ĐIỀU TRỊ CÁC BỆNH UNG THƯ

25 405 0
ĐIỀU TRỊ CÁC BỆNH UNG THƯ

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

Chương XV ĐIỀU TRỊ CÁC BỆNH UNG THƯ 15.1 Mở đầu Ung thư nảy sinh yếu tố điều hòa kiểm soát sinh trưởng tăng sinh tế bào Mất kiểm soát điều hòa có lẽ đột biến gen mã cho qúa trình điều hòa Nói chung, đột biến thoái hóa gen liên quan tới làm chức năng, trường hợp gen ức chế khối u chẳng hạn Có đột biến trội lại liên quan tới việc tạo thêm chức biểu mức bình thường gen ung thư lặn chẳng hạn Các dạng đột biến làm điều hòa phát triển tế bào Thao tác đột biến gen tăng cường yếu tố tế bào mục tiêu GTL ung thư Như GTL điều trị ung thư nhằm: (1) thay gen kiềm chế ung thư bị đột biến, (2) làm bất hoạt gen ung thư biểu mức, (3) chuyển thành phần tiền thuốc (prodrug) đích (4) cải biến sửa đổi đáp ứng miễn dịch kháng khối u Hình 15.1 Cơ sở di truyền tạo khối u Sơ đồ đại diện đột biến trình tự phát triển ung thư biểu mô từ tế bào biểu mô bình thường Những chữ viết tắt là: APC (adenomatous poliposis coli gene) (gen coli gây polyp); MSH2 - gen sửa chữa DNA động vật có vú; Ras gen ung thư; DDC- loại bỏ trong gen gây ưng thư; p53- gen kiềm chế khối u Những đột biến gen sửa chữa DNA khởi đầu tế bào bình thường (nét đậm) với đột biến APC (chữ nghiêng) xảy kiện sớm phát triển khối u nhỏ Đột biến gen ung thư RAS (hoạt hóa đột biến điểm) làm phát triển khối u trung bình với loại bỏ gen DDC giai đoạn khối u phát triển lớn Đột biến chót gen kiềm chế khối u p53 hình thành nên khối u (Theo Simon J Hall, Thomas F Kresina, Richard Trauger Barbara A Conley An Introduction to Molecular Medicine and Gene Therapy A John Wiley & Sons, Inc., Publication 2001) 15.2 Cơ sở di truyền gây ung thư Những biến đổi trình bình thường tế bào tăng sinh, biệt hóa chết theo chương trình – apoptosis góp phần vào việc phát triển ung thư Sự biến đổi sản phẩm gen dẫn tới khối u lành tính, tiền ác tính ác tính Chúng bao gồm gen gây ung thư hoạt hóa gen thúc đẩy tăng trưởng gen kiềm chế khối u làm bất hoạt gen kiềm chế sinh trưởng Hai đặc điểm quan trọng việc sinh khối u liên quan tới biến đổi gen, là: (1) sinh khối u gồm nhiều bước (2) mở rộng dòng Sự hình thành khối u trải qua nhiều bước liên quan tới số biến đổi gen đụng chạm “hit” xảy cách tế bào bình thường qua nhiều giai đoạn dẫn tới ác tính trình bày hình (15.1) Sự mở rộng dòng tế bào xác định biến đổi gen (đột biến) xảy nhiều bước tạo khối u 15.2.1 Chu kỳ tế bào Chu kỳ tế bào gồm pha dựa sở hoạt động tế bào (H.15.2) Thời kỳ chép DNA xảy pha (giai đoạn) S phân bào có tơ pha M Hai pha xen G1 G2 Các tế bào giao phó chu kỳ chép cho pha G1 điểm giới hạn R Thêm vào đó, từ pha G1 tế bào chuyển vào pha yên lặng Go Sự điều hòa chu kỳ tế bào gây cấn khớp chuyển pha G1/S G2/M Các cyclin điều hòa tiến triển chu kỳ tế bào khớp với kinase phụ thuộc cyclin (cyclin-dependent kinase – CDK) Cyclin tác động chất điều hòa cấu trúc định vị tế bào, đặc hiệu chất, tương tác với enzyme điều hòa lên thời gian hoạt hóa CDK Vì vậy, gen số gen cyclin phân biệt (Bảng 15.1) điều hòa chu kỳ tế bào điểm định cách gắn vào CDK hình thành phức hợp CDK/cyclin Các cyclin tổng hợp gắn hoạt hóa CDK, sau phân hủy Các CDK phosphoryl hóa chất tế bào protein u nguyên bào võng mạc (retinoblastoma) (pRb), ép buộc chuyển pha G1/S chu kỳ tế bào, pRb sản phẩm gen kiềm chế khối u Sự phosphoryl hóa pRb xảy tác động phức hợp cyclinD-CDK4/6 phức hợp cyclinE/CDK2 làm bất hoạt chức ức chế tăng trưởng phân tử cho phép tiến triển chu kỳ tế bào Vì tổng hợp cyclin đặc hiệu việc phức hợp với CDK làm kiểm soát tăng trưởng tế bào Chẳng hạn cyclin D1 khởi đầu đặc tính gen ung thư in vitro in vivo khuếch đại biểu mức ung thư tế bào thực quản có vảy (esophagus squamous) ung thư đầu, cổ, bàng quang vú Cyclin có nhiều chức khác nữa, gen cyclin A vị trí hợp virus viêm gan vào hệ gen Vì ức chế phosphoryl hóa CDK mục tiêu quan trọng để giảm bớt tăng sinh tế bào Nhiều công trình nghiên cứu khẳng định có phân tử khác gắn ức chế CDK Protein hợp CDK (Cip 1) gắn với phức hợp cyclin/CDK ức chế hoạt động chúng Cip hoạt hóa sản phẩm gen kiềm chế khối u p53 già yếu tế bào Vì Cip ứng cử viên làm nhiệm vụ điều hòa tăng sinh phân chia tế bào Một chất ức chế khác p16 chất kiềm chế đa khối u (MTS-1) ức chế đặc hiệu CDK4, có locus gen nhiễm sắc thể 9p21 Trong khối u tụy thực quản, người ta quan sát thấy có loại bỏ có đột biến locus Chất ức chế CDK tự nhiên p27 Kip 1, liên kết chặt chẽ với phức hợp cyclinE/CDK2 cyclin D/CDK4 Kip có liên quan việc điều hòa trung gian tín hiệu ngoại bào biến đổi yếu tố tăng trưởng β1 (TGF- β1), mà suy chế ức chế tăng trưởng TGF- β Vì chất ức chế phosphoryl hóa CDK làm túc đẩy hoạt động chu kỳ tế bào nên chúng đại diện cho phân tử đích GTL chống ung thư phân tử ngăn chặn hoạt tính tăng sinh tế bào Hình 15.2 Chu kỳ tế bào Năm pha chu kỳ tế bào, điểm kiểm soát quan trọng điều hòa tương tác cyclin với kinase phụ thuộc cyclin (CDK) CDKI (chất ức chế) gen kiềm chế khối u Rb (retinoblastoma – u nguyên bào võng mạc) DHFR dihydrofolate reductase (Theo Simon J Hall, Thomas F Kresina, Richard Trauger Barbara A Conley An Introduction to Molecular Medicine and Gene Therapy A John Wiley & Sons, Inc., Publication 2001) Bảng 15.1 Cyclin chu kỳ tế bào Cyclin C, D1, E Các pha chu kỳ tế bào G1/S Tác động điều hòa Xác định xảy chu kỳ A S, G2M Thúc đẩy gián phân B1, B2 S, G2M Thúc đẩy gián phân 15.2.2 Sự chết theo chương trình tế bào- apoptosis Apoptosis – chết theo chương trình tế bào có liên quan tới kiện đặc biệt nhân Quá trình bao gồm việc nén tách riêng chất nhiễm sắc thành khối rõ nét kháng lại màng nhân, ngưng tụ tế bào chất, phân đoạn nhân hay cuộn lại bề mặt tế bào hình thành các thể apoptotic gắn màng Những thực thể thực bào tế bào liền kề Trong chết tế bào có phân cắt DNA chuỗi kép vùng kết nối nucleosome để tạo nên đoạn khoảng 185 bp Những đoạn tạo nên bậc thang điện di đồ Cơ sở gen chết theo chương trình tế bào sáng tỏ Gen gây ung thư bcl-2 lại bảo vệ tế bào lympho neuron khỏi chết theo chương trình Tuy nhiên, protein khác có tên bax tạo nên dimer với bel-2 bax góp phần tạo nên chết theo chương trình tế bào Tỷ lệ tế bào bel-2/bax xác định tế bào bị chết hay sống sót Một protein bổ sung enzyme chuyển đôỉ interleukin 1β, ICE thúc đẩy mạnh chết tế bào Mới đây, bax – thành viên tiền apoptotic họ gen bel-2 mô tả Việc sử dụng bax, bak, bel-2 , ICE gen khác liên quan tới apoptosis kỹ thuật chuyển gen đích tiếp cận nhằm cải thiện khả sống quần thể tế bào đặc hiệu Các tế bào ung thư đích gây chết cài vào gen apoptosis Mặt khác, tế bào miễn dịch công vào tế bào ác tính kết hợp với việc chuyển gen apoptosis làm tăng khả đề kháng thể 15.2.3 Sự biến nạp tế bào tế bào nói “được biến nạp” tức chuyển từ kiểu hình bình thường sang kiểu hính ác tính Các tế bào ác tính phơi bày đặc tính tế bào phân biệt rõ rệt với tế bào bình thường Chẳng hạn như, sở hình thái học tế bào biểu mô phân cực, không phân chia, hình dạng đồng biệt hóa Khi tế bào biểu mô biến nạp thành ác tính trở nên không phân cực, đa hình, biểu biệt hóa mức độ khác nhau, mang hình ảnh gián phân, phân chia nhanh biểu kháng nguyên liên quan khối u bề mặt tế bào Kháng nguyên liên quan khối u đích tế bào khối u; thông qua kháng thể đơn dòng, liposome chất giống thuốc độc tố gây cảm ứng làm chết tế bào Cách tiếp cận đích sử dụng quy trình GTL Các tế bào biến nạp cách xử lý hóa học, chiếu xạ, tự đột biến gen nội sinh thâm nhiễm virus Các tế bào biến nạp tạo theo chế có hình trụ, tránh ức chế tiếp xúc phụ thuộc mật độ (kết thành cụm) thả neo độc lập không ức chế tăng trưởng điều hòa giới hạn điểm chu kỳ tế bào (H.15.3) Ngoài việc tế bào biến nạp trở thành tác nhân gây khối u chuyển vào động vật non biến nạp virus liên quan nhiều với GTL sử dụng vec tơ virus Mặc dầu vec tơ virus khiếm khuyết chép sử dụng chuyển gen, có khả có tái tổ hợp virus vec tơ với virus gây bệnh cách tự nhiên, để tạo nên virus biến nạp chép tốt Hình 15.3 Hình thái học tế bào biến nạp virus Epstein – Bar Lưu ý phát triển đám tụ thành hình tròn khuẩn lạc vệ tinh (Theo Simon J Hall, Thomas F Kresina, Richard Trauger Barbara A Conley An Introduction to Molecular Medicine and Gene Therapy A John Wiley & Sons, Inc., Publication 2001) 15.2.4 Các gen gây ung thư Các gen gây ung thư tế bào (gen ung thư tế bào) gen bình thường có liên quan tới sinh trưởng, tăng sinh, biệt hóa hoạt hóa phiên mã Các gen gây ung thư tế bào biểu cách lầm lạc đột biến gen xếp lại /sự chuyển vị, khuếch đại biểu gen thông qua việc yếu tố điều hòa kiểm soát biểu Với khiếm khuyết chúng gọi gen gây ung thư Sự biểu lầm lạc phát triển tăng sinh tế bào gây ác tính Tới có 60 gen gây ung thư xác định có liên quan với nhiều loại khối u Những gen ung thư chủ chốt chức liên quan liệt kê bảng (15+.2) Các gen ung thư phân thành thứ hạng theo định vị mức tế bào theo chế tác động chúng Một ví dụ gen ung thư ras, bình thường trạng thái yên lặng, cấu trúc gồm họ gen với thành viên: Ki-ras, Ha-ras N-ras Mỗi gen mã cho polypeptide 21-kD, protein p21 enzyme GTPase liên kết màng Trong liên kết với màng sinh chất, p21 tương tác trực tiếp với enzyme ras serinethreonine kinase Sự phức hợp (ras/raf) bắt đầu tầng (thác) tải nạp tín hiệu Dọc theo đường hoạt hóa MAP kinase, chuyển vị yếu tố nhân yếu tố phiên mã nhân phosphoryl hóa Con đường cung cấp tín hiệu cho tiến trình chu kỳ tế bào, biệt hóa, vận chuyển protein, tiết tổ chức khung tế bào Ras dễ bị ảnh hưởng cách đặc biệt với đột biến điểm “điểm nóng” (hot spots) dọc theo gen (mã 12,13,59 61) Kết hoạt hóa cấu thành gen sản xuất mức protein p21 80% ung thư tụy có liên quan tới đột biến ras, điều cho thấy biến đổi gen phận nhiều giai đoạn tạo khối u tế bào tụy Gen ung thư thứ hai c-myc, gen mã cho protein có liên quan tổng hợp DNA; c-myc tế bào bình thường đặc trưng cho tăng sinh, biệt hóa, chết theo chương trình tế bào thông qua tác động với tư cách yếu tố phiên mã protein gắn DNA Sự biểu c-myc tế bào có liên quan với tăng sinh tế bào có quan hệ ngược lại với biệt hóa tế bào Cần lưu ý rằng, biểu cấu thành c-myc làm cho tế bào khả thoát khỏi chu kỳ tế bào Trong số ung thư ung thư kết tràng lại đột biến gen c-myc, mức mRNA lại tăng cao Như vây, điều hòa sau phiên mã đáp ứng phần tăng sinh tế bào Trong tất trường hợp, bất thường gen ung thư đích đặc hiệu GTL Bảng 15.2 Các thứ hạng chức gen ung thư chủ yếu Gen gây ung thư sis, int-2, K53, FGF-5 int-1, Met Chức liên quan yếu tố tăng trưởng Các khối u liên quan u giáp trạng Ret, erb-B 1-2, neu, fms met,trk, kit, sea tyrosine kinase protein receptor ung thư vú src, yes, fgr fgs/fes,abl tyrosine kinase protein receptor ung thư kết tràng rà, pin0-1, mos, cot protein tế bào chất- serine kinase ung thư phổi tế bào nhỏ Ki-ras, Ha-ras, N-ras, kinase protein G màng Gsp, gip, rho A-C c-myc, N - myc, L- myc nhân tế bào mby, fos, jun, maf, cis, rel, ski,erb-A ung thư tuyến tụy u tế bào vảy Các gen ung thư thấy virus RNA gây khối u (retrovirus) Một số retrovirus có gen biến nạp gọi v-onc gen gây ung thư virus Ngoài có gen mã hóa đặc biệt chẳng hạn gag, pol, env Các gen gây ung thư virus xuất phát từ đột biến điểm, loại bớt, cài lắp thêm thay Các gen ung thư tế bào có lẽ bắt gặp retrovirus trình có tên tải nạp retrovirus Điều xảy retrovirus cài vào hệ gen gần với gen ung thư tế bào Người ta tạo gen virus lai sau phiên mã v-onc hợp vào hạt retrovirus vào tế bào bên cạnh thâm chuyển Chẳng hạn gen ung thư HPV-16 E6/E7 lấy từ virus gây u nhú người biểu chúng khởi đầu cho biến nạp tăng sản ung thư khẳng định kiểu hình ác tính tế bào ung thư cổ tử cung 15.2.5 Các gen kiềm chế khối u Các gen kiềm chế ung thư mã cho phân tử làm cải biến tăng trưởng tế bào thông qua chế điều hòa chy kỳ tế bào Chỉ bất thường gen ức chế khối u làm sản phẩm gen có chức mẫn cảm với biến nạp ác tính Vì hoàn trả chức gen ức chế khối u GTL, đặc biệt giai đoạn ác tính có khả chuyển ngược lại thành kiểu hình tế bào bình thường Sự hoàn trả chức gen kiềm chế khối u tế bào ác tính có khả “sự biến nạp ngược” tế bào ác tính để trở thành dạng không ác tính Bảng 15.3 Tóm tắt gen kiềm chế khối u Gen kiềm chế khối u p53 retinoblastoma, rb BRCA-1 NF1 Sự loại trừ ung thư kết tràng, DCC MEN-1 WT1 c-ret MTS-1 Coli gây polyp tuyến, APC Locus gen 17p 13q 17q 17q 18q 11p 11p 10p 9q 5q Có nhiều gen kiềm chế khối u (Bảng 15.3), đáng lưu ý retinoblstoma (rb) (u nguyên bào võng mạc) p53 Chất kiềm chế khối u p53 mọt phosphoprotein nhân- 393 amino acid, tác động yếu tố phiên mã cách gắn vào promoter DNA với phương thức đặc hiệu trình tự để kiểm soát biểu protein có liên quan chu kỳ tế bào (pha G1/S) Chức p53 “người lính gác hệ gen” ức chế chu kỳ tế bào thông qua tương tác với phức hợp cyclin/CDK đặc hiệu cảm ứng apoptosis qua đường bax, fas Sự tác động để đáp ứng với hư hại DNA Vì thế, hoat hóa p53, tế bào ác tính tiền ác tính bị ức chế bị tiêu diệt hay bị thực bào Như vậy, bị gen p53 đột biến, loại bớt hay ức chế phân tử kiềm chế khối u p53 liên quan tới tiến triển khối u Sự bất hoạt p53 xảy nhiều chế, bao gồm đột biến gen, loại bỏ nhiễm sắc thể, liên kết với protein ung thư virus, liên kết với protein tế bào mdm2, thay đổi định vị tế bào protein Người ta xác định p53 bị biến đổi số dạng ác tính người Sự xuất đột biến p53 gắn liền với tiên lượng sấu bệnh có xu hướng phát triển giảm độ nhạy cảm với trị liệu hóa học Vì lý nên người có p53 bất thường ứng cử viên tiềm GTL 15.2.6 Các gen sửa chữa DNA Sự khiếm khuyết DNA chuỗi kép sửa chữa sản phẩm gen sửa chữa DNA Những gen tác động vào trình đọc, sửa hiệu chỉnh trình tự cặp base DNA ghép đôi không tương xứng Những sai sót base ghép đôi không hiệu chỉnh chép phân chia tế bào làm tính ổn định hệ gen Cho tới người ta biết gen động vật có vú hMHL1, hMSH2, hPMS1 hPMS2 Những đột biễn xảy gen tạo nên sản phẩm gen khiếm khuyết thấy hội chứng ung thư trực tràng không polyp di truyền dòng mầm (hereditary nonpolyposis colorectal cancer) (HNPCC) Những đột biến gen hMSH2 (locus nhiễm sắc thể 2p) gen hHLH1 (locus nhiễm sắc thể 3p) nhiều tài liệu ghi nhận HNPCC, nơi có nhiều (khoảng 10 ngàn) sai sót soma (những biến đổi ngẫu nhiên trình tự DNA) Vì thế, đột biến enzyme sửa chữa DNA chế sinh ung thư di truyền ung thư trình phát triển cá thể 15.3 Gen trị liệu ung thư Một chiến lược GTL ung thư bồi thường lại gen đột biến Nếu gen bị chức thông qua biến đổi gen bồi thường lại theo nhiều chế Đối với chức gen kiềm chế khối u bồi thường cách chuyển tới gen bình thường trội hiệu chỉnh trực tiếp khiếm khuyết gen Nếu gen chịu tác động có xu hướng trở lại gen ung thư hay yếu tố tăng trưởng phải hướng tới việc loại bỏ gen điều hòa biểu gen 15.3.1 Tăng cường gen kiềm chế khối u Các gen kiềm chế klhối u lớp gen có phân biệt di truyền, liên quan tới kiềm chế tăng trưởng bất thường Khi chức kiềm chế khối u protein bị làm kiềm chế tăng trưởng Vì gen kiềm chế ung thư coi gen ung thư bị thoái hóa Các nghiên cứu “họ ung thư” dẫn đến hội chứng ung thư phân biệt xác định gen kiềm chế ung thư bị đột biến từ dòng mầm Các cá thể họ nhạy cảm ung thư, họ mang alen bình thường gen nên cần kiện đột biến chức kiềm chế khối u Gen kiềm chế khối u đích cho GTL p53 Sở dĩ p53 gen kiềm chế khối u thường hay bị đột biến ung thư người Khi chuyển gen p53 vào tế bào khối u in vitro kết tải nạp tăng kiềm chế, giảm hình thành quần thể, giảm hoạt tính gen gây khối u tế bào cảm ứng chết theo chương trình tế bào Tuy nhiên, tế bào bình thường có biến đổi sau thâm chuyển biểu mức gen p53 Sự phát dẫn đến công trình tảng xa thử nghiệm lâm sàng Các nghiên cứu lâm sàng với gen p53 bắt đầu dĩ nhiên nhiều chướng ngại cần phải vượt qua đến thành công trị liệu Như biết có nhiều hệ thống chuyển gen cho ứng dụng lâm sàng Chúng ta lướt qua đôi nét hệ thống 15.3.1.1 Retrovirus Đối với retrovirus, lợi đáng kể hợp gen chuyển p53 vào tế bào khối u phân chia nhanh tế bào bình thường Tuy nhiên, hợp hợp hệ gen cải biến vĩnh viễn tế bào người ta bớt giảm khả đột biến ghép tế bào bình thường với gen chuyển p53 Các retrovirus hạn chế sản xuất với độ chuẩn thấp ổn định Vì việc cải biến nâng cấp vec tơ retrovirus hệ đương thời cần thiết cho việc trị liệu với p53 in vitro ex vivo đạt hiệu Bảng 15.4 Gen trị liệu với yếu tố kiềm chế khối u - p53 Loại ung thư Ung thư vú Ung thư buồng trứng Ung thư cổ tử cung Ung thư tuyến tiền liệt Ung thư phổi Vec tơ Adenovirus Ung thư Hiệu ứng Giảm tăng sinh hình thành quần thể, chết theo chương trình tế bào Retrovirus MDA-MB; BT549 Giảm hình thành quần thể Adenovirus Liposome MDA-MB MDA-MB; MCF-7 Ức chế tăng trưởng 71-95% Ức chế tăng trưởng 40-75% ghép ngoại lai Adenovirus SK-OV3; 2774; Cao3,4 PA-1 Giảm tăng sinh hình thành quần thể tế bào Adenovirus SK-OV3 Nhạy cảm hóa với xạ tăng sống sót ghép ngoại lai Adenovirus HeLa; C33A; HT3; C4-1 SiHa; Caski; ME180; MS751 Giảm tăng sinh hình quần thể tế bào Adenovirus C33A; HT3; HeLa; SiHa; ms751 Kiềm chế khối u 100% ghép ngoại lai Adenovirus C4-2; DU-145; PC-3; LNCaP; DuPro-1;Tsu-Prt Giảm tăng sinh tăng apoptosis tế bào Adenovirus C4-2; DU-145; PC-3; Tsu-Prt Ức chế khối u 100% ghép ngoại lai Adenovirus H23,69, 266Br, 322, 358, 460 596, H661; Calu-6; MRC-9; a549; wi-38 Giảm tăng sinh tế bào Retrovirus H226Br; 322, 358, 460; wt226 Giảm tăng sinh tế bào Adenovirus Ung thư đầu cổ Dòng tế bào/ghép ngoại lai MDA-MB; SK-BR-3; BT-549 T47-D; HBL-100; MCF-7 SkBr3; 184 BS; MCF10 H1299, 69, 358, 226Br Ức chế tăng trưởng với giảm sống sót ghép ngoại lai Adenovirus Tu-138, 177; MDA 686-LN; TR146; MDA 886; CNE-1, 2Z Giảm tăng sinh tăng apoptosis dòng tế bào Adenovirus Tu138, 177, MDA866, 686-LN Kiềm chế khối u 67–100% ghép ngoại lai ; apoptosis khối u Adenovirus G55, 59, 112, 124,; U87 MG; Giảm tăng sinh hệ thần kinh SK-N-MC; SN-N-SH; U-251; T-98; U-87, 373 MG, 138MG; A-172; LG; EFC-2; D54 MG; T98G tăng apoptosis dòng tế bào Retrovirus A673 Giảm hình thành quần thể tế bào Adenovirus G122 Kiềm chế khối u 100%trong ghép ngoại lai Retrovirus A673 Kiềm chế khối u Ung thư bàng quang Adenovirus HT-1376; 5637; J82; FHs738b1 Giảm tăng sinh tế bào Ung thư trực tràng Adenovirus DLD-1; HCT116; SW480, 620; RKO; KM12L4; SW837; Colo 205, 320; EB Giảm tăng sinh, tăng apoptosis dòng tế bào Adenovirus DLD-1; SW620; KM1214 Ức chế tăng trưởng tăng apoptosis ghép ngoại lai Ung thư gan Adenovirus Hep3B, G2; HLE; HLF; SK-HEP-1 Giảm tăng sinh tế bào Adenovirus McA-RH7777 Ức chế tăng trưởng ghép ngoại lai Ung thư da Adenovirus SK-MEL-24 SK-MEL-24 Giảm tăng sinhtế bào Tăng ức chế ghép ngoại lai Ung thư Adenovirus A673, SK-UT-1 Giảm tăng sinh tế bào Ung thư xương Adenovirus Saos-2 Giảm tăng sinh tăng apoptosis tế bào Retrovirus Giảm tăng sinh hình thành quần thể tế bào Saos-2 Adenovirus Saos-2 Kiềm chế khối u 100% ghép ngoại lai Retrovirus Saos-2 Kiềm chế khối u 100%ghép ngoại lai JB6; k-562 Giảm hình thành quần thể tế bào Be-13 Giảm tăng sinh hình U lympho Adenovirus Retrovirus thành quần thể tế bào Virus ngưu đậu HL-60 Giảm tăng sinh, tăng apoptosis biệt hóa tế bào 15.3.1.2 Adenovirus virus adeno liên hợp Các hệ thống chuyển gen có sở adenovirus, virus adeno liên hợp, herpes virus ngưu đậu khai thác cho GTL Với GTL người ta sử dụng gen chuyển p53, adenovirus virus ngưu đậu Những lợi đáng kể vectơ là: (1) tải nạp tế bào phân chia nằm yên, (2) tính hướng mô rộng (3) có khả tạo chất liệu lâm sàng với nồng độ cao Các adenovirus trì nhiễm sắc thể chuyển gen tức xảy với adenovirus tái tổ hợp khiếm khuyết chép Sự biểu ngắn hạn p53 lợi cho việc xử lý tạo u cảm ứng ức chế tăng sinh, giảm hình thành quần thể giảm hoạt tính tạo khối u ác tính tế bào ung thư đích Chắc chắn apoptosis cảm ứng biểu tức thời p53 tế bào khối u thể loại bỏ phân dòng Một khó khăn phức tạp trị liệu việc quan sát trình sinh học tế bào bình thường.Tuy nhiên, adenovirus khiếm khuyết chép sử dụng nghiên cứu lâm sàng, chưa thấy tác dụng phụ trái ngược đáng kể với tế bào bình thường Một vấn đề khác việc sử dụng adenovirus đáp ứng miễn dịch vật chủ vec tơ Cả kháng thể trung hòa tế bào T độc tế bào làm ức chế hiệu GTL sở adenovirus Các hệ gần vec tơ adenovirus đề cập cách đặc biệt vấn đề làm giảm đáng kể tính sinh miễn dịch cấu trúc vec tơ 15.3.1.3 Các hệ thống chuyển gen virus p53 sử dụng với liposome tiêm trức tiếp DNA p53 Mặc dầu hiệu quả, hai hệ thống độc tính tính sinh miễn dịch hệ thống virus Các liposome cho hội tốt trường hợp ác tính di thông qua khả đặc hiệu tế bào tạo u Nó có hiệu ứng cao hợp tế bào đích kháng thể với kháng nguyên đặc hiệu khối u lớp lipid trung tâm liposome Các liposome tạo từ phosphatidylcholine truyền thống chuyển gen tới quan tử nội bào đặc hiệu chúng không hòa vào nhiều lại kháng acid Vì liposome đường vòng qua trình nội bào để chuyển gen tới nhân Trong GTL, việc chuyển gen trị liệu liposome có kết việc làm ức chế tạo mạch nâng cao hiệu qua hiệu ứng “người cuộc” (bystander) Cả kiện lợi cho trị liệu khối u di 15.3.2 Làm bất hoạt biểu qúa mức gen ung thư Sự biểu mức gen ung thư gạt bỏ cách giới hạn lại biiểu gen chúng Sự ức chế đặc hiệu