TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CHẾ BIẾN BIÊN SOẠN TS Nguyễn Minh Trí ThS Nguyễn Thị Thanh Hải THỰC HÀNH VI SINH VẬT THỰC PHẨM Họ tên SV: MSSV: Lớp: Nhóm: NHA TRANG 2010 MỤC LỤC Bài 1: MỘT SỐ QUY ĐỊNH TRONG PHỊNG THÍ NGHIỆM .3 Bài 2: NGHIÊN CỨU HÌNH THÁI TẾ BÀO VI SINH VẬT .5 Bài 3: CHUẨN BỊ DỤNG CỤ VÀ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VI SINH VẬT 10 Bài 4: CÁC PHƯƠNG PHÁP CẤY VI SINH VẬT 11 Bài 5: LẤY MẪU THỰC PHẨM VÀ CHUẨN BỊ MẪU 15 Bài 6: TỔNG SỐ VI KHUẨN HIẾU KHÍ (TPC – Total Plate count) 17 Bài 7: XÁC ĐỊNH SỐ LƯỢNG COLIFORM, FECAL COLIFORM VÀ ESCHERICHIA COLI 19 Bài 8: KIỂM TRA SALMONELLA TRONG MẪU THỰC PHẨM 21 Bài 9: KIỂM TRA VIBRIO TRONG MẪU THỰC PHẨM 23 Bài 10: KIỂM TRA STAPHYLOCOCCUS AUREUS TRONG THỰC PHẨM 25 Bài 11: KIỂM TRA LISTERIA MONOCYTOGENES TRONG THỰC PHẨM 27 Bài 12: PHÂN LẬP NẤM MỐC 28 Bài 13: PHÂN LẬP LACTOBACILLUS TRONG MẪU THỰC PHẨM 29 Bài 14: ỨNG DỤNG VI SINH VẬT CÔNG NGHIỆP 30 PHỤ LỤC .32 Bài 1: MỘT SỐ QUY ĐỊNH TRONG PHỊNG THÍ NGHIỆM Thực hành Vi sinh vật đại cương nhằm trang bị cho bạn số kỹ bản, giúp bước đầu tìm hiểu giới vi sinh vật rộng lớn Phần trình bày liên quan đến vi khuẩn, nấm men nấm mốc Chúng ta tìm hiểu hai nhóm vi sinh vật có lợi có hại Để bắt tay vào nghiên cứu vi sinh cần phải học thao tác cấy kỹ thuật để không gây tạp nhiễm ảnh hưởng đến thí nghiệm hay khơng gây phân tán vi sinh vật môi truờng xung quanh Việc liên quan đến việc học kỹ thuật vô trùng thực hành phương tiện an tồn phịng thí nghiệm Bạn phải biết thực quy định phịng thí nghiệm Lịch thí nghiệm: Trước đến phịng thí nghiệm, bạn phải biết thí nghiệm làm, phải chuẩn bị hiểu trước đến phòng thí nghiệm Mỗi buổi thí nghiệm bắt đầu phần trình bày thảo luận ý Do vậy, điều quan trọng không đến lớp trễ Vật dụng cá nhân: Để nơi quy định Trang phục: Phải mặc áo bảo hộ (blouse) làm việc phịng thí nghiệm Áo bảo hộ giúp bạn tránh nhiễm vi sinh vật xảy cố, tránh vấy bẩn hố chất, thuốc nhuộm Khi khỏi phịng thí nghiệm phải cởi áo bảo hộ Tóc phải cột, bọc gọn tránh nhiễm vi sinh sém cháy lửa đèn cồn THUẬT NGỮ Một số thuật ngữ cần phân biệt: Vơ trùng q trình mà tất vi sinh vật sống bị phá huỷ Các vi sinh vật bị giết nóng áp lực hay nhiệt độ cao điều kiện khô, hay đốt thành tro Nếu nói vật vơ trùng, hiểu vật hồn tồn khơng có vi sinh vật sống Nói chung nói đến vơ trùng, ý nói đến an tồn phịng thí nghiệm, chủ yếu nói đến vơ trùng nóng áp lực autoclave Phương pháp khử trùng đốt cháy tác nhân khử trùng đốt thành tro Tất chất thải sinh học phải đốt cháy kỹ trước thải bỏ Khử trùng q trình sinh vật không sinh bào tử, sinh dưỡng bị phá huỷ Các tác nhân gây trình gọi chất khử trùng hay chất giết khuẩn Các tác nhân sử dụng