Đang tải... (xem toàn văn)
Saponin còn gọi là Saponosid là một nhóm glycosid lớn, gặp rộng rãi trong thực vật. Saponin cũng có trong một số động vật như hải sâm, cá sao. Saponin gồm các chất vô định hình thường là cao phân tử .Tiền tố latinh sapo có nghĩa là xà phòng và thực tế thường gặp từ saponification có nghĩa là sự xà phòng hóa trong cả tiếng Anh và tiếng Pháp.
SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ Mục Lục PHẦN I : SAPONIN-TÍNH CHẤT VÀ PHÂN LOẠI4 I SAPONIN-NGUỒN GỐC VÀ TÍNH CHẤT ĐẶC TRƯNG4 1.Định nghĩa4 2.Sự phân bố thực vật4 3.Tính chất vật lí Saponin4 4.Một số tính chất riêng biệt5 II PHÂN LOẠI SAPONIN5 Saponin Triterpeeoid6 1.1 Saponin Triterpennoid pentacyclic 1.1.a Nhóm Olean6 1.1.b Nhóm Ursan 1.1.c Nhóm Lupan: 1.1.d Nhóm Hopan: 1.2 Saponin Triterpenoid Tetracyclic.8 1.2.a Nhóm Dammaran6 1.2.b Nhóm Lanostan 1.2.c Nhóm Cucurbitan Saponin Steroid9 2.1 Nhóm Spirostan9 2.2 Nhóm Furostan10 2.3 Nhóm Aminofurostan11 2.4 Nhóm Spirosolan12 2.5 Nhóm Solanidan12 NHÓM 2-LỚP DHTP9B SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ III MỘT SỐ LOẠI SAPONIN QUAN TRONG VÀ CÔNG DỤNG12 1.Một số loại Saponin quan trọng12 2.Công dụng y học13 PHẦN II: PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ- PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ4 I TỔNG QUAN VỀ PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ4 1.Cách xử lí mẫu14 2.Hóa chất14 3.Nguyên tắc thực hiện14 II MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ ĐO TỔNG SỐ SAPONIN14 1.Phương pháp UV/VIS14 1.1 Hóa chất sử dụng14 1.2 Nguyên tắc thực hiện15 1.3 Cách tiến hành15 1.4 Lưu ý15 1.5.Phương pháp UV/VIS với số mẫu thực vật15 1.6.Xác định tổng số Sapogenin17 1.6.1 Nguyên tắc thực hiện17 1.6.2 Cách tiến hành17 2.Phương pháp quang phổ tán huyết17 2.1 Nguyên tắc17 2.2 Hoá chất cách tiến hành18 2.3 Ví dụ kết đo được18 NHÓM 2-LỚP DHTP9B SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ 3.Phương pháp đo quang18 3.1 Các xác định mẫu18 3.2 Hóa chất pha chế thuốc thử18 3.3 Tiến hành18 3.4 Kết quả19 3.5 Một vài ví dụ khác hóa chất cách tiến hành19 Phụ lục20 Xác định Saponin tồng số cỏ càri phương pháp quang phổ UV/VIS 2.Phân biệt sapogenin triterpenoid saponin steroid quang phổ 20 3.Sơ đồ phân loại Saponin 23 Tài liệu tham khảo24 NHÓM 2-LỚP DHTP9B SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ Saponin phương pháp xác định Saponin tổng số Phần I : Saponin- Tính chất, Cấu tạo Phân loại I) Saponin-Nguồn gốc tính chất đặc trưng 1) Định nghĩa : Saponin gọi Saponosid nhóm glycosid lớn, gặp rộng rãi thực vật Saponin có số động vật hải sâm, cá Saponin gồm chất vô định hình thường cao phân tử Tiền tố latinh sapo có nghĩa xà phòng thực tế thường gặp từ "saponification" có nghĩa xà phòng hóa tiếng Anh tiếng Pháp Dưới tác dụng enzym có thực vật hay vi khuẩn axít loãng, Saponin bị thuỷ phân thành phần gồm genin gọi Sapogenin (aglycone ) phần đường (glycone) gồm nhiều phân tử đường Các đường phổ biến D-glucoza, D-galactoza, Larabinoza, axít galactunoic, axít D-glucuronic Phần genin có cấu trúc cholan sapogeninsteroi Sapogenintritecpen dạng β-amirin (axít olenoic), dạng α-amirin (axít asiatic), dạng lupol (axit buletinie) tritecpen bốn vòng 2) Sự phân bố thực vật: Saponin Steroid thường gặp mầm Các họ hay gặp là: Amaryllidaceae, Dioscoreaceae, Liliaceae, Smilacaceae Ðáng ý số loài thuộc chi Dioscorea L.; Agave L.; Yucca L Saponin Triterpenoid thường gặp mầm thuộc họ như: Acanthaceae, Amaranthaceae, Araliaceae, Campanulaceae, Caryophyll-aceae, Fabaceae, Polygalaceae, Rubiaceae, Sapindaceae, Sapotaceae Trong saponin thường tích lũy phận khác nhau: tích lũy bồ kết, bồ hòn; rễ cam thảo, viễn chí, cát cánh; dứa Mỹ 3)Tính chất lý Saponin: Saponin Glucosid với đặc tính tạo bọt kết hợp Sapogenin (phần kị nước tan chất béo ) phần đường tan nước Saponin đa số có vị đắng ngoại trừ số Glycyrrhizin có cam thảo bắc, Abrusosid cam thảo dây, Oslandin Polypodium vulgare có vị ngọt.Saponin tan nước, Alcol, tan Aceton, Ether, hexan người ta dùng ba dung môi để tủa saponin Saponin bị tủa chì Acetat, Bari Hydroxyd, Ammoni Sulfat Saponin khó bị thẩm tích, người ta dựa vào tính chất để tinh chế Saponin trình NHÓM 2-LỚP DHTP9B SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ chiết xuất