i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUN  LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan đề tài nghiên cứu tơi Các kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình TƯỞNG THỤC UN khác Mọi giúp đỡ cácNGỌC thơng tin trích dẫn nêu rõ nguồn gốc Người thực NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH TẠO HẠT VÀ CÁC ĐIỀU KIỆN TỐI ƯU NHẰM TĂNG CƯỜNG KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA NANO CHITOSAN Tưởng Ngọc Thục Uyên LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC BN MA THUỘT, NĂM 2010 ii LỜI CẢM ƠN Để hồn thành tốt luận văn này, tơi xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: -PGS.TS Nguyễn Anh Dũng, người hướng dẫn khoa học trực tiếp, tận tình hướng dẫn phương pháp nghiên cứu đóng góp nhiều ý kiến q báu, giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn -Lãnh đạo Trường Đại học Tây Ngun, tập thể Thầy Cơ giáo Phòng Sau đại học, Khoa Khoa học tự nhiên -Cơng nghệ, Khoa Nơng Lâm nghiệp - Các Thầy Cơ giáo tận tâm giảng dạy, truyền thụ kiến thức q báu q trình học tập - Ban Giám hiệu Trường THPT chun Nguyễn Du - Các bạn bè, đồng nghiệp người thân giúp đỡ, động viên tơi q trình học tập nghiên cứu Trân trọng cảm ơn Người thực Tưởng Ngọc Thục Un iii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN …………………………………………………………………… i LỜI CẢM ƠN ……………………………………………………………………… ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG …………………………………………………………… vi DANH MỤC CÁC ĐỒ THỊ viii DANH MỤC CÁC HÌNH x PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1.Tính cấp thiết 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3.Ý nghĩa khoa học 1.4.Ý nghĩa thực tiễn 1.5.Giới hạn đề tài PHẦN 2: TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU 2.1 Tổng quan chitosan ……………………………………………… 2.2 Tổng quan nano chitosan 2.2.1 Các phương pháp tạo vật liệu nano chitosan 2.3 Ứng dụng chitin, chitosan dẫn suất y học 14 2.3.1.Hoạt tính kháng ung thư 16 2.3.2.Giảm cholesterol máu (hypocholesterolemic activity) 17 2.3.3.Đặc tính chống oxi hóa 17 2.3.4.Màng phủ làm lành vết thương (would healing) 18 2.3.5.Sử dụng cấy ghép 19 2.3.6 Ứng dụng ly giải chậm thuốc 19 2.3.7 Hoạt tính kháng khuẩn ……………………………………… 21 iv 2.3.8 Hoạt tính chống đơng máu dẫn xuất sulfated chitosan 27 2.3.9.Ứng dụng làm tá chất cho vaccin 28 2.4 Tổng quan Escherichia coli Staphylococcus aureus 31 2.4.1 Vi khuẩn Escherichia coli 31 2.4.2 Vi khuẩn Staphylococcus aureus 36 PHẦN 3: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 3.1 Nội dung nghiên cứu 40 3.1.1 Nghiên cứu qui trình tạo hạt nano chitosan 40 3.1.2 Nghiên cứu thử nghiệm khả kháng khuẩn hạt nano chitosan 40 3.2 Phương pháp nghiên cứu 40 3.2.1 Hóa chất 40 3.2.2 Địa điểm nghiên cứu 41 3.2.3 Thời gian thực 41 3.2.4 Phương pháp nghiên cứu qui trình tạo hạt nano chitosan 41 3.2.5 Nghiên cứu thử nghiệm khả kháng khuẩn hạt nano Chitosan 43 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 50 4.1 Nghiên cứu qui trình tạo hạt nano chitosan 50 4.