cho vật dụng chúng độc với mô người động vật Nhiễm trùng xác định có phát triển (nhân lên) vi sinh vật mô thể Thuật ngữ vô trùng dùng để trình mà ngăn cản xâm nhập tác nhân nhiễm trùng vào mô vô trùng, ngăn ngừa nhiễm trùng Các kỹ thuật vô trùng thao tác mà nhà vi sinh vật học dùng để loại tất vi sinh vật khỏi môi trường nhiễm hay mô sống tiếp xúc Các chất kháng khuẩn hoá chất (thường chất khử khuẩn hồ tan) sử dụng an toàn cho bên thể nhằm phá huỷ hay ức chế vi khuẩn sinh dưỡng CÁC KỸ THUẬT VÔ TRÙNG Khi bắt đầu làm vệc với canh cấy vi khuẩn trình bày sau, bạn phải học kỹ thuật Một số điều phải tuân theo: - Rửa tay Trước bắt đầu làm việc phòng thí nghiệm bạn phải rửa tay Sử dụng dung dịch sát khuẩn Lau khô giấy lau Kết thúc cơng việc, trước rời phịng thí nghiệm, phải rửa tay xà phòng - Khử trùng mặt bàn làm việc Bắt đầu buổi làm việc phải lau bàn chất diệt khuẩn trình nhằm loại bụi bẩn có mặt bàn, làm giảm thiểu nguy nhiễm khuẩn canh cấy mà làm việc Kết thúc cơng việc, trước rời phịng thí nghiệm, phải tiến hành khử trùng lại để bảo vệ cho nhóm thực tập - Sử dụng đèn cồn (đèn gas) Trong phịng thí nghiệm vi sinh thường sử dụng đèn cồn để khử trùng vòng cấy que cấy, miệng bình, miệng ống nghiệm Để khử trùng vịng cấy cần đốt nóng đỏ Để không giết chết vi sinh vật mà muốn cấy chuyền, trước đưa vào canh cấy, cần vòng cấy nguội xuống cách giữ vịng cấy vùng vơ trùng xung quanh lửa thời gian Để an toàn sử dụng đèn cồn, cần lưu ý không di chuyển đèn cồn cháy Không dùng miệng thổi tắt đèn cồn, muốn tắt phải dùng nắp chụp đậy lại Khơng mồi lửa cho đèn cồn từ đèn cồn cháy - Pipette Để chuyển canh cấy pipette phải sử dụng thiết bị hút học, Không sử dụng miệng để hút - Thải bỏ canh cấy Các bình, ống nghiệm, hộp lồng nuôi cấy vi sinh vật trước thải bỏ, phải hấp khử trùng (autoclave) để giết chết vi sinh vật XỬ LÝ KHI LÀM ĐỔ CANH CẤY Tất trường hợp cố làm đổ canh cấy vi sinh vật phải báo cáo với giáo viên hướng dẫn Mặc dù đa số vi sinh vật sử dụng thực hành khơng gây bệnh, có số gây bệnh Do vậy, phải xử lý tất trường hợp cố làm đổ dịch cấy, phòng có liên quan đến vi sinh vật gây bệnh Biện pháp xử lý: - Tất áo bảo hộ, vải lau dính dịch cấy phải đem autoclave - Dùng giấy, vải thấm dịch sát khuẩn đặt vào vùng canh cấy đổ - Đổ thuốc sát khuẩn quanh nơi có canh cấy vi sinh, để hạn chế lây lan xung quanh khơng khí - Dùng kẹp (loại hấp tiệt trùng được) gắp giấy, vải lau bỏ vào dụng cụ chứa đựng đem autoclave (autoclave kẹp gắp) (Tương tự, hoá chất gây nguy hiểm đến người gây kích ứng thể, gây tổn thương da hay gây ung thư phải báo cáo với giáo viên hướng dẫn để có biện pháp xử lý thích hợp) MỘT SỐ QUY ĐỊNH QUAN TRỌNG KHÁC Khơng đem canh cấy vi sinh, hố