Đang tải... (xem toàn văn)
Hội nghị tư vấn khu vực châu Á Thái Bình Dương của FAO năm 1992 đã khẳng định đấu tranh sinh học là nền tảng của chương trình IPM (Quản lý dịch hại tổng hợp) với chiến lược là sử dụng tác nhân sinh học để hạn chế các quần thể VSV gây bệnh. Trong số các tác nhân sinh học thường được sử dụng để ức chế VSV gây bệnh, xạ khuẩn là nhóm có nhiều tiềm năng nhất vì tỷ lệ loài có khả năng sinh chất kháng sinh cao, trong đó có nhiều chất kháng sinh có khả năng chống nấm mạnh. Cho tới nay , trong khoảng hơn 8.000 chất kháng sinh được biết đến trên thế giới thì 80% là do xạ khuẩn sinh ra . Vì vậy, việc tìm kiếm các chủng xạ khuẩn có khả năng sinh chất kháng sinh kháng nấm bệnh cây có thể góp phần vào công tác bảo vệ cây trồng và xây dựng nền nông nghiệp an toàn và bền vững.
LỜI CẢM ƠN Hiện nay, trình học tập trường Đại học chủ yếu trọng đào tạo cho Sinh viên nắm vững kĩ thuật lý thuyết, kiến thức tổng quan ngành nghề, hiểu biết khoa học nói chung Nên chưa thể sâu vào thực tế Việc tham gia nghiên cứu khoa học hội cho sinh viên tiếp cận, ứng dụng kiến thức học ghế nhà trường vào sống cụ thể, đem lại cho sinh viên kinh nghiệm bổ ích, tinh thần hăng say lao động, thêm yêu ngành nghề chọn Bên cạnh rèn luyện kĩ thực hành, rèn cho sinh viên nhạy bén, sáng tạo điều cần thiết cho Sinh viên sau trường Báo cáo nghiên cứu khoa học hoàn thành Viện Công nghệ Sinh học, trường Đại học Lâm Nghiệp - thị trấn Xuân Mai - huyện Chương Mỹ Thành phố Hà Nội Để hoàn thành báo cáo này, chúng em quan tâm nhà trường, động viên bạn bè giúp đỡ, hướng dẫn nhiệt tình thầy cô Nhân dịp này, cho phép chúng em bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ThS Nguyễn Thị Minh Hằng tận tình dẫn, giúp đỡ chúng em suốt trình nghiên cứu Xin cảm ơn Viện Công nghệ sinh học Lâm Nghiệp, trường Đại học Lâm Nghiệp tạo điều kiện tốt cho em suốt trình nghiên cứu để hoàn thành báo cáo Do trình nghiên cứu khoa học có nhiều hạn chế mặt thời gian kinh nghiệm, báo cáo không tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận ý kiến đóng góp thầy cô giáo để báo cáo nghiên cứu khoa học hoàn thiện Chúng em xin trân thành cảm ơn! MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT DDT: Dichloro diphenyl trichloroethane FAO: Food and Agriculture Organization of the United Nations IPM: Integrated Pest Management CFU: Colony Forming Unit CZ: Czapek Dox Agar PDA: Potato Dextrose Agar ISP : International Streptomyces Project LB: Lysogeny Broth TSB: Tryptone - casein soy broth VSVKĐ: Vi sinh vật kiềm định HTKS: Hoạt tính kháng sinh CKS: Chất kháng sinh ĐẶT VẤN ĐỀ Nước ta nước nhiệt đới gió mùa nóng ẩm nên điều kiện thích hợp dịch bệnh nấm tồn phát triển Hàng năm phải chịu thiệt hại hàng trăm tỉ đồng hoa màu bị nhiễm nấm bệnh Hàng ngàn hecta ăn quả, công nghiệp bị giảm suất sau thu hoạch chặt bỏ nhiễm nấm bệnh Bệnh hại nấm vấn đề mà người nông dân gặp nhiều khó khăn việc quản lý