Phần genin tức sapogenin dẫn chất Acetyl Sapogenin thường dễ kết tinh Saponin Saponin gồm chất vô định hình thường có cao phân tử Độ tan saponin bị ảnh hưởng tính chất dung môi (như bị ảnh hưởng nhiệt độ, thành phần, pH), nước cồn (methanol, ethanol) dung môi trích Saponin phổ biến nhất.) Các saponin chất hoạt quang Thường Steroit saponin tả truyền Triterpenoit Saponin hữu truyền Điểm nóng chảy Sapogenin thường cao 4.Một số tính chất đặc biệt Saponin: - Làm giảm sức căng bề mặt, tạo bọt nhiều hòa tan vào nước, có tác dụng nhũ hoá tẩy - Làm vỡ hồng cầu nồng độ loãng - Ðộc với động vật máu lạnh đặc biệt saponin làm tăng tính thấm biểu mô đường hô hấp nên làm chất điện giải cần thiết, có tác dụng diệt loài thân mềm giun, sán, ốc sên - Kích ứng niêm mạc gây hắt hơi, đỏ mắt,có tác dụng lomg đờm, lợi tiểu, liều cao gây nôn mửa, lỏng _Có thể tạo phứa với Cholesterol chá 3-β-hydroxysteroid khác _Tuy vài tính chất vài saponin.Ví dụ: sarsaparillosid tính phá huyết tính tạo phức với cholesterol II) Phân loại Saponin: Các saponin phân loại steroid, triterpenoidal ancaloit tùy thuộc vào chất aglycone Dựa theo cấu trúc hoá học chia ra: Saponin Triterpenoid : Gồm loại trung tính loại acid Saponin Steroid : Gồm loại trung tính loại kiềm ( có Nito hay gọi Ankaloid Saponin ) NHÓM 2-LỚP DHTP9B SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ Cấu trúc hóa học: 1) Saponin Triterpenoid: Phần genin loại có 30 Carbon cấu tạo nhóm Hemiterpen, chia làm loại Saponin triterpenoid pentacyclic Saponin triterpenoid tetracyclic 1.1) Saponin Triterpennoid pentacyclic : Gồm nhóm Olean, Ursan, Lupan, Hopan 1.1.a) Nhóm Olean: Phần lớn Saponin Triterpenoid tự nhiên thuộc nhóm Phần aglycon có vòng thường dẫn chất 3-β hydroxy olean 12 - ene, tức β amyrin (A) Vd: Một vài aglycon - Acid oleanolic: R1 = R2 = R4 = R5 = - , R3 = -COOH - Hederagenin: R2 = R4 = R5 = -, R1 = - , R3 = -COOH - Gypsogenin: R2 = R4 = R5 =- , R1 = -CHO , R3 = -COOH NHÓM 2-LỚP DHTP9B SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ Mạch đường nối vào C-3 theo dây nối acetal, có mạch đường nối vào C-28 theo dây nối ester Gần người ta phân lập saponin có đến 10-11 đơn vị đường kể mạch, riêng mạch đến đơn vị đường 1.1.b) Nhóm Ursan : Cấu trúc nhóm ursan tương tự nhóm olean khác nhóm methyl C-30 không đính vào vị trí C-20 mà lại đính vị trí C-19 Các sapogenin nhóm ursan thường dẫn chất 3-β hydroxy ursan 12-ene, tức α-amyrin Những Saponin nhóm gặp nhóm olean Cinchona glycosid A, Cinchona glycosid B có canh-ki-na, Asiaticosid có rau má Saponin nhóm 1.1.c) Nhóm Lupan: Cấu trúc nhóm lupan có vòng A,B,C,D giống nhóm trên, khác vòng E vòng cạnh, C-20 vòng thường có nối đôi vị trí 20-29 Lấy ví dụ saponin có rễ Ô rô Acanthus iliciformis Một số saponin có ngũ gia bì chân chim thuộc nhóm 1.1.d) Nhóm Hopan: Cấu trúc nhóm hopan có vòng A,B,C,D giống nhóm trên, khác vòng E vòng cạnh, C-22 vòng nhóm methyl góc đính C-18 thay C-17 Saponin biết chất mollugocin A có cỏ thảm Mollugo hirta L NHÓM 2-LỚP DHTP9B SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ 1.2) Saponin Triterpenoid Tetracyclic: Gồm nhóm Dammaran, Lanostan, Cucurbitan 1.2.a) Nhóm Dammaran : Ðại diện saponin nhân sâm Phần aglycon gồm bốn vòng mạch nhánh Khi tác dụng acid mạch nhánh đóng vòng tạo thành vòng tetrahydropyran Bằng phương pháp đặc biệt để cắt phần đường, người ta thu genin thật Hai genin là: protopanaxadiol protopanaxatriol Phần đường nối vào OH cabon số có thêm mạch nối vào OH mạch nhánh Saponin triterpenoid tetracyclic nhóm damaran gặp hạt táo (Ziziphus jujuba Mill.), rau đắng biển (Bacopa monnieri (L.) Wettst 1.2.b) Nhóm Lanostan: Holothurin A, saponin có loài hải sâm - Holothuria spp ví dụ nhóm NHÓM 2-LỚP DHTP9B SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ Một nhóm phụ nhóm Lanostan nhóm Cycloartan có cấu trúc 9,19 cyclo (9β) lanostan Các Saponin Abrusosid A, B, C, D có cam thảo dây Abrus precatorius saponin thuộc nhóm 1.2.c) Nhóm Cucurbitan : Phần lớn saponin nhóm Cucurbitan gặp tronghọ Cucurbitaceae Ở nhóm C19 không đính vào C10 mà thay vào lại đính C9 Saponin Steroid: Gồm số nhóm Spirostan, Furostan, Aminofurostan, Spirosolan, Solanidan 2.1) Nhóm Spirostan: Ta xét chất Sapogenin làm ví dụ: Sarsasapogenin Smilagenin Tigogenin _Đặc điểm