chất, dụng cụ khỏi phịng thí nghiệm trừ bạn phép giáo viên hướng dẫn Không hút thuốc, ăn uống phịng thí nghiệm Khơng đưa tay lên sờ miệng Dọn dẹp, lau chùi sau làm việc Lam kính, kính sau nhuộm soi cần rửa, làm khô để nơi quy định Các dụng cụ, lọ hoá chất sau dùng xong phải để nơi quy định Khi làm việc với dụng cụ cần cẩn thận, kính hiển vi Khi khơng hiểu vận hành nào, bạn phải hỏi người phụ trách Hợp tác, làm việc sinh viên khác nhóm, phải tự phân tích kết thí nghiệm Bài 2: NGHIÊN CỨU HÌNH THÁI TẾ BÀO VI SINH VẬT KÍNH HIỂN VI: Hiện có nhiều loại kính hiển vi, số loại dùng phổ biến phịng thí nghiệm vi sinh vật: kính hiển vi trường sáng, kính hiển vi trường tối, phản pha, huỳnh quang; trình bày kính hiển vi trường sáng Nếu trước bạn tìm hiểu kính hiển vi, khơng có nhiều thơng tin cung cấp cho bạn; nhiên lần tìm hiểu vi sinh vật, bạn cần đọc kỹ để sử dụng kính hiển vi Kính hiển vi dụng cụ cần chăm sóc đặc biệt để tránh hư hỏng hệ thống quang học học Thực tế kính hiển vi nhiều người sử dụng di chuyển nhiều dẫn đến dễ hư hỏng kính so với người sử dụng Bạn cần thực dẫn sử dụng kính PHƯƠNG PHÁP LÀM TIÊU BẢN: Hình 1: Phương pháp làm tiêu giọt treo b/ Phương pháp làm tiêu cố định Hình 2: Phương pháp làm tiêu cố định Hình 3: Làm tiêu cố định từ mơi trường lỏng mơi trường rắn Nhuộm đơn: Hình 4: Phương pháp nhuộm đơn Nhuộm Gram Hình 5: Phương pháp nhuộm Gram Hình 6: Một số hình ảnh kiểu nhuộm quan sát tế bào vi khuẩn BÁO CÁO KẾT QUẢ VÀ NHẬN XÉT Vẽ hình dạng tế bào nấm men quan sát Nêu thao tác chăm sóc kính hiển vi? Lý dùng dầu soi kính? Vẽ hình dạng số vi khuẩn lactic quan sát được: : Vi khuẩn Gram dương có màu bước nhuộm iodine bị bỏ quên thao tác nhuộm Gram? Bài 3: CHUẨN BỊ DỤNG CỤ VÀ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VI SINH VẬT CHUẨN BỊ DỤNG CỤ: Bao gói dụng cụ a/ Nguyên tắc - Dụng cụ bao gói phải đảm bảo khơ - Bao gói phải kín cẩn thận để sau khử trùng đảm bảo vô trùng dụng cụ lớp giấy gói lấy sử dụng dễ dàng b/ Phương pháp bao gói dụng cụ: Hướng dẫn cụ thể Các phương pháp vô trùng dụng cụ a/ Nguyên tắc - Sau vô trùng cần đảm bảo: + Sự vô trùng tuyệt đối cho dụng cụ vật phẩm + Không làm thay đổi chất lượng mẫu vật - Bảo đảm an toàn tuyệt đối cho người Khi khử trùng nhiệt, tế bào sinh dưỡng VSV bị tiêu diệt dễ dàng bào tử tồn nhiệt độ Khả chịu nhiệt vi sinh vật phụ thuộc vào: - Tính chất mơi trường - Số lượng tế bào - Độ pH vật cần khử trùng Do để khử trùng nhiệt hiệu cần xác định ngưỡng nhiệt độ thấp khoảng thời gian ngắn cần thiết để tiêu diệt toàn VSV bào tử chúng có dụng cụ cần khử trùng b/ Phương pháp vơ trùng dụng cụ: Hướng dẫn cụ thể MƠI TRƯỜNG NI CẤY VI SINH VẬT Chuẩn bị mơi trường ni cấy: Hầu hết thí nghiệm vi sinh