phòng trừ Thiệt hại kinh tế bệnh điều thấy rõ: làm giảm suất trồng, giảm phẩm chất nông sản thu hoạch bảo quản, ảnh hưởng xấu đến đất trồng cấu trồng Từ kỷ 18 Anton De Bary đặt móng môn khoa học bệnh (1853) Để khắc phục thiệt hại bệnh gây ra, người ta sử dụng nhiều biện pháp như: kỹ thuật canh tác, thuốc hóa học, … sử dụng thuốc hóa học để phòng ngừa ngăn chặn bệnh hại trồng nhiều người ưa chuộng tính dễ sử dụng, hiệu cao kết hợp với biện pháp canh tác việc phòng bệnh cho đạt hiệu lớn Tuy nhiên, sau thời gian dài sử dụng thuốc hóa học phân hóa học người ta nhận thấy chúng ảnh hưởng đến môi trường sống lớn Chúng tác động xấu đến cân sinh thái, gây ô nhiễm môi trường đất, nước làm cho người gia súc bị ngộ độc Đáng ngại hơn, số thuốc trừ sâu chậm phân hủy lưu tồn lâu đất (DDT lưu tồn 25 năm) lưu tồn lâu đất chất hoá học làm nồng độ chúng tăng dần theo thời gian Đồng thời việc sử dụng tuỳ tiện liều lượng, thời gian phun thuốc hóa học tạo nên dư lượng lớn không cho phép rau màu lương thực, gây nên vụ ngộ độc thực phẩm lớn mà người mà biết thời gian qua Chính vậy, Hội nghị tư vấn khu vực châu Á Thái Bình Dương FAO năm 1992 khẳng định đấu tranh sinh học tảng chương trình IPM (Quản lý dịch hại tổng hợp) với chiến lược sử dụng tác nhân sinh học để hạn chế quần thể VSV gây bệnh Trong số tác nhân sinh học thường sử dụng để ức chế VSV gây bệnh, xạ khuẩn nhóm có nhiều tiềm tỷ lệ loài có khả sinh chất kháng sinh cao, có nhiều chất kháng sinh có khả chống nấm mạnh Cho tới , khoảng 8.000 chất kháng sinh biết đến giới 80% xạ khuẩn sinh (Dhanasekaranetal., 2012) Vì vậy, việc tìm kiếm chủng xạ khuẩn có khả sinh chất kháng sinh kháng nấm bệnh góp phần vào công tác bảo vệ trồng xây dựng nông nghiệp an toàn bền vững Xuất phát từ lý trên, chúng em thực đề tài: “Nghiên cứu khả đối kháng số chủng vi sinh vật phân lập từ đất trồng rừng số loại nấm vật gây bệnh thực vật phổ biến miền bắc Việt Nam” CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU Nấm xếp vào nhóm sinh vật, không giống Rong Tảo, nấm không chứa diệp lục tố Cấu tạo thường đơn bào đa bào, quan sát kính hiển vi nhìn mắt thường, chúng đo từ vài microns vài centimeters có tới vài metters, trường hợp nấm có thể Lớp Đảm khuẩn (Basidiomycetes) Nấm có quan sinh trưởng dạng sợi, phân nhánh Một tập hợp nhiều sợi nấm sinh trưởng tạo thành tản nấm thể dinh dưỡng nấm Sợi nấm màng ngăn gọi sợi đơn bào sợi nấm có nhiều màng ngăn gọi sợi đa bào Chiều rộng sợi nấm biến động khoảng 0,5-100 µm, phần lớn từ 5-20 µm, chiều dài thay đổi tùy theo loại nấm điều kiện dinh dưỡng Nấm sợi không màu màu khác Nấm đất gây bệnh tồn đất thời gian dài kể điều kiện ký chủ Chúng bảo tồn sợi nấm, hạch nấm, hậu bào tử, bào tử trứng bào tử có vách dày đất tàn dư trồng Nấm xâm nhiễm, gây hại trồng làm cho rễ tế bào mạch dẫn không khả hút nước chất dinh dưỡng từ giá thể Vì mà triệu chứng bệnh nấm gây thường giống nhau, gây héo vàng, còi cọc chết