thực việc sử dụng phân tử antisense ribozyme Antisense oligonucleptide sản sinh cách đặc biệt sở trình tự có nghĩa (sense) gen ung thư gắn vào gen ung thư Đích phân tử antisense oligonucleptide thường vị trí khởi đầu phiên dịch vị trí ghép nối gen (hình 15.4) Sự gắn kết đại diện cho cách tiếp cận antigene ức chế dòng thông tin di truyền (DNA-RNA-protein) Cách tiếp cận antigene dựa sở đích DNA hệ gen, gồm phiên mã gen ung thư Sự ức chế biểu gen đạt nhờ hình thành cặp ba (triplex) (gồm phân tử antisense cặp đôi DNA chuỗi kép) Với hình thành cặp ba ổn định phiên dịch RNA gen ung thư bị ức chế Cần phải lưu ý rằng, hình thành cặp ba dựa sở cặp đôi base ổn định động học phải lưu ý tới chức bổ cứu chiều dài phân tử antisense Sự ức chế biểu gen antisense xảy vị trí phiên mã khác thông qua protein điều hòa (sense aptamer, Bảng 15.5) Nếu đích yếu tố phiên mã protein điều hòa nhân khác thúc đẩy biểu gen Cách tiếp cận cuối với antisense ức chế biểu gen hướng vào kiện phiên dịch sau phiên dịch Sự phiên dịch RNA thành protein ức chế mRNA đích Hình 15.4 Mô hình antisense oligonucleptide đặc hiệu sản sinh từ trình tự gen ung thư, gắn vào gen ung thư làm cảm ứng ngăn chặn tổng hợp RNA polymerase (được vẽ vòng chữ nhật lớn) (Theo Simon J Hall, Thomas F Kresina, Richard Trauger Barbara A Conley An Introduction to Molecular Medicine and Gene Therapy A John Wiley & Sons, Inc., Publication 2001) nhờ antisense oligonucleptide Chiến lược trị liệu ung thư nhiều thách thức nữa, có nhiều phân tử mRNA cho gen ung thư tế bào ác tính Đối với antisense cần hoàn tất bước trước sử dụng Trước phải thiết lập sở gen gây ung thư Thứ hai xác định trình tự đặc hiệu cho ức chế antisense Mặc dầu sở di truyền gây ung thư xác định rõ ràng thông qua nhiều bước hình thành khối u, đường công nghệ di truyền đặc hiệu để tạo gen ung thư cần thiết Điều quan trọng phải xác định số biến đổi di truyền xảy trình tự tiến tới ác tính Việc xác định biến đổi di truyền bao hàm chiến lược chẩn đoán phân tử nhằm quản lý lâm sàng người bị ung thư Hơn nữa, biến đổi di truyền tương ứng gây nên ung thư phải thiết lập Việc xác định gen ung thư cần thiết để xác định xem antisense thích hợp Với đích xác định trình tự nucleptide đặc hiệu cần thiết cho việc sản xuất antisense Những ví dụ điển hình trị liệu gen antiense ung thư vú, u tuyến tụy, ung thư kết tràng Tiến trình lâm sàng ung thư vú phải xác định từ giai đoạn sớm lúc di xa Những yếu tố triệu chứng kiện quan trọng giúp ta phân biệt ung thư di để có trị liệu bổ trợ Trên bảng (15.2) cho thấy gen ung thư erb có liên quan với ung thư vú Sự khuếch đại biểu mức gen ung thư erb thể qua việc kiểm soát tế bào chép DNA, sửa chữa tách rời NST Phạm vi biến đổi tế bào xác định số lượng gen ung thư Khi quan sát thấy tế bào khối u có phiên mã gen ung thư cao xu hướng tới di kết trị liệu lâm sàng thấp Một quan sát tương tự thực ung thư tuyến tụy Mặc dầu tế bào từ khối u di làm bất hoạt gen kiềm chế khối u p53, loại bỏ nhiễm sắc thể 18q đột biến điểm mã 12 gen K-ras, biểu mức gen ung thư rhoC tương quan đáng kể với triệu chứng dự đoán Vì thế, đích tốt trị liệu gen antisense ung thư gen ung thư biểu mức giữ vai trò quan trọng bệnh sinh Có nhiều gen ung thư đích cho trị liệu gen antisense c-fos cho ung thư não, c-srs cho ung thư kết tràng, c-myb cho bệnh bạch cầu khối u hệ thần kinh trung ương c-myc cho u hắc sắc tố ung thư buồng trứng Ức chế biểu gen ung thư đích ghi trường hợp dòng tế bào ghép ngoại lai chuột thiếu hụt miễn dịch (nude, SCID) Đi với giảm biểu gen hiệu ứng sinh học điều hòa xuống biểu yếu tố tăng trưởng tăng độ nhạy cảm tế bào khối u với hóa trị liệu Nếu làm giảm biểu yếu tố tăng trưởng yếu tố tăng trưởng mạch máu nội mô yếu tố tăng trưởng biến nạp α có hiệu ứng đáng kể tạo mạch tăng trưởng khối u Việc sử dụng antisense c-fos não làm thay đổi chức thần kinh hành vi bệnh nhân Với trường hợp làm tăng độ nhạy cảm tế bào khối u với hóa trị liệu việc giảm tăng sinh khối u hình thành quần thể chứng minh GTL antisense làm tăng tính kháng u đặc hiệu thuốc coi “trị liệu tổ hợp” Sự hấp thu tế bào antisense oligodeoxyribonucleptide yếu tố làm giới hạn hiệu ứng trị liệu Trong nghiên cứu động vật, đưa liposome qua tĩnh mạch làm tăng hấp thu Vì thế hệ có bổ sung antisense cần thiết coi kỹ thuật chuyển giao Mở rộng công nghệ antisense việc sử dụng ribozyme – phân tử antisense RNA có hoạt tính xúc tác (Hình 15.5) Xin nhắc lại rằng, chức ribozyme gắn vào bán phần RNA đích thông qua lai đặc hiệu trình tự antisense Sự bất hoạt phân tử đích xảy phân cắt khung phosphodiester vị trí đặc hiệu Hai lớp ribozyme nghiên cứu kỹ ribozym hammerhead ribozyme hairpin Ribozyme hammerhead cắt RNA trình tự nucleptide U-H (H = A, C U) thủy phân liên kết 3’-5’ phosphodiester Ribozyme hairpin cắt trình tự nucleptide C-U-G Lợi bật cuả ribozyme hẳn antisense RNA truyền thống không bị tiêu hao xảy phản ứng phân cắt đích Vì thế, ribozyme đơn làm bất hoạt nhiều phân tử đích nồng độ thấp Thêm vào đó, ribozyme sản sinh từ đơn vị phiên mã nhỏ, ribozyme hướng đích tới vùng khác hệ gen ung thư Các ribozyme có tính đặc hiệu trình tự cao antisense RNA đích phải thật chuẩn xác với trình tự đích cho phép gắn Hơn nữa, vị trí phân cắt phải phía bên phải đoạn antisense Hình 15.5 Mô hình ribozyme hình cặp tóc (hairpin), phân tử antisense RNA có hoạt tính Vị trí cắt RNA C-N-G, N= nucleptide (Theo Simon J Hall, Thomas F Kresina, Richard Trauger Barbara A Conley An Introduction to Molecular Medicine and Gene Therapy A John Wiley & Sons, Inc., Publication 2001) Chức phạm vi xúc tác ribozyme in vivo đích RNA ung thư chưa rõ Tuy nhiên, ribozyme hammerhead sử dụng điều trị gen ung thư tế bào HER-2/ neu ung thư buồng trứng, gen ung thư bcr-abl bệnh bạch cầu tủy mạn, c-fms ung thư buồng trứng, H-ras, c-fos c-myc u hắc sắc tố, N-ras, Ha-ras v-myc dòng tế bào biến nạp c-fos ung thư kết tràng Trong tất trường hợp dù thâm chuyển tế bào với ribozyme xảy thông qua hạt polyamine, adenovirus vec tơ retrovirus biểu gen ung thư đích bị kiềm chế (Bảng 15.6) Hơn nữa, hiệu ứng sinh học quan sát thấy giảm tăng sinh, biệt hóa ngược tế bào, tăng apoptosis tế bào ung thư tăng độ nhạy cảm với thuốc kháng u Vì thế, trị liệu gen antisense ribozyme niềm hy vọng thật cho việc trị liệu đặc hiệu ung thư Một phương pháp khác hiệu chỉnh hiệu ứng biểu mức gen ung thư can thiệp cải biến sau phiên dịch sản phẩm gen ung thư để chúng có chức cần thiết Chẳng hạn như, gen ung thư ras đề cập trên, biểu mức nhiều khối u Tuy nhiên, để hoạt hóa ras phải di rời từ tế bào chất tới màng sinh chất, việc thêm nhóm farnesyl (nhờ xúc tác farnesyl transferase) vào protein ras cần thiết phép ras định vị màng Ngày người ta phát triển farnesyl transferase bị ức chế số tricyclic hợp chất khác Sự ức chế dẫn đến kết ức chế tăng trưởng in vitro mà ức chế tăng trưởng khối u mô hình động vật tạo u Sự ức chế gây độc tính nhẹ với tế bào bình thường Cũng giống trị liệu antisense, dường chất ức chế farnesyl transferase làm