chung : Những chất có 27 carbon cholesterol mạch nhánh từ C20 tới C27 tạo thành vòng có oxy (16,22 22,26 diepoxy ), vòng hydrosfuran (vòng E) vòng hydropyran (vòng F) Hai vòng nối với carbon chung C-22 Mạch nhánh gọi mạch nhánh Spiroacetal Ba chất đồng phân NHÓM 2-LỚP DHTP9B SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ Sarsasapogenin Smilagenin khác cấu hình C-25 Sarsasapogenin có nhóm methyl C-25 hướng axial có cấu hình tuyệt đối 25S, Smilagenin nhóm methyl C-25 hướng equatorial có cấu hình tuyệt đối 25R Các Saponin nhóm có nối vòng C D trans (khác với glycosid tim) Còn vòng A B cis chất Sarsasapogenin Smilagenin trans chất Tigogenin Smilagenin Tigogenin khác cấu hình C-5 Công thức lập thể chất Sarsasapogenin, Smilagenin Tigogenin: Nhóm OH C3 thường hướng β, số hướng α ví dụ saponin tỳ giải Ở dạng glycosid phần đường nối vào OH C-3, số trường hợp C1 Mạch đường thường phân nhánh phức tạp Ví dụ: Digitonin Saponosid có digital, có mạch đường gồm đơn vị đường phân nhánh: Xyl - → 3glc-1 → 4gal →digitogenin |1 glc-1 → 3gal Nhóm Spirostan ý nhiều nguồn nguyên liệu quan trọng để bán tổng hợp thuốc steroid Hai saponin quan trọng diosgenin (có chủ yếu loài Dioscorea) hecogenin (có chủ yếu loài Agave) NHÓM 2-LỚP DHTP9B 10 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ 2.3) Nhóm Aminofurostan: Ở vòng F mở trường hợp sarsaparillosid nói vị trí C-3 đính nhóm NH2 Ví dụ jurubin, saponin có Solanum paniculatum 2.4) Nhóm Spirosolan: Nhóm khác nhóm spirostan nguyên tử oxy vòng F thay NH Một điểm cần ý có Isomer C-22 (khác với nhóm spirostan) Ví dụ Solasonin có cà Úc (cà xẻ ) Solanum laciniatum có cấu trúc (25R) 22α tomatin saponin có cà chua có cấu trúc (25S) 22β 2.5) Nhóm Solanidan: Solanin có mầm khoai tây thuộc nhóm Ở vòng E F chung 1C 1N Những chất thuộc nhóm Aminofurostan, Spirosolan Solanidan có chứa N vừa mang tính alcaloid vừa mang tính glycosid nên gọi chất Glycoalcaloid NHÓM 2-LỚP DHTP9B 12 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ 2.6) Ngoài nhóm Saponin Steroid kể người ta gặp số saponin steroid có cấu trúc mạch nhánh khác : Ví dụ Polypodosaponin Oslandin Jizba phân lập (1971) từ thân rễ Polypodium vulgare L Oslandin bidesmosid có vị αSpinasterol glycosid có chè Camelia sinensis (L.) O K.tze (Thea sinensis L.) III) Một số loại saponin quan trọng tác dụng : 1) Một số loại Saponin quan trọng: Saponin Ro: Có khả phân giải rượu, chống viêm gan, phục hồi hư tổn gan Saponin Rb1: Kiềm chế hệ thống thần kinh trung ương, làm dịu đau, bảo vệ tế bào gan Saponin Rb2: Chống bệnh tiểu đường, chống xơ cứng gan, đẩy nhanh khả hấp thụ tế bào gan Saponin Rc: Giúp làm dịu đau, làm tăng tốc độ tổng hợp protein Saponin Rd: Đẩy nhanh hoạt động vỏ tuyến thượng thận Saponin Re: Bảo vệ gan, làm tăng tốc độ tổng hợp tế bào tủy Saponin Rf: Giúp làm dịu đau tế bào não Saponin Rg1: Giúp tập trung, chống mệt mỏi Saponin Rg2: Hạn chế gắn kết tiểu cầu máu, phụ hồi trí nhớ Saponin Rg3: Hạn chế trình chuyển giao ung thư, bảo vệ gan Saponin Rh1: Bảo vệ gan, chống khối u, hạn chế gắn kết tiểu cầu máu Saponin Rh2: Hạn chế ung thư phát triển, hạn chế khối u phát triển 2) Tác dụng, công dụng số Saponin - Saponin có tác dụng long đờm, chữa ho, hoạt chất dược liệu chữa ho viễn chí, cát cánh, cam thảo, thiên môn, mạch môn - Một số dược liệu chứa Saponin có tác dụng thông tiểu rau má, tỳ giải, thiên môn, mạch môn, - Saponin có mặt số vị thuốc bổ nhân sâm, tam thất số thuộc họ nhân sâm khác - Saponin làm tăng thấm tế bào; có mặt saponin làm cho hoạt chất khác dễ hoà tan hấp thu, ví dụ trường hợp digitonin Digital NHÓM 2-LỚP DHTP9B 13 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ - Một số Saponin có tác dụng chống viêm Một số có tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm, ức chế virus - Một số có tác dụng chống ung thư thực nghiệm - Nhiều saponin có tác dụng diệt loài thân mềm (nhuyễn thể) - Sapogenin Steroid dùng làm nguyên liệu để bán tổng hợp thuốc steroid - Digitonin dùng để định lượng cholesterol - Một số nguyên liệu chứa saponin dùng để pha nước gội đầu, giặt len dạ, tơ lụa Một số saponin tăng cường khả hấp thụ thức ăn động vật không nhi lại số khác có hại Ví dụ: Saponin tìm thấy yến mạch rau bina tăng thúc đẩy khả thể để hấp thụ canxi silicon, hỗ trợ tiêu hóa Một số cỏ dại cỏ chứa lượng đáng kể saponin nguy hiểm kết sống đe dọa độc tính loài động vật Phần II : Phương pháp xác định Saponin tồng số_ Phương pháp quang phổ Có nhiều phương pháp xác định Saponin song phần trình bày nhóm đề cập đến phương pháp quang phổ I) Tổng quan phương pháp quang phổ Phương pháp quang phổ trở thành phương pháp phổ biến việc định lượng Saponin từ nguyên liệu thực vật động vật đơn giản, nhanh chóng không tốn để thực 1) Cách xử lí mẫu phân tích: Để đánh giá saponin tổng số thực thao tác đơn giản để kiểm tra có mặt Saponin Điều thực cách đặt nguyên liệu thực, động vật vào ống nghiệm chứa đầy nước cất lắc mạnh phút( Ncube et al, 2011) Sự xuất bọt ổn định liên tục bề mặt chất lỏng 15 phút có mặt Saponin Định lượng Saponin thường thực NHÓM 2-LỚP DHTP9B 14 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ phương pháp quang phổ phương pháp sắc ký Sự khác biệt hai phương pháp phương pháp quang phổ cho biết tổng giá trị Saponin phương pháp sắc ký định lượng hợp chất Saponin cụ thể 2) Hóa chất : Phương pháp khảo nghiệm xác định saponin tổng số,Vanillin-acid Sulfuric lựa chọn phổ biến phương pháp định lượng Saponin máy quang phổ Tuy nhiên có vài yếu tố, chẳng hạn lựa chọn tiêu chuẩn, bước sóng yếu tố khác cần xem xét trước sử dụng phương pháp 3) Nguyên tắc thực hiện: Các nhuyên tắc phương pháp phản ứng oxy hóa Saponin Triterpene với vanillin( Li et al, 2010) Axit sunfuric sử dụng chất oxy hóa màu sắc đặc trưng phản ứng màu tím ( Hiai, Oura, & Hakajima, 1976) axit Pecloric sử dụng( Chen, Xie et al, 2007; Li, Zu et al, 2010; Wu et al, 2001) Do khác biệt việc lựa chọn thuốc thử, điều kiện thuốc thử phát triển đầy đủ màu sắc, tiêu chuẩn bước sóng từ nghiên cứu trước đã, thật khó để so sánh kết lần kiểm định.Tuy nhiên cung cấp tài liệu tham khảo tốt cho thiết kế thử nghiệm tương lai II) Một số phương pháp quang phổ xác định Saponin tổng số 1) Phương pháp UV-Quang phổ : Đây phương pháp áp dụng rộng rãi Quang phổ UV / VIS Ultraviolet : Phân tích Saponin vùng ánh sáng khả kiến 1.1) Hoá chất sử dụng : Trong phương pháp hóa chất dùng hỗn hợp củaVanillin Acid Acetic sử dụng dùng acid thay Vanillindễ dàng bị oxy hóa tạo thành màu tím bị oxy hóa Acid Percloric 1.2)Nguyên tắc thực hiện: Hai công trình (Patel et al., 2012a Ncube et al., 2011) tìm thấy cách sử dụng điều kiện 60°C 10 phút hỗn hợp có phát triển đầy đủ màu sắc theo thủ tục Hiai et al (1976) Tuy nhiên, nhà nghiên cứu khác sử dụng 70 ° C 15 phút (Chen et al., 2007b) 20 phút (Li et al., 2010b) cho phép phát triển đầy đủ màu sắc Sự khác biệt cần chuẩn hóa, thời gian phản ứng gán trực tiếp với giá trị độ hấp thụ thực mà sau chuyển vào số lượng 1.3) Cách tiến hành: Phương pháp tổng Saponin để định lượng tổng số saponin từ phản ứng Triterpene oxy hóa Saponin với Vanillin (Li et al., 2010b), không tránh khỏi đặt câu hỏi liệu việc lựa chọn tiêu chuẩn để sử dụng máy quang phổ điều cần thiết để thể nhóm saponin xác từ nguồn thực vật Thật không may, thông tin có liên quan việc lựa chọn tiêu chuẩn tìm thấy Không giải thích ghi tác phẩm trước việc lựa chọn bước sóng, hầu hết nghiên cứu lựa chọn bước sóng 544 nm quan sát Tuy nhiên, bước sóng chọn NHÓM 2-LỚP DHTP9B 15 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ nằm khoảng 480-610 nm, trừ 473 nm (Mostafa et al., 2013) 283 nm (Liu et al., 2012b), có lẽ hấp thụ tối đa màu tím nằm phạm vi (Bruice, 2007) 1.4) Lưu ý : Để đảm bảo điều kiện thích hợp, điều quan trọng dung dịch acid Aanillinacetic phải tạo thành ngày tiến hành đo sử dụng nguyên nhân docơ chế acid Acetic-vanillin, acid Percloric làm nước với nhóm Hydroxyldo làm tăng số lượng liên kết đôi hệ thống liên hợp 1.5) Phương pháp quang phổ UV/vis với số mẫu thực vật Vật liệu Hỗn hợp chất phản ứng Điều kiện cho phép phát triển đầyđủ màu sắc 70oC,15 phút Điều kiện làm mát trước khí UV/vis đo lường Tiêu chuẩn sử dụng Bước sóng chọn (nm) Loại máy đo quang Năng suất thu Chạy nước, phút Axit oleanolic 550 Chùm kép 5.11%( cách sử dụng cao MAE) 60oC, 20 phút 0oC,5 phút Axit oleanolic 544 _ 200.01 mg/ 100g trọng lượng khô 70oC, 20 phút Chạy nước, phút Axit oleanolic 550 Máy quang phổ Unico 2100( shan ghai Unico Equipment Co.Ltd Trung Quốc) 0.5ml vanilin 8%+ 5ml axit sulfuric 72% _ 60oC, 10 phút Bồn