Nhiệt độ thích hợp nấm 25 – 28 oC, nhiệt độ thấp – 10oC, cao 35oC 1 Một số bệnh nấm gây chất kháng sinh phòng chống nấm bệnh 1.1.1 Thực trạng bệnh hại trồng Ở nước sản xuất nông nghiệp, bệnh gây thiệt hại kinh tế nghiêm trọng Các dịch bệnh đạo ôn hại lúa, bệnh bạc (do vi khuẩn gây ra), bệnh vàng lụi (do virus gây ra), bệnh khô vằn (do nấm gây ra), …đã gây tổn thất lớn suất mà làm tính ổn định giống trồng Theo thống kê tổ chức lương nông giới cho thấy: loại trồng đồng ruộng phải chống đở với 100.000 loài sâu hại khác nhau, 10.000 loài nấm, 200 loài vi khuẩn, 600 loài tuyến trùng 600 loài virus gây bệnh; thiệt hại hàng năm khoảng 20% (tức 1/5) sản lượng lương thực thực phẩm thề giới bị mấttrắng Sau số bệnh gây thiệt hại lớn phổ biến miền Bắc Việt Nam: * Bệnh thối gốc đu đủ: - Bệnh phát sinh thân cây,vết bệnh lúc đầu đầu kim, sau lan rộng khắp thân đổi sang màu nâu hay đen Lá bị vàng, rũ rụng đi,do gốc bị thối bị đổ chết Thường 2-3 năm tuổi dễ bị nhiễm bệnh, nhiên non bị bệnh Cây gieo từ đất có mầm bệnh mang mầm bệnh sau trồng điều kiện thích hợp bệnh phát triển.Bệnh thường phát triển nặng vào đầu mùa mưa, nấm pythium aphanidermatum thuộc lớp Phycomycetes gây Có nhiều loài Pythium gây bệnh chủ yếu P.aphanidermatum Nấm có đặc điểm như: túi bào tử có hình cầu tròn Hình 1.1 Triệu chứng đốm thân đu đủ nấm P.aphanidermatum gây * Bệnh phồng chè: - Thường phát sinh phận: non, bánh tẻ, xuất cành non non Ban đầu vết bệnh đốm nhỏ màu vàng nhạt, xung quanh vết bệnh bong lên bất thường, sau vết bệnh lớn dần, mặt lõm xuống, mặt phồng lên Trên vết bệnh phủ lớp phấn màu trắng, cuối vết bệnh chuyển sang màu nâu, vết phồng khô xẹp xuống - Bệnh nấm exsobasidium vexans gây Dưới điều kiện độ ẩm cao, nhiệt độ thấp bệnh phát sinh mạnh Các thời điểm bệnh thường phát sinh mạnh thường từ tháng đến tháng tháng 9- 10 Nhiệt độ thích hợp 15–20 0C Nhiệt độ 11-120C lợi ích cho phát triển bệnh 26 0C bệnh không phát triển Hình 1.2 Triệu chứng phồng chè nấm exsobasidium vexans gây * Bệnh thán thư xoài: - Là loại bệnh nguy hiểm nhất, thường gây hại mùa mưa lúc đêm có sương Nấm bệnh công cành non, non, hoa Trên hoa bệnh rụng hoa, đốm bệnh màu xám nâu, tròn hay góc cạnh, tạo đốm cháy rách lá, cuối bị rụng Trên quả, bệnh ban đầu đốm nâu nhỏ, sau phát triển thành đốm thối đen lõm xuống vỏ Bệnh nấm Colletotrichum gloeosporioides gây 10 Hình 3.5a Khuẩn lạc BT1 Hình 3.5b Khuẩn lạc BT2 Hình 3.5c Khuẩn lạc BT3 Hình 3.5d Khuẩn lạc BT4 Hình 3.5e Khuẩn lạc BT5 Hình 3.5g Khuẩn lạc BT6 Hình 3.5 Hình thái khuẩn lạc chủng xạ khuẩn 44 Sau phân lập, tinh chủng xạ khuẩn ta thu giữ giống làm giống phương pháp cấy vạch để giữ khuẩn vào ống nghiệm môi trường Gause đặc Kết lưu giữ xạ khuẩn ống nghiệm mô tả hình 3.6 Hình 3.6 Xạ khuẩn giữ giống ống nghiệm 3.2.2 Xác định hoạt tính đối kháng xạ khuẩn với nấm bệnh Từ chủng nấm chủng xạ khuẩn phân lập tuyển chọn tiến hành xác định hoạt tính đối kháng nấm bệnh xạ khuẩn phương pháp đục lỗ (xác định hoạt tính kháng sinh dịch thể) Kết xác định hoạt tính thu bảng sau: Bảng 3.4 Hoạt tính kháng nấm chủng xạ khuẩn Xạ khuẩn Nấm FA1 FA2 FA3 FA4 FA5 FA6 Ghi chú: Đường kính vòng kháng nấm (Dd-dd) mm BT1 BT2 BT3 BT4 BT5 +(26) +(28) +(24) +(22) +(18) +(16) +(15) (+): Có hoạt tính kháng nấm (-): Không có hoạt tính kháng nấm 45 BT6 +(6) - Hình 3.7a Hình 3.7b Hình 3.7c Hình 3.7d Hình 3.7 Hoạt tính kháng nấm chủng xạ khuẩn: Kháng chủng nấm FA1 (3.7a); kháng chủng nấm FA4 (3.7c); kháng chủng nấm FA5 (3.7d); kháng chủng nấm FA6 (3.7b) Từ kết bảng hình 3.7 thấy chủng xạ khuẩn đem thử hoạt tính có chủng BT1 BT4 chủng có khả kháng loại nấm bệnh hoạt lực chủng mạnh thể vòng kháng có kích thước lớn rõ ràng Khả kháng chủng xạ khuẩn khác Ngoài chủng BT6 thể tính kháng nấm FA5, nhiên hoạt tính yếu rõ ràng Đối với chủng nấm FA2 FA3 khả kháng tất chủng xạ khuẩn yếu 46 Chúng lựa chọn chủng xạ khuẩn BT1 BT4 chủng có khả kháng nấm mạnh để tiến hành quan sát hình thái khuẩn lạc, hình dạng tế bào nhuộm màu phương pháp nhuộm Gram 3.2.3 Kết quan sát hình dạng tế bào xạ khuẩn Hình thái khuẩn lạc chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng sinh quan sát đĩa thạch với môi trường Gause sau 4-7 ngày nuôi cấy 30°C Hình thái khuẩn lạc xác định dựa vào màu sắc, cấu trúc bề mặt kích thước chúng (bảng 3.3) Hình thái tế bào quan sát cách nhuộm tiêu Gram, quan sát kính hiển vi quang học 3.2.3.1 Chủng BT1 Khuẩn lạc: Sau 4-7 ngày nuôi cấy môi trường Gause quan sát thấy khuẩn lạc có dạng hình tròn, non có màu trắng sữa, già có màu nâu nhạt, chất màu trắng bám chặt vào môi trường, đường kính 1,5-2 mm (hình 3.8) Hình 3.8 Hình thái khuẩn lạc chủng BT1 47 Hình thái tế bào: Tế bào xạ khuẩn BT1 bắt màu Gram dương Quan sát hình dạng tế bào cho thấy BT1 có cuống sinh bào tử dạng sợi, xoắn vào nhau, bào tử dạng chuỗi dài Hình 3.9 Hình dạng hệ sợi bào tử chủng BT1 3.2.3.2 Chủng BT4 Khuẩn lạc: Sau 4-7 ngày nuôi cấy môi trường Gause quan sát thấy khuẩn lạc có dạng hình tròn, màu trắng đục, có lớp, lớp dày, lớp mỏng, rìa xù xì, đường kính 1-1,5 mm Hình thái tế bào: Tế bào xạ khuẩn BT4 bắt màu Gram dương Quan sát hình dạng tế bào cho thấy BT4 có sợi bào tử đơn phân nhánh, bào tử dạng chuỗi ngắn đơn Hình 3.10 Hình dạng tế bào bào tử chủng BT4 48 3.3 Kết phân lập, tuyển chọn chủng vi khuẩn Bacillus từ đất có khả đối kháng với nấm bệnh 3.3.1 Kết phân lập, tuyển chọn chủng vi khuẩn Bacillus từ đất Từ mẫu đất thu thập địa điểm khác nhau, thực dãy pha loãng nồng độ 10-1 – 10-6 LB đặc, nuôi nhiệt độ 30°C 2-3 ngày sau tiến hành phân lập vi khuẩn Các khuẩn lạc có hình dạng màu sắc khác tách riêng tinh giữ ống nghiệm để sử dụng cho thí nghiệm sau Lựa chọn chủng nghi ngờ vi khuẩn Bacillus với đặc điểm hình thái bên có dạng nhầy bề mặt trơn bóng Sau trình phân lập, tinh ta thu kết bảng sau: Bảng 3.5 Đặc điểm hình thái chủng vi khuẩn Bacillus phân lập từ đất T T Ký hiệu