tăng hiệu ứng thuốc trị liệu hóa học gây độc tế bào Tuy nhiên, tác nhân lại hữu ích coi tác nhân phòng ngừa hóa học cho bệnh nhân có rủi ro cao khối u biểu mức ras Bảng 15.6 Ứng dụng trị liệu ribozyme ung thư người Vec tơ Plasmid pHβApr-1 neo Promoter β-actin H-ras K-ras c-sis Bàng quang u hắc săc tố Tuyến tụy U trung biểu mô pMAMneo MMTV-LTR H-ras c-myc c-fos U hắc sắc tố U hắc sắc tố U hắc sắc tố & buồng trứng pLNCX pLNT pRc CMV Tyrosinase CMV H-ras H-ras Pleiotrophin U hắc sắc tố tuyến tụy U hắc sắc tố U hắc sắc tố Adenovirus Retrovirus Liposome Lipofection Gen ung thư đích CMV H-ras K-ras β-actin bcr/abl thymidine kinase bcr/abl bcr/abl AML1/MTG8 Các tế bào ung thư U hắc sắc tố Tuyến tụy CML CML CML AML 15.3.3 Trị liệu với tiền thuốc đích (targeted prodrug) GTL với tiền thuốc đích chống ung thư chuyển trực tiếp vào khối u gen để hoạt hóa tiền thuốc không độc thành sản phẩm độc tế bào nhờ sử dụng promoter đặc hiệu mô vec tơ virus (Bảng 15.7) Cách tiếp cận đạt độc tính tối đa vị trí chuyển giao vec tơ, tế bào xa độc tính thấp Trên động vật, số tiền thuốc hoạt hóa enzyme thể hiệu ứng kháng khối u cao Tuy nhiên, với khối u người enzyme hoạt hóa tiền thuốc tương tự Trị liệu với tiền thuốc enzyme trực tiếp gen (gene – directed enzyme prodrug therapy – GDEPT) nhằm tiêu diệt tế bào khối u thông qua việc hoạt hóa tiền thuốc sau gen mã emzyme hoạt hóa hướng đích tới tế bào ác tính (H 15.6) Hệ thống tiền thuốc/ enzyme đặc hiệu nghiên cứu cho trị liệu ung thư GDEPT Kỹ thuật đòi hỏi tiền thuốc phải có chế hoạt động không gây độc tính chuyển đổi ngược nội bào thành chất chuyển hóa gây độc tế bào cao lại không đặc hiệu với chu kỳ tế bào (không ảnh hưởng tới chu kỳ tế bào) Thuộc tính hoạt hóa sẵn sàng thúc đẩy hiệu ứng “người cuôc” (bystander) Vì thế, tế bào không tải nạp nằm cạnh bị giết chết chất chuyển hóa có độc tính vừa tạo thành Hợp chất tốt hợp với tiêu chuẩn tác nhân alkyl hóa nitroreductase vi khuẩn Hệ thống ganciclovir/gen thymidine kinase virus herpes simplex (herpes simplex virus thymidine kinase – HSVtk) thường hay dùng GDEPT- HSVtk, thymidine kinase động vật có vú phosphoryl hóa ganciclovir thành ganciclovir triphosphate Ganciclovir triphosphate ức chế tổng hợp DNA tác động chất tương tự thymidine; hợp vào DNA để ngăn cản tổng hợp DNA Ngoài hiệu ứng gây độc tế bào trực tiếp tế bào tải nạp HSVtk xử lý với ganciclovir, cách tiếp cận tạo hiệu ứng người làm cho tế bào bên cạnh không biểu HSVtk bị chết theo Điều xảy dịch chuyển ganciclovir phosphoryl hóa từ tế bào tải nạp HSVtk tới tế bào bên cạnh không biểu qua khớp và/hoặc thông qua việc sản sinh bọng apoptosis gần tế bào kề cận Các bọng chứa enzyme HSVtk, ganciclovir hoạt hóa, cytokine phân tử tải nạp tín hiệu bax, bak cyclin Ngoài ra, hiệu ứng người làm tăng hoạt tính miễn dịch cục thúc đẩy tiêu diệt tế bào khối u tồn Bất kể chế hiệu ứng người cho phép tiêu diệt cách hiệu tế bào khối u mà không cần phải xử lý tế bào ác tính Bảng 15.7 Các promoter sử dụng để biểu gen đích GTL ung thư Các tế bào ung thư Promoter Ung thư tuyến sữa ung thư vú MMTV-LTR; WAP-NRE; β=casein; SLP!; DF3(MUC1); c-erbB2 U nguyên bào thần kinh u nguyên bào đệm U hắc sắc tố Calcineurin Aα; synapsin 1; HSV-LAT Bênh bạch cầu tế bào B Ung thư phổi Ung thư kết tràng Ung thư gan Ung thgư tuyến tiền liệt Ung thư tuyến tụy Ung thư xương sụn Tyrosinase; TRP-1 Chuỗi nặng Ig chuỗi nhẹ κ; yếu tố tăng cường chuỗi nặng Ig Yếu tố đáp ứng CEA; SLP1; Myc-Max CEA; SLP1 AFP PSA c-erbB2 c-sis Việc xử lý ganciclovir tế bào bệnh bạch cầu người thâm nhiễm HSVtk ức chế tăng trưởng tế bào Cả tế bào ung thư phổi tế bào di gan chuột (trong mô hình in vivo ung thư di căn) bị tiêu diệt in vivo sau thâm nhiễm Các tế bào khôi u gan xử lý thành công in vitro với thymidine kinase virus varicella –zoster (varicella –zoster virus thymidine kinase –VZVtk), chuyển ngược methoxypurine arabinonucleoside (ara M) không độc thành adenine arabinonucleoside triphosphate (ara ATP) độc Hình 15.6 Trị liệu tiền thuốc enzyme trực tiếp gen (GDEPT) (Theo Simon J Hall, Thomas F Kresina, Richard Trauger Barbara A Conley An Introduction to Molecular Medicine and Gene Therapy A John Wiley & Sons, Inc., Publication 2001) Thắng lợi nghiên cứu dẫn đến nhiều thử nghiệm lâm sàng với việc sử dụng HSVtk Mặc dầu kiềm chế tăng trưởng khối u dẫn chửng rõ ràng nghiên cứu chưa mở khả cứu chữa bệnh nhân Dường có biến thiên hiệu ứng người in vivo hiệu ứng tải nạp bị giới hạn in vivo Tuy nhiên, việc sử dụng HSVtk làm tăng tính nhạy cảm hóa trị liệu, mà chứng minh vai trò trị liệu tiền thuốc kết hợp với thuốc kháng khối u Một hệ thống tiền thuốc bổ sung nghiên cứu rộng rãi gen cytosine deaminase (CD) E.coli cộng với 5-fluorocytossine (5-FC) Gen CD chuyển ngược 5-FU thành tác nhân hóa trị liệu 5-flourouracil (5-FU) 5-FU thuốc điều trị chuẩn cho khối u dày - ruột non (gastrointestinal –GI) di dùng làm test cho hệ thống tiền thuốc Trị liệu hệ thống với 5-FU kiềm chế tăng sinh tế bào khối u tải nạp CD Vì chiến lược cho khối u GI di gan hướng vào việc chuyển giao giới hạn vùng CD tới khối u lớn Để việc chuyển giao đặc hiệu mô tới gan, promoter kháng nguyên phôi gen α- fetoprotein thăm dò với việc truyền vec tơ CD qua động mạch gan Tuy nhiên, khối u đặc hiệu lại kháng lại với xử lý lặp lại 5-Fu, cần phải có can thiệp thêm phương pháp luận 15.3.4 Cải biến đáp ứng miễn dịch kháng u 15.3.4.1 Miễn dịch khối u qua trung gian tế bào Việc sản sinh tính miễn dịch đặc hiệu tế bào T độc tế bào xác nhận (1) khả nhận dạng tế bào gây bệnh tế bào CD8 (2) hoạt hóa mở rộng tế bào CD8 đặc hiệu kháng nguyên Việc lựa chọn hoạt hóa tế bào với tính đặc hiệu chuẩn xác kháng nguyên đặc hiệu xảy hạch lympho Tại đây, tế bào T tương tác với tế bào trình diện kháng nguyên tế bào phân nhánh (dendritic) Các tế bào phân nhánh chủ tới hạch lympho sau gặp tế bào gây bệnh ngoại biên Các tế bào phân nhánh phù hợp đặc biệt với chức chúng biểu phân tử MHC lớp I II mà phân tử đồng kích thích đặc hiệu B7.1, B7.2, CD40L, ICAM1,2,3VCAM-1 LFA-3 Với nhận dạng hoạt hóa đặc hiệu tế bào T, dòng tế bào di rời khỏi hạch tiến thẳng tới vị trí tế bào gây bệnh Khi tế bào T hoạt hóa, chúng nhiệm vụ phải biết nhận dạng Vấn đề xảy thông qua việc chuyển tín hiệu giống hệ thống hòa hợp tổ chức (major histocompatibility -MHC) tế bào trình diện kháng nguyên (antigenpresenting cell –APC) Các tế bào tăng sản ung thư hữu thách thức đặc biệt hệ thống này, tế bào phân tử đồng kích thích cần để hoạt hóa hữu hiệu tế bào T độc tế bào Ngoài thấy việc chuyển giao tín hiệu MHC đồng kích thích làm suy yếu tế bào chế mà tế bào khối u tránh công miễn dịch Một cách tiếp cận khác lại nhằm vào việc khắc phục cố thiếu phân tử đồng kích thích tải nạp tế bào khối u với phân tử đồng kích thích chúng có chức trực tiếp APC Những tế bào xử lý trực tiếp tới vật chủ vaccine, cải biến in vivo thông qua việc tiêm vào khối u gen phân tử đồng kích thích Đã có nhiều báo cáo thành công cách tiếp cận mô hình động vật Mặc dầu vậy, có