BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ CÂY ME RỪNG PHYLLANTHUS EMBLICA Giảng viên hướng dẫn : TS Nguyễn Thị Ánh Tuyết Sinh viên thực : Nguyễn Ngọc Tín Mã số sinh viên : K38.201.124 Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA HĨA HỌC  KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ CÂY ME RỪNG PHYLLANTHUS EMBLICA Giảng viên hướng dẫn : TS Nguyễn Thị Ánh Tuyết Sinh viên thực : Nguyễn Ngọc Tín Mã số sinh viên : K38.201.124 Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2016 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu thực phịng thí nghiệm Hợp chất thiên nhiên, khoa Hóa học, trường Đại học Sư phạm thành phố Hồ Chí Minh Em xin chân thành cảm ơn Nguyễn Thị Ánh Tuyết tận tình hướng dẫn giúp đỡ em trình thực khóa luận tốt nghiệp Cơ khơng hỗ trợ cho em mặt kiến thức khoa học kỹ mà truyền cho em niềm đam mê nghiên cứu khoa học Đó hành trang quý báu cho em bước đường tương lai sau Em xin hết lịng cảm ơn q Thầy Cơ phịng hợp chất thiên nhiên nói riêng Thầy Cơ khoa Hóa học – trường Đại học Sư phạm thành phố Hồ Chí Minh nói chung Các Thầy Cơ tận tình hướng dẫn, giảng dạy, truyền thụ cho em nhiều kiến thức khoa học quý báu suốt thời gian em học trường Em xin gửi lời cảm ơn đến bạn phịng thí nghiệm Hợp chất thiên nhiên Trường đại học Sư phạm thành phố Hồ Chí Minh tận tình trao đổi kinh nghiệm quý báu tạo điều kiện giúp đỡ em suốt q trình thực đề tài Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1.ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT CỦA CÂY ME RỪNG 1.1.1 Mô tả chung 1.1.2 Vùng phân bố 1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ DƯỢC TÍNH 1.2.1 Dược tính theo y học cổ truyền 1.2.2 Nghiên cứu dược tính 1.3 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 14 2.1 HÓA CHẤT, THIẾT BỊ, PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 14 2.1.1 Hóa chất 14 2.1.2 Thiết bị 14 2.1.3 Phương pháp tiến hành 14 2.2 NGUYÊN LIỆU 15 2.2.1 Thu hái nguyên liệu 15 2.2.2 Xử lí mẫu nguyên liệu 15 2.3 ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO 15 2.4 CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG CAO HEXANE 16 2.4.1 Sắc ký cột silica gel cao hexane 16 2.4.2 Sắc ký cột phân đoạn H2 bảng 2.1 17 2.4.3 Sắc ký cột phân đoạn H2.4 bảng 2.2 17 2.5 CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG CAO ETHYL ACETATE 18 2.5.1 Sắc ký cột silica gel cao ethyl acetate 18 2.5.2 Sắc ký cột phân đoạn EA4 bảng 2.4 19 2.5.3 Sắc ký cột phân đoạn EA4.1 bảng 2.5 19 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT PEATC1 21 3.2 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT PHTC2 22 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 24 4.1 KẾT LUẬN 24 4.2 ĐỀ XUẤT 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết tắt H-NMR 13 C-NMR HSQC Tiếng Anh Proton (1) Nuclear Magnetic Resonance Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance Heteronuclear Single Quantum Correlation HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coherence s d t dd m δ J ppm RP-18 UV Rf EA C DCM Me H AcOH Ac Glu SKC SKLM g mg MHz Hz Singlet Doublet Triplet Double of doublet Multiplet Chemical shift Coupling constant Part per million Reversed Phase-18 Ultra Violet Retention factor Ethyl Acetate Chloroform Dichloromethane Methanol n-Hexane Acetic acid Acetone Glucopyranosyl gam miligam Mega Hertz Hertz Tiếng Việt Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1) Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon (13) Phổ tương tác dị hạt nhân qua liên kết Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết Mũi đơn Mũi đôi Mũi ba Mũi đôi đôi Mũi đa Độ chuyển dịch hoá học Hằng số ghép spin Một phần triệu Pha đảo C-18 Tia cực tím Etyl acetat Cloroform Diclorometan Metanol Hexan Axit axetic Aceton Glucopyranosyl Sắc ký cột Sắc ký lớp mỏng Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số hợp chất cô lập từ me rừng Phyllanthus Emblica Linn Bảng 2.1 Sắc kí cột silica gel cao hexane 15 Bảng 2.2 Sắc kí cột silica gel phân đoạn H2 16 Bảng 2.3 Sắc kí cột silica gel phân đoạn H2.4 16 Bảng 2.4 Sắc kí cột silica gel cao ethyl acetate 18 Bảng 2.5 Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA4 18 Bảng 2.6 Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA4.1 19 Bảng 3.1 Dữ liệu phổ NMR hợp chất PEATC1 21 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR hợp chất PHTC2 24 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1 Quy trình điều chế cao hexane ethyl acetate 15 Sơ đồ 2.2 Quy trình lập hợp chất PHTC2 17 Sơ đồ 2.3 Quy trình lập hợp chất PEATC1 19 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Lá me rừng .2 Hình 1.2 Quả me rừng Hình 3.1 Một số tương quan HMBC hợp chất PHTC2 23 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC Phụ lục Phổ 1H-NMR (Acetone-d ) hợp chất PEATC1 Phụ lục Phổ 13C-NMR (Acetone-d ) hợp chất PEATC1 Phụ lục Phổ 1H-NMR (CDCl ) hợp chất PHTC2 Phụ lục Phổ 13C-NMR (CDCl ) hợp chất PHTC2 Phụ lục Phổ HSQC (CDCl ) hợp chất PHTC2 Phụ lục 5a Phổ HSQC (CDCl ) dãn rộng hợp chất PHTC2 Phụ lục Phổ HMBC (CDCl ) hợp chất PHTC2 Phụ lục 6a Phổ HMBC (CDCl ) dãn rộng hợp chất PHTC2 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín LỜI MỞ ĐẦU Chi Phyllanthus chi lớn, có khoảng 500 – 700 loài chia thành 10 – 11 chi nhỏ, bao gồm Isocladus, Kirganelia, Cicca, Emblica, Conani, Gomphidium, Phyllanthodendron, Xylophylla, Botryanthus, Ericocus Phyllanthus [5] Trong năm gần đây, loại thuộc chi Phyllanthus quan tâm ứng dụng y học cổ truyền Trong số đó, Phyllanthus amarus Schum et Thonn (cây Diệp hạ châu đắng), Phyllanthus urinaria L (cây Diệp hạ châu ngọt) Phyllanthus reticulatus Poir (cây Phèn đen) dùng nhiều thuốc chữa bệnh gan, sỏi thận, … Cây me rừng (Phyllanthus emblica Linn) thuộc chi Phyllanthus Cây dùng Y học cổ truyền Việt Nam nhiều nước giới Ở nước ta, mọc phổ biến đồi trọc, bãi hoang, rừng thưa Cây ưa ánh sáng, chịu khô hạn Quả dùng chữa cảm mạo, phát sốt, ho, đau cổ họng, miệng khô khát Rễ dùng để trị viêm ruột, đau bụng ngoài, cao huyết áp Cịn nấu nước rửa bên ngồi trị lở loét, mẫn ngứa [1] Bên cạnh việc sử dụng thuốc y học cổ truyền, hợp chất cô lập từ me rừng chứng minh có tác dụng hạ men gan, chống oxi hóa, kháng khuẩn, … Mặc dù, giới có nhiều nghiên cứu thành phần hóa học me rừng, Việt Nam, nghiên cứu thành phần hóa học Chính mà chúng tơi chọn me rừng để nghiên cứu đề tài với mong muốn làm rõ thêm thành phần hóa học, từ hiểu thêm tác dụng chữa bệnh đóng góp chứng khoa học có giá trị vào kho dược liệu Y học Việt Nam Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR (500 MHz), 13C-NMR (125 MHz), 2D-NMR máy Bruker Avance ghi phịng thí nghiệm Phân tích trung tâm, Đại học Khoa học Tự nhiên, số 227 Nguyễn Văn Cừ, Q.5, Tp.Hồ Chí Minh 2.2 NGUYÊN LIỆU 2.2.1 Thu hái nguyên liệu Mẫu dùng nghiên cứu khoá luận me rừng (Phyllanthus emblica Linn.) thu hái Bình Thuận vào tháng 5/2014 Mẫu TS Phạm Văn Ngọt nhận danh tên khoa học “Phyllanthus emblica Linn”, họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) 2.2.2 Xử lý mẫu nguyên liệu Mẫu nguyên liệu rửa sạch, loại bỏ phần sâu bệnh, phơi khơ bóng râm, xay thành bột mịn Sau tiến hành ngâm chiết phân lập hợp chất 2.3 ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO Lá me rừng (Phyllanthus emblica Linn.) phơi khô nghiền thành bột mịn, sấy khô đến khối lượng không đổi (7.2kg) Nguyên liệu bột mịn tận trích với ethanol 960 phương pháp ngâm dầm, lọc cô quay loại dung môi áp suất thấp thu cao ethanol thô (285.5 g) Cao ethanol thô chiết lỏng - lỏng với hexane, ethyl acetate thu cao hexane (22.1 g), cao ethyl acetate (143.1 g) cao lại (77.1g) Q trình thực tóm tắt theo sơ đồ 2.1 14 Khóa luận tốt nghiệp 2.4 Nguyễn Ngọc Tín CƠ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG CAO HEXANE 2.4.1 Sắc kí cột silica gel cao hexane Cao hexane (22.1 g) sắc kí cột (SKC) silica gel, giải ly với hệ dung H:EA có độ phân cực tăng dần từ 0% đến 100% EA, sau giải ly với hệ dung mơi EA:Me có độ phân cực tăng dần từ 0% đến 100% Me Dịch giải ly qua cột hứng vào lọ, theo dõi q trình giải ly sắc kí lớp mỏng (SKLM) Những lọ cho kết SKLM giống gộp chung thành phân đoạn Kết thu phân đoạn (H1 – 6), trình bày bảng 2.1 Bảng 2.1 Sắc kí cột silica gel cao hexane H H:EA 9:1 Khối lượng (g) 7.70 2.69 Sắc kí lớp mỏng Vệt dài Nhiều vết Chưa khảo sát Khảo sát Phân đoạn H1 H2 H3 H:EA 8:2 1.76 Nhiều vết Đã khảo sát H4 H:EA 7:3 0.54 Nhiều vết Chưa khảo sát H5 H:EA 6:4 0.94 Nhiều vết Chưa khảo sát H6 EA 1.83 Vệt dài Chưa khảo sát STT Dung môi giải ly Ghi Ghi chú: H: hexane, EA: ethyl acetate 15 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín 2.4.2 Sắc kí cột silica gel phân đoạn H2 bảng 2.1 Phân đoạn H2 cho SKLM nhiều vết, tách rõ nên phân đoạn H2 thực SKC sillica gel, giải ly với hệ dung môi H:DCM 15:35 Tiến hành bước tương tự sắc kí cột phân đoạn trước Kết thu phân đoạn (H2.1 – H2.9), trình bày bảng 2.2 Bảng 2.2 Sắc kí cột silica gel phân đoạn H2 STT Phân đoạn Dung môi giải ly Khối lượng (mg) Sắc kí lớp mỏng Ghi H2.1 H2.2 H2.3 H2.4 H2.5 H2.6 H2.7 H2.8 H2.9 H:DCM 15:35 H:DCM 15:35 H:DCM 15:35 H:DCM 15:35 H:DCM 15:35 H:DCM 15:35 H:DCM 15:35 H:DCM 15:35 H:DCM 15:35 20.4 23.3 60.0 571.6 411.1 50.5 217.1 407.2 138.8 Nhiều vết Nhiều vết Vệt dài Nhiều vết Nhiều vết Nhiều vết Nhiều vết Vệt dài Vệt dài Chưa khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát Khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát Ghi chú: DCM: dichloromethane 2.4.3 Sắc kí cột silica gel phân đoạn H2.4 bảng 2.2 Phân đoạn H2.4 cho SKLM nhiều vết, tách rõ nên phân đoạn H2.4 SKC sillica gel với hệ dung môi H:DCM 35:15 Tiến hành bước tương tự sắc kí cột phân đoạn trước Kết thu phân đoạn (H2.4.1-H2.4.5), trình bày bảng 2.3 Bảng 2.3 Sắc kí cột silica gel phân đoạn H2.4 STT Phân đoạn H2.4.1 H2.4.2 H2.4.3 H2.4.4 H2.4.5 Dung môi giải ly H:DCM H:DCM H:DCM H:DCM H:DCM 35:15 35:15 35:15 35:15 35:15 Khối lượng (mg) 1.2 52.2 33.3 153.8 159.7 Sắc kí lớp mỏng Vệt dài vết tách rõ Nhiều vết Nhiều vết Nhiều vết Ghi Chưa khảo sát Khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát Phân đoạn H2.4.2 có sắc kí lớp mỏng cho vết rõ, màu tím vết dơ kéo thành đuôi dài Từ phân đoạn H2.4.2 (52.2 mg) bảng 4, tiếp tục SKC nhiều lần thu hợp chất có dạng bột màu trắng, ký hiệu PHTC2 (23.0 mg) Q trình thực tóm tắt theo sơ đồ 2.2 16 Khóa luận tốt nghiệp 2.5 Nguyễn Ngọc Tín CƠ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ CĨ TRONG CAO ETHYL ACETATE 2.5.1 Sắc kí cột silica gel cao ethyl acetate Cao ethyl acetate (143.1 g) SKC silica gel, giải ly với hệ dung môi H:EA có độ phân cực tăng dần từ 80% đến 100% EA, sau tiếp tục giải ly với hệ dung mơi EA:Me có độ phân cực tăng dần từ 5% đến 100% Me Dịch giải ly qua cột hứng vào lọ, theo dõi trình giải ly SKLM Những lọ cho kết SKLM giống gom chung thành phân đoạn Kết thu phân đoạn (EA1 – 6) trình bày bảng 2.4 17 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín Bảng 2.4 Sắc kí cột silica gel cao ethyl acetate Phân đoạn EA1 EA2 EA3 EA:Me 95:5 22.25 EA4 EA5 EA:Me 8:2 EA:Me 7:3 33.40 14.70 STT Dung môi giải ly Khối lượng (g) H:EA 2:8 EA 16.50 13.28 Sắc kí lớp mỏng Vệt dài Nhiều vết Nhiều vết kéo vệt Nhiều vết Nhiều vết Ghi Đã khảo sát Chưa khảo sát Đã khảo sát Khảo sát Chưa khảo sát Ghi chú: Me: methanol 2.5.2 Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA4 bảng 2.4 Phân đoạn EA4 (33.4 g) SKLM cho nhiều vết, hình màu tím đèn UV nên chọn đem SKC silica gel, giải ly với hệ dung mơi H:EA có độ phân cực tăng dần từ 75% đến 100% EA, sau tiếp tục giải ly với hệ dung mơi EA:Me có độ phân cực tăng dần từ 5% đến 100% Me Tiến hành bước tương tự sắc kí cột phân đoạn trước Kết thu phân đoạn (EA4.1 – EA4.8) ghi lại bảng 2.5 Bảng 2.5 Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA4 STT Phân đoạn Dung môi giải ly EA4.1 H:EA 1