nước đá,15 phút Axit oleanolic 538 _ Các thông số khai thác lò vi sóng hỗ trợ tối ưu 51OC, phút, 900W, 52 ml/g, ethanol 42% trình chiết saponin mang lại cao đạt 11.62±0.37% hạt nhân khử chất béo 15 mg/ mg _ _ _ _ Alium nigrum L Vanillin 0.7%axit sulfuric 72% _ _ Diosgeni n Diosgeni n 473 Tulbaghia violacea 250 ml thuốc thử vanillin( 8g/ 100 ml ethanol)+ 2.5 ml axit sulfuric 72% 60oC, 10 phút Bồn nước đá, 3- phút Diosgeni n 544 Máy quang phổ U2001( Hi tachi, Tokyo, Nhật Bản) _ Linh ganoderma 0.2ml vanillin 5%-axit acetic+ 1.2 ml axit pecloric Củ khoai mì 0,5 ml 8% Ipomoea vanillin ethanol+ 5ml dungdịch axit sulfuric 72% nước Nhân 0.2ml vanillin Xanthocera 5%axit s sorbifolia acetic+ 1.2 ml Bunge axit pecloric 70% Bryonia Laciniosa Cám gạo NHÓM 2-LỚP DHTP9B 16 236,14mgDE/g extract Sản lượng( mg/ g dw): rễ: 19.38; củ: 15.65; lá: 10,48 Sản lượng( mgDE/ ml): micropropagated: 25.14; trồng trời: 8.94 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ Sữa nành đậu Súp đậu Bian-Que (gồm đậu tương đen, đậu xanh đậu đỏ adzuki) Hạt giống Chi Ngưu tất Aspara, Tribulus Terrestris, Albizia lebbeck Rhizoma anemarrhen a Rễ Panax quinquefoli um nhân sâm Panax 0.5 ml dung dịch vanillin 8%( ethanol) ml axit sulfuric 27% 60oC, 10 phút Nước đá Soyasapo nin 544 Multidetec tionmicrop late reader(Syn ergyTMH T, BIOTEK,GA, USA) _ _ _ Soyasapo nin 544 _ 0.25 ml thuốc thử vanillin( 8%, w / v 99.9% ethanol) + 2.5ml 72% (v / v) axit sulfuric ml axit sulfuric 60oC, 10 phút Bồn nước đá Quillaja saponin 544 _ 60oC, 30 phút Nước lạnh Sarsasapo genin 283 _ Purity 65.3% 0,2 ml vanillinacetic + ml percloric 60oC, 15 phút _ Ginsenosi de 560 _ Nó tìm thấy UAE nhanh so với phương pháp chiết xuất truyền thống khoảng ba lần 5% axit 0,8 acid Đối với hai đậu nành lên men không lên men chiết xuất sữa với 80% methanol cho sản lượng cao 247,44 167,21 mg saponin / g chiết xuất, so với 50% acetone nước Súp đậu đen đậu nành:76.60-108.50 mg / g; súp đậu đỏ adzuki: 103.18129.49mg / g; súp đậu xanh: 32.8439.23mg / g Các nội dung tổng saponin hạt giống trấu, gokhru Siris 45,75, 25,65 48,26% (w/w), tương ứng 1.6) Xác định tổng Sapogenin: Các Sapogenin Triterpenoid H2SO4 đậm đặc có đỉnh hấp thu cực đại vùng tử ngoại 310nm Cực đại với Saponin Steroid Tổng Sapogenin Steroid sử dụng để xác định số lượng cụ thể steroidal saponins bên nguyên liệu thực vật (Baccou, Lambert, & Sauvaire, 1977) Sự khác biệt tổng saponin tổng sapogenins steroid dung môi sử dụng để chuẩn bị thuốc thử 1.6.1) Cách xử lí mẫu: tổng Sapogenins Steroid, Anasaldehyde acid Sulfuric pha loãng với Ethyl Acetate Tổng Sapogenins Steroid chứng minh ổn định tái sản xuất với số tiêu chuẩn, tức là., Diosgenin, Tigogenin, Hecogenin, Smilagenin, Yonagenin, Tokorogenin, vv mà không cần can thiệp từ loại đường, Sterol, acid béo dầu thực vật (Baccou et al., 1977) NHÓM 2-LỚP DHTP9B 17 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ 1.6.2) Nguyên tắc cách tiến hành: Phương pháp dựa phản ứng màu với anisaldehyde (hoặc vanillin), acid sulfuric ethyl acetate đo bước sóng tối đa λmax = 430 nm Các qui trình để xác định số lượng tổng sapogenin steroid đo trọng lượng 0-40 mg thô hòa tan ml ethyl acetate ống nghiệm Sau trộn với ml thuốc thử A( bao gồm 0,5 ml anisaldehyde 99,5 ml ethyl acetate) ml thuốc thử C (gồm 50ml axit Sulfuric đậm đặc 50 ml Ethyl Acetate) Các ống nghiệm với hỗn hợp đặt nồi cách thủy 60°C 10 phút để phát triển đầy đủ màu sắc Sau đó, làm lạnh 10 phút nhiệt độ phòng trước đo 430 nm máy quang phổ Các ống nghiệm đặt bồn nước trì 70°C 15 phút để phát triển màu sắc đầy đủ, sau để nguội phút bồn nước 0°C đo khối lượng đến 25 ml acid Acetic đồng hồ Sau 30 phút ổn định, sau ống nghiệm đo độ hấp thụ 454 nm quang phổ kế mang lại tổng saponin steroid 28,34% (w/w) bột đông khô 2) Phương pháp quang phổ tán huyết: Sử dụng để định lượng Sapponin tổng số nguyên liệu thực phẩm 2.1) Nguyên tắc: Nguyên tắc phương pháp phản ứng saponin với thuốc thử máu để sinh oxy-hemoglobin kết màu đo lường máy quang phổ 2.2) Hóa chất cách tiến hành: Các saponin hòa tan vào nước cất 100 ml dung dịch ủ với 1ml EDTA- máu tươi 30oC 30 phút Sau ly tâm 10 phút, hemoglobin đo quang 545 nm kết thể saponin tan máu 2.3) Ví dụ kết đo được: Kết phân tích cho thấy giống mướp đắng trắng