ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Nguyễn Huy Dƣơng PHÂN TÍCH GEN MÃ HÓA CHO PROTEIN NHX LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU MẶN Ở LÚA LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – Năm 2015 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Nguyễn Huy Dƣơng PHÂN TÍCH GEN MÃ HÓA CHO PROTEIN NHX LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU MẶN Ở LÚA Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60420121 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS ĐỖ THỊ PHÚC Hà Nội – Năm 2015 Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học LỜI CẢM ƠN Trƣơc tiên xin gửi lời cảm ơn, biết ơn sâu sắc tới TS Đỗ Thị Phúc, ngƣời thầy nhiệt tình hƣớng dẫn, giúp đỡ, hỗ trợ suốt trình thực đề tài tạo điều kiện thuận lợi giúp hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy, cô giáo môn Di truyền học dạy dỗ và tạo điều kiện sở vật chất môn suốt thời gian học tập nghiên cứu trƣờng Tôi xin chân thành cảm ơn cán phòng thí nghiệm thuộc môn Di truyền học, phòng Genomics tạo điều kiện trang thiết bị đầy đủ, đại phục vụ cho nghiên cứu đề tài Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới cử nhân Trần Xuân An, ngƣời giúp đỡ tận tình trình thực hành thí nghiệm cần thiết cho đề tài luận văn thạc sĩ Luận văn đƣợc thực với nguồn kinh phí từ quỹ NAFOSTED Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 23 tháng 11 năm 2015 Học viên Nguyễn Huy Dƣơng Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học Mục Lục MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung lúa 1.2 Khả chịu mặn lúa 1.2.1 Ảnh hƣởng mặn sinh trƣởng phát triển lúa 1.2.2 Đáp ứng thực vật nói chung lúa nói chung điều kiện mặn 1.3 Họ protein NHX thực vật 1.3.1 Nguồn gốc tiến hóa họ protein NHX thực vật 1.3.2 Chức họ protein thực vật 1.3.2.1 Điều hòa pH .9 1.3.2.2 Chống chịu mặn 1.3.3 Họ protein NHX lúa 10 1.4 Khái niệm chức yếu tố điều hòa cis thực vật 12 1.5 Tình hình nghiên cứu họ gen NHX giới Việt Nam 13 1.6 Một số công cụ tin sinh đƣợc sử dụng nghiên cứu in silico 14 1.6.1 Các công cụ tìm kiếm sở liệu .14 1.6.2 Các công cụ dự đoán cấu trúc phân tử protein 15 1.6.3 Các công cụ đánh giá kết dự đoán cấu trúc phân tử protein .16 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Vật liệu 17 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Tách chiết DNA tổng số phƣơng pháp CTAB : 18 i Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học 2.2.2 Phƣơng pháp điện di gel Agarose 18 2.2.3 Phƣơng pháp PCR 19 2.2.4 Sử dụng sở liệu phần mềm tin sinh để nghiên cứu in silico gen mã hóa cho protein NHX phân tích kết nghiên cứu 20 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 3.1 Kết nghiên cứu in silico họ gen OsNHX 22 3.1.1 Dữ liệu họ gen OsNHX 22 3.1.1.1 Vị trí phân bố gen NST 22 3.1.1.2 Cấu trúc gen thuộc họ gen NHX 23 3.1.1.3 Phân tích cấu trúc protein 25 3.1.2 Phân tích vùng promoter gen thuộc họ gen OsNHX 33 3.1.2.1 Nhận diện yếu tố cis thuộc vùng promoter 33 3.1.2.2 Thiết kế logo motif số yếu tố cis liên quan đến tính chịu mặn 37 3.1.3 Phân tích in silico liệu biểu gen OsNHX 39 3.1.3.1 Sự biểu gen thuộc họ gen OsNHX điều kiện bình thƣờng 39 3.1.3.2 Sự biểu gen thuộc họ OsNHX điều kiện stress 43 3.2 Kết phân tích đa hình vùng promoter gen OsNHX3 45 3.2.1 Kết phản ứng PCR 45 3.2.2 Kết giải trình tự 45 3.2.3 Đánh giá mức độ đa hình vùng promoter giống lúa nghiên cứu 48 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 Tài liệu tham khảo 53 ii Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học