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng khối lượng phân tử đến kích thước hạt, điện tích tính ổn định hạt nano chitosan 50 4.1.2 Nghiên cứu ảnh hưởng tỷ lệ CS:TPP (w/w) đến kích thước điện hạt nano chitosan 56 4.2 Nghiên cứu thử nghiệm khả kháng khuẩn hạt nano chitosan 62 2.1.Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ chitosan đến khả kháng khuẩn 62 4.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ nano chitosan đến khả v kháng khuẩn 64 4.2.3.Nghiên cứu ảnh hưởng khối lượng phân tử chitosan đến khả kháng khuẩn hạt nano chitosan 69 4.2.4.Nghiên cứu ảnh hưởng tỉ lệ CS: TPP ( 4:1; 5:1; 6:1) đến khả kháng khuẩn hạt nano chitosan 73 4.2.5 Nghiên cứu ảnh hưởng pH mơi trường đến khả kháng khuẩn hạt nano chitosan 76 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 79 5.1 Kết luận 79 5.2 Kiến nghị 79 vi DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU , CÁC CHỮ VIẾT TẮT Số thứ tự Chữ ciết tắt Nghĩa chữ viết tắt HPLC Sắc kí lỏng cao áp MIC Nồng độ ức chế tối thiểu DNA Deoxyribo nucleic acid pDNA Plasmide deoxyribo nucleic acid DEMC Diethylmethylchitosan TPP Tri polyphosphate PMAA Polymethacrylic axit CS Chitosan CMC Cacboxymethyl cellulose 10 CNP Chitosan nanoparticles 11 TEM Kính hiển vi điện tử truyền quang 12 SEM Kính hiển vi điện tử qut 13 kDa Kilo Dalton 14 E.coli Escherichia coli 15 S.aureus Staphylococcus aureus 16 LMWC Khối lượng phân tử thấp vii DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang 2.1 Ảnh hưởng nồng độ chitosan đến kích thước, điện khả hấp phụ BSA 2.2 Tính chất vật lý chitosan oligomer/CMC nanoparticles hấp phụ với pDNA 2.3 11 Các tính chất chitosan liên quan đến ứng dụng sinh y học 15 2.4 Chỉ số MIC (µg/ml) MBC (µg/ml) chitosan DEMC 24 2.5 Chỉ số MIC số dẫn suất chitosan số vi khuẩn 25 2.6 Chỉ số MIC (µg/ml) MBC (µg/ml) kháng sinh Doxycycline Chitosan nanoparticles 4.1 Ảnh hưởng khối lượng phân tử chitosan đến tính chất hạt nano chitosan 4.2 50 Ảnh hưởng tỷ lệ Chitosan: TPP đến tính chất hạt nano chitosan (Chitosan 30kDa) 4.3 27 56 Ảnh hưởng nồng độ đến khả kháng khuẩn chitosan vi khuẩn Escherichia coli Staphylococcus aureus 4.4 Khả kháng khuẩn nano chitosan (CS:TPP = 6:1) chitosan vi khuẩn Escherichia coli 4.5 65 Khả kháng khuẩn nano chitosan (CS:TPP = 6:1) chitosan vi khuẩn Staphylococcus aureus 4.6 62 Ảnh hưởng khối lượng phân tử đến khả 67 viii kháng khuẩn nano chitosan vi khuẩn Escherichia coli 4.7 Ảnh hưởng khối lượng phân tử đến khả kháng khuẩn nano chitosan vi khuẩn Staphylococcus aureus 4.8 70 72 Ảnh hưởng tỉ lệ CS:TPP đến khả kháng khuẩn nano chitosan vi khuẩn Escherichia coli 74 4.9 Ảnh hưởng tỉ lệ CS:TPP đến khả kháng khuẩn nano chitosan vi khuẩn Staphylococcus aureus 75 4.10 Ảnh hưởng pH mơi trường đến khả kháng khuẩn hạt nano chitosan vi khuẩn Escherichia coli 76 4.11 Ảnh