phát có chứa saponin thấp Nồng độ 0,25% thấp so với giống xanh nồng độ 0,67% 3) Phương pháp đo quang: Chọn thảo dược: Bột ngưu tất làm mẫu xác định: 3.1) Cách xác định mẫu : +Mẫu chuẩnCân xác khoảng 1g bột ngưu tất, cho vào cối sứ nghiền kĩ với cồn Tráng chày cối cồn , thêm cồn đến vạch, lắc đều, lọc lấy dịch +Mậu chuẩn: Cân xác khoảng 0,04 g Axit Oleanolic, hòa tan cồn vừa đủ 100 ml 3.2) Hóa chất pha chế thuốc thử : Thuốc thử gồm dung dịch Vanilin 8% Axit Sunfuric 72 % NHÓM 2-LỚP DHTP9B 18 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ Đề pha dd thuốc thử cần : Vanilin 800 mg Nước cất 28 ml Cồn tuyệt đối 10ml Axit 72 ml Thuốc thử Ortho Toluidin ml Thioure 0,15 g Axit Axetic vừa đủ 100ml 3.3) Tiến hành : Lần lượt hút xác thể tích dung dịch thuốc thử, chó vào ống nghiệm bảng sau : Trộn đều, đun cách thủy 10 phút Lấy làm lạnh nước đá Đo mật đọ quang ống chuẩn ống thử ống trắng bước song λ= 538 nm Định lượng Saponin mẫu thử mẫu trắng 3.4) Kết quả: Hàm lượng Saponin mẫu thử Số lầ n 1 Các mẫu 10.08 9.12 10.36 10.12 10.04 10.46 9.28 10.02 9.48 10.20 9.28 9.76 9.78 9.70 10.46 9.56 10.46 10.26 9.96 10.20 10.30 10.06 10.14 10.38 T B 10.01 9.86 9.87 10.03 10.04 10.07 9.96 9.99 Hàm lượng Saponin mẫu trắng NHÓM 2-LỚP DHTP9B 19 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ Nhận xét: Hàm lượng Sponin mẫu khác không đáng kể vá có giá trị xấp xỉ 10% 3.5 Một vài ví dụ khác hóa chất cách tiến hành quang: Ví dụ: định lượng acid glycyrrhetic cam thảo, phản ứng cho màu tím; nhóm spirostan, A Akahori dùng aldehyd có nhân thơm+ acid phosphoric để định lượng: 50mg sapogenin+ 500mg anis aldehyd ethanol 99%, đun 10 phút 100 oC để yên đo mật độ quang 550nm Các dẫn chất D 5- sapogenin ví dụ diosgenin dùng thuốc thử FeCl 3- H3PO4: 800mg FeCl3 10ml nước (a), lấy 1ml (a) thêm đủ 50ml với H 3PO4 (b) 50 mg diosgenin + 50ml (b) làm lạnh phút nước đá, thêm 0,5ml H 2SO4, làm lạnh 10 phút đặt tủ sấy nhiệt độ 700C phút Phụ lục 1) Xác định Saponin tồng số cỏ càri phương pháp quang phổ UV/VIS Trigonella foenum-graecum, thường gọi cỏ cà ri, họ đậu để nhiều quốc gia châu Á, Trung Đông châu Âu.Xác định kiểu gen cỏ cà ri giàu saponin định có ích cho ngành công nghiệp dược phẩm Trong nghiên cứu này, saponin steroid phân tích 46 kiểu gen cỏ cà ri khác sở trọng lượng khô Sự khác biệt đáng kể tổng số saponin số kiểu gen Saponin dao động từ 0,92 g đến 1,68 g 3,25-6,88 g tương ứng với giá trị trung bình 1,34 g 5,19 g / 100 g dw tương ứng Fenugreek, Trigonella foenum-graecum gọi methi, hột cỏ Hy Lạp, chân chim thành viên gia đình họ đậu Các hạt giống cỏ cà ri từ lâu biết đến loại thuốc cổ truyền, có tác dụng hypocholesterol đái tháo đường Các hoạt động hypocholesterol có liên quan đến phần khử chất béo chiết xuất từ hạt liên quan đến subfractions saponin phong phú Ngoài ra, hạt cỏ cà ri cho có tính chất phục hồi dinh dưỡng kích thích trình tiêu hóa Tại Ấn Độ, họ biết đến NHÓM 2-LỚP DHTP9B 20 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ thành phần quan trọng ăn truyền thống (MethiPak) tiêu thụ thời kỳ mang thai cho bú Hơn nữa, hạt cỏ cà ri tiếng với đặc tính thơm hăng họ; gia vị, họ thành phần nhiều chế cà ri thường sử dụng để thực phẩm hương vị kích thích thèm ăn Các vật liệu thí nghiệm gồm 46 đan có kiểu gen cỏ cà ri lấy từ Ngân hàng Quốc gia Gene, quốc gia Cục Tài nguyên di truyền thực vật, New Delhi, Ấn Độ Các mẫu hạt giống (3 lần lặp lại kiểu gen) xay qua Mỹ thử tiêu chuẩn Sàng vị trí 20 với Hiệp hội Kiểm nghiệm Vật liệu (ASTM) thông số kỹ thuật E11 (Sieve Kích thước 0,850 mm) sấy khô cho h lò khí nóng 60 ° lưu trữ bình hút ẩm giữ bóng tối Hóa chất Tất hóa chất sử dụng nghiên cứu lớp phân tích Diosgenin (~ 95%) mua từ Sigma Chemical Co St Louis, MO, USA p-anisaldehyd (4methoxybenzaldehyde) (≥98%) acid sulfuric (~ 98%) thu từ Merck, Hohenbrunn, Đức Tất dung môi hữu khác mua từ Fisher Scientific, Nepean, ON, Canada Cách xử lý mẫu Các mẫu khử chất béo máy Soxhlet h với hexane thimbles chiết cellulose làm dung môi đôi dày (Whatman) Sau hoàn thành khai thác n-hexane bốc sử dụng thiết bị bay quay cân nặng Tổng số dầu% cố định (tổng số chất béo thô) tính công thức Tổng sản lượng dầu cố định (tính theo%) = 100 × (W2W3) / (W2-W0), nơi W0 = Trọng lượng đê, W1 = Trọng lượng mẫu ban đầu với