Danh mục bảng Bảng 1.1 Các gen chống chịu mặn thực vật Bảng 1.2 Các gen điều hòa liên quan đến tính chịu mặn thực vật Bảng 1.3 Số lƣợng vị trí protein thuộc họ protein NHX số loài thực vật Bảng 2.1 Danh sách 12 giống lúa dùng nghiên cứu Error! Bookmark not defined Bảng 2.2 Trình tự cặp mồi đặc hiệu sử dụng PCR vùng promoter gen OsNHX3 20 Bảng 2.3 Thành phần phản ứng PCR 20 Bảng 2.4 Chu trình nhiệt phản ứng PCR 21 Bảng 3.1 Thông tin sở liệu gen thuộc họ gen OsNHX lúa 22 Bảng 3.2 So sánh mức độ tƣơng đồng trình tự nucleotid gen thuộc họ OsNHX Error! Bookmark not defined Bảng 3.3 So sánh mức độ tƣơng đồng trình tự amino acid protein họ OsNHX Error! Bookmark not defined Bảng 3.4 Chỉ số đánh giá mô hình 3D protein thuộc họ OsNHX 33 Bảng 3.5 Vị trí trình tự TSS yếu tố cis vùng promoter gen thuộc họ OsNHX 34 Bảng 3.6 Dữ liệu tạo dòng cDNA biểu gen OsNHX4 42 Bảng 3.7 Vị trí kiểu thay trình tự nuleotid vùng promoter gen OsNHX3 giống lúa nghiên cứu 48 Bảng 3.8 Sự thay đổi yếu tố điều hòa cis thay nucleotide vùng promoter gen OsNHX3 11 giống lúa 51 iii Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học Danh mục hình Hình 1.1 Các đƣờng điều hòa chống chịu stress mặn thực vật Hình 1.2 Thành phần họ protein OsNHX tham gia điều hòa định ion nội bào Error! Bookmark not defined Hình 3.1 Sơ đồ phân bố gen OsNHX NST lúa 23 Hình 3.2 Cấu trúc exon/intron gen thuộc họ gen NHX lúa Error! Bookmark not defined Hình 3.3a Mô hình cấu trúc miền protein xuyên màng OsNHX1 Error! Bookmark not defined Hình 3.3b Mô hình cấu trúc miền protein xuyên màng OsNHX2 Error! Bookmark not defined Hình 3.3c Mô hình cấu trúc miền protein xuyên màng OsNHX3 Error! Bookmark not defined Hình 3.3d Mô hình cấu trúc miền protein xuyên màng OsNHX4 Error! Bookmark not defined Hình 3.3e Mô hình cấu trúc miền protein xuyên màng OsNHX5 Error! Bookmark not defined Hình 3.4a Mô hình 3D protein OsNHX1 30 Hình 3.4b Mô hình 3D protein OsNHX2 30 Hình 3.4c Mô hình 3D protein OsNHX3 31 Hình 3.4d Mô hình 3D protein OsNHX4 31 Hình 3.4e Mô hình 3D protein OsNHX5 31 Hình 3.5 Phân tích điểm Ramachandran protein OsNHX3 32 Hình 3.6 Logo consensus yếu tố ABRE Error! Bookmark not defined Hình 3.7 Logo consensus yếu tố G-box Error! Bookmark not defined Hình 3.8 Logo consensus yếu tố MBS Error! Bookmark not defined iv Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học Hình 3.9 Logo consensus yếu tố CAAT Error! Bookmark not defined.8 Hình 3.10 Logo consensus yếu tố TATA-box Error! Bookmark not defined Hình 3.11 Logo consensus yếu tố GCN4 Error! Bookmark not defined Hình 3.12a Sự biểu gen OsNHX mô quan lúa 40 Hình 3.12b Biểu gen gen OsNHX qua giai đoạn phát triển lúa 41 Hình 3.13 Sự biểu gen OsNHX4 số mô, quan lúa 42 Hình 3.14 Sự biểu gen OsNHX1 (a) OsNHX2 (b) điều kiện stress mặn 43 Hình 3.15 Sự biểu gen OsNHX3 (c) OsNHX5 (d) điều kiện stress mặn 44 Hình 3.16 Sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi pro-NHX3 45 Hình 3.17 Kết giải trình tự promoter gen OsNHX3 giống lúa CD2 45 Hình 3.18 So sánh trình tự promoter 11 giống lúa với trình tự database 46 v Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học DANH MỤC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Tiếng Anh Tiếng Việt DNA Deoxyribonucleic Acid Axit deoxiribonucleic aa Amino acid Axit amin bp Base Pair Cặp bazơ nitơ Cds Coding sequense Trình tự mã hóa cho protein CREs Cis Regulatory Elements Yếu tố điều hòa cis CTAB Cetyl Trimethyl Amoni Bromide dNTPs Deoxyribonucleotide Triphosphate ddNTP Dideoxyribonucleotide Triphosphate DPE