chủng RC1 RC2 RC3 RC4 RC5 RC6 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc Khuẩn lạc có dạng hình tròn, màu trắng sữa, bề mặt trơn nhẵn, đường kính d = 1,7 cm Khuẩn lạc có dạng hình tròn, màu trắng sữa, bề mặt trơn nhẵn, mép tròn, đường kính d = 1,3 cm Khuẩn lạc màu trắng sữa, bề mặt trơn nhẵn Khuẩn lạc hình tròn, bề mặt trơn nhẵn, đường kính d = cm Khuẩn lạc dạng lan bất định, màu trắng sữa, bề mặt trơn bóng Khuẩn lạc hình tròn, màu trắng sữa, bề mặt trơn nhẵn, đường kính d = 0,9 cm Sau phân lập, tinh chủng vi khuẩn nghi ngờ Bacillus bảng tiến hành thu giữ chủng cách cấy vạch để giữ khuẩn vào ống nghiệm môi trường LB đặc 3.3.2 Xác định hoạt tính đối kháng chủng vi khuẩn Bacillus với nấm bệnh 49 Từ chủng nấm chủng vi khuẩn Bacillus phân lập tuyển chọn tiến hành xác định hoạt tính đối kháng nấm bệnh vi khuẩn phương pháp đục lỗ (xác định hoạt tính kháng sinh dịch thể) Kết xác định hoạt tính thể bảng Bảng 3.6 Hoạt tính kháng nấm chủng vi khuẩn Bacillus Vi khuẩn Đường kính vòng kháng nấm (Dd-dd) mm Nấm RC1 RC2 RC3 RC4 RC5 FA1 FA2 FA3 +(4) FA4 FA5 +(5) +(4) FA6 Ghi chú: (+): Có hoạt tính kháng nấm RC6 +(2) +(2) - (-): Không có hoạt tính kháng nấm Hình 3.11 Hoạt tính kháng nấm chủng vi khuẩn Bacillus: Kháng chủng nấm FA3 (3.7a); kháng chủng nấm FA5 (3.7b) Từ kết bảng 3.6 hình 3.11 thấy chủng vi khuẩn Bacillus đem thử hoạt tính có chủng RC2 RC6 chủng có khả kháng loại nấm bệnh FA3 FA5, thể vòng kháng rõ ràng,tuy nhiên hoạt tính yếu Ngoài chủng RC1 thể tính kháng chủng nấm FA5 chủng thể hoạt tính mạnh Đối với 50 chủng nấm FA1, FA2, FA4 FA6 khả kháng tất chủng xạ khuẩn yếu Từ lựa chọn chủng xạ khuẩn RC2 RC1 chủng có khả kháng nấm mạnh để tiến hành quan sát hình thái khuẩn lạc, hình dạng tế bào nhuộm màu phương pháp nhuộm Gram 3.3.3 Kết quan sát hình dạng tế bào xạ khuẩn Hình thái khuẩn lạc chủng vi khuẩn Bacillus có hoạt tính kháng sinh quan sát đĩa thạch với môi trường LB đặc sau 2-3 ngày nuôi cấy 30°C Hình thái khuẩn lạc xác định dựa vào màu sắc, cấu trúc bề mặt kích thước chúng (bảng 3.5) Hình thái tế bào quan sát cách nhuộm tiêu Gram, quan sát kính hiển vi quang học 3.3.3.1 Chủng RC1 Khuẩn lạc: Sau 2-3 ngày nuôi cấy môi trường LB đặc, quan sát thấy khuẩn lạc có dạng hình tròn, màu trắng sữa, bề mặt trơn nhẵn, đường kính d = 1,7 cm Hình dạng tế bào: Tế bào vi khuẩn RC1 bắt màu Gram dương Quan sát hình dạng tế bào cho thấy RC1 trực khuẩn hình que dạng chuỗi dài, có bào tử phìn đầu Hình 3.12 Hình dạng tế bào bào tử chủng RC1 3.3.3.2 Chủng RC2 51 Khuẩn lạc: Sau 2-3 ngày nuôi cấy môi trường LB đặc, quan sát thấy khuẩn lạc có dạng hình tròn, màu trắng sữa, bề mặt trơn nhẵn, mép tròn, đường kính d = 1,3 cm Hình dạng tế bào: Tế bào vi khuẩn RC2 bắt màu Gram dương Quan sát hình dạng tế bào cho thấy RC2 trực khuẩn hình que, ngắn, đứng đơn lẻ hay tạo thành chuỗi ngắn Hình 3.13 Hình dạng tế bào chủng RC2 Từ hình dạng tế bào quan sát chủng RC1 RC2 khẳng