SPIRAMYCIN Spiramicinum Thành phần R Công thức phân tử Phân tử lượng Spiramycin I H C43H74N2O14 843,1 Spiramycin II COCH3 C45H76N2O15 885,1 Spiramycin III CO-CH2-CH3 C46H78N2O15 899,1 Spiramycin kháng sinh nhóm macrolid tạo nuôi cấy chủng vi khuẩn Streptomyces ambofaciens thu phương pháp khác Thành phần (4R,5S,6S,7R,9R,10R,11E,13E,16R)-6-[[3,6-dideoxy-4-O-(2,6-dideoxy-3-C-methyl-α-L-ribohexopyranosyl)-3-(dimethylamino)-β-D-glucopyranosyl]oxy]-4-hydroxy-5-methoxy-9,16dimethyl-7-(2-oxoethyl)-10-[[2,3,4,6-tetradeoxy-4-(dimethylamino)-D-erythrohexopyranosyl]oxy]oxacyclohexadeca-11,13-dien-2-on (spiramycin I, p.t.l: 843) Ngoài có spiramycin II (4-O-acetylspiramycin I) spiramycin III (4-O-propanoylspiramycin I) Hoạt lực không 4100 IU mg, tính theo chế phẩm làm khô Tính chất Bột màu trắng ngà vàng, hút ẩm nhẹ Khó tan nước, dễ tan aceton, ethanol 96% methanol Định tính A Hòa tan 0,10 g chế phẩm methanol (TT) pha loãng thành 100,0 ml với dung môi Pha loãng tiếp 1,0 ml dung dịch thành 100,0 ml methanol (TT) Phổ hấp thụ tử ngoại (Phụ lục 4.1) dung dịch thu khoảng từ 220 - 350 nm có cực đại 232 nm Độ hấp thụ riêng cực đại khoảng 340 B Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel G (TT) Dung môi khai triển: Isopropanol - dung dịch amoni acetat 15% điều chỉnh đến pH 9,6 dung dịch natri hydroxyd 40% - ethyl acetat (4 : : 9) Trộn đều, để yên cho tách lớp sử dụng lớp Dung dịch thử: Hòa tan 40 mg chế phẩm methanol (TT) pha loãng thành 10 ml với dung môi Dung dịch đối chiếu (1): Hòa tan 40 mg spiramycin chuẩn (ĐC) methanol (TT) pha loãng thành 10 ml với dung môi Dung dịch đối chiếu (2): Hòa tan 40 mg erythromycin A chuẩn (ĐC) methanol (TT) pha loãng thành 10 ml với dung môi Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng µl dung dịch Triển khai sắc ký đến dung môi 15 cm Lấy mỏng để bay hết dung môi không khí Phun dung dịch anisaldehyd ethanol (TT) sấy mỏng 110 ºC phút Vết sắc ký đồ thu từ dung dịch thử phải tương ứng vị trí, màu sắc kích thước với vết sắc ký đồ thu từ dung dịch đối chiếu (1) Nếu sắc ký đồ thu từ dung dịch thử xuất hai vết khác có giá trị R f cao giá trị R f vết chính, vết phải tương ứng vị trí màu sắc với vết phụ sắc ký đồ thu từ dung dịch đối chiếu (1) khác biệt với vết sắc ký đồ thu từ dung dịch đối chiếu (2) C Hòa tan 0,5 g chế phẩm 10 ml dung dịch acid sulfuric 0,05 M (TT) thêm 25 ml nước Điều chỉnh dung dịch đến pH dung dịch natri hydroxyd 0,1 M (TT) pha loãng thành 50 ml nước Thêm vào ml dung dịch thu ml hỗn hợp gồm thể tích nước thể tích acid sulfuric (TT), màu nâu xuất pH Hoà tan 0,5 g chế phẩm ml methanol (TT) pha loãng thành 100 ml với nước carbon dioxyd (TT) pH dung dịch thu (Phụ lục 6.2) từ 8,5 - 10,5 Góc quay cực riêng Từ -80o đến -85o, tính theo chế phẩm làm khô (Phụ lục 6.4) Hòa tan 1,00 g chế phẩm dung dịch acid acetic 0,2 M (TT) pha loãng với dung môi thành 50,0 ml để thử Thành phần Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Không 80,0% spiramycin I, không 5,0% spiramycin II không 10,0% spiramycin III; tổng hàm lượng spiramycin I, spiramycin II spiramycin III không 