bao tay trước sấy giai đoạn tiền khai thác, W2 = trọng lượng mẫu với thimble sau sấy giai đoạn tiền khai thác, W3 = trọng lượng mẫu với thimble sau sấy giai đoạn postextraction Các tài liệu thimble không khí khô, mặt đất cối chày, sau sấy khô 60 ° Các mẫu lưu trữ bình hút ẩm nhiệt độ phòng tối trước phân tích cho nội dung sapogenins steroid Khoảng 100 mg bánh khử chất béo (còn lại sau chiết xuất dầu) đưa vào ống ly tâm ml methanol thêm vào ống để lại máy lắc qua đêm, sau ly tâm Việc khai thác lặp lặp lại lần với ml methanol ly tâm Cuối cùng, tất nước chiết xuất methanol gộp chung methanol bốc sử dụng thiết bị bay quay Cuối cùng, loại bột tinh thể màu vàng saponin thô thu Khi axit thủy phân saponin cho sapogenin mà sau ước lượng UV / Vis Cách tiến hành kết NHÓM 2-LỚP DHTP9B 21 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ Tổng số saponin steroid cỏ cà ri khử chất béo xác định theo thủ tục báo cáo với số sửa đổi Mẫu khô có chứa saponin steroid hòa tan ml ethyl acetate, mà ml 0,5% (v / v) p-anisaldehyde ethyl acetate ml dung dịch 50% (v / v) H2SO4 ethyl acetate thêm vào Hỗn hợp phản ứng sau ủ 60 ° 10 m cho phát triển màu sắc Saponin có mặt mẫu deglycosylated qua thủy phân axit, phát triển mang màu xuất phát từ tổng saponin + sapogenin mẫu Sau 10 phút ủ, ống đặt bồn tắm nước máy lạnh Phần 0,5 ml nước cất thêm vào ống Độ hấp thụ giải pháp phát triển màu đo quang phổ (UV 5704 SS, Tổng công ty Điện tử India Limited (ECIL), Ấn Độ) 430 nm Ethyl acetate sử dụng điều khiển để đo độ hấp thụ Đối với thuốc thử trống, ml ethyl acetate đặt ống nghiệm khảo nghiệm theo cách tương tự Đối với đường cong hiệu chuẩn, 8-40 mg diosgenin tiêu chuẩn ml ethyl acetate sử dụng Các nội dung tổng saponin steroid cho 46 gia nhập đạt kiểu gen cỏ cà ri trình bày Bảng Tất giá trị trung bình tính 100 g trọng lượng khô với độ lệch chuẩn Một loạt nội dung tổng saponin steroid quan sát thấy 46 đan có kiểu gen cỏ cà ri, dao động từ 0,92 g (UM279) đến 1,68 g (AM316) diosgenin tương đương cho 100 g dw với giá trị trung bình 1,34 g Có khác biệt khoảng lần từ mức thấp kiểu gen thứ hạng cao Phân tích phương sai cho thấy có khác biệt đáng kể kiểu gen tổng số saponin steroid mức 5% có ý nghĩa với Các nghiên cứu cho thấy biến rộng rãi kiểu gen cỏ cà ri saponin steroid lượng Kiểu gen, tức UM278, UM280, AM287, AM288 AM316 chứa nhiều 1,5 g 5,0 g saponin steroid dầu định, tương ứng Kiểu gen Fenugreek giàu saponin steroid sử dụng nguồn thay cho trình tổng hợp thuốc steroid ngành công nghiệp dược phẩm NHÓM 2-LỚP DHTP9B 22 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ 2) Phân biệt sapogenin triterpenoid saponin steroid quang phổ Xác định phương pháp quang phổ: Các sapogenin triterpenoid H 2SO4 đậm đặc có đỉnh hấp thu cực đại vùng tử ngoại 310nm Cực đại với Saponin Steroid Saponin tác dụng với antimoin trichlorid dung dịch chlorofrom soi đưới đèn phân tích tử ngoại saponin triterpenoid có huỳnh quang xanh saponin steroid vàng NHÓM 2-LỚP DHTP9B 23 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ ) Sơ đồ phân loại Saponin theo cấu trúc cấu tạo Hình 3.4 Cấu trúc thứ tự nguyên tử phân tử triterpenoid S a p o n in S a p o n in t r it e r p e n o id S a p o n in t r it e r p e n o id p e n t a c y c l ic S a p o n in s t e r o id S a p o n i n t r i t e r p e n o id t e t r a c y c l ic olean damaran ursan lanostan Lupan c u c u r b it a n s p ir o s t a n furostan a m in o f u r o s t a n s p ir o s o l a n hopan s o l a n id a n NHÓM 2-LỚP DHTP9B 24 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ Tài liệu tham khảo: 1) Bài giảng Dược liệu Tập I - 1998 2) Dược điển Việt Nam III 3) Đỗ Tất Lợi - Những thuốc vị thuốc Việt Nam 2003 4) Ngô Văn Thu_Hóa học Saponin_NXB KHTN năm 1990 5) Jean BRUNETON Pharmacognosy, Phytochemistry, Medicinal Plants - Technique & Documentation - Lavoisier, 1995 (Translated by Caroline K Hatton 6) Choon Yoong Cheok, Hanaa Abdel Karim Salman, Rabiha Sulaiman C.Y Cheok et al./ Food Research International.59 (2014) 16- 40 Trang 27 7) Hostettmann, K.; A Marston (1995) Saponins Cambridge: Cambridge University Press p 3ff ISBN 0-521-32970-1 OCLC 29670810 8) Functional Genomics of Triterpene Saponin Biosynthesis in Medicago Truncatula" Retrieved 23 February 2009 NHÓM 2-LỚP DHTP9B 25 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ NHÓM 2-LỚP DHTP9B 26 [...]... lượng đáng kể các saponin nguy hiểm và kết quả trong cuộc sống đe dọa độc tính đối với các loài động vật nào đó Phần II : Phương pháp xác định Saponin tồng số_ Phương pháp quang phổ Có nhiều phương pháp xác định Saponin song phần trình bày của nhóm chỉ đề cập đến phương pháp quang phổ I) Tổng quan về phương pháp quang phổ Phương pháp quang phổ đã trở thành một phương pháp phổ biến trong việc định lượng. .. bọt ổn định và liên tục trên bề mặt chất lỏng trong 15 phút chỉ ra sự có mặt của các Saponin Định lượng Saponin thường được thực NHÓM 2-LỚP DHTP9B 14 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ hiện bởi phương pháp quang phổ và phương pháp sắc ký Sự khác biệt giữa hai phương pháp này là phương pháp quang phổ cho biết tổng giá trị Saponin trong khi phương pháp sắc ký định lượng hợp chất Saponin. .. : Phương pháp khảo nghiệm xác định saponin tổng số,Vanillin-acid Sulfuric là lựa chọn phổ biến nhất trong phương pháp định lượng Saponin trong máy quang phổ Tuy nhiên có vài yếu tố, chẳng hạn như lựa chọn các tiêu chuẩn, bước sóng và những yếu tố khác cần được xem xét trước khi sử dụng phương pháp này 3) Nguyên tắc thực hiện: Các nhuyên tắc cơ bản của phương pháp này là các phản ứng oxy hóa giữa Saponin. .. II) Một số phương pháp quang phổ trong xác định Saponin tổng số 1) Phương pháp UV -Quang phổ : Đây là phương pháp được áp dụng rộng rãi nhất Quang phổ UV / VIS Ultraviolet : Phân tích Saponin trong vùng ánh sáng khả kiến 1.1) Hoá chất sử dụng : Trong phương pháp hóa chất được dùng là một hỗn hợp củaVanillin và Acid Acetic được sử dụng có thể dùng acid thay thế Vanillindễ dàng bị oxy hóa và tạo thành... dầu nhất định, tương ứng Kiểu gen Fenugreek giàu saponin steroid có thể được sử dụng như là nguồn thay thế cho quá trình tổng hợp thuốc steroid trong các ngành công nghiệp dược phẩm NHÓM 2-LỚP DHTP9B 22 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ 2) Phân biệt sapogenin triterpenoid và saponin steroid bằng quang phổ Xác định bằng phương pháp quang phổ: Các sapogenin triterpenoid trong H 2SO4 đậm đặc... methanol và ly tâm Cuối cùng, tất cả các nước nổi của các chiết xuất methanol được gộp chung và methanol được bốc hơi sử dụng thiết bị bay hơi quay Cuối cùng, một loại bột tinh thể màu vàng của saponin thô đã thu được Khi axit thủy phân saponin cho sapogenin mà sau đó được ước lượng bằng UV / Vis Cách tiến hành và kết quả NHÓM 2-LỚP DHTP9B 21 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ Tổng số saponin. .. trong một quang phổ kế và mang lại tổng saponin steroid 28,34% (w/w) của bột đông khô 2) Phương pháp quang phổ tán huyết: Sử dụng để định lượng Sapponin tổng số của một nguyên liệu thực phẩm 2.1) Nguyên tắc: Nguyên tắc của phương pháp này là phản ứng của saponin với thuốc thử máu để sinh ra oxy-hemoglobin là một kết quả màu đo lường trong máy quang phổ 2.2) Hóa chất và cách tiến hành: Các saponin này... 1) Xác định Saponin tồng số trong cỏ càri bằng phương pháp quang phổ UV/ VIS Trigonella foenum-graecum, thường được gọi là cỏ cà ri, là một cây họ đậu để nhiều quốc gia châu Á, Trung Đông và châu Âu .Xác định kiểu gen cỏ cà ri giàu saponin nhất định sẽ có ích cho các ngành công nghiệp dược phẩm Trong nghiên cứu này, saponin steroid được phân tích trong 46 kiểu gen cỏ cà ri khác nhau trên cơ sở trọng lượng. .. 10.06 10.14 10.38 T B 10.01 9.86 9.87 10.03 10.04 10.07 9.96 9.99 Hàm lượng Saponin trong mẫu trắng NHÓM 2-LỚP DHTP9B 19 SAPONIN VÀ PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SAPONIN TỔNG SỐ Nhận xét: Hàm lượng Sponin trong các mẫu khác nhau không đáng kể vá có giá trị xấp xỉ 10% 3.5 Một vài ví dụ khác về hóa chất và cách tiến hành đó quang: Ví dụ: định lượng acid glycyrrhetic trong cam thảo, phản ứng cho màu tím; còn đối... thực mà sau đó chuyển vào số lượng 1.3) Cách tiến hành: Phương pháp tổng Saponin là để định lượng tổng số saponin từ phản ứng của Triterpene oxy hóa Saponin với Vanillin (Li et al., 2010b), nhưng không tránh khỏi đặt câu hỏi liệu việc lựa chọn tiêu chuẩn để được sử dụng trong máy quang phổ là điều cần thiết để thể hiện các nhóm saponin chính xác từ các nguồn thực vật Thật không may, các thông tin có liên