định rõ chủng thuộc chủng vi khuẩn Bacillus 52 3.4 Đặc tính sinh lý hóa chủng vi sinh vật 3.4.1 Khả đồng hóa nguồn Cacbon Để đánh giá khả đồng hóa nguồn cacbon khác nhau, tiến hành nuôi chủng vi sinh vật môi trường TBS ISP- (TBS: vi khuẩn, ISP-9: xạ khuẩn) có bổ sung nguồn cacbon khác với nồng độ 1% Sau - 14 ngày nuôi cấy, kết thể bảng 3.7 Bảng 3.7 Khả đồng hóa nguồn Cacbon chủng vi sinh vật Nguồn cacbon Glucose Saccharose Maltose Lactose Ghi chú: BT1 ++++ ++ ++ +++ Chủng vi sinh vật BT4 RC1 ++++ ++++ ++ +++ ++ +++ +++ - RC2 ++++ +++ +++ - ++++: Sinh trưởng tốt +++ : Sinh trưởng tốt ++ : Sinh trưởng yếu + : Sinh trưởng yếu - : Không sinh trưởng Kết bảng 3.7 cho thấy chủng vi sinh vật có khả đồng hóa tốt nguồn cacbon khác Tuy nhiên, chủng xạ khuẩn BT1 BT2 có khả đồng hóa tốt nguồn cacbon glucose lactose, sinh trưởng yếu môi trường có chứa nguồn cacbon saccharose maltose Đối với chủng vi khuẩn Bacillus chúng có khả đồng hóa tốt nguồn cacbon glucose, giảm dần nguồn cacbon saccharose maltose, chúng khả đồng hóa nguồn cacbon lactose 3.4.2 Ảnh hưởng điều kiện nhiệt độ Điều kiện nhiệt độ phù hợp yếu tố kích thích sinh trưởng phát triển vi sinh vật Vì vậy, tiến hành khảo sát nhiệt độ thích hợp chủng vi sinh vật cách đưa chúng vào nuôi thang nhiệt độ khác Khả sinh trưởng chúng thể bảng 3.8 53 Bảng 3.8 Ảnh hưởng điều kiện nhiệt độ Nhiệt độ 25°C 28°C 30°C 32°C 35°C 40°C Ghi chú: Chủng vi sinh vật BT4 RC1 ++ + ++ ++ ++++ ++ + +++ + ++++ +++ BT1 ++ +++ ++++ + + - RC2 + ++ ++ ++ ++++ +++ ++++: Sinh trưởng tốt +++ : Sinh trưởng tốt ++ : Sinh trưởng yếu + : Sinh trưởng yếu - : Không sinh trưởng Kết bảng 3.8 cho thấy khả sinh trưởng vi sinh vật khoảng nhiệt độ khác Chủng xạ khuẩn BT1 BT4 sinh trưởng tốt nhiệt độ 28°C -30°C ngừng sinh trưởng 40°C Hai chủng vi khuẩn Bacillus sinh trưởng tốt nhiệt độ 35°C -40°C sinh trưởng yếu nhiệt độ 25°C -32°C 3.4.3 Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng phát triển vi sinh vật Từ kết tiến hành nuôi cấy chủng vi sinh vật đối kháng môi trường có nguồn cacbon thích hợp (glucose) nhiệt độ tối thích (vi khuẩn Bacillus 37°C xạ khuẩn 30°C) Nuôi khảo sát mức độ pH môi trường khác nhằm đánh giá ảnh hưởng pH đến sinh trưởng chủng vi sinh vật Bảng 3.9 Ảnh hưởng pH pH 6,5 BT1 ++ +++ ++++ Chủng vi sinh vật BT4 RC1 ++ + +++ ++ ++++ ++++ 54 RC2 + ++ +++ 7,5 Ghi chú: +++ +++ +++ +++ ++++: Sinh trưởng tốt +++ : Sinh trưởng tốt ++ : Sinh trưởng yếu + : Sinh trưởng yếu - : Không sinh trưởng Kết bảng 3.9 cho thấy khả sinh trưởng chủng vi sinh vật môi trường có pH khác khác nhau.Hai chủng xạ khuẩn BT1 BT4 có khả sinh trưởng tốt pH từ 6,5 -7,5, sinh trưởng yếu pH =6.Hai chủng vi khuẩn Bacillus có khả sinh trưởng pH từ 7-7,5, sinh trưởng yếu pH từ 6-6,5 Như pH thích hợp cho chủng vi sinh vật phát triển pH =7 55 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ mẫu bệnh thu thập phân lập khiết nấm gây bệnh Từ mẫu đất khác phân lập chủng