90,0%, hàm lượng tính theo chế phẩm làm khô Pha động, dung dịch sắc ký điều kiện sắc ký theo quy định phần tạp chất liên quan Tiêm dung dịch thử dung dịch đối chiếu (1) Tính toán hàm lượng phần trăm thành phần dựa hàm lượng thành phần spiramycin I, spiramycin II spiramycin III chuẩn Tạp chất liên quan Xác định phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Chuẩn bị dung dịch sắc ký trước sử dụng Pha động: Acetonitril - dung dịch đệm pH 2,2 có chứa natri perclorat 0,93% (30 : 70) Dung môi hòa mẫu: Hỗn hợp acetonitril - nước (3 : 7) Dung dịch thử: Hòa tan 25,0 mg chế phẩm dung môi hòa mẫu pha loãng thành 100,0 ml với dung môi Dung dịch đối chiếu (1): Hòa tan 25,0 mg spiramycin chuẩn (ĐC) dung môi hòa mẫu pha loãng thành 100,0 ml với dung môi Dung dịch đối chiếu (2): Pha loãng 2,0 ml dung dịch đối chiếu (1) thành 100,0 ml dung môi hoà mẫu Dung dịch đối chiếu (3): Pha loãng 5,0 ml dung dịch đối chiếu (1) thành 100,0 ml dung môi hoà mẫu Dung dịch đối chiếu (4): Hòa tan mg spiramycin chuẩn (ĐC) 25 ml pha động, sau đốt nóng cách thuỷ 60 oC 30 phút Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (25 cm × 4,6 mm) nhồi pha tĩnh B (5 µm), diện tích bề mặt riêng 350 m2/g khoảng cách hạt 0,01 µm Detector quang phổ tử ngoại bước sóng 232 nm Tốc độ dòng: 0,8 ml/phút Thể tích tiêm: 20 µl Cách tiến hành: Tiêm dung dịch đối chiếu (2) Điều chỉnh độ nhạy hệ thống cho chiều cao pic sắc ký đồ 50% thang đo Tiêm dung dịch đối chiếu (3) dung dịch đối chiếu (4) Phép thử có giá trị sắc ký đồ thu dung dịch đối chiếu (3) pic có thời gian lưu tương đối so với pic spiramycin I khoảng 1,1 sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (4), độ phân giải pic tạp chất A (neospiramycin I) (được rửa giải lần đầu) spiramycin I (rửa giải khoảng 13 đến 17 phút) 6,3 Nếu cần thiết, điều chỉnh nồng độ acetonitril pha động (tăng nồng độ để giảm thời gian lưu giảm nồng độ để tăng thời gian lưu) Tiêm dung dịch thử dung dịch đối chiếu (2) Ghi lại sắc ký đồ dung dịch thử khoảng thời gian gấp lần thời gian lưu spiramycin I Trên sắc ký đồ thu dung dịch thử: Diện tích pic pic spiramycin I, II, III, không lớn diện tích pic sắc ký đồ thu dung dịch đối chiếu (2) (2%) Bỏ qua pic có diện tích nhỏ 0,05 lần diện tích pic sắc ký đồ thu dung dịch đối chiếu (2) H×nh 1: S¾c ký ®å cña spiramycin Kim loại nặng Không 20 phần triệu (Phụ lục 9.4.8) Lấy 1,0 g chế phẩm thử theo phương pháp Dùng ml dung dịch chì mẫu 10 phần triệu để chuẩn bị mẫu đối chiếu Mất khối lượng làm khô Không 3,5% (Phụ lục 9.6) (0,500 g; 80 oC; áp suất không 670 Pa; phosphor pentoxyd; giờ) Tro sulfat Không 0,1% (Phụ lục 9.8, phương pháp 2) Dùng 1,0 g chế phẩm Định lượng Tiến hành theo “Xác định hoạt lực kháng sinh phương pháp thử vi sinh vật” (Phụ lục 13.9) Dùng phương pháp khuyếch tán; chủng thị: Bacillus subtilis ATCC 6633; dung môi: methanol (TT); chất hoà loãng: dung dịch đệm số 2; môi trường: môi trường số điều chỉnh đến pH 8,0 ± 0,1; khoảng nồng độ dung dịch đem thử: 40 -160 IU/ml; nhiệt độ ủ: 32 - 35 oC Bảo quản Trong đồ đựng kín Loại thuốc Thuốc kháng khuẩn Chế phẩm Viên nén