CLINDAMYCIN HYDROCLORID Clindamycini hydrochloridum C18H33ClN2O5S.HCl P.t.l: 461,5 Clindamycin hydroclorid methyl 7-cloro-6,7,8-trideoxy-6- [[[(2S,4R)-1-methyl-4-propylpyrroli -din -2-yl] carbonyl] amino]-1-thio-L-threo-α-D-galacto-octopyranosid hydroclorid, phải chứa từ 84,0 đến 93,0 % clindamycin, C18H33ClN2O5S, tính theo chế phẩm khan Tính chất Bột kết tinh trắng gần trắng Dễ tan nước, khó tan ethanol 96% Định tính Có thể chọn hai nhóm định tính sau: Nhóm I: A, C Nhóm II: B, C, D A Phổ hồng ngoại (Phụ lục 4.2) chế phẩm phải phù hợp với phổ hồng ngoại clindamycin hydroclorid chuẩn (ĐC) B Hoà tan 10 mg chế phẩm ml dung dịch acid hydrocloric loãng (TT) đun nóng cách thuỷ phút Thêm ml dung dịch natri carbonat 10% (TT) ml dung dịch natri nitroprusiat 2% (TT), màu đỏ tía xuất C Hoà tan 0,1 g chế phẩm nước pha loãng thành 10 ml với dung môi Dung dịch thu cho phản ứng A clorid (Phụ lục 8.1) D Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel G (TT) Dung môi khai triển: Isopropanol - dung dịch amoni acetat 15% điều chỉnh đến pH 9,6 amoniac - ethyl acetat (20 : 40 : 45) Trộn đều, để yên cho tách lớp sử dụng lớp Dung dịch thử: Hoà tan 10 mg chế phẩm methanol (TT) pha loãng thành 10 ml với dung môi Dung dịch đối chiếu (1): Hoà tan 10 mg clindamycin hydroclorid chuẩn (ĐC) methanol (TT) pha loãng thành 10 ml với dung môi Dung dịch đối chiếu (2): Hoà tan 10 mg clindamycin hydroclorid chuẩn (ĐC) 10 mg lincomycin hydroclorid chuẩn (ĐC) methanol (TT) pha loãng thành 10 ml với dung môi Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng µl dung dịch Triển khai sắc ký đến dung môi 15 cm Lấy mỏng để bay hết dung môi không khí Phun dung dịch kali permanganat 0,1% (TT) Vết sắc ký đồ thu từ dung dịch thử phải tương ứng vị trí, màu sắc kích thước với vết sắc ký đồ thu từ dung dịch đối chiếu (1) Phép thử có giá trị sắc ký đồ thu từ dung dịch đối chiếu (2) cho hai vết tách khỏi rõ rệt pH Hoà tan 1,0 g chế phẩm nước carbon dioxyd (TT) pha loãng thành 10 ml với dung môi Dung dịch thu có pH từ 3,0 - 5,0 (Phụ lục 6.2) Góc quay cực riêng Từ +135o đến +150o, tính theo chế phẩm khan (Phụ lục 6.4) Hoà tan 1,000 g chế phẩm nước pha loãng thành 25,0 ml với dung để thử Tạp chất liên quan Xác định phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động điều kiện sắc ký : Chuẩn bị theo dẫn phần Định lượng Dung dịch thử: Hoà tan 50,0 mg chế phẩm pha động pha loãng thành 50,0 ml với pha động Dung dịch đối chiếu (1): Hoà tan 50,0 mg clindamycin hydroclorid chuẩn (ĐC) pha động pha loãng thành 50,0 ml pha động Dung dịch đối chiếu (2): Pha loãng 2,0 ml dung dịch thử thành 100,0 ml pha động Cách tiến hành: Tiến hành chạy sắc ký dung dịch khoảng thời gian lần thời gian lưu pic clindamycin ghi lại sắc ký đồ Kiểm tra khả thích hợp hệ thống: Trong sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (1): Thời gian lưu tương đối so với pic clindamycin (thời gian lưu khoảng 10 phút): Tạp chất A (lincomycin) khoảng 0,4; tạp chất B (clindamycin B) khoảng 0,65; tạp chất C (7-epiclindamycin ) khoảng 0,8 Giới hạn tạp chất: Trên sắc ký đồ dung dịch thử: Tạp chất B: Diện tích pic tương ứng với clindamycin B không lớn diện tích pic sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (2) ( 2,0 %) Tạp chất C: Diện tích pic tương ứng với 7-epiclindamycin không lớn hai lần diện tích pic sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (2) (4,0 %) Diện tích píc tạp chất liên quan khác hai tạp không lớn 1/2 lần diện tích pic sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (2) (1%) Tổng diện tích pic tất tạp chất liên quan không lớn lần diện tích pic sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (2) (6,0 %) Bỏ qua tất pic có diện tích pic 0,025 lần diện tích pic sắc ký đồ dung dịch đối chiếu (2) ( 0,05%) Nước Từ 3,0 đến 6,0% (Phụ lục 10.3) Dùng 0,500 g chế phẩm Tro sulfat Không 0,5% (Phụ lục 9.9, phương pháp 2) Dùng 1,0 g chế phẩm Định lượng Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Dung dịch đệm phosphat pH 7,5: Hoà tan 6,8 g kali dihydrophosphat (TT) 1000 ml nước điều chỉnh pH dung dịch thu đến 7,5 dung dịch kali hydroxyd 25 % (TT) Pha động: Dung dịch đệm phosphat pH 7,5 - acetonitril (550 : 450) Tỷ lệ điều chỉnh cần (lưu ý: Tăng tỷ lệ acetonitril pha động làm giảm thời gian lưu, giảm tỷ lệ làm tăng độ phân giải 7- epiclindamycin clindamycin) Dung dịch chuẩn: Sử dụng Dung dịch đối chiếu (1) mục Tạp chất liên quan Dung dịch thử: Sử dụng Dung dịch thử mục Tạp chất liên quan Điều kiện sắc ký: Cột: Cột thép không gỉ (4,6 mm × 25 cm) nhồi pha tĩnh C (5 µm) Detector: Quang phổ tử ngoại bước sóng 210 nm Tốc độ dòng: ml/ phút Thể tích tiêm: 20 µl Cách tiến hành: Kiểm tra khả thích hợp hệ thống sắc ký: Độ lệch chuẩn tương đối diện tích pic clindamycin thu lần sắc ký lặp lại dung dịch chuẩn không lớn 0,85 % Tiêm dung dịch chuẩn dung dịch thử (ghi sắc ký đồ với thời gian khoảng hai lần thời gian lưu pic clindamycin) Tính hàm lượng clindamycin từ diện tích pic clindamycin thu sắc ký đồ dung dịch chuẩn, dung dịch thử từ hàm lượng clindamycin, C18H33ClN2O5S, có clindamycin hydroclorid chuẩn Bảo quản Trong đồ đựng kín nhiệt độ không 30 °C Loại thuốc Kháng sinh họ lincosamid Chế phẩm Viên nang