Downstream Promoter Element Yếu tố promoter xuôi dòng DRE Drought Response Element Yếu tố đáp ứng hạn EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid Ethylen tetraaxetic axit EST Expressed Sequence Tag Tag trình tự biểu IRRI The International Rice Research Institute National Center for Biotechnology Information Viện nghiên cứu lúa quốc tế NCBI Trung tâm thông tin công nghệ sinh học quốc gia Mỹ vi Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học NHX Na+/H+ -Exchanger Trao đổi ion Na+/H+ NST Chromosome Nhiễm sắc thể PCR Polymerase Chain Reaction Phản ứng chuỗi trùng hợp RGAP Rice Genome Annotation Project Dự án giải hệ gen lúa TAE Tris-acetate-EDTA TE Tris-EDTA TSS Transciption Start Site Vị trí khởi đầu phiên mã vii Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học MỞ ĐẦU Ở Việt Nam lúa trồng địa có khả thích nghi rộng với điều kiện sinh thái khác Tuy nhiên suất lúa phụ thuộc vào nhiều yếu tốnhƣ phân bón, giống, kỹ thuật canh tác khác từ môi trƣờng sinh thái nhƣ khí hậu, độ mặn, độ chua độ màu mỡ đất Độ mặn yếu tố có nguy ảnh hƣởng lớn đến sinh trƣởng, phát triển bình thƣờng suất lúa Những nghiên cứu trƣớc độ mặn cao đất không gây độc cho tế bào mà chúng ảnh hƣởng đến khả hấp thu chất dinh dƣỡng khác định nội môi quan, tế bào thực vật qua làm giảm suất chất lƣợng dinh dƣỡng lúa Do lựa chọn lƣơng thực nói chung lúa nói riêng theo hƣớng thích nghi với điều kiện sinh thái ngập mặn nhiệm vụ chiến lƣợc góp phần đảm bảo an ninh lƣơng thực Trong nhiều năm qua, công tác chọn tạo giống đạt đƣợc thành tựu định, song phƣơng pháp đƣợc ứng dụng chủ yếu lai tạo gây đột biến thực nghiệm nên kết nhiều hạn chế, chƣa đáp ứng đƣợc yêu cầu cải tạo giống lúa có chất lƣợng, có khả chống chịu với bất lợi từ môi trƣờng sinh thái Bên cạnh việc sâu nghiên cứu sở di truyền gen chịu mặn, đặc biệt gen tham gia trao đổi Ion Na+/H+ chƣa đƣợc quan tâm nghiên cứu Họ protein NHX đƣợc xem họ protein có liên quan đến tính chịu mặn thực vật đƣợc nghiên cứu năm gần đây, nhiên lúa họ protein lúa chƣa đƣợc quan tâm nghiên cứu cách đầy đủ Để góp phần nghiên cứu đầy đủ cấu trúc, chức họ protein NHX lúa, qua sàng lọc, tuyển chọn nhân dòng giống lúa có khả thích nghi cao với độ mặn chọn đề tài: “Phân tích gen mã hóa cho protein NHX liên quan đến tính chịu mặn lúa” Để đạt đƣợc mục tiêu đề tài tiến hành nội dung nghiên cứu sau: Nghiên cứu in silico họ gen mã hóa cho protein OsNHX lúa Phân tích đa hình vùng promoter gen OsNHX3 Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bùi Chí Bửu, & Nguyễn Thị Lang (2003) "Cơ sở di truyền tính chống chịu thiệt hại môi trƣờng lúa" Nhà xuất Nông Nghiệp Tiếng Anh Akhiles T, Jitendrap K & Saura (2004, April) “Structural and functional analysis of rice genome” Journal of Genetics An R., Chen Q.-J., Chai M.-F., Lu P.-L., Su Z., Qin Z.-X., … Wang X.-C (2007) "AtNHX8, a member of the monovalent cation: proton antiporter-1 family in Arabidopsis thaliana, encodes a putative Li+/H+ antiporter" The Plant Journal: For Cell and Molecular Biology, 49(4), pp.718–728 Apse M P., Sottosanto J B., & Blumwald E (2003) "Vacuolar cation/H+ Exchange, ion homeostasis, and leaf development are altered in a T-DNA insertional mutant of AtNHX1, the Arabidopsis vacuolar Na+/H+ antiporter" The Plant Journal: For Cell and Molecular Biology, 36(2), pp.229–239 Atsunori Fukuda A N (2010) "Molecular and functional analyses of rice NHX-type Na+ /H+ antiporter genes." Planta, 233(1), pp.175–88 Bassil E., Coku A., & Blumwald E (2012) "Cellular ion homeostasis: emerging