hưởng pH mơi trường đến khả kháng khuẩn hạt nano chitosan vi khuẩn Staphylococcus aureus 77 ix DANH MỤC CÁC ĐỒ THỊ STT Tên đồ thị Trang 4.1 Phân bố kích thước hạt dung dịch nano chitosan với trọng lượng phân tử 20 kDa 53 4.2 Phân bố kích thước hạt dung dịch nano chitosan với trọng lượng phân tử 30 kDa 54 4.3 Phân bố kích thước hạt dung dịch nano chitosan với trọng lượng phân tử 300 kDa 55 4.4 Phân bố kích thước hạt dung dịch nano chitosan với tỷ lệ CS:TPP 3:1 57 4.5 Phân bố kích thước hạt dung dịch nano chitosan với tỷ lệ CS:TPP 4:1 58 4.6 Phân bố kích thước hạt dung dịch nano chitosan với tỷ lệ CS:TPP 5:1 4.7 4.8 59 Phân bố kích thước hạt dung dịch nano chitosan với tỷ lệ CS:TPP 6:1 60 Phân bố kích thước hạt nano chitosan với tỷ lệ CS:TPP 7:1 61 4.9 Khả kháng khuẩn chitosan vi khuẩn Escherichia coli Staphylococcus aureus 63 4.10 Khả kháng khuẩn nano chitosan chitosan vi khuẩn Escherichia coli 66 4.11 Khả kháng khuẩn nano chitosan chitosan vi khuẩn Staphylococcus aureus 67 4.12 Ảnh hưởng khối lượng phân tử đến khả kháng khuẩn nano chitosan vi khuẩn Escherichia coli 4.13 Ảnh hưởng khối lượng phân tử đến khả kháng 70 x khuẩn nano chitosan vi khuẩn Staphylococcus aureus 73 4.14 Ảnh hưởng tỉ lệ CS : TPP đến khả kháng khuẩn nano chitosan vi khuẩn Escherichia coli 74 4.15 Ảnh hưởng tỉ lệ CS : TPP đến khả kháng khuẩn nano chitosan vi khuẩn Staphylococcus aureus 75 4.16 Ảnh hưởng pH mơi trường đến khả kháng khuẩn hạt nano chitosan vi khuẩn Escherichia coli 77 4.17 Ảnh hưởng pH mơi trường đến khả kháng khuẩn hạt nano chitosan vi khuẩn Staphylococcus aureus 78 xi DANH MỤC CÁC HÌNH STT Tên hình ảnh Trang 2.1 Sơ đồ phương pháp tạo hạt nanochitosan 2.2 Cơ chế tạo hạt chitosan nanoparticles với axit methacrylic 2.3 TEM hạt nanoparticles CS-PMAA 10 2.4 Sơ đồ tạo giọt phương pháp kết tủa 12 2.5 Sơ đồ tạo giọt phương pháp sấy phun 13 2.6 Sơ đồ tạo hạt phương pháp mixel ngược pha 14 2.7 Ảnh hưởng chitosan chitosan oligomer (COS) đến tế bào E.coli (Eaton,2008) 22 2.8 Cơ chế xâm nhập qua màng chitosan mang vaccin có kích thước nm khác 29 2.9 Ảnh hưởng loại adjuvant lên đáp ứng miễn dịch chuột với vaccin cúm H5N1 30 2.10 Ảnh hưởng chitosan tá chất khác đến đáp ứng miễn dịch chuột với vaccin H5N1 hiệu giá kháng thể (HIU) 31 4.1 Ảnh TEM hạt nano chitosan tổng hợp với trọng lượng phân tử 20 kDa 53 4.2 Ảnh TEM hạt nano chitosan tổng hợp với trọng lượng phân tử 30 kDa 54 4.3 Ảnh TEM hạt nano chitosan tổng hợp với trọng lượng phân tử 300 kDa 55 4.4 Ảnh TEM hạt nano chitosan tổng hợp với tỷ lệ CS: TPP 3:1 57 4.5 Ảnh TEM hạt nano chitosan tổng hợp với tỷ lệ CS: TPP 4:1 58 xii 4.6 Ảnh TEM hạt nano chitosan tổng hợp với tỷ lệ CS: TPP 5:1 59 4.7 Ảnh TEM hạt nano chitosan tổng hợp với tỷ lệ CS: TPP làà 6:1 60 4.8 Ảnh TEM hạt nano chitosan tổng hợp với tỷ lệ CS: TPP 7:1 61 xiii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUN  TƯỞNG NGỌC THỤC UN NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH TẠO HẠT VÀ CÁC ĐIỀU KIỆN TỐI ƯU NHẰM TĂNG CƯỜNG KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA NANO CHITOSAN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC BN MA THUỘT, NĂM 2010 xiv PHẦN MỞ ĐẦU 1.1.Tính cấp thiết Khoa học cơng nghệ nano lĩnh vực năm gần phát triển nhanh chóng hiệu ứng dụng rộng rãi nhiều ngành sinh y học, điện tử, vật lí, hóa học Vật liệu nano với kích thước nanomet siêu nhỏ thể nhiều tính chất lạ hiệu ứng kích thước Hiện nhiều nước giới xem cơng nghệ nano mục tiêu mũi nhọn để đầu tư phát triển Việt Nam nước phát triển, vệ sinh an tồn thực phẩm mức thấp chịu chi phối nhiều yếu tố như: mơi trường nhiễm dẫn đến nhiễm vào nơng sản vật ni, quy trình sản xuất chế biến thực phẩm nhỏ lẻ, khơng đáp ứng điều kiện vệ sinh an tồn thực phẩm, hủ tục lạc hậu ăn uống lợi nhuận mà sử dụng phụ gia, bảo quản ngồi danh mục y tế, kiểm sốt thực phẩm qua biên giới thị trường chưa chặt chẽ gióng lên hồi chng báo động hết Các thuốc kích thích vật ni, dư lượng thuốc bảo vệ thực vật, melanin sữa nước mắm, 3-MCPD nước tương, urea, chlor, cloramphenicol, dipterex thủy hải sản , đặc biệt thức ăn nước uống nhiễm khuẩn gây nhiều vụ ngộ độc tập thể, nguy hại cho sức khỏe người Khái niệm thực phẩm Việt Nam xa xỉ người dân, dân nghèo Để chống lại nhiễm khuẩn, việc sử dụng chất kháng sinh giải pháp phổ biến để đẩy lùi bệnh dịch vi khuẩn gây Tuy nhiên việc sử dụng thuốc kháng sinh có mặt trái là: chất kháng sinh tính chọn lọc thấp nên dễ dẫn đến tượng vi khuẩn có lợi bị tiêu diệt, gây trạng thái cân khu hệ vi sinh vật, đặc biệt việc sử dụng rộng rãi loại thuốc kháng sinh dễ dẫn đến nguy kháng thuốc vi khuẩn xa gia tăng tính nguy hiểm triệu chứng lâm sàng tạo lồi vi khuẩn Chính vậy, u cầu cấp thiết đặc phải tìm chất có khả ức chế sinh trưởng vi khuẩn mà khơng gây tượng nhờn thuốc, khơng phá vỡ trạng thái cân khu hệ vi sinh vật, khơng tác dụng phụ, khơng độc hại, khơng gây nhiễm mơi trường Chitosan polisaccharide tự nhiên, dẫn xuất từ q trình khử acetyl chitin Chitin thành phần cấu trúc vỏ tơm, cua, polimer sinh học có nhiều tự nhiên, đặc biệt Việt Nam có bờ biển dài, nhiều sơng suối Chitosan khơng độc, có khả tự phân hủy sinh học cao, chất ăn Chitosan mang điện tích dương, có lực cao với axit mang điện tích âm, tương tác với thành phần polianion vách tế bào vi sinh vật, kết hợp DNA, gắn kết gây đơng tụ, kết tủa tế bào vi khuẩn Do đó, chitosan có tính kháng khuẩn, kháng nấm rộng, làm người trẻ lâu, hoạt hóa tế bào thể, gia tăng khả miễn dịch, giải độc , bảo vệ gan thể Đặc biệt hạt nano chitosan có kích thước nano, có nhiều ưu điểm diện tích tiếp xúc điện tích dương lớn chitosan, có tiềm tăng cường hoạt tính sinh học, có hoạt tính kháng khuẩn Vì vậy, việc nghiên cứu tạo hạt nano nhằm tăng cường tính kháng khuẩn chitosan ứng dụng bảo quản thực phẩm vấn đề cấp thiết Ở Việt Nam, Nguyễn Anh Dũng sử dụng chế phẩm chitosan