xạ khuẩn, có chủng BT1 BT4 có hoạt tính kháng nấm mạnh nhất, có đường kính vòng kháng nấm với chủng FA1 FA4 26 – 28mm 22 – 24 mm Đã phân lập chủng vi khuẩn Bacillus, có chủng RC1 RC2 có hoạt tính kháng nấm mạnh nhất, có đường kính vòng kháng nấm 4mm nấm FA3 – 5mm nấm FA5 Điều kiện nuôi cấy thích hợp cho sinh trưởng phát triển chủng BT1 BT4 là: nguồn cacbon glucose lactose, nhiệt độ 30°C, pH = 6,5 – 7,5 Điều kiện nuôi cấy thích hợp cho sinh trưởng phát triển chủng RC1 RC2 là: nguồn cacbon glucose, nhiệt độ 37°C, pH = – 7,5 KIẾN NGHỊ Do thời gian có hạn nên đề tài chưa hoạn thiên tất nội dung nghiên cứu lĩnh vực này, thời gian cho phép tiến hành nghiên cứu nội dung sau đây: Xác định điều kiện lên men thích hợp cho sinh trưởng phát triển chủng vi sinh vật Thử nghiệm khả kháng nấm bệnh chủng vi sinh vật thực tiễn Nghiên cứu khả tổng hợp chất kháng sinh chủng vi sinh vật Tách chiết xác định chất hóa học chất kháng sinh 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Lân Dũng, Phạm Thị Trân Châu (1878) Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học – Tập III Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Thành Đạt (2000) Sinh học vi sinh vật, Nhà xuất Giáo dục Nguyễn Thị Minh Hằng, Đỗ Văn Bút (2013) Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn Actinomycetes phân giải cellulose từ đất rừng Hội nghị khoa học toan quốc Đặng Văn Tiến, Nguyễn Đình Tuấn, Vi Thị Đoan Chính, Ngô Đình Bính (2009) Nghiên cứu xạ khuẩn sinh kháng sinh vi khuẩn Xanthomonasoryae gây bệnh Báo cáo khoa học hội nghị Công nghệ sinh học toàn quốc Nguyễn Khang, 2005 – Kháng sinh học – NXB Y học, Hà Nội Nguyễn Đức Lượng,2005 – Thí nghiệm vi sinh vật, tập – NXB Đại học quốc gia, thành phố HCM Nguyễn Đức Lượng,2003- Công nghệ sinh học – NXB Đại học quốc gia thành phố HCM Nguyễn Thành Đạt, K.A Vinogradva V.A.Poltorac (1974), Tính biến dị bề mặt bào tử Xạ khuẩn sinh choromomycin, Act.A buraviensis, microbiologia, TXL III, N5, NXB Academia cccp Nguyễn Văn Cách (2004), Công nghệ lên men chất kháng sinh, NXB khoa học kỹ thuật, Hà Nội 10 Vi Thị Đoan Chính (2000), Nghiên cứu khả nâng cao hoạt tính kháng sinh chủng Streptomyces rimosus R77 Streptomyces hygroscopicus 5820 kỹ thuật dung hợp tế bào trần, Luận án TS sinh học, Viện công nghệ sinh học, Hà Nội 11 Nguyễn Lân Dũng, Đoàn Xuân Mượu, Nguyễn Phùng Tiến, Đặng Đức Trạch, Phạm Văn Ty (1972), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học, Tập I, NXBKHKT Hà Nội, 328 - 345 12 Nguyễn Lân Dũng, Phạm Văn Ty, Nguyễn Đình Quyến (1977), Vi sinh vật học - tập II, Nhà xuất Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội 57 13 Biền Văn Minh (2000), Nghiên cứu khả sinh chất kháng sinh số chủng xạ khuẩn phân lập từ đất Bình Trị Thiên, Luận án tiến sĩ sinh học, Hà Nội 14 Trần Thanh Thủy, Hướng dẫn thực hành vi sinh vật học NXB Giáo dục (1998) 15 GS TS Vũ Triệu Mân, Giáo trình bệnh chuyên khoa, NXB Nông nghiệp (2007) 58