số baó cáo tế bào B7.1 cải biến lại không cảm ứng tính miễn dịch đặc hiệu khối u Mặc dầu vậy, thử nghiệm lâm sàng khởi đầu với khối u tải nạp B7.1 bệnh nhân u hắc sắc tố ung thư kết tràng Những kết đạt tới chứng minh việc sử dụng tế bào khối u chiếu xạ tải nạp với B7.1 vaccine làm tăng ĐƯMD kháng u Mặc dầu vậy, thích ứng lâm sàng hiệu ứng cần phải chứng minh Một cách tiếp cận khác lại nằm vào việc làm tăng khả tế bào khối u với chức APC tải nạp kháng nguyên hòa hợp tổ chức không thích ứng di truyền vào tế bào Hiệu ứng rõ ràng thâm chuyển tạo đáp ứng allo (allo-response) mạnh quanh khối u, mà cảm ứng di rời hoạt hóa APC tế bào T Ngoài ra, việc sản xuất IL-2 cục từ tế bào T tuyển mộ khuếch đại xa đáp ứng viêm cục Các thử nghiệm lâm sàng với cách tiếp cận đạt nhiều tiến bệnh nhân u hắc sắc tố 15.3.4.2 Các cytokine Cytokine protein tiết tế bào miễn dịch, tác động chất trung gian (mediator) mạnh ĐƯMD Những nghiên cứu lâm sàng cho thấy phân tử có độc tính mạnh chuyển tới hệ thống với liều lượng cao Vì việc mở rộng nghiên cứu cytokine ung thư, dùng GTL để chuyển gen cytokine tới tế bào khối u tức tạo nên môi trường xung quanh tế bào, làm thuận lợi cho việc tiêu diệt chúng Cho tới nay, vấn đề hoàn tất thông qua việc chuyển giao virus với cấu trúc adenovirus hay retrovirus lipid cationic Cũng chuyển trực tiếp cytokine vào khối u vào tế bào khối u ex vivo Thực tế tất cytokine nghiên cứu thể có hiệu ứng với tăng trưởng khối u sống sót tế bào số mô hình động vật Trong hầu hết trường hợp, tác động cytokine tới khối u giới hạn số nhỏ tế bào, điều chứng tỏ tác động cytokine lên ĐƯMD kháng lại khối u không đơn giản việc tiêu diệt tế bào thâm chuyển mà đóng góp to lớn vào việc hoạt hóa tồn tế bào miễn dịch kháng khối u xung quanh khối u Tuy nhiên, cảm ứng đáp ứng viêm vị trí viêm làm hoạt hóa nhiều dạng tế bào vị trí u Ngoài ra, việc chuyển cytokine tới tế bào khối u ex vivo nâng cao tính miễn dịch tế bào khối u mở cửa cho việc sử dụng tế bào khối u cải biến gen vaccine Bảng 15.8 Các cytokine, phân tử phụ trợ yếu tố tăng trưởng thâm chuyển để làm tăng tính miễn dịch Cytokine IL-2 Hoạt tính sinh học Yếu tố tăng trưởng tế bào T mở rông CTL Hệ thống khối u Não, vú., kết tràng, phổi tế bào nhỏ, u hắc sắc tố, buồng trứng IL-4 Yếu tố tăng trưởng tế bào T B Ung thư tiến triển, não IL-7 Hoạt hóa CTL, điều hòa xuống TGF-β U Kết tràng, u lympho, u hắc sắc tố, u thận IL-12 Hoạt hóa đáp ứng Th1, hoạt hó CTL Ung thư tiến triển, u hắc sắc tố IFN Hoạt hóa tế bào CD8, hoạt hóa đại thực bào, điều hòa lên biểu lộ MHC lớp I II Hoạt hóacác tté bào phân nhánh, hoạt hóa đại thực bào U hắc sắc tố, tuyến tiền liệt, não GM-CSF Thận, tuyến tiền liệt, u hắc sắc tố Bảng 15.8 liệt kê cytokine nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng Như thấy, phần lớn thử nghiệm sử dụng IL-2 Đây polypeptide gồm 133 amino acid, trước gọi yếu tố tăng trưởng tế bào T, cytiokine sơ cấp tạo tế bào CD4 hoạt hóa IL-2 tác động có tính chất cục vị trí ĐƯMD nhằm mở rộng quần thể tế bào CD8 hoạt hóa Các tế bào T hồi phục trực tiếp từ khối u chuyển thành lympho thấm nhập khối u (tumor-infiltrating lymphocyte – TIL) Ngoài ra, Il-2 làm mở rộng tế bào diệt tự nhiên (natural killer –NK) – nhóm tế bào miễn dịch tế bào giết tiềm tế bào tăng sản ung thư Các phân tử khác họ interleukin có hiệu ứng tương tự nghiên cứu interleukin (Il-4), interleukin (IL-7) interleukin 12 (IL-12) IL-12 heterodimer gồm peptide 40.000 35.000 Đáp ứng qua trung gian tế bào Th1 thường cộng lực với cytokine Th1 khác IFN-g IL-2 Một cytokine khác quan tâm nhiều năm gần yếu tố kích thích bạch cầu hạt đơn nhân (granulocyte-monocyte stimulating factor- GMCSF) Cytokine thúc đẩy hoạt hóa APC hy vọng mở rộng trực tiếp tới CTL thông qua tương tác APC/CTL Cuối cùng, việc cải biến trực tiếp vaccine tế bào khối u để biểu cytokine khích lệ với kết tiền lâm sàng lâm sàng, rõ ràng việc sử dụng cách rộng rãi nhiều trở ngại có thay đổi biểu cytokine cần quan tâm Tuy vây, tế bào nguyên bào sợi công nghệ hóa biểu cytokine quan tâm Sau đó, tế bào tiêm với tế bào hoang dã chiếu xạ tế bào khối u cải biến để thúc đẩy ĐƯMD vị trí tiêm Tương tự vậy, việc theo dõi tế bào tiết cytokine vào lớp u thực cách tiêm hẳn vào khối u Các thử nghiệm lâm sàng pha I với nguyên bào sợi tiết IL-2 hoàn tất kết luận tế bào chế phẩm vaccine làm tăng ĐƯMD đặc hiệu kháng u 15.3.4.3 Sự kiềm chế miễn dịch Khối u có phát triển hay không tùy thuộc vào khả tránh né hệ miễn dịch Chẳng hạn kiềm chế miễn dịch thường thấy bệnh nhân u não Những công trình gần chứng minh suy yếu ĐƯMD liên quan trực tiếp với việc sản xuất khối u sọ nhiều cytokine kiềm chế miễn dịch rõ rệt Một cytokine kiềm chế miễn dịch đặc hiệu yếu tố tăng trưởng biến nạp β (transforming growth factor β –TGF-β) Hiện có đồng dạng TGF-β TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3 Ngoài có TGF-β trọng lượng phân tử lớn phân tử TGF-β1 liên kết với protein lớn tế bào Tất đồng dạng TGF-β, trừ mẫu có trọng lượng phân tử cao tiết dạng dimer phân cắt phần acid protease để trở nên có hoạt tính Một số đồng dạng TGF-β cytokine TGF-β2 (trước gọi yếu tố kiềm chế tế bào T từ u nguyên bào xốp) có huyết tương với mức cao dạng hoạt hóa sinh học bệnh nhân kiềm chế miễn dịch với u tế bào hình tự ghép (anaplastic astrocytoma) đa u nguyên bào xốp (glioblastoma) Nguồn cung cấp yếu tố tế bào bướu não, quan sát thấy yếu tố có nồng độ cao dòng tế bào phát triển bướu não in vitro Ngoài ra, chứng minh hàm lượng số TGF-β có giảm xuống cạnh tranh miễn dịch phục hồi với mức độ cắt bỏ khối u, phát củng cố thêm tế bào khối u nguồn TGF-β2 TGF-β1 thấy có nhiều huyết tương bệnh nhân ung thư kết tràng tỷ lệ tăng liên quan trực tiếp với bệnh theo phân loại Duke giai đoạn khối u Hơn nữa, từ mức cao TGF-β1 (11,9ng/ml) để tiến tới mức bình thường (3,8 ng/ml) phải tuần lâu sau phẫu thuật cắt bỏ Một cytokine kiềm chế miễn dịch tiềm tàng khác phát bệnh nhân u tế bào hình tự ghép đa u nguyên bào xốp interleukin 10 (IL10) Hoạt tính kiềm chế miễn dịch IL-10 biết rõ Vứa gần người ta chứng minh IL-10 ức chế tăng sinh tế bào T in vitro đáp ứng với kháng nguyên hòa tan làm giảm mạnh tăng sinh tế bào hoạt hóa lập thể (alloreactive) người phản ứng tế bào lympho pha trộn (mixed lymphocyte reaction – MLR) Ngoài ra, IL-10 cảm ứng trạng thái đáp ứng đặc hiệu kháng nguyên dài hạn tế bào T CD4+ người Vì lý nên IL10 ngăn trở ĐƯMD kháng u Hiện có nhiều công trình chứng minh điều hòa xuống TGF-β, nhờ kỹ thuật antisense cho hiệu ứng gây miễn dịch cao cho vaccine tế bào khối u Các tế bào công nghệ hóa ex vivo sử dụng đơn kết hợp cytokine, chuyển vào tế bào khôi u tế bào vận chuyển đồng phân phối vaccine tế bào khối u Những nghiên cứu bệnh nhân đa u não giúp ta hiểu giá trị lâm sàng chiến lược Nói tóm lại, cải biến miễn dịch kháng khối u thông qua GTL nghiên cứu với nhiều chiến lược Biến cải khối u in vivo để biểu phân tử đồng kích thích /hoặc cytokine làm tăng phản ứng miễn dịch khối u Người ta nghiên cứu việc sử dụng