cần sử dụng mơi trường cho qua trình ni cấy vi khuẩn Thơng thường thí nghiệm sử dụng mơi trường khơ chuẩn bị sẵn Tuy nhiên, số trường hợp bạn cần vài môi trường đặc biệt mà không chuẩn bị sẵn, bạn nhóm phải chuẩn bị BÁO CÁO KẾT QUẢ VÀ NHẬN XÉT Tại phải sấy dụng cụ hấp trùng môi trường? Kiểm tra kết khử trùng cách để môi trường vào tủ ấm 37oC từ 24-48h để xác định có khuẩn lạc mọc khơng? Nếu có, giải thích nguyên nhân tượng Trình bày nguyên tắc việc pha môi trường dinh dưỡng? Các bước pha môi trường dinh dưỡng? Bài 8: KIỂM TRA SALMONELLA TRONG MẪU THỰC PHẨM Quy trình tóm tắt xác định Salmonella Chuẩn bị mẫu: Cân 25g mẫu + 225ml dung dịch BPW Đồng mẫu Ủ 30 – 350C/ 24 Cấy 0,1 ml dịch tăng sinh sang ống 10ml môi trường RV Ủ 420C/ 24 Cấy ria môi trường chọn lọc (XLD, HE, SS, BS) Ủ 350C / 24 – 48 Chọn khuẩn lạc đặc trưng môi trường chọn lọc cấy sang BHI Ủ 350C / 24 Test sinh hóa Kết luận: Salmonella dương tính/ âm tính 25g mẫu BÁO CÁO KẾT QUẢ KIỂM TRA SALMONELLA Đọc ghi nhận kết thu (sau giờ): - Hình dạng, màu sắc khuẩn lạc môi trường chọn lọc: Ý nghĩa tiêu kiểm tra Samonella? Nếu lô hàng thực phẩm bị nhiễm khuẩn Salmonella, cần xử lý nào? Những lưu ý tiến hành thí nghiệm: Bài 9: KIỂM TRA VIBRIO TRONG MẪU THỰC PHẨM Quy trình tóm tắt kiểm tra V cholerae/ V parahaemolitycus Chuẩn bị mẫu: Cân 25g mẫu + 225ml dung dịch APW Đồng mẫu Ủ 350C/ -8 Ủ 350C/ 24 Phân lập TCBS Ủ 350C/ 24 Chọn khuẩn lạc đặc trưng cấy ria sang TSA – 2% NaCl Ủ 350C / 24 Test sinh hóa khẳng định Kết luận: Vibrio cholerae/ V parahaemolitycus Quy trình tóm tắt xác định số lượng Vibrio Chuẩn bị mẫu: Cân 50g mẫu + 450ml dung dịch PBS Đồng mẫu Pha loãng mẫu 10-1, 10-2, 10-3 Cấy 1ml mẫu nồng độ pha loãng vào 10 ml APW Mỗi nồng độ cấy ống nghiệm Ủ 350C/ 24 Nhận diện đếm số ống APW dương tính (đục) Cấy ria ống dương tính môi trường chọn lọc TCBS Ủ 350C / 24 Nhận diện Vibrio đặc trưng làm test sinh hóa khẳng định Xác định số ống dương tính tra bảng Mac Crandy BÁO CÁO KẾT QUẢ KIỂM TRA VIBRIO Đọc ghi nhận kết thu (sau giờ): - Hình dạng, màu sắc khuẩn lạc môi trường chọn lọc TCBS: Ý nghĩa tiêu kiểm tra Vibrio? 3.Nếu lô hàng thực phẩm bị nhiễm khuẩn Vibrio Cần xử lý nào? Những lưu ý tiến hành thí nghiệm: Bài 10: KIỂM TRA STAPHYLOCOCCUS AUREUS TRONG THỰC PHẨM Quy trình tóm tắt kiểm tra S aureus Chuẩn bị mẫu: Cân 25g mẫu + 225ml dung dịch đệm phosphate Đồng mẫu Pha loãng mẫu 10-1, 10-2, 10-3… Cấy 1ml mẫu nồng độ pha loãng cấy vào đĩa BP Trang dịch mẫu bề mặt thạch Ủ 350C/ 24 Chọn đĩa có chứa 20 – 200 khuẩn lạc đặc trưng đếm số lượng khuẩn lạc Cấy ria khuẩn lạc đặc trưng môi trường TSA Ủ 350C / 24 Test sinh hóa khẳng định Xác định tỷ lệ S aureus Tính tốn mật độ S aureus (CFU/g-ml) BACILLUS CEREUS BÁO CÁO KẾT QUẢ KIỂM TRA S AUREUS Đọc ghi nhận kết thu (sau giờ): - Tính kết thu được: Đếm số khuẩn lạc đĩa tính kết Mẫu: Các nồng độ pha loãng Đĩa Đĩa - Hình dạng, màu sắc khuẩn lạc mơi trường chọn lọc BP: Ý nghĩa tiêu kiểm tra S aureus? 