roles of intracellular NHX antiporters in plant growth and development" Journal of Experimental Botany, pp.ers250 Bassil E., Ohto M., Esumi T., Tajima H., Zhu Z., Cagnac O., … Blumwald E (2011) "The Arabidopsis intracellular Na+/H+ antiporters NHX5 and NHX6 are endosome Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học associated and necessary for plant growth and development" The Plant Cell, 23(1), pp.224–239 Brett C L., Donowitz M., & Rao R (2005) "Evolutionary origins of eukaryotic sodium/proton exchangers" American Journal of Physiology - Cell Physiology, 288(2), pp.C223–C239 Brett C L., Tukaye D., Mukherjee S., & Rao R (2005) " The Yeast Endosomal Na+(K+)/H+ Exchanger Nhx1 Regulates Cellular pH to Control Vesicle Trafficking" Molecular Biology of the Cell, 16(3), pp.1396-1405 10 Brown R L., Kazan K., McGrath K C., Maclean D J., & Manners J M (2003) "A Role for the GCC-Box in Jasmonate-Mediated Activation of the PDF1.2 Gene of Arabidopsis" Plant Physiology, 132(2), pp.1020–1032 11 Chanroj S., Wang G., Venema K., Zhang M W., Delwiche C F., & Sze H (2012) "Conserved and diversified gene families of monovalent cation/H+ antiporters from algae to flowering plants" Plant Physiology, 3, pp.25 12 Fukuda A., Nakamura A., & Tanaka Y (1999) "Molecular cloning and expression of the Na+ /H+ exchanger gene in Oryza sativa" Biochimica Et Biophysica Acta, 1446(1-2), pp.149–155 13 Fukuda A., Nakamura A., Tagiri A., Tanaka H., Miyao A., Hirochika H., & Tanaka Y (2004) "Function, intracellular localization and the importance in salt tolerance of a vacuolar Na+ /H+ antiporter from rice" Plant and Cell Physiology, 45(2), pp.146–159 Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học 14 Gálvez F J., Baghour M., Hao G., Cagnac O., Rodríguez-Rosales M P., & Venema K (2012) "Expression of LeNHX isoforms in response to salt stress in salt sensitive and salt tolerant tomato species" Plant physiology and biochemistry: PPB / Société française de physiologie végétale, 51, pp.109–115 15 Horie T., Karahara I., & Katsuhara M (2012) "Salinity tolerance mechanisms in glycophytes: An overview with the central focus on rice plants" Rice, 5(1), pp.11 16 Jiang X., Leidi E O., & Pardo J M (2010) "How vacuolar NHX Exchangers function in plant salt tolerance?" Plant Signaling & Behavior, 5(7), pp.792–795 17 Khush G S (1997) "Origin, dispersal, cultivation and variation of rice" Plant Molecular Biology, 35(1-2), pp.25–34 18 Komarnytsky S., & Borisjuk N (2003) "Functional analysis of promoter elements in plants" Genetic Engineering, 25, pp.113–141 19 Kumar K., Kumar M., Kim S.-R., Ryu H., & Cho Y.-G (2013) "Insights into genomics of salt stress response in" Rice, 6(1), pp.27 20 Li J., He X., Xu L., Zhou J., Wu P., Shou H., & Zhang F (2008) "Molecular and functional comparisons of the vacuolar Na+/H+ exchangers originated from glycophytic and halophytic species" Journal of Zhejiang University Science B, 9(2), pp.132–140 21 Londo J P., Chiang Y.-C., Hung K.-H., Chiang T.-Y., & Schaal B A (2006) "Phylogeography of Asian wild rice, Oryza rufipogon, reveals multiple Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học independent domestications of cultivated rice, Oryza sativa" Proceedings of the National Academy of Sciences, 103(25), pp.9578–9583 22 M Akbar, T Yabuno, & S Nakao (1972) “Breeding for Saline-resistant Varieties of Rice” Japan J Breed, 22(5), pp.277-284 23 Ma Y., Wang J., Zhong Y., Cramer G R., Cheng Z.