tế bào khối u khác loại hay đồng loại cải biến ex vivo vaccine Những phương pháp trị liệu áp dụng sau phẫu thuật để tiêu diệt tế bào biến nạp tồn đọng chưa loại vật lý Cũng hy vọng vaccine làm giới hạn phát triển di khối u sơ cấp Trong năm tới chắn có nhiều thông tin liên quan tới hiệu ứng lâm sàng cải biến gen đáp ứng kháng u 15.4 Các vaccine kháng ung thư DNA Sản xuất vaccine kháng ung thư khái niệm dựa nguyên tắc sau đây: (1) tế bào bình thường tế bào ác tính có khác biệt chất lượng số lượng, (2) hệ miễn dịch xác định khác biệt dạng tế bào (3) hệ miễn dịch chương trình hóa tiêm chủng để nhận dạng khác biệt tế bào bình thường tế bào ác tính Tiên đề miễn dịch học phải phân biệt rõ ràng (self and nonself) sở miễn dịch qua trung gian tế bào biểu kháng nguyên MHC Vaccine kháng ung thư cố gắng tập trung vào lĩnh vực liên quan tới việc nâng cao tính miễn dịch vật chủ thông qua việc nhận dạng ghi nhớ tế bào ác tính: (1) tiêm chủng tế bào ác tính chiếu xạ, có chất bổ trợ (adjuvant) cải biến thâm nhiễm với cytokine phân tử phụ trợ để nâng cao ĐƯMD; (2) tiêm chủng tế bào với protein liên quan tới khối u phép thực bào tế bào trình diện kháng nguyên trình diện tới tế bào giết thông qua alen MHC; (3) tiêm chủng trình diện kháng nguyên khối u polypeptide thể đột biến trình mồi kháng nguyên; (4) tiêm chủng với DNA trần vec tơ virus có chứa cDNA mã cho kháng nguyên liên quan tới khối u, phân tử phụ trợ, cytokine phân tử khác để làm tăng tính miễn dịch (5) tiêm chủng kháng nguyên carbohydrate liên quan với tế bào ác tính Những chiến lược vacine đích trực tiếp ung thư thâm nhiễm virus có liên quan tới phát triển ung thư Chẳng hạn như, thâm nhiễm mạn tính với virus viêm gan C làm phát triển khối u tế bào gan Vì thế, việc sản xuất vaccine để ngăn ngừa thâm nhiễm virus viêm gan C làm giảm nguy ung thư gan 15.4.1 Các vaccine sở vec tơ Cơ sở miễn dịch học việc thâm chuyển tế bào với cytokine phân tử phụ trợ tăng cường ĐƯMD kháng khối u Đích tăng cường ĐƯMD nâng cao trình diện kháng nguyên Một cách tiếp cận công nghệ gen tế bào khối u để trình diện trực tiếp kháng nguyên khối u tới tế bào T độc tế bào hay tế bào T giúp đỡ Vì thế, tiểu quần thể tế bào ung thư hướng vào tế bào trình diện kháng nguyên chuyên nghiệp đại thực bào tế bào phân nhánh (dendritic) Nhiều cytokine yếu tố tăng trưởng thâm chuyển vào tế bào khối u sở giả thuyết cho tăng biểu cytokine vị trí u làm tăng trình diện kháng nguyên cục tính miễn dịch kháng u, đặc biệt tế bào T độc tế bào CD8+ Những yếu tố sơ cấp liên quan tới tránh né tế bào khối u khỏi “trông nom” tế bào T độc tế bào làm biểu phân tử đồng kích thích tới tế bào khối u môi trường cytokine không thích hợp Đối với tế bào T độc tế bào, để giết tế bào khối u đòi hỏi phải có tín hiệu nội bào: (1) tín hiệu đặc hiệu kháng nguyên trung gian gặp gỡ receptor tế bào T với phức hợp MHC (2) phân tử không đặc hiệu kháng nguyên đồng kích thích cung cấp receptor phụ trợ sau xảy ligand tế bào trình diện kháng nguyên Vì thế, có mặt phan tử đồng kích thích (receptor CD28 tế bào T họ B7 ligand APC) khẩn yếu cho mở rộng tế bào T trạng thái ĐƯMD Các nghiên cứu động vật rõ thâm chuyển tế bào u hắc sắc tố với phân tử đồng kích thích B7 thúc đẩy tính miễn dịch kháng khối u thâm chuyển với cytokine yếu tố tăng cường Il-2, IL-4, IL-6, interferon-δ GM-CSF Đối với thâm chuyển, ĐƯMD quan sát thấy gồm thấm nhập ưa eosin với tế bào T CD4+ CD8+ Trong hệ thống đặc biệt, tế bào bệnh bạch cầu tuỷ cấp thâm chuyển với retrovirus có chứa gen chuyển cho B7.1 104 đến 105 tế bào phân phối vào chuột có mang khối u Kết cho thấy tất chuột loại thải khối u chúng trì tháng u Tham gia đáp ứng miễn dịch loại thải gồm Il-2 interferon-δ tế bào T CD8+ hoạt hóa Tuy nhiên, nghiên cứu rõ vaccine DNA hiệu ứng động vật có khối u lớn Ở động vật này, hiệu ứng vaccine nâng cao kết hợp với hóa trị liệu Những thắng lợi pha I mở cửa cho thử nghiệm lâm sàng với việc sử dụng cytokine tái tỏ hợp phân tử đồng kích thích 15.4.2 Tiêm chủng vaccine sở tế bào Có cách tiếp cận GTL sở tế bào trị liệu miễn dịch ung thư vaccine khối u cải biến gen tiêm chủng tế bào phân nhánh (dendritic) Cả cách tiếp cận đòi hỏi phải nhận dạng tế bào khối u tăng cường ĐƯMD Như trình bày trên, chiến lược vaccine việc loại trừ khối u phải bắc cầu qua nhiều cách GTL sở làm tăng ĐƯMD 15.4.2.1 Các vaccine khối u cải biến gen Cơ sở gốc cho cách tiếp cận tăng cường tính miễn dịch khói u thông qua biểu cytokine đặc hiệu bổ sung Các cytokine giả định trợ giúp cho trình trình diện kháng nguyên tạo tính miễn dịch kháng khối u Giả thuyết xây dựng sở liệu chứng minh tiêm chủng với tế bào khối u không cải biến không làm tăng tính miễn dịch kháng khối u ĐƯMD bảo vệ cảm ứng cytokine bao gồm tế bào T giúp đỡ tế bào T độc tế bào cở tiêm chủng Các tế bào T hợp để phát triển kháng thể đặc hiệu kháng u kháng thể idiotype anti-idiotype, kháng thể thúc đẩy độc tính tế bào qua trung gian tế bào phụ thuộc kháng thể (antibodydependent cell-mediated cytotoxycity – ADCC) Các tế bào độc tế bào chín tạo từ tế bào non thông qua tiêm chủng Mục đích tiêm chủng tế bào khối u cảm ứng thiết lập thoái lui khối u thiết lập trí nhớ miễn dịch chưa đạt yêu cầu với chứng minh in situ mức cytokine đạt tới mức “sinhlý học” nhờ thâm chuyển ex vivo tế bào khối u đồng loại Các nghiên cứu đương thời chứng minh cách hiệu để tạo tế bào T chín thông qua trình diện tế bào khối u Các kháng nguyên khối u trình diện thông qua giải phóng kháng nguyên liên quan tới tế bào khối u tế bào chết apoptosis Kháng nguyên giải phóng từ tế bào khối u thông qua đáp ứng viêm dẫn đến thoái hóa kháng nguyên khối u làm chết tế bào Sự mồi kháng nguyên kiểu đường để cảm ứng tế bào T độc tế bào Vì thế, cách tiếp cận GTL làm tăng ĐƯMD qua thâm chuyển gen cytokine hiệu hoạt hóa đường mồi kháng nguyên để cảm ứng tế bào T độc tế bào Như lưu ý trước, nỗ lực thâm chuyển nhằm vào gen Il-2, Il-4, Il-6, Il-7, γ-interferon, yếu tố hoại tử khối u yếu tố kích thích quần thể đại thực bào – bạch cầu hạt Những nỗ lực cho thấy việc cảm ứng tính miễn dịch đặc hiệu khối u động vật loại trừ thách thức khối u (ung thư phổi vú) Hơn nữa, nỗ lực thâm chuyển gen B7.1 nhằm tăng cường trình diện kháng nguyên khối u Đối với trường hợp khối u rắn thông thường, phát triển đặc biệt chậm thâm chuyển cảm ứng virus tối ưu để chuyển giao gen làm tăng cường miễn dịch Đối với khối u này, tỷ lệ thâm chuyển đạt khoảng 10 15% sử dụng vec tơ DNA plasmid có đoạn lặp tận dài virus adeno liên hợp (AAV) hợp vào liposome Việc tiêm chủng hàng tuần với cấu trúc mô hình động vật ung thư phổi di cho thấy có làm giảm di phổi Mặc dầu phương pháp cho kết khích lệ, phải sử dụng tế bào trình diện kháng nguyên chiến lược tiêm chủng 15.4.2.2 Tiêm chủng với tế bào phân nhánh (dendritic) Việc sử dụng tế bào phân nhánh chiến lược tiêm chủng để cảm ứng tính miễn dịch kháng khối u dựa sở giả thuyết cho mồi tế bào T độc tế bào thiếu hiệu ứng, gây nên tăng sinh khối u Vì làm tăng biểu kháng nguyên khối u tế