3.Nếu lô hàng thực phẩm bị nhiễm khuẩn S aureus cần xử lý nào? 4.Những lưu ý tiến hành thí nghiệm: Bài 11: KIỂM TRA LISTERIA MONOCYTOGENES TRONG THỰC PHẨM Quy trình tóm tắt định lượng L monocytogenes theo phương pháp MPN Mẫu thực phẩm 25 g + 225 ml nước muối sinh lý vô trùng Đồng Cấy 1ml vào ống nghiệm dãy ống nghiệm Nhiệt độ phịng/48 Xác định số ống dương tính cách cấy phân lập MT chọn lọc test hóa sinh Tính số lượng BÁO CÁO KẾT QUẢ KIỂM TRA LISTERIA MONOCYTOGENES Đọc ghi nhận kết thu (sau giờ): Xác định ống dương tính (sau xác nhận cách phân lập mơi trường chọn lọc test sinh hóa) nồng độ pha lỗng tính kết Mẫu: Các nồng độ pha loãng Ống Ống Ống Tra bảng Mac Crandy tính tốn số lượng: Ý nghĩa việc kiểm tra L monocytogenes thực phẩm? Nêu điểm lưu ý tiến hành thí nghiệm? Bài 12: PHÂN LẬP NẤM MỐC A/ Môi trường nuôi cấy: - Môi trường SDA - Môi trường PGA B/ Quá trình phân lập: - Chuẩn bị giống nấm mốc: Để cơm nếp lên mốc 5-7 ngày - Chọn mốc màu vàng hoa cau, dùng que cấy móc chấm nhẹ lên khuẩn lạc - Mở nhẹ đĩa thạch chuẩn bị sẵn, gõ nhẹ khuỷu que cấy lên thành đĩa - Để ngửa đĩa nhiệt độ phòng -5 ngày - Quan sát khuẩn lạc hệ sợi BÁO CÁO KẾT QUẢ PHÂN LẬP NẤM MỐC Quan sát hình dạng nấm mốc kính hiển vi: Mô tả khuẩn lạc đặc trưng: Bài 13: PHÂN LẬP LACTOBACILLUS TRONG MẪU THỰC PHẨM Vi khuẩn Lactobacillus thuộc nhóm vi khuẩn Gram (+), dạng hình que ngắn, khơng sinh bào tử, kén mơi trường, yếm khí có khả dung nạp oxy, có khả lên men đường tạo acid lactic, phản ứng catalase âm tính Vi khuẩn lactic ứng dụng rộng rãi đời sống chế biến sản phẩm từ sữa, chế biến thức ăn ủ chua, sản xuất acid lactic, xử lý môi trường A/ Môi trường nuôi cấy: - Môi trường MRS B/ Phân lập vi khuẩn: - Chuẩn bị giống vi khuẩn (nước dưa chua) - Lấy vịng que cấy, cấy ria mơi trường MRS chuẩn bị sẵn đĩa petri - Lật ngược đĩa đem ủ 350C 24giờ - Quan sát khuẩn lạc đặc trưng - Test catalase: dùng que cấy lấy vòng sinh khối vi khuẩn đặt lên lam kính Nhỏ oxy già lên quan sát khả sinh bọt khí - Quan sát hình dạng vi khuẩn phương pháp nhuộm Gram BÁO CÁO KẾT QUẢ PHÂN LẬP VI KHUẨN LACTOBACILLUS Quan sát hình dạng vi khuẩn kính hiển vi Mô tả khuẩn lạc đặc trưng Kết thử nghiệm catalase Bài 14: ỨNG DỤNG VI SINH VẬT CÔNG NGHIỆP TIẾN HÀNH QUÁ TRÌNH LÊN MEN LACTIC * Cách 1: - Nguyên liệu: Dưa cải 0,5 kg Nước muối - 3,5% 500 ml Đường thìa cà phê - Cách làm: + Dưa cải bẹ để héo, rửa sạch, cắt khúc, để + Pha 500ml dung dịch NaCl - 3,5% bổ sung thêm