-M., & others (2015) "Genomewide analysis of the cation/proton antiporter (CPA) super family genes in grapevine (Vitis vinifera L.)" Plant Omics Journal, 8(4), pp 300-311 24 Mishra S., Alavilli H., Lee B., Panda S K., & Sahoo L (2014) "Cloning and Functional Characterization of a Vacuolar Na+/H+ Antiporter Gene from Mungbean (VrNHX1) and Its Ectopic Expression Enhanced Salt Tolerance in Arabidopsis thaliana" PLoS ONE, 9(10), pp.e106678 25 Mudgal V., Madaan N., & Mudgal A (2010) "Biochemical Mechanisms of Salt Tolerance in Plants: A Review" International Journal of Botany, 6(2), pp.136– 143 26 Munns R., & Tester M (2008) "Mechanisms of Salinity Tolerance" Annual Review of Plant Biology, 59(1), pp.651–681 27 Pardo J M., Cubero B., Leidi E O., & Quintero F J (2006) "Alkali cation exchangers: roles in cellular homeostasis and stress tolerance" Journal of Experimental Botany, 57(5), pp.1181–1199 Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học 28 Poljakoff A, & Mayber (1975) "Morphological and Anatomical Changes in Plants as a Response to Salinity Stress" In Plants in Saline Environments (pp 97–117) Springer Berlin Heidelberg 29 Reyes B G de los, Mohanty B., Yun S J., Park M.-R., & Lee D.-Y (2015) "Upstream regulatory architecture of rice genes: summarizing the baseline towards genus-wide comparative analysis of regulatory networks and allele mining" Rice, 8(1), pp.14 30 Rodríguez-Rosales M P., Gálvez F J., Huertas R., Aranda M N., Baghour M., Cagnac O., & Venema K (2009) "Plant NHX cation/proton antiporters" Plant Signaling & Behavior, 4(4), pp.265–276 31 Saghai Maroof M A., Biyashev R M., Yang G P., Zhang Q., & Allard R W (1994) "Extraordinarily polymorphic microsatellite DNA in barley: species diversity, chromosomal locations, and population dynamics." Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 91(12), pp.5466–5470 32 Sasaki T., Wu J., Mizuno H., Antonio B A., & Matsumoto T (2008) "The Rice Genome Sequence as an Indispensable Tool for Crop Improvement" Rice Biology in the Genomics Era, pp.3–12 33 Tuteja N (2007) "Mechanisms of High Salinity Tolerance in Plants" In Methods in Enzymology (Vol 428, pp 419–438) Elsevier 34 Venema K., Belver A., Marin-Manzano M C., Rodríguez-Rosales M P., & Donaire J P (2003) "A novel intracellular K+/H+ antiporter related to Na+/H+ antiporters Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN Luận văn Thạc sĩ Khoa học Di truyền học is important for K+ ion homeostasis in plants" The Journal of Biological Chemistry, 278(25), pp.22453–22459 35 Venema K., Quintero F J., Pardo J M., & Donaire J P (2002) "The arabidopsis Na+/H+ exchanger AtNHX1 catalyzes low affinity Na+ and K+ transport in reconstituted liposomes" The Journal of Biological Chemistry, 277(4), pp.2413– 2418 36 Viswanathan Chinnusamy A J (2005) "Understanding and Improving Salt Tolerance in Plants" Crop Science, 45(2), pp.437–448 37 Wittkopp P J., & Kalay G (2012) "Cis-regulatory elements: molecular mechanisms and evolutionary processes underlying divergence" Nature Reviews Genetics, 13(1), pp.59–69 38 Wu C.-A., Yang G.-D., Meng Q.-W., & Zheng C.-C (2004) "The Cotton GhNHX1 Gene Encoding a Novel Putative Tonoplast Na+/H+ Antiporter Plays an Important Role in Salt Stress" Plant and Cell Physiology, 45(5), pp.600–607 39 Zörb C., Noll A., Karl S., Leib K., Yan F., & Schubert S (2005) "Molecular characterization of Na+ /H+ antiporters (ZmNHX) of maize (Zea mays L.) and their expression under salt stress" Journal of Plant Physiology, 162(1), pp.55–66 Nguyễn Huy Dƣơng ĐH Khoa học Tự nhiên-ĐHQGHN