để ức chế sinh trưởng vi khuẩn Escherichia coli, nghiên cứu tạo hạt nano chitosan làm tá chất miễn dịch cho vaccin cúm A H5N1 xây dựng mơ hình thử nghiệm động vật Xuất phát từ tơi chọn đề tài: “Nghiên cứu qui trình tạo hạt điều kiện tối ưu nhằm tăng cường khả kháng khuẩn nano chitosan” 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Xây dựng quy trình tạo hạt nano chitosan tripolyphosphate (TPP) 3 1.2.2 Xác định điều kiện tối ưu để nâng cao hiệu kháng khuẩn hạt nano chitosan 1.3.Ý nghĩa khoa học Tạo hạt nano chitosan nhằm tăng cường hoạt tính kháng khuẩn hồn tồn Việt Nam 1.4.Ý nghĩa thực tiễn Thành cơng đề tài đẩy nhanh việc sử dụng vật liệu nano chitosan bảo quản, phòng chống nhiễm khuẩn thực phẩm Việt Nam Đây vật liệu an tồn cho sức khỏe người phổ biến, giá thành hạ phù hợp với điều kiện kinh tế nhân dân 1.5.Giới hạn đề tài Do thời gian có hạn, thiết bị, hóa chất hạn chế nên tơi tiến hành nghiên cứu quy trình tạo hạt nano chitosan, bước đầu thử nghiệm hai loại vi khuẩn Escherichia coli Staphylococcus aureus 4 PHẦN TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU 2.1 Tổng quan chitosan Chitin thành phần cấu trúc nên vỏ trùng, tơm, cua, vách tế bào nấm Chitin có cấu tạo tương tự cellulose, có khác biệt đơn vị cấu tạo nên chitin N-acetyl-D-glucosamine, đơn vị nối với liên kết β-1,4-glycoside Cơng thức cấu tạo chitin chitosan Tính chất, hoạt tính sinh học chitin, chitosan phụ thuộc nhiều vào khối lượng phân tử (Mw) mức độ deacetyl hóa (DD: degree of deacetylation) Mức độ deacetyl hóa dùng để % số nhóm acetyl phân tử chitin, chitosan bị khử Mức độ deacetyl hóa tỷ lệ thuận với mật độ nhóm NH3+ phân tử ảnh hưởng đến tính chất đa điện phân độ tan chitin, chitosan Chitin có mức độ deacetyl hóa trung bình nằm khoảng 10-15% Có sản phẩm chitin deacetyl hóa phần (partially deacetyl chitin) có mức độ deacetyl hóa từ 30-40% Trong chitosan phải có mức độ deacetyl hóa > 50%, với mức độ deacetyl hóa chitosan dễ tan số acid hữu lỗng acetic, lactic Mức độ deacetyl hóa xác định nhiều phương pháp khác như: IR spectrophotometry, sắc ký lọc gel, UV spectrophotometry, 1H NMR, 13C- NMR, phương pháp chuẩn độ HPLC theo Kumar (2000) [21] Khối lượng phân tử chitin, chitosan xác định HPLC Tuy nhiên phương pháp đơn giản nhất, nhanh đo độ nhớt, dựa vào số α K phương trình Mark – Houwink: [η] = K.Mα = 1.81 x 10-3 M0.93 Trong đó: η độ nhớt biểu kiến chitin (intrisic viscosity) ; M: khối lượng phân tử Khối lượng phân tử trung bình chitin biến động từ 1.0 – 2.5 x106, khối lượng phân tử chitin giảm xuống mức độ deacetyl hóa tăng lên Chitosan có ứng dụng rộng rãi ngành cơng, nơng nghiệp, y dược, thực phẩm… nhờ vào đặc tính sau (Rinaudo, 2006) - Tính chất đa điện ly mang điện tích dương (cationic polyelectrolyte) cho phép gắn kết với thành phần sinh học mang điện tích âm - Có thể tái sinh theo đường sinh học trái đất - Có khả phân hủy sinh học enzyme thể - Có khả