Thuốc tiêm gentamicin Injectio Gentamicini Thuốc tiêm gentamicin dung dịch vô khuẩn chứa gentamicin sulfat nớc cất pha tiêm Chế phẩm phải đáp ứng yêu cầu chuyên luậnThuốc tiêm, thuốc tiêm truyền (Phụ lục 1.19) yêu cầu sau: Hàm lợng gentamicin, từ 95,0 đến 110,0% so với hàm lợng ghi nhãn Tính chất Dung dịch trong, không màu PH 3,0 đến 5,5 (Phụ lục 6.2) Định tính A Phơng pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel G Dung môi: Sau lắc để tách lớp, lấy lớp dới hỗn hợp đồng thể tích amoniac 13,5 M cloroform - methanol Dung dịch đối chiếu: Hoà tan 10 mg gentamicin sulfat chuẩn 10 ml nớc Dung dịch thử: Pha loãng chế phẩm với nớc để đợc dung dịch chứa khoảng mg gentamicin sulfat ml Cách tiển hành: Chấm riêng biệt 20 àl dung dịch lên mỏng Sau triển khai dung môi đợc khoảng 15 cm, lấy để khô không khí Phát iod phun dung dịch ninhydrin ethanol (TT) sấy mỏng 105 oC phút: Ba vết thu đợc sắc ký đồ dung dịch thử phải có giá trị R f màu sắc với ba vết thu đợc sắc ký đồ dung dịch đối chiếu B Trong phép thử thành phần gentamicin sulfat, thời gian lu pic sắc ký đồ dung dịch thử phải tơng đơng với thời gian lu pic sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Thành phần gentamicin sulfat Tiến hành phơng pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động: Pha dung dịch natri heptansulphonat monohydrat 0,025 M hỗn hợp: Methanol - nớc - acid acetic băng (70: 25: 5), lọc qua màng lọc 0,45 àm Dung dịch đối chiếu: Thêm ml methanol (TT) vào 10 ml dung dịch gentamicin sulfat chuẩn có nồng độ 0,065%, lắc thêm ml thuốc thử phthalaldehyd (TT), lắc thêm methanol (TT) vừa đủ 25 ml Đun cách thuỷ 60 oC, 15 phút, để nguội Nếu dung dịch không dùng ngay, để lạnh oC sử dụng vòng Dung dịch thử: Cũng chuẩn bị nh nhng thay10 ml dung dịch gentanicin sulfat chuẩn 10 ml dung dịch thử có nồng độ khoảng 0,045% gentamicin Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (10 đến 12,5 cm ì 4,6 đến mm) đợc nhồi pha tĩnh C (5àm) (cột ODS Hypersil thích hợp) Detector quang phổ hấp thụ tử ngoại bớc sóng 330 nm Thể tích tiêm: 20 àl Tốc độ dòng: 1,5 ml/phút Cách tiến hành: Tiến hành sắc ký với dung dịch đối chiếu, sắc ký đồ thu đ ợc, thời gian lu thành phần C2 từ 10 đến 20 phút pic đợc tách hoàn toàn với thời gian lu tơng đối (so với thành phần C2: 1,00) nh sau: Thuốc thử: 0,13; thành phần C1: 0,27; thành phần C1a: 0,65; thành phần C2a: 0,85; Điều chỉnh độ nhạy thể tích tiêm dung dịch đối chiếu để chiều cao pic thành phần C1 khoảng 75% thang đo Kẻ đờng ngang sắc ký đồ, nối chân pic, đo chiều cao pic Cũng tiến hành nh với dung dịch thử Phép thử có giá trị hệ số phân giải pic thành phần C2a C2 không nhỏ 1,3 Từ chiều cao pic sắc ký đồ dung dịch thử, dung dịch đối chiếu tỷ lệ thành phần tơng ứng biết dung dịch đối chiếu, tính đợc tỷ lệ thành phần C1, C1a, C2a, C2 chế phẩm đem thử Các tỷ lệ phải nằm giới hạn sau: C1: 25,0 50,0% C1a: 10,0 35,0% C2 + C2a: 25,0 55,0% Nội độc tố vi khuẩn Tiến hành theo chuyên luận Phép thử nội độc tố vi khuẩn (Phụ lục 13.2) Pha loãng dung dịch tiêm cần thiết với nớc BET để có nồng độ tơng đơng khoảng 10 mg gentamicin/ ml (Dung dịch A) Giới hạn nồng độ nội độc tố vi khuẩn dung dịch A 16,7 IU ml Tiến hành phép thử sử dụng giá trị pha loãng cực đại dung dịch A đ ợc tính từ độ nhạy thuốc thử Lysat dùng phép thử Định lợng Tiến hành theo chuyên luận Xác định hoạt lực thuốc kháng sinh phơng pháp thử vi sinh vật (Phụ lục 13.9) Hoạt lực lý thuyết gentamycin 1000 đơn vị (IU) mg Bảo quản Để nơi mát, không 25oC Loại thuốc Kháng sinh Hàm lợng thờng dùng 80 mg/2 ml; 40 mg/1 ml 40 mg/2 ml