bào phân nhánh làm giới hạn cần thiết việc chuyển kháng nguyên từ tế bào khối u tới tế bào trình diện kháng nguyên (KN) Trong trường hợp này, nhận dạng tế bào khối u hệ miễn dịch bẩm sinh không cần thiết cho việc cảm ứng tính miễn dịch tế bào T kháng khối u Quan điểm bao trùm tiêm chủng tế bào phân nhánh sử dụng kỹ thuật chuyển gen ex vivo để biểu mức KN tế bào khối u bề mặt tế bào trình diện KN sau vaccine hóa để cảm ứng tính miễn dịch kháng u Cách tiếp cận đòi hỏi kỹ thuật tối ưu phải qua nhiều bước Vấn đề bao gồm việc phân biệt xác định đặc trưng gen miễn dịch khối u (KN cảm ứng ĐƯMD), phân lập phát triển in vitro tế bào phân nhánh, kỹ thuật chuyển gen protein tế bào phân nhánh, xác định phương pháp tiêm chủng khảo sát hiệu ứng ngược liên quan tới việc tiêm chủng kể cảm ứng tính miễn dịch Cách tiếp cận việc tiêm chủng tế bào phân nhánh sử dụng mô hình động vật ung thư người Điều đáng lưu ý việc làm test mô hình di sau phẫu thuật chuột nhằm tránh tăng trưởng di nhỏ tồn từ trước, sau cắt bỏ khối u sơ cấp Trong mô hình này, việc điều trị cho chuột mang khối u với tế bào phân nhánh biểu KN từ klhối u dạng chiết xuất protein tế bào khối u peptide khối u đặc hiệu hay RNA dẫn đến kết làm cảm ứng tính miễn dịch đặc hiệu khối u Người ta chứng minh hiệu tiêm chủng tế bào phân nhánh mô hình ung thư người động vật Những nghiên cứu gần khảo sát địa phương hóa tế bào phân nhánh có đánh dấu phóng xạ người dựa sở đường hấp thu Các tế bào phân nhánh phân phối qua tĩnh mạch , khởi đầu định vị phổi tới gan, lách tủy xương Những tế bào phân phối da bị khỏi vị trí tiêm di cư tới hạch bạch huyết vùng Vì thế, việc phát triển tính miễndịch kháng khối u người nhờ tiêm chủng tế bào phân nhánh phụ thuộc vào dạng khối u đường phân phối vaccine 15.4.3 Các vaccine sở idiotype Thuật ngữ idiotype biểu thị dẫy định kháng nguyên (QĐKN) xác định huyết học phân tử kháng thể cho Khi QĐKN chia sẻ với kháng thể, yếu tố hòa tan tế bào gọi idiotype phản ứng chéo (cross-reactive idiotype –CRI) Các CRI tạo sở cho mạng lưới điều hòa miễn dịch thông tin thành viên mạng lưới CRI chiếm tỷ lệ lớn quần thể kháng thể cho Các CRIM định idiotype điều hòa trội Theo hệ quả, phần nhỏ kháng thể biểu CRI định nghĩa idiotype phản ứng chéo thứ yếu (minor cross-reactive idiotype –CRIm) Từ biểu cách tương đối idiotype suy mức độ kết nối thành viên hệ miễn dịch (khàng thể, yếu tố, tế bào B T) Đó sở cho khía cạnh điều hòa miễn dịch mạng lưới miễn dịch idiotype Khía cạnh miễn dịch kiểu gen idiotype (idiotypy) nguyên gốc đề cử nhóm tương tác bổ trợ tạo sở cho tự điều hòa ĐƯMD đồng loại (Bảng 15.9) Cơ sở tới giả thuyết tính chất hai mặt phân tử kháng thể Phân tử kháng thể sơ cấp nhận dạng gắn với KN thông qua vị trí gắn KN Cũng vị trí biểu kiểu gen idiotype Vì tác động với tư cách kháng nguyên, phân tử idiotype (Ab1) cảm ứng quần thể thứ hai phân tử kháng thể (Ab2) Các phân tử kháng thể bổ cứu huyết học với phân tử kháng thể Ab1 Các quần thể kháng thể Ab2 gọi kháng idiotype (anti-idiotype) Một tiểu quần thể độc quyền kháng thể kháng idiotype thành viên xác định huyết học KN khởi đầu Tiểu quần thể không bổ cứu với vị trí gắn KN quần thể Ab1 gắn vào kháng thể idiotype bị ức chế KN Khi xét tới hình ảnh bên KN KN đặc hiệu khối u trường hợp đại diện cho ứng cử viên phân tử vaccine trị liệu miễn dịch ung thư Bảng 15.9 Các khía cạnh huyết học Ig tế bào B T Idiotype Ab1 Gắn kháng nguyên Cảm ứng KN idiotype Biểu CRI khác Các phân tử cá thể Anti-Idiotype Ab2 Gắn idiotype Cảm ứng idiotype Xác định CRI Ant-anti-Idiotype Ab3 Gắn kháng nguyên Cảm ứng anti-idiotype Biểu CRI idiotype (mở rộng repertoire) Các tiểu quần thể Các phân tử cá thể hình ảnh bên trung hòa tế bào ung kháng nguyên thư; quần thể có hiệu ứng cao Ab1 (mở rộng repertoire) Các idiotype biểu tế bào khối u u ác tính tế bào B xem KN đặc hiệu khối u đích cho trị liệu miễn dịch vaccine Các hapten, chất phụ trợ cytokine dùng để làm tăng tính miễn dịch idiotype thiết lập ĐƯMD bảo vệ kháng idiotype Những kết mở rộng nhờ sử dụng kỹ thuật DNA để phát triển protein nấu chảy (fusion) vaccine DNA trần bao gồm thành phần mạng lưới idiotype - kháng idiotype Vì thế, việc tiêm chủng idiotype thể hiệu ứng cá thể u bạch huyết tế bào B đa u tủy Trong bệnh nhân thời kỳ không bệnh sống sót kéo dài tạo tính miễn dịch đặc hiệu idiotype Những nghiên cứu khởi đầu động vật chứng minh có tồn mạng lưới idiotype – kháng dioitype Mạng lưới gồm KN đặc hiệu khối u, Ab1 (idiotype), kháng thể kháng idiotype Ab2 kháng thể kháng – kháng idiotype (anti-anti idiotypic antibody) Đối với việc tiêm chủng idiotype người ta sử dụng vùng biến đổi cao chuỗi nặng nhẹ Ig có chứa idiotype Các QĐKN miễn dịch trực tiếp tạo nên ĐƯMD kháng u nhờ polypeptide nhỏ tổng hợp cộng hợp với chất mang sinh miễn dịch Cả kháng thể kháng u tế bào T CD4+ ( giúp đỡ) CD8+ (độc tế bào) tạo nhận diện cách đặc hiệu idiotype KN đặc hiệu khối u gốc (chất sinh miễn dịch-immunogen) Việc tiêm chủng với yếu tố tăng trưởng yếu tố kích thích quần thể đại thực bào - bạch cầu hạt nâng cao ĐƯMD kháng u phải lưu tâm đặc biệt tới tế bào diệt khối u (CD8+) Ngoài ra, động vật gây miễn dịch với kháng thể kháng idiotype (Ab2) hình thành đáp ứng kháng thể KN đặc hiệu khối u, kháng thể kháng – kháng idiotype (Ab3) Đáp ứng kháng thể khuếch đại đa dạng gắn KN cao kháng thể Ab1 đồng thời làm giảm chức tăng trưởng quần thể hóa khối u in vivo Khi tiêm chủng với cấu trúc DNA mã cho idiotype u bạch huyết dẫn đến đáp ứng kháng thể kháng idiotype đặc hiệu Các kháng thể Ab2 bảo vệ động vật khỏi thách thức với u Tiêm chủng da cấu trúc DNA có dạng DNA trần mã cho vùng biến đổi kháng thể người Trong thử nghiệm lâm sàng dài hạn, người ta kiềm chế khối u bệnh nhân ung thư Vì thế, việc tiêm chủng idiotype phải áp dụng trường hợp đa u tủy u bạch huyết Đây phương pháp cảm ứng tính miễn dịch khối u để phòng ngừa bệnh hay tái phát 15.5 Tóm lại Có nhiều phương pháp trị liệu gen ung thư lâm sàng sở làm tăng tính miễn dịch kháng u vật chủ tăng độ nhạy cảm đói với thuốc kháng u Quy trình bao gồm kỹ thuật trị liệu gen ex vivo in vivo với chuyển gen cytokine phân tử bổ trợ, chuyển gen gây độc tế bào cảm ứng tiền thuốc, tiêm chủng gen hiệu chỉnh phân tử biến đổi gen gây ung thư Vấn đề thứ hai bao gồm việc làm bất hoạt biểu gen ung thư thay gen kiềm chế khối u bị khiếm khuyết Cho tới nay, số liệu thu cho thấy với bệnh nhân ung thư tiến triển thường điều trị theo phương pháp truyền thống, việc trị liệu gen làm trung gian kiềm chế khối u, độc tính phải thấp tác dụng phụ mức chấp nhận Các vec tơ virus cần phải cải biến để giảm độc tính tính sinh miễn dịch, đồng thời phải nâng cao hiệu ứng tải nạp với vec tơ virus không virus Cần phải nâng cao đích tính đặc hiệu khối u, đồng thời phải hiểu sâu điều hòa gen, chết theo chương trình tế bào (apoptosis), đồng thời phải phối hợp GTL hóa trị liệu để nâng cao chất lượng điều trị bệnh ung thư

Ngày đăng: 24/08/2016, 02:44

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan