Đang tải... (xem toàn văn)
vi sinh vật đại cương Download miễn phí s1.downloadmienphi.netfiledownloadfile92041314495.pdf Đối tượng của vi sinh vật học đại cương . ... Giai đoạn vi sinh vật học thực nghiệm với Pasteur . ...... GIỚI THIỆU CHUNG MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP BẢO. Vi sinh đại cương Sinh viên Công nghệ Hoá học ĐH Nông Lâm Tp ... https:sites.google.comast.hcmuaf.edu.vndien...sinh...visinhdaicuong Trang thông tin điện tử của sinh viên Bộ môn Công nghệ Hóa Học Đại học Nông ... Giới thiệu một số kỹ thuật bảo quản VSV ... Báo cáo vi sinh học đại cương ... Vi Sinh đại Cương chọn lọc TaiLieu.VN tailieu.vn › Luận Văn Báo Cáo › Báo cáo khoa học Bài giảng Vi sinh đại cương do GV: Phạm Thị Thúy Nga biên soạn giúp các ... Xin giới thiệu tới các bạn học sinh, sinh viên Đề thi kết thúc học phần Vi sinh đại ... PDFGiáo trình vi sinh Mientayvn.com mientayvn.comSinhTai_lieuLogoGT_vi_sinh.pdf VI SINH ĐẠI CƯƠNG. Ts. Đặng Thị Hoàng Oanh ... Từ khoá: vi sinh vật, vi khuẩn, virút, vi nấm, nguyên sinh động vật,. Vi khuẩn lam, vi sinh vật ... GIỚI THIỆU . GIÁO TRÌNH VI SINH ĐẠI CƯƠNG doc Tài liệu 123doc 123doc.org › Giáo Dục Đào Tạo › Cao đẳng Đại học Vi sinh vật học đại cương, nghiên cứu những quy luật chung nhất về vi sinh vật. ... Thủy Sinh Đại Cương Tác giả: Hứa Thị Phượng Liên Giới Thiệu TRƯỜNG ... Tổng hợp Câu hỏi ôn thi Vi sinh đại cương ( trắc nghiệm ) 123doc.org 123doc.org › Y Tế Sức Khỏe › Y học thưởng thức Tổng hợp Câu hỏi ôn thi Vi sinh đại cương ( trắc nghiệm ) . tăng sinh khối tế bào3 .Vi rút gây nên hiện tượng sinh tanA. VirionB. ... Giới nguyên sinhc. Giới thực ...
MỤC LỤC CHƢƠNG I MỞ ĐẦU VỀ VI SINH VẬT HỌC ĐỐI TƢỢNG VÀ NHIỆM VỤ CỦA VI SINH VẬT HỌC 1.1 Đối tƣợng vi sinh vật học đại cƣơng 1.2 Sự phân bố vi sinh vật 1.3 Vai trò vi sinh vật 1.4 Nhiệm vụ vi sinh vật học đại cƣơng 10 KHÁI LƢỢC VỀ LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN CỦA VI SINH VẬT HỌC 11 2.1 Giai đoạn trƣớc phát minh kính hiển vi 11 2.2 Giai đoạn sau phát minh kính hiển vi (Phát vi sinh vật) 11 2.3 Giai đoạn vi sinh vật học thực nghiệm với Pasteur 12 2.4 Giai đoạn sau Pasteur vi sinh học đại 14 CÁC ĐẶC ĐIỂM CHUNG CỦA VI SINH VẬT 16 3.1.Kích thƣớc nhỏ bé 16 3.2 Hấp thu nhiều, chuyển hoá nhanh 17 3.3 Sinh trƣởng nhanh, phát triển mạnh 17 3.4 Có lực thích ứng mạnh dễ dàng phát sinh biến dị 18 3.5 Phân bố rộng, chủng loại nhiều 19 3.6 Là sinh vật xuất trái đất 19 CHƢƠNG II VI SINH VẬT NHÂN NGUYÊN THỦY 21 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU HÌNH THÁI VÀ CẤU TẠO TẾ BÀO VI SINH VẬT 21 1.1 Kính hiển vi 21 1.1.1 Kính hiển vi quang học 21 1.1.2 Kính hiển vi điện tử 22 1.2 Phƣơng pháp làm tiêu hiển vi 23 1.2.1 Phƣơng pháp làm tiêu soi tƣơi (giọt ép, giọt treo) 23 1.2.2 Phƣơng pháp làm tiêu nhuộm soi kính hiển vi quang học 24 1.2.3 Phƣơng pháp quan sát dƣới kính hiển vi điện tử 25 VI KHUẨN 26 2.1 Hình dạng kích thƣớc 26 2.1.1 Cầu khuẩn (Coccus) 26 2.1.2 Trực khuẩn (Bacillus, Bacterium) 28 2.1.3 Cầu trực khuẩn (Cocco-Bacillus) 30 2.1.4 Phẩy khuẩn (Vibrio) 30 2.1.5 Xoắn thể (Spirillum) 30 2.1.6 Xoắn khuẩn (Spirochaeta) 31 2.2 Cấu tạo tế bào vi khuẩn 32 2.2.1 Thành tế bào (Cell wall) 33 2.2.2 Màng tế bào chất 36 2.2.3 Tế bào chất (Cytoplasm) 38 2.2.4 Mesosom 38 2.2.5 Ribosom 39 2.2.6 Các hạt dự trữ 40 2.2.7 Thể nhân (nuclear body) 41 2.2.8 Bao nhầy (capsula) 43 2.2.9 Tiêm mao (Flagella) nhung mao (pilus hay fimbria) 44 2.2.10 Nha bào hình thành nha bào (spore) 48 MỘT SỐ NHÓM VI KHUẨN ĐẶC BIỆT 52 3.1 Xạ khuẩn 52 3.2 Mycoplasma dạng L vi khuẩn 55 3.3 Rickettsia 56 SỰ SINH SẢN Ở VI KHUẨN 57 4.1 Sinh sản vô tính 57 4.2 Sinh sản hữu tính 57 CHƢƠNG III VI SINH NHÂN THẬT 60 NẤM MEN 60 1.1 Hình thái, cấu tạo nấm men 60 1.1.1 Hình thái, kích thƣớc nấm men 60 1.1.2 Cấu tạo tế bào nấm men 61 1.2 Sinh sản nấm men 69 1.2.1 Sinh sản vô tính 69 1.2.2 Sinh sản hữu tính: Sinh sản bào tử túi 72 1.3 Vai trò nấm men 74 1.4 Phân loại nấm men 75 NẤM MỐC (NẤM SỢI) 75 2.1 Hình thái nấm mốc 75 2.2 Cấu tạo nấm mốc 77 2.2.1 Khuẩn ty 77 2.2.2 Bào tử 83 TẢO 87 3.1 Ngành Tảo đỏ (Rhodophyta) 88 3.2 Nhóm Tảo nâu 89 3.2.1 Ngành Khuê tảo hay Tảo cát (Bacillariophyta) 89 3.2.2 Ngành Tảo giáp (Pyrrophyta) 90 3.2.3 Ngành Tảo nâu (Phaeophyta) 90 3.3 Nhóm Tảo lục 91 3.3.1 Ngành Tảo lục (Chlorophyta) 92 3.3.2 Ngành Tảo vòng (Charophyta) 93 3.3.3 Ngành Euglenophyta (Tảo mắt) 93 CHƢƠNG IV SINH LÝ HỌC VI SINH VẬT 97 DINH DƢỠNG Ở VI SINH VẬT 97 1.1 Thành phần hóa học tế bào vi khuẩn 97 1.1.1 Nƣớc 97 1.1.2 Vật chất khô 98 CÁC KIỂU DINH DƢỠNG Ở VI SINH VẬT 105 2.1 Nhu cầu thức ăn vi sinh vật 105 2.2 Nguồn thức ăn nitơ vi khuẩn 109 2.3 Nguồn thức ăn khoáng vi sinh vật 111 2.4 Nhu cầu chất sinh trƣởng vi sinh vật 113 CƠ CHẾ VẬN CHUYỂN CÁC CHẤT DINH DƢỠNG VÀO TẾ BÀO VI SINH VẬT 114 3.1 Khuếch tán thụ động 115 3.2 Vận chuyển nhờ permease 115 TRAO ĐỔI VẬT CHẤT VÀ NĂNG LƢỢNG 119 4.1 Quá trình trao đổi lƣợng 119 4.1.1 Bản chất hô hấp vi sinh vật 120 4.1.2 Các loại hô hấp 120 4.2 Sự phân giải hợp chất hữu 128 4.2.1 Phân giải hợp chất không chứa Nitơ 128 4.2.2 Phân giải hợp chất hữu chứa Nitơ 139 4.3 Tổng hợp hợp chất hữu 143 4.3.1 Tổng hợp hợp chất hữu có Nitơ 143 4.3.2.Tổng hợp hợp chất hữu không chứa Nitơ 146 SỰ SINH TRƢỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA VI SINH VẬT 147 5.1 Sinh trƣởng, sinh sản phát triển vi khuẩn 147 5.2 Phƣơng pháp nghiên cứu phát triển vi sinh vật 147 5.2.1 Nuôi cấy vi sinh vật 147 5.2.2 Nuôi cấy vi khuẩn 149 5.3 Các phƣơng pháp định lƣợng vi khuẩn 150 5.3.1 Đếm trực tiếp dƣới kính hiển vi 150 5.3.2 Đếm số tế bào sống (khuẩn lạc đĩa thạch) 152 5.3.3 Phƣơng pháp đo độ đục huyền phù vi khuẩn 153 5.4 Lý thuyết phát triển vi khuẩn 155 5.5 Biểu đồ phát triển vi khuẩn 157 5.5.1 Sinh trƣởng phát triển vi khuẩn điều kiện nuôi cấy tĩnh 157 5.5.2 Hiện tƣợng sinh trƣởng kép 160 5.5.3 Sinh trƣởng phát triển vi khuẩn điều kiện nuôi cấy liên tục 161 CHƢƠNG V ẢNH HƢỞNG CỦA CÁC YẾU TỐ MÔI TRƢỜNG ĐẾN SỰ SINH TRƢỞNG CỦA VI SINH VẬT 164 ẢNH HƢỞNG CỦA CÁC TÁC NHÂN VẬT LÝ 164 1.1 Độ ẩm 164 1.2 Nhiệt độ 164 1.2.1 Nhiệt độ thấp 165 1.2.2 Nhiệt độ cao 166 1.3 Áp suất thẩm thấu 167 1.4 Sóng siêu âm 167 1.5 Sức căng bề mặt 168 1.6 Tia xạ 168 1.6.1 Ánh sáng mặt trời 169 1.6.2 Tia tử ngoại (tia cực tím -UV) 169 ẢNH HƢỞNG CỦA CÁC YẾU TỐ HÓA HỌC 170 2.1 Ảnh hƣởng pH môi trƣờng 170 2.2 Thế oxi hóa khử (Eh) 171 2.3 Các chất diệt khuẩn (sát trùng) 172 2.3.1 Phenol 172 2.3.2 Ethanol 172 2.3.3 Các halogen tác dụng độc với vi khuẩn 173 2.3.4 Kim loại nặng 173 ẢNH HƢỞNG CỦA CÁC YẾU TỐ SINH HỌC HAY TƢƠNG TÁC GIỮA VI SINH VẬT VỚI VI SINH VẬT VÀ VỚI VI SINH VẬT KHÁC 175 3.1 Kháng sinh 175 3.1.1 Khái niệm phân loại chất kháng sinh 175 3.1.2 Một số vấn đề kháng sinh 178 - Cơ chế tác động kháng sinh 178 - Hiện tƣợng kháng thuốc vi sinh vật 179 - Cơ chế hình thành tính kháng thuốc vi sinh vật 180 3.2 Tế bào diệt tự nhiên yếu tố hòa tan 182 3.3 Kháng thể 183 3.4 Tiêu độc khử trùng 183 3.4.1 Tiêu độc phƣơng pháp tiêu độc 183 3.4.2 Khử trùng phƣơng pháp khử trùng 184 CHƢƠNG VI DI TRUYỀN HỌC VI SINH VẬT 189 MỘT SỐ KHÁI NIỆM CHUNG 189 CƠ SỞ VẬT CHẤT DI TRUYỀN CỦA VI KHUẨN 190 2.1 ADN nhiễm sắc thể, ARN protein 190 2.1.1 Sao chép (tự sao) 190 2.1.2 Phiên mã 192 2.1.3 Dịch mã 193 2.2 Khái niệm phân loại Plasmid 196 2.3 Biến dị vi khuẩn 198 2.3.1 Sự thích nghi 198 2.3.2 Các loại biến dị 199 VẬN CHUYỂN VÀ TÁI TỔ HỢP THÔNG TIN DI TRUYỀN 203 3.1 Chuyển nạp 204 3.1.1 Những thí nghiệm F Griffith chuyển nạp 1928 205 3.1.2 Thí nghiệm in vitro tƣợng chuyển nạp 206 3.1.3 Bản chất nhân tố chuyển nạp 207 3.1.4 Điều kiện để có chuyển nạp 208 3.1.5 Các giai đoạn trình chuyển nạp 209 3.1.6 Ứng dụng chuyển nạp nghiên cứu di truyền học 211 3.2 Tải nạp 213 3.2.1 Khái niệm phage vi khuẩn vi khuẩn sinh tan 214 3.2.2 Các kiểu tải nạp 218 3.2.3 Cơ chế chung tải nạp 220 3.2.4 Ứng dụng trình tải nạp 220 3.3 Giao nạp (tiếp hợp) 221 3.3.1 Chứng minh có tƣợng lai vi khuẩn 221 3.3.2 Sự phân hóa giới tính 222 3.3.3 Episome plasmid 222 3.3.4 Nhân tố F/ 222 3.3.5 Tái tổ hợp 223 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT DI TRUYỀN TRONG CHẨN ĐOÁN BỆNH TRUYỀN NHIỄM 223 4.1 Quy trình thƣờng quy để chẩn đoán bệnh vi sinh vật 223 4.2 Những trở ngại chẩn đoán vi khuẩn học 224 4.3 Phƣơng pháp nhân ADN (PCR: polymerase chain reaction) 224 CHƢƠNG VII KỸ THUẬT BẢO QUẢN GIỐNG VI SINH VẬT 228 PHIẾU THÔNG TIN VỀ CHỦNG VI SINH VẬT BẢO QUẢN 228 CHỨC NĂNG CỦA BỘ SƢU TẬP VI SINH VẬT 229 MỘT SỐ ĐIỂM LƢU Ý ĐỐI VỚI MỘT BỘ SƢU TẬP GIỐNG VI SINH VẬT 230 3.1 Duy trì khả sống vi sinh vật bảo quản 230 3.2 Quan tâm đến số lƣợng tế bào tiến hành bảo quản 230 3.3 Duy trì đặc tính di truyền ổn định chủng vi sinh vật bảo quản 230 3.4 Tính chủng vi sinh vật bảo quản 230 3.5 Kinh phí cần cho Bộ sƣu tập vi sinh vật 230 3.6 Bảo quản chủng có giá trị 231 3.7 Cung cấp chủng giống cho khách hàng 231 3.8 Cung cấp thông tin liên quan đến chủng bảo quản 231 3.9 Kiểm tra chất lƣợng chủng vi sinh vật bảo quản 232 3.10 Cơ sở liệu Bộ sƣu tập vi sinh vật 232 GIỚI THIỆU CHUNG MỘT SỐ PHƢƠNG PHÁP BẢO QUẢN GIỐNG VI SINH VẬT 232 4.1 Phƣơng pháp cấy truyền vi sinh vật 232 4.2 Phƣơng pháp đông khô vi sinh vật phƣơng pháp đông khô trực tiếp 234 4.2.1 Phƣơng pháp đông khô 234 4.2.2 Phƣơng pháp đông khô dịch thể trực tiếp (L-drying) 235 4.2.3 Phƣơng pháp bảo quản lạnh sâu 236 MỘT SỐ PHƢƠNG PHÁP PHỔ BIẾN SỬ DỤNG TRONG BẢO QUẢN CÁC NHÓM VI SINH VẬT CỤ THỂ 237 5.1 Các phƣơng pháp dùng cho bảo quản vi khuẩn xạ khuẩn 237 5.1.1 Bảo quản vi khuẩn 237 5.1.2 Bảo quản xạ khuẩn: 240 5.2 Bảo quản vi tảo 241 5.3 Các phƣơng pháp dùng cho bảo quản nấm sợi 241 5.4 Phƣơng pháp bảo quản nấm men 247 CHƯƠNG I MỞ ĐẦU VỀ VI SINH VẬT HỌC ĐỐI TƢỢNG VÀ NHIỆM VỤ CỦA VI SINH VẬT HỌC 1.1 Đối tƣợng vi sinh vật học đại cƣơng Xung quanh chúng ta, sinh vật lớn mà nhìn thấy đƣợc, có vi sinh vật nhỏ bé, muốn nhìn thấy chúng phải sử dụng kính hiển vi, ngƣời ta gọi chúng vi sinh vật Môn khoa học nghiên cứu hoạt động sống vi sinh vật đƣợc gọi Vi sinh vật học Vi sinh vật học phát triển nhanh dẫn đến việc hình thành lĩnh vực khác nhau: vi khuẩn học (Bacteriology), nấm học (Mycology), tảo học (Algology) virus học (Virolory), Việc phân chia lĩnh vực dựa vào phƣơng hƣớng ứng dụng Do thấy có y sinh vi sinh vật học, vi sinh vật học thú y, vi sinh vật công nghiệp, vi sinh vật học nông nghiệp Ngay vi sinh vật học nông nghiệp có nhiều chuyên ngành: vi sinh vật lƣơng thực, vi sinh vật thực phẩm, Mỗi lĩnh vực có đối tƣợng cụ thể riêng, cần sâu Tuy nhiên mức độ định chuyên ngành có điểm giống Vi sinh vật học đại cƣơng, nghiên cứu quy luật chung vi sinh vật Đối tƣợng nghiên cứu vi sinh vật học vi khuẩn, xạ khuẩn (Actinomycetes), virus, Bacteriophage (thể thực khuẩn), nấm, tảo, nguyên sinh động vật Vi khuẩn: nhóm vi sinh vật có nhân nguyên thủy, thể đơn bào, sinh sản chủ yếu hình thức trực phân, thể nhỏ bé, muốn quan sát đƣợc phải sử dụng kính hiển vi quang học Virus: sinh vật mà kích thƣớc chúng vô nhỏ bé, ký sinh nội bào tuyệt đối, muốn quan sát chúng phải sử dụng kính hiển vi điện tử Nấm: trƣớc đƣợc coi thực vật bậc thấp nhƣng diệp lục tố, thƣờng đơn bào, có nhóm giả đa bào, thể phân nhiều nhánh nhƣng vách ngăn vách ngăn nhƣng có lỗ thông, thuộc tế bào nhân thật Vi sinh vật có kích thƣớc nhỏ bé có cấu trúc thể tƣơng đối đơn giản nhƣng chúng có tốc độ sinh sôi nẩy nở nhanh chóng hoạt động trao đổi chất vô mạnh mẽ Vi sinh vật phân giải hầu hết tất loại chất có giới, kể chất khó phân giải, chất gây hại đến nhóm sinh vật khác Bên cạnh khả phân giải, vi sinh vật có khả tổng hợp nhiều hợp chất hữu phức tạp, điều kiện nhiệt độ, áp suất bình thƣờng 1.2 Sự phân bố vi sinh vật Vi sinh vật phân bố rộng rãi tự nhiên: đất, nƣớc, không khí, thể sinh vật khác, lƣơng thực, thực phẩm loại hàng hóa Chẳng thế, phân bố chúng theo hệ sinh thái vô phong phú, đa dạng, từ lạnh đến nống, từ chua đến kiềm, từ háo khí đến kị khí, Do phân bố rộng rãi hoạt động mạnh mẽ nên vi sinh vật có tác dụng lớn việc tham gia vòng tuần hoàn vật chất trái đất nhƣ tham gia vào trình sản xuất nông nghiệp Vi sinh vật học đại cƣơng, nghiên cứu quy luật chung vi sinh vật 1.3 Vai trò vi sinh vật Trong thiên nhiên, vi sinh vật giữ mắt xích trọng yếu chu chuyển liên tục bất diệt vật chất, vi sinh vật hay lý mà hoạt động vi sinh vật bị ngừng trệ dù thời gian ngắn, làm ngƣng hoạt động sống trái đất Thật ngƣời ta tính toán vi sinh vật hoạt động để cung cấp CO2 cho khí đến lúc lƣợng CO2 bị cạn kiệt, lúc xanh quang hợp đƣợc, sống loài sinh vật khác không tiến hành bình thƣờng đƣợc, bề mặt trái đất trở nên lạnh lẽo Vi sinh vật nhân tố tham gia vào việc giữ gìn tính bền vững hệ sinh thái tự nhiên Đối với sản xuất nông nghiệp, vi sinh vật có vai trò lớn, vi sinh vật tham gia vào việc phân giải hợp chất hữu cơ, chuyển hóa chất khoáng, cố định nitơ phân tử để làm giàu thêm dự trữ nitơ đất Trong trình sống, vi sinh vật sản sinh nhiều chất có hoạt tính sinh học cao có tác dụng trực tiếp trình sinh trƣởng, phát triển trồng, vật nuôi Ngƣời ta nhận thấy vi sinh vật tiêu thụ sản phẩm trao đổi chất trồng tiết quanh rễ số sản phẩm đầu độc trở lại trồng Trong chăn nuôi ngƣ nghiệp, vi sinh vật có tác dụng to lớn, thể loài động vật có hệ vi sinh vật phong phú, hệ vi sinh vật giúp cho trình đồng hóa chất dinh dƣỡng thải chất cặn bã trình sống Trong chăn nuôi vấn đề lớn làm để phòng chống đƣợc bệnh truyền nhiễm, môn vi sinh vật thú y môn dịch tễ học đề biện pháp phòng dịch bệnh súc vật số bệnh lây sang ngƣời, nhƣ dại, lao, nhiệt thán, Hiện vi sinh vật môn khoa học mũi nhọn cách mạng sinh học Nhiều vấn đề quan trọng sinh học đại nhƣ, nguồn gốc sống, chế thông tin, chế di truyền, chế điều khiển học tổ chức sinh vật học, vi sinh vật học có bƣớc tiến vĩ đại, trở thành vũ khí sắc bén tay ngƣời để nhằm chinh phục thiên nhiên phục vụ đắc lực cho sản xuất đời sống 1.4 Nhiệm vụ vi sinh vật học đại cƣơng - Nghiên cứu đặc điểm hình thái, cấu tạo, di truyền, hoạt động sinh lý hóa học, nhóm vi sinh vật - Sự phân bố vi sinh vật tự nhiên mối quan hệ chúng với môi trƣờng sinh vật khác - Nghiên cứu biện pháp thích hợp để sử dụng cách có hiệu vi sinh vật có lợi nhƣ biện pháp tích cực nhằm ngăn ngừa vi sinh vật có hại hoạt động đời sống ngƣời 10 Hình 7.2 Đông khô vi sinh vật 4.2.2 Phƣơng pháp đông khô dịch thể trực tiếp (L-drying) Ngoài phƣơng pháp đông khô nhƣ mô tả trên, có phƣơng pháp đông khô trực tiếp Khác biệt với phƣơng pháp chỗ dịch huyền phù vi sinh vật đƣợc làm khô nhanh chế độ chân không thích hợp mà mẫu không cần làm lạnh từ trƣớc Phƣơng pháp đặc biệt có ý nghĩa nhóm vi khuẩn khả sống nhiệt độ thấp giai đoạn tiền đông Các thông số quan trọng cần đƣợc quan tâm thực phƣơng pháp là: - Tuổi vi sinh vật bảo quản - Thành phần dịch huyền phù tế bào vi sinh vật - Tốc độ đông khô - Nhiệt độ đông khô thấp - Khoảng thời gian làm khô mẫu độ ẩm cuối mẫu Phƣơng pháp nhanh thuận lợi cho đợt bảo quản số lƣợng lớn mẫu Thông thƣờng theo phƣơng pháp vi sinh vật đƣợc bảo quản từ 10-20 năm Nói chung hai phƣơng pháp có nhiều ƣu điểm so với phƣơng pháp trƣớc nhƣ thời gian bảo quản lâu, tiết kiệm đƣợc công sức sai sót nhãn mác tạp nhiễm 235 Tuy nhiên, nhƣợc điểm lớn phƣơng pháp giá thành thiết bị Độ ổn định chủng vi sinh vật bảo quản theo đợt đông khô khác Hơn chủng trƣớc đem sử dụng phải đƣợc hoạt hoá môi trƣờng thích hợp số lần để phục hồi đặc tính sinh học 4.2.3 Phƣơng pháp bảo quản lạnh sâu Đối với phƣơng pháp bảo quản lạnh sâu vi sinh vật đƣợc bảo quản môi trƣờng dịch thể nƣớc cần cho hoạt động sống vi sinh vật bị bất hoạt nhiệt độ lạnh sâu (-196°C -> -80 °C) Hình 7.3 Bảo quản lạnh sâu Đặc biệt với phƣơng pháp bảo quản lạnh sâu nitơ lỏng phƣơng pháp vạn Phƣơng pháp thích hợp với nhiều đối tƣợng vi sinh vật khác nhƣ vi khuẩn, nấm sợi, nấm men, virut, tảo dòng tế bào động vật Tuy nhiên, phƣơng pháp bộc lộ số nhƣợc điểm nhƣ đầu tƣ kinh phí cho thiết bị điện, nitơ lỏng rủi ro nhƣ cháy nổ Đặc biệt phƣơng pháp không thích hợp với chủng vi sinh vật thƣờng xuyên dùng đến Nói chung phƣơng pháp thƣờng đƣợc dùng với chủng vi sinh vật có đặc tính quí mà không thích hợp với phƣơng pháp đông khô 236 Hình 7.4 Bảo quản nitơ lỏng MỘT SỐ PHƢƠNG PHÁP PHỔ BIẾN SỬ DỤNG TRONG BẢO QUẢN CÁC NHÓM VI SINH VẬT CỤ THỂ 5.1 Các phƣơng pháp dùng cho bảo quản vi khuẩn xạ khuẩn 5.1.1 Bảo quản vi khuẩn a Phƣơng pháp đông khô (Freeze drying/ lyophilization) Đây phƣơng pháp phổ biến đƣợc sử dụng bảo tàng vi sinh vật giới Phƣơng pháp đông khô hạn chế đƣợc thay đổi đặc tính vi sinh vật bảo quản đƣợc thời gian dài Phƣơng pháp đông khô đƣợc trình bày phƣơng pháp đƣợc dùng NCTC (National Colleciton Type Culture, Anh) * Nuôi vi khuẩn cho đông khô: Vi khuẩn đƣợc cấy môi trƣờng ống thạch nghiêng thích hợp Tuy nhiên, chuẩn bị dịch vi khuẩn môi trƣờng dịch thể nhƣng phải làm đậm đặc tế bào li tâm Tuổi tế bào quan trọng thƣờng chọn tế bào nằm pha sinh trƣởng log * Chuẩn bị đệm mẫu: Có thể dùng hai loại đệm sau: 237 + Đệm huyết thanh- inositol; Meso-inositol: gam Huyết ngựa (số 3): 100 ml Thanh trùng phƣơng pháp lọc vi khuẩn, sau phân 5ml vào bình vô trùng + Đệm inositol: Môi trƣờng dinh dƣỡng bột số 2: 2.5 gam Meso-inositol: gam Nƣớc cất: đủ 100 ml Phân ml vào bình khử trùng nhiệt độ 121OC * Chuẩn bị dịch tế bào: Mật độ tế bào có ý nghĩa quan trọng chất lƣợng bảo quản Thông thƣờng thu sinh khối từ ống thạch nghiêng dùng cho 1-2 ml đệm pha mẫu để tạo dịch huyền phù tế bào Mật độ vi khuẩn thông thƣờng cần đạt 1010 (đối với vi sinh vật bào tử) Mật độ giảm với vi sinh vật có bào tử Hai đệm pha mẫu dùng với vi khuẩn nhƣng trƣờng hợp enterobacteria không dùng đệm huyết gây thay đổi đặc tính miễn dịch vi khuẩn * Chuẩn bị ống đông khô: Ống đông khô đƣợc rửa sau ngâm qua đệm với dịch acid loãng (HCl 2%) lại đƣợc rửa sạch, làm khô chuẩn bị nút bông, ống đƣợc trùng khô khử trùng theo phƣơng pháp thông thƣờng * Chuẩn bị mẫu trƣớc đông khô: Lƣợng dịch huyền phù vi khuẩn đƣợc đƣa cẩn thận pipet pasteur vào ống đông khô khoảng 0.1- 0.2 ml Chú ý thao tác phải cẩn thận tránh dính mẫu vào thành hay phía ống đông khô * Bƣớc tiền đông khô: Mục tiêu bƣớc làm bay hết nƣớc bị lạnh đông tạo đá Trƣớc tiến hành đông khô mẫu đƣợc chuẩn bị qua bƣớc tiền đông (nhƣ trình bày trên) sau bƣớc tiền đông khô tiến hành mẫu đƣợc lắp vào hệ thống đông khô trình làm nƣớc điều kiện lạnh đƣợc tiến hành khoảng 238 * Tạo chỗ thắt ống đông khô: Sau bƣớc tiền đông khô, yêu cầu phải tạo vết thắt Việc tạo vết thắt đƣợc thực với hệ thống đèn hàn Tuy nhiên, sở bảo quản vi sinh vật sử dụng hệ thống hàn tạo vết thắt thiết bị tự động * Hậu đông khô: Trong bƣớc mẫu lại tiếp tục đƣợc làm khô độ ẩm cuối đạt khoảng 1% Thời gian cho bƣớc thay đổi từ 1-2 * Hàn ống đông khô: Việc hàn ống trực tiếp thiết bị đông khô (manifold) cần có kinh nghiệm cẩn thận Trƣớc hết phải tiến hành khoá van sau thực thao tác hàn ống đông khô * Kiểm tra độ chân không ống đông khô: Ngƣời ta sử dụng thiết bị đèn phát mức độ chân không Với mẫu đạt độ chân không cần thiết xuất màu xanh tím nhạt Đối với mẫu không đạt tiêu chuẩn tín hiệu màu tím đậm * Kiểm tra khả sống mẫu: Đếm số lƣợng tế bào phƣơng pháp chủ yếu để đánh giá chất lƣợng bảo quản Việc đếm đƣợc thực trƣớc sau đông khô Các bƣớc kiểm tra đƣợc thực sau năm để đánh giá chất lƣợng mẫu đông khô Nói chung khả sống vi sinh vật có bào tử cao vi sinh vật bào tử loại gram dƣơng cao vi sinh vật gram âm Tuy nhiên, với vi sinh vật kỵ khí yêu cầu phải đƣợc tiến hành theo qui trình, tránh vi sinh vật tiếp xúc với oxy * Bảo quản mẫu: Mẫu thông thƣờng đƣợc bảo quản 4OC hay nhiệt độ phòng b Phƣơng pháp giữ lạnh sâu - Chuẩn bị tế bào cho lạnh sâu: Tế bào đƣợc nuôi cấy môi trƣờng nhiệt độ thích hợp đầu pha log 239 - Pha dịch tế bào với glycerol DMSO trùng trƣớc để đạt nồng độ cuối 10% mật độ tế bào 106 - Dịch huyền phù tế bào đƣợc đƣa vào ống lạnh sâu đóng nắp (trong trƣờng hợp hàn ống thuỷ tinh, cần để dịch xanh metylene 0.05% để phát ống bị rò rỉ) Toàn mẫu để nhiệt độ phòng 30 phút cân áp suất thẩm thấu tế bào Trong trƣờng hợp có nitơ lỏng mẫu đƣợc chuyển sang bình nitơ lỏng Mẫu đƣa vào lạnh sâu cần theo tốc độ định Thông thƣờng tốc độ lạnh dao động 1-3 OC/phút để đạt tới nhiệt độ -30OC ban đầu Sau mẫu đƣợc làm lạnh tiếp với tốc độ cao 10-15 OC/phút để đạt tới nhiệt độ lạnh cần thiết (-100OC đến -80 OC) Hiện nay, có thiết bị làm lạnh sâu đƣợc chƣơng trình hoá với tốc độ mong muốn Tuy nhiên, đơn giản mẫu ban đầu đƣợc đặt đá khô sau lại đƣa vào tủ lạnh sâu đặt thời gian vài để đạt nhiệt độ -65OC - Hoạt hoá mẫu: mẫu lạnh (lạnh sâu hay nitơ lỏng) đƣợc hoạt hoá cách làm tan nhanh tới mức (thông thƣờng đƣa vào tủ ấm 37 OC 40-60 giây) Nhƣ vậy, theo cách đạt đƣợc khả sống 95% tế bào sau 10 năm bảo quản c Một số phƣơng pháp bảo quản khác: Bảo quản gelatin silicagel 5.1.2 Bảo quản xạ khuẩn: Xạ khuẩn mang đặc tính vi khuẩn nấm sợi (có sợi bào tử) cần có phƣơng pháp bảo quản thích hợp Thông thƣờng xạ khuẩn đƣợc bảo quản theo cách thông thƣờng nhƣ cấy truyền, đông khô lạnh sâu nhƣ với vi khuẩn Tuy nhiên, có phƣơng pháp kinh tế mà đảm bảo chất lƣợng chủng bảo quản mà trình bày đây, phƣơng pháp bảo quản đất Các bƣớc tiến hành bảo quản đất: - Chuẩn bị đất: lấy đất vƣờn làm khô 150 OC để làm chết vi sinh vật có bào tử trứng giun có Đất sau trùng đƣợc nghiền nhỏ qua lƣới có kích thƣớc 30 mesh Đất sau nghiền đƣợc đƣa vào ống nghiệm chuẩn bị nút trùng 240 60 phút Trƣớc tiến hành bảo quản phải kiểm tra nhiễm khuẩn đất cách cấy vòng que cấy đất từ ống nghiệm đặt vào môi trƣờng giàu dinh dƣỡng cho vi khuẩn giữ 24 OC, 28 OC 37 O C, kiểm tra sau 2-4 ngày - Chuẩn bị dịch huyền phù xạ khuẩn Nƣớc cất vô trùng đƣợc dùng để tạo dịch huyền phù xạ khuẩn (hay bào tử xạ khuẩn) từ ống thạch nghiêng Lấy ml dịch huyền phù cho vào ống nghiệm để khô nhiệt độ phòng (24OC) thời gian tháng Đập nhẹ vào thành ống cho hạt tách bảo quản mẫu 4OC - Hoạt hoá mẫu đơn giản cách lấy vòng que cấy mẫu đƣa lên môi trƣờng (thạch dịch thể) để nhiệt độ thích hợp 5.2 Bảo quản vi tảo Vi tảo thông thƣờng đƣợc bảo quản theo phƣơng pháp: Cấy truyền, lạnh sâu đông khô Các phƣơng pháp đƣợc trình bày chi tiết phần vi khuẩn Một số điểm cần ý bảo quản vi tảo chỗ: Nên dùng tế bào già pha cân bằng, phƣơng pháp lạnh sâu cho kết tốt phƣơng pháp đông khô 5.3 Các phƣơng pháp dùng cho bảo quản nấm sợi a Phƣơng pháp cấy truyền: Phƣơng pháp thƣờng đƣợc ứng dụng với sợi nấm có bào tử Các chủng nấm sợi đƣợc nuôi môi trƣờng thạch thích hợp sợi nấm phát triển đến mức độ cực đại, sau trình hình thành bào tử, ống giống đƣợc bảo quản theo cách khác nhau: - Các ống thạch đƣợc để tủ lạnh (4-7 OC) - Bảo quản thạch dƣới lớp dầu: Các ống thạch đƣợc bảo quản dƣới lớp dầu parafin có tỷ trọng tƣơng đối 0.83- 0.89 đƣợc khử trùng nhiệt độ 121 OC 15 phút Lớp dầu cách bề mặt thạch khoảng cm Nhiệt độ bảo quản 15-20 OC - Bảo quản nƣớc, nấm sợi đƣợc nuôi môi trƣờng thạch đĩa Sau sợi phát triển cực đại cắt thành miếng nhỏ kích thƣớc khoảng mm2 cho vào lọ nƣớc trùng Bảo quản nhiệt độ phòng b Bảo quản nấm sợi có bào tử silicagel: 241 Chuẩn bị: - Lọ đựng silicagel (10-15ml) có nắp chịu nhiệt (sắt hay nhựa) trùng nhiệt độ 170 OC - Silicagel: Loại suốt, màu, kích thƣớc số lƣợng hạt silicagel đƣa vào không 1/3 thể tích lọ, trùng nhiệt độ 170 °C - Môi trƣờng sữa tách bơ (Skimmilk) 20% khử trùng ƣớt O (115 C/20 phút) - Ống thạch nghiêng (có thể đĩa petri) chứa bào tử nấm sợi, tuỳ theo chủng, môi trƣờng nuôi cấy mà thời gian thu bào tử thích hợp khác (10-15 ngày) Cách tiến hành: - Dùng pipet pasteur lấy khoảng 3-4 ml sữa trùng cho vào ống nghiệm chứa bào tử nấm sợi, dùng que cấy tạo dịch huyền phù bào tử có mật độ cao (đối với số chủng có số lƣợng bào tử thấp tạo dịch bào tử từ vài ống thạch bào tử khác nhau) - Dùng pipet pasteur lấy dịch bào tử cho vào lọ đựng silicagel Chú ý silicagel hút nƣớc sinh nhiệt việc đƣa dịch bào tử vào phải đƣợc thực chậu nƣớc đá Lƣợng dịch bào tử đƣa vào không vƣợt 1/3 thể tích hạt silicagel lọ Sau dùng tay lắc đảm bảo hạt silicagel dính dịch bào tử nấm sợi Dán nhãn, ghi thông tin cần thiết nhƣ số mã chủng, ngày bảo quản, môi trƣờng nhiệt độ thích hợp - Lọ silicagel đƣợc đậy nắp cẩn thận nhƣng không vặn chặt (nới 1,5 vòng) sau giữ bình hút ẩm (độ ẩm 35-40%), 25OC tuần Vặn chặt nút quấn giấy parafil giữ 4OC -Kiểm tra độ sống sót sau bảo quản: -Mẫu silicagel °C, dùng que cấy vô trùng lấy hạt silicagel để mặt thạch môi trƣờng mầm thóc (Maltagar), lắc cho hạt silicagel tiếp xúc lên mặt môi trƣờng Để nhiệt độ thích hợp, kiểm tra tra khuẩn lạc nấm theo thời gian thích hợp c -Bảo quản nấm sợi có bào tử theo phƣơng pháp đông khô (freez-drying): Chuẩn bị: 242 - Ống đông khô rửa (sonic cleaner) 15 phút sau khử trùng 170OC - Môi trƣờng sữa tách bơ (Skimmilk) 20% khử trùng ƣớt (115OC/20 phút) - Ống thạch nghiêng (có thể đĩa petri) chứa bào tử nấm sợi, tuỳ theo chủng môi trƣờng nuôi cấy mà thời gian thu bào tử thích hợp khác (10-15 ngày) -Cách tiến hành: - Dùng pipet pasteur lấy khoảng 3-4 ml sữa trùng cho vào ống nghiệm chứa bào tử nấm sợi, dùng que cấy tạo dịch huyền phù bào tử có mật độ cao (đối với số chủng có số lƣợng bào tử thấp tạo dịch bào tử từ vài ống thạch bào tử khác nhau) - Dùng pipet pasteur lấy dịch bào tử cho vào ống đông khô (0,2 0,3 ml), thông thƣờng chuẩn bị 13 ống cho chủng Dán nhãn, ghi thông tin cần thiết nhƣ mã số chủng, ngày bảo quản, môi trƣờng nhiệt độ thích hợp Sau đậy nút hay giấy bạc - Giữ -80°C trƣớc tiến hành đông khô, đồng thời bật máy Dura-Stop, nhiệt độ đạt -40OC, đƣa mẫu vào tủ đông khô Dura-Stop, bật máy Dura-Dry, mức độ chân không đạt 45 minitor, nhiệt độ -55OC, tăng nhiệt độ Dura-Stop lên -5OC, để qua đêm - Tăng nhiệt độ Dura-Stop lên 25°C, đạt nhiệt độ cần thiết, tắt máy hút chân không nhƣng không tắt Dura-Dry - Tắt Dura-Stop, lần lƣợt nối tube mẫu vào hệ thống manifold, bật máy Dura-Dry, tiến hành hàn ống độ chân không đạt 45-48 minitor, nhiệt độ -55OC Chú ý: Trong trƣờng hợp dùng Dura-Dry đƣợc thực nhƣ sau: - Tiến hành bƣớc 1,2,3,4 nhƣ - Mẫu đƣợc để tiền đông khô -80°C Bật máy DuraDry, đạt nhiệt độ -60oC đến -55oC, độ chân không 45 minitor, gắn ống mẫu với hệ thống manifold tiến hành hàn ống độ chân không đạt 45-48 minitor, nhiệt độ -55oC Kiểm tra độ sống sót sau đông khô: - Mở ống đông khô cách đốt nóng đầu hàn đèn cồn làm lạnh đột ngột cồn đốt 243 - Dùng pipet pasteur lấy khoảng 1ml nƣớc cất vô trùng từ ống nghiệm chứa 9,8 ml nƣớc cất vô trùng làm tan mẫu đông khô Hút toàn dịch huyền phù sang ống nghiệm chứa 9,8 ml nƣớc cất Trộn nhỏ vào vị trí khác (mỗi vị trí giọt) môi trƣờng thạch đĩa thích hợp nghiêng cho dịch chảy dọc theo hƣớng nhƣ hình vẽ: Hình 7.5 PP kiểm tra độ sống sót vi sinh vật sau đông khô - Sau đậy nắp đĩa, bao quanh parafil để nhiệt độ thích hợp - Cách đánh giá: Rất tốt: ≥ 100 khuẩn lạc Khá: 50 – 100 khuẩn lạc Trung bình: 10-50 khuẩn lạc Kém: < 10 khuẩn lạc Không mọc Bảo quản đƣợc thực với mẫu từ trở lên Tuy nhiên, có số nấm sợi mà khuẩn lạc mọc tràn lan đánh giá nhƣ sau: Nếu khuẩn lạc mọc khắp bề mặt đĩa tốt Mẻ đông khô thành công nhƣ số khuẩn lạc mọc chiếm nửa bề mặt môi trƣờng đĩa petri Các mẫu có số lƣợng khuẩn lạc mọc dƣới mức phải làm tăng mật độ bào tử trƣớc đông khô nhƣ thay đổi môi trƣờng sinh bào tử, chuẩn bị dịch huyền phù bào tử từ 3-4 ống nghiệm bào tử nấm sợi d Bảo quản nấm sợi phƣơng pháp đông khô trực tiếp: 244 Phƣơng pháp đông khô trực tiếp thực tƣơng tự nhƣ phƣơng pháp đông khô trình bày đƣợc thực nhƣ sau: Chuẩn bị: - Ống đông khô rửa (sonic cleaner) 15 phút sau khử trùng 170oC - Môi trƣờng L-drying chuẩn có thành phần nhƣ sau: Đệm phosphat: 0.1M : 100 ml Monosodium glutamat: g Adonitol: 1.5 g (Khử trùng 115oC/20 phút) - Ống thạch nghiêng (có thể đĩa petri) chứa bào tử nấm sợi, tuỳ theo chủng môi trƣờng nuôi cấy mà thời gian thu bào tử thích hợp khác (10-15 ngày) Cách tiến hành: - Dùng pipet pasteur lấy khoảng 3-4 ml môi trƣờng trùng cho vào ống nghiệm chứa bào tử nấm sợi, dùng que cấy tạo dịch huyền phù bào tử nấm có mật độ cao (đối với số chủng có số lƣợng bào tử thấp tạo dịch bào tử từ vài ống thạch bào tử khác nhau) - Dùng pipet pasteur lấy dịch bào tử cho vào ống đông khô (0,2 ml), thông thƣờng chuẩn bị 13 ống cho chủng, dán nhãn, ghi thông tin cần thiết nhƣ số mã chủng, ngày bảo quản, môi trƣờng nhiệt độ thích hợp Sau đậy nút hay giấy bạc - Đồng thời bật máy Dura-Dry, mức độ chân không đạt 45 minitor, nhiệt độ -75oC, lần lƣợt nối ampoule mẫu vào hệ thống manifold (chú ý khoá van chân không nối ampoule mẫu với tube manifold sau lại mở ra, để đảm bảo độ chân không cần thiết làm đông khô phải lần lƣợt đƣa mẫu vào tín hiệu đèn thị cho phép) Khi độ chân không đạt 45-48 minitor, nhiệt độ -55oC tiến hành trình làm khô - Hàn kín ampoule mẫu: -Khi máy cô Dura-Dry chạy để đảm bảo độ chân không cần thiết, lần lƣợt khoá van cho ampoule mẫu tiến hành hàn với mẫu vị trí ống bị thắt Dùng lửa gas để đốt nóng phần ống 245 thắt cho phía xoay cho thuỷ tinh chảy bịt kín ống Sau dùng lửa gas để cắt rời phần (nối với manifold) phần dƣới chứa mẫu Hết đợt lại khoá van ampoule mẫu hàn lần lƣợt nhƣ Kiểm tra chất lƣợng sau bảo quản: - Để kiểm tra độ sống sót mẫu nấm sợi bảo quản, thực theo cách đƣợc mô tả phần đông khô - Kiểm tra độ chủng: mẫu đƣợc cấy môi trƣờng thích hợp quan sát hình thái đặc điểm sinh học đặc trƣng cần thiết để đánh giá khả tạp nhiễm đặc tính sinh học - Thí nghiệm đánh giá nhanh thời gian bảo quản: mẫu sau đông khô trực tiếp đƣợc giữ 37oC tuần Độ sống sót mẫu bảo quản giảm tuần 37oC tƣơng đƣơng với bảo quản 10 năm 4oC e Bảo quản nấm sợi phƣơng pháp lạnh sâu -80 oC nitơ lỏng (-196 oC): Chuẩn bị: - Chuẩn bị dung dịch glycerol 10% (3 ml ống nghiệm) khử trùng 121 oC 15 phút Ống nhựa nút xoáy (2 ml), rửa sonic cleaner, khử trùng 170 oC - Chuẩn bị mẫu nấm sợi môi trƣờng thạch đĩa có lƣợng bào tử lớn Cách tiến hành: - Dùng pipet pasteur hút khoảng 0,3 ml glycerol trùng vào ống nhựa đựng mẫu Sau dùng dao vô trùng cắt lấy miếng nhỏ môi trƣờng chứa sợi bào tử nấm sợi cho vào ống nhựa Lƣợng glycerol đủ để phủ lên miếng thạch mẫu, đậy nút bao băng parafil sau dán nhãn - Mẫu trƣớc tiên phải để 5oC (tạo điều kiện cho glycerol vào tế bào), sau đƣợc làm lạnh sâu tử 25oC xuống -55oC với tốc độ 1oC/phút Trong trƣờng hợp thiết bị làm lạnh để 20oC giờ, sau chuyển sang -80oC hay nitơ lỏng (-196oC) Chú ý: Việc bảo quản theo phƣơng pháp lạnh sâu thích hợp với hầu hết nấm sợi sinh bào tử tế bào có vách ngăn Nhƣng phƣơng pháp tỏ không thích hợp với nấm sợi không sinh bào tử 246 vách ngăn Trong trƣờng hợp cần nuôi cấy nấm sợi môi trƣờng thích hợp để tạo bào tử Nếu không khắc phục đƣợc phải tiến hành nuôi môi trƣờng dịch thể để thu lấy sinh khối giữ glycerol 10% nhƣ Đánh giá khả sống mẫu bảo quản: - Làm tan mẫu (mẫu lấy từ tủ lạnh sâu -80oC nitơ lỏng o 196 C) bể ổn nhiệt 37oC phút - Dùng que cấy lấy miếng môi trƣờng thạch đặt vào vị trí khác môi trƣờng thạch đĩa thích hợp Để nhiệt độ thích hợp xem khả mọc sau thời gian thích hợp (2-4 ngày) Chú ý lấy mẫu cần lấy sợi nấm để đƣa vào môi trƣờng thạch đĩa Một số điều ý bảo quản nấm sợi: - Ảnh hƣởng ánh sáng với trình hình thành bào tử: Phần lớn trƣờng hợp thành công phƣơng pháp bảo quản phụ thuộc vào số lƣợng bào tử Ánh sáng tác nhân quan trọng trình hình thành bào tử nấm sợi, ánh sáng có bƣớc sóng ngắn có tác dụng kích thích trình hình thành bào tử, ánh sáng gần vùng cực tím (3100 – 4000 nm) có tác dụng thay đổi màu sắc kích thƣớc khuẩn lạc - Thành phần môi trƣờng: Nói chung môi trƣờng có thành phần dinh dƣỡng nghèo thƣờng cho lƣợng bào tử lớn - Tránh nhiễm tạp mạt (mite), chủng nấm sợi lƣu giữ thƣờng bị mạt phá hoại Đầu tiên chúng ăn chủng giống làm hỏng, sau gây tạp nhiễm mang bào tử vi khuẩn thể từ ống sang ống khác Vì lý mà cần có biện pháp hạn chế mạt, thông thƣờng chủng giống phải đƣợc bảo quản nơi sạch, nhiệt độ 4-8oC 5.4 Phƣơng pháp bảo quản nấm men Tƣơng tự nhƣ nấm sợi, có nhiều phƣơng pháp bảo quản nấm men Chúng đề cập đến phƣơng pháp thông dụng đƣợc sử dụng sƣu tập nấm men lớn giới a Phƣơng pháp cấy truyền: Cấy truyền phƣơng pháp đơn giản, nhanh rẻ tiền nhƣ thông dụng nhất, nhiên hạn chế phƣơng pháp dễ tạp nhiễm nhƣ thay đổi đặc điểm sinh học, tính trạng di truyền bất lợi bảo quản theo phƣơng pháp Cấy truyền môi trƣờng dịch thể: 247 - Cách tiến hành đơn giản chuẩn bị 10 ml môi trƣờng nuôi cấy nấm men (thông thƣờng môi trƣờng YM Yeast extract – Maltose) lọ McCartney khử trùng nhiệt độ 121oC 15 phút Thƣờng làm lọ cho chủng bảo quản - Một vòng que cấy chủng nấm men bảo quản đƣợc đƣa vào môi trƣờng thao tác vô trùng giữ 25oC 72 Phải kiểm tra phát triển chủng bảo quản - Sau mẫu đƣợc giữ 4oC - Thông thƣờng theo cách thời gian bảo quản chủng thƣờng thay đổi từ 2- tháng Cấy truyền môi trƣờng thạch: Cấy truyền môi trƣờng thạch tƣơng tự nhƣ môi trƣờng dịch thể nhƣng môi trƣờng đƣợc bổ sung thạch (1.6%) Giống sau cấy đƣợc giữ 72 nhiệt độ thích hợp để đạt độ phát triển cần thiết, sau đƣợc để 4-8oC Theo phƣơng pháp giống có thời gian sống lâu phƣơng pháp cấy truyền dịch thể, thông thƣờng giống đƣợc bảo quản từ 3-6 tháng Thời gian bảo quản đƣợc kéo dài từ 2-3 năm nhƣ ống giống đƣợc bảo quản dầu parafin trùng đƣợc đổ lên môi trƣờng thạch cho tạo lớp dày khoảng 1cm b Phƣơng pháp bảo quản lạnh sâu đông khô (xem phần phƣơng pháp dùng cho bảo quản vi khuẩn xạ khuẩn) Tóm tắt Các vi sinh vật sinh trƣởng phát triển môi trƣờng, chịu tác động nhân tố môi trƣờng, đặc tính sinh lý chung dễ dàng bị biến đổi Các phƣơng pháp bảo quản chủng giống vi sinh vật nhằm mục đích lƣu trữ giống vi sinh vật phân lập đƣợc, giống vi sinh vật có đặc tính quý giống vi sinh vật quan tâm Mục tiêu phƣơng pháp bảo quản kéo dài tuổi thọ vi sinh vật nhƣng không làm thay đổi làm thay đổi tính chất chúng Câu hỏi ôn tập Trình bày phƣơng pháp bảo quản giống vi khuẩn? 2, Trình bày phƣơng pháp bảo quản giống nấm mốc 248 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyền, Phạm Văn Ty Vi sinh vật học Nhà xuất Giáo dục 1998 Nguyễn Thành Đạt Cơ sở học Vi sinh vật Nhà xuất Đại học Sƣ phạm 2002 Phạm Thành Hổ Sinh học đại cƣơng Nhà xuất Đại học quốc gia thành phố Hồ Chí Minh.2002 Biền Văn Minh, Phạm Văn Ty, Kiều Hữu ảnh, Phạm Hồng Sơn, Phạm Ngọc Lan, Nguyễn Thị Thu Thủy Giáo trình vi sinh vật học Nhà xuất Đại học Huế 2006 Trần Linh Thƣớc Phƣơng pháp phân tích vi sinh vật nƣớc, thực phẩm mỹ phẩm Nhà xuất Giáo dục 2002 249