vào thìa cà phê đường + Xếp dựa vào lọ thuỷ tinh ém chặt + Để nước muối từ từ cho ngập dưa + Lên men nhiệt độ 28 – 300C - ngày + Vi khuẩn lactic sống bề mặt rau tác nhân trình * Cách 2: - Cho vào bình tam giác + 150 ml sữa tươi khử trùng + thìa cà phê sữa chua khuấy cho thật nhuyễn - Lắc bình để men giống tan - Để tủ ấm 30 – 350C - 4h ta sữa (chua) đông tụ Xác định đặc trưng trình Xác định đối tượng vi sinh vật tham gia: - Làm tiêu giọt ép từ nước dưa cải chua để quan sát hình dạng, xếp tế bào vi khuẩn lên men lactic - Làm tiêu giọt treo để quan sát chuyển động vi khuẩn lactic từ dịch sữa chua - Yêu cầu nhận biết dạng cầu khuẩn trực khuẩn vi khuẩn lên men lactic KHẢ NĂNG LÊN MEN BÁNH MỲ CỦA NẤM MEN Saccharomyces cerevisiae Nguyên liệu: Bột mỳ Đường Nước Nấm men Saccharomyces cerevisiae Hình 21: Nấm men Saccharomyces cerevisiae kính hiển vi quang học (a) kính hiển vi điện tử (b) Cách làm: - Cho bột mỳ, đường, nấm men vào thố - Nhồi bột với lượng nước vừa phải - Để tủ ấm 300C/ 30phút BÁO CÁO KẾT QUẢ VÀ NHẬN XÉT Quan sát hình dạng, xếp tế bào, khả di động vi khuẩn lên men lactic Kiểm tra khả làm trương nở bột mỳ nấm men: Báo cáo kết nhận xét: PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phương pháp MPN (Most Probable Number): - Phương pháp MPN (Phương pháp pha loãng tới hạn hay phương pháp chuẩn độ) phương pháp dùng để ước lượng số lượng vi sinh vật diện đơn vị thể tích dựa vào bảng Mac Crandy - Thí nghiệm thực độ pha loãng liên tiếp Mỗi độ pha loãng sử dụng để cấy 3, 5, 10 ống nghiệm - Các bước thực hiện: Cho vào ống nghiệm môi trường nuôi cấy phù hợp cho sinh trưởng phát triển vi sinh vật cần kiểm tra Định lượng thể tích xác dung dịch mẫu nồng độ pha loãng bậc 10 liên tiếp nhau, nồng độ pha loãng cấy vào 3, 5, 10 ống nghiệm - Dựa vào kết biểu kiến chứng minh tăng trưởng vi sinh vật cần kiểm tra ống nghiệm để xác định ống dương tính Tra bảng Mac Crandy để có kết Bảng Mac Crandy cho loạt ống nghiệm nồng độ Lượng mẫu cấy/ống 0,1 0,01 0,001 0 0 1 0 1 0 0 1 1 1 1 2 1 0 2 2 1 2 MPN/g 1100 Phụ lục 2: Biểu mẫu kiểm tra vệ sinh thực phẩm Công Ty Trách Nhiệm Hữu Hạn ĐC: ĐT: - Fax: ********************************** KẾT QUẢ PHÂN TÍCH VI SINH SẢN PHẨM MICROBIOLOGICAL ANALYSIS REPORT OF PRODUCT Số/ No: / VS/ 09 Ngày lấy mẫu/ Date of sampling: 07/04/2009 Nơi lấy mẫu/ Place of sampling: Kho thành phẩm Ngày phân tích/ Date of analysis: 07/04/2009 Ngày sản xuất/ Productiondate: 05/04/2009 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH / RESULT CHỈ TIÊU / CRITERIA Coliform E coli Định tính S aureus Shigella Salmonella V cholerae V paraheamolyticus Mã số/ Code of samples TPC Tiêu chuẩn/ Standard 1x106 1.4x104 2x102 1.2x102 Neg (-) 1x102