tương hợp sinh học với quan, mơ tế bào động thực vật - Có khả kích thích q trình làm lành vết thương đơng máu - Có khả tương tác chun biệt với receptor màng - Giảm chlolesterol liên kết có chọn lọc với acid béo - Khơng gây độc sản phẩm sau thủy phân chất chuyển hố tự nhiên - Khơng gây đáp ứng miễn dịch mơ quan động vật - Có tác dụng hỗ trợ điều hòa miễn dịch - Có thể sử dụng nhiều dạng sản phẩm dạng miếng, bột mịn, hạt, màng, xốp (scaffolds), bơng, sợi gel [43] 2.2 Tổng quan nano chitosan 2.2.1 Các phương pháp tạo vật liệu nano chitosan Chitosan nanoparticles hạt chitosan có kích thước nanomet Chitosan nanoparticles có kích thước siêu nhỏ nên dễ dàng qua màng tế bào, diện tích điện tích bề mặt cực lớn nên ứng dụng nhiều sinh y học mang thuốc, vaccine, cơng nghệ sinh học làm vector chuyển gen Hiện có nhiều phương pháp tạo nano chitosan Theo Sulnin (2004) phương pháp chủ yếu để tạo hạt nano chitosan là: Phương pháp khâu mạch nhũ tương (emulsion cross linking), phương pháp tạo giọt (coacervation) NaOH-methanol, phương pháp sấy phun (dry spraying), phương pháp tạo gel ionic (ionic gel) tripolyphosphate (TPP) phương pháp rây (sieving method) Trong phổ biến phương pháp tạo hạt gel tripolyphosphate[43] 2.2.1.1 Phương pháp tạo chitosan nanoparticles liên kết cộng hóa trị Ohya nghiên cứu tạo nano chitosan để nhốt thuốc chống ung thư 5FU cách cho dung dịch chitosan khâu mạch cộng hóa trị với glutaraldehyde Nhóm kép - CHO glutaraldehyde phản ứng với nhóm – NH2 chitosan để khâu mạch (cross-linking) tạo nano chitosan Phương pháp có ưu điểm kích thước tính chất hạt nano chitosan ổn định [11] [...]... ñể ức chế sinh trưởng của vi khuẩn Escherichia coli, nghiên cứu tạo hạt nano chitosan làm tá chất miễn dịch cho vaccin cúm A H5N1 và xây dựng mô hình thử nghiệm trên ñộng vật Xuất phát từ ñó tôi ñã chọn ñề tài: Nghiên cứu qui trình tạo hạt và các ñiều kiện tối ưu nhằm tăng cường khả năng kháng khuẩn của nano chitosan 1.2 Mục tiêu ñề tài 1.2.1 Xây dựng quy trình tạo hạt nano chitosan bằng tripolyphosphate... GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN  TƯỞNG NGỌC THỤC UYÊN NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH TẠO HẠT VÀ CÁC ĐIỀU KIỆN TỐI ƯU NHẰM TĂNG CƯỜNG KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN CỦA NANO CHITOSAN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC BUÔN MA THUỘT, NĂM 2010 xiv 1 PHẦN 1 MỞ ĐẦU 1.1.Tính cấp thiết Khoa học và công nghệ nano là một lĩnh vực mới trong những năm gần ñây nhưng ñã và ñang phát triển nhanh chóng vì sự hiệu quả và những... biệt hạt nano chitosan có kích thước nano, có nhiều ưu ñiểm như diện tích tiếp xúc và ñiện tích dương lớn hơn chitosan, do ñó có tiềm năng tăng cường hoạt tính sinh học, trong ñó có hoạt tính kháng khuẩn Vì vậy, việc nghiên cứu tạo hạt nano nhằm tăng cường tính kháng khuẩn của chitosan ứng dụng trong bảo quản thực phẩm là vấn ñề cấp thiết hiện nay Ở Việt Nam, Nguyễn Anh Dũng ñã sử dụng chế phẩm chitosan. .. ñịnh các ñiều kiện tối ưu ñể nâng cao hiệu quả kháng khuẩn của hạt nano chitosan 1.3.Ý nghĩa khoa học Tạo hạt nano chitosan nhằm tăng cường hoạt tính kháng khuẩn là hoàn toàn mới tại Việt Nam 1.4.Ý nghĩa thực tiễn Thành công của ñề tài sẽ ñẩy nhanh việc sử dụng vật liệu nano chitosan trong bảo quản, phòng chống nhiễm khuẩn ở thực phẩm ở Việt Nam Đây là vật liệu an toàn cho sức khỏe con người và phổ... Phương pháp tạo chitosan nanoparticles bằng liên kết cộng hóa trị Ohya ñã nghiên cứu tạo nano chitosan ñể nhốt thuốc chống ung thư 5FU bằng cách cho dung dịch chitosan khâu mạch cộng hóa trị với glutaraldehyde Nhóm kép - CHO của glutaraldehyde sẽ phản ứng với nhóm – NH2 của chitosan ñể khâu mạch (cross-linking) tạo nano chitosan Phương pháp này có ưu ñiểm là kích thước và tính chất hạt nano chitosan rất...xi DANH MỤC CÁC HÌNH STT Tên hình ảnh Trang 2.1 Sơ ñồ phương pháp tạo hạt nanochitosan 7 2.2 Cơ chế tạo hạt chitosan nanoparticles với axit methacrylic 9 2.3 TEM của hạt nanoparticles CS-PMAA 10 2.4 Sơ ñồ tạo giọt bằng phương pháp kết tủa 12 2.5 Sơ ñồ tạo giọt bằng phương pháp sấy phun 13 2.6 Sơ ñồ tạo hạt bằng phương pháp mixel ngược pha 14 2.7 Ảnh hưởng của chitosan và chitosan oligomer (COS)... 4.3 Ảnh TEM hạt nano chitosan khi tổng hợp với trọng lượng phân tử là 300 kDa 55 4.4 Ảnh TEM hạt nano chitosan khi tổng hợp với tỷ lệ CS: TPP là 3:1 57 4.5 Ảnh TEM hạt nano chitosan khi tổng hợp với tỷ lệ CS: TPP là 4:1 58 xii 4.6 Ảnh TEM hạt nano chitosan khi tổng hợp với tỷ lệ CS: TPP là 5:1 59 4.7 Ảnh TEM hạt nano chitosan khi tổng hợp với tỷ lệ CS: TPP làà 6:1 60 4.8 Ảnh TEM hạt nano chitosan khi... nhập qua màng của chitosan mang vaccin có kích thước nm khác nhau 29 2.9 Ảnh hưởng của các loại adjuvant lên ñáp ứng miễn dịch của chuột với vaccin cúm H5N1 30 2.10 Ảnh hưởng của chitosan và các tá chất khác ñến ñáp ứng miễn dịch của chuột với vaccin H5N1 và hiệu giá kháng thể (HIU) 31 4.1 Ảnh TEM hạt nano chitosan khi tổng hợp với trọng lượng phân tử là 20 kDa 53 4.2 Ảnh TEM hạt nano chitosan khi tổng... dụng dưới nhiều dạng sản phẩm như dạng miếng, bột mịn, hạt, màng, tấm xốp (scaffolds), bông, sợi và gel [43] 2.2 Tổng quan về nano chitosan 2.2.1 Các phương pháp tạo vật liệu nano chitosan Chitosan nanoparticles là các hạt chitosan có kích thước nanomet Chitosan nanoparticles do có kích thước siêu nhỏ nên dễ dàng ñi qua màng tế bào, diện tích và ñiện tích bề mặt cực lớn nên ñược ứng dụng nhiều trong... thể - Có khả năng tương hợp sinh học với các cơ quan, mô và tế bào ñộng thực vật - Có khả năng kích thích quá trình làm lành vết thương và ñông máu - Có khả năng tương tác chuyên biệt với các receptor trên màng - Giảm chlolesterol do liên kết có chọn lọc với các acid béo 6 - Không gây ñộc do các sản phẩm sau thủy phân ñều là các chất chuyển hoá tự nhiên - Không gây ñáp ứng miễn dịch trong mô và cơ quan