lục 9.2) màu đậm màu màu mẫu V (Phụ lục 9.3, phương pháp 2) pH pH dung dịch S phải từ 6,8 đến 7,6 (Phụ lục 6.2) Tạp chất liên quan Xác định phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Dung dịch A: Trộn thể tích acid acetic băng (TT) 95 thể tích nước Pha động A: Dung dịch natri hexansulfonat (TT) 0,3764% chỉnh đến pH 3,1 acid phosphoric (TT) Pha động B: Methanol loại dùng cho HPLC Dung dịch thử: Hòa tan 0,35 g chế phẩm 15,0 ml dung dịch A pha loãng thành 100,0 ml với nước Dung dịch đối chiếu (1): Hòa tan mg chế phẩm mg tạp chất chuẩn E thiamin (ĐC) ml dung dịch A pha loãng thành 25,0 ml nước Pha loãng 5,0 ml dung dịch thu thành 25,0 ml nước Dung dịch đối chiếu (2): Pha loãng 1,0 ml dung dịch thử thành 100,0 ml nước Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (25 cm × 4,0 mm) nhồi pha tĩnh C (4 µm) với diện tích bề mặt 350 m 2/g kích thước lỗ xốp 10 nm Nhiệt độ cột: 45 ºC Detector: Quang phổ tử ngoại bước sóng 248 nm Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút Thể tích tiêm: 25 µl Cách tiến hành: Tiến hành chạy sắc ký theo chương trình dung môi sau: Thời gian (phút) - 25 25 - 33 33 - 40 40 - 45 Pha động A (% tt/tt) 90 → 70 70 → 50 50 50 → 90 Pha động B (% tt/tt) 10 → 30 30 → 50 50 50 → 10 Thời gian lưu tương đối tạp so với pic thiamin (khoảng 30 phút) sau: tạp chất A khoảng 0,3, tạp chất B khoảng 0,9, tạp chất C khoảng 1,2 Kiểm tra khả thích hợp hệ thống sắc ký: Tiêm dung dịch đối chiếu (1), độ phân giải pic tạp chất E pic thiamin không nhỏ 1,6 Tiêm dung dịch thử dung dịch đối chiếu (2) Yêu cầu sắc ký đồ dung dịch thử: - Không có pic tạp có diện tích lớn diện tích pic thu sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (2) (1,0%) - Tổng diện tích pic tạp không lớn 1,5 lần diện tích pic thu sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (2) (1,5%) Bỏ qua pic có diện tích nhỏ 0,05 lần diện tích pic thu sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (2) (0,05%) Ghi chú: Tạp chất A: 3-[(4-amino-2-methylpyrimidin-5-yl)methyl]-4-methyl-5-[2-(sulphonatooxy)ethyl]thiazol (thiamin sulfat ester) Tạp chất B: 3-[(4-aminopyrimidin-5-yl)methyl]-5-(2-hydroxyethyl)-4-methylthiazol (desmethylthiamin) Tạp chất C: 3-[(4-amino-2-methylpyrimidin-5-yl)methyl]-5-(2-cloroethyl)-4-methylthiazol (clorothiamin) Tạp chất E: 3-[(4-amino-2-methylpyrimidin-5-yl)methyl]-5-(2-hydroxyethyl)-4-methylthiazol-2(3H)thion (thioxothiamin) Kim loại nặng Không 20 phần triệu (Phụ lục 9.4.8) Lấy 1,0 g chế phẩm tiến hành thử theo phương pháp Dùng ml dung dịch chì mẫu 10 phần triệu (TT) để chuẩn bị mẫu đối chiếu Tro sulfat Không 0,1% (Phụ lục 9.9, phương pháp 2) Dùng 1,0 g chế phẩm Mất khối lượng làm khô Không 1,0% (Phụ lục 9.6) (1,000 g; 100 - 105 °C) Định lượng Hoà tan 0,140 g chế phẩm ml acid formic khan (TT), thêm 50 ml anhydrid acetic (TT) Chuẩn độ dung dịch acid percloric 0,1 N (CĐ) Xác định điểm kết thúc phương pháp chuẩn độ đo điện (Phụ lục 10.2), thời gian chuẩn độ vòng phút Làm mẫu trắng song song điều kiện ml dung dịch acid percloric 0,1 N (CĐ) tương đương với 16,37 mg C12H17N5O4S Bảo quản Trong đồ đựng kín (không làm kim loại), tránh ánh sáng Loại thuốc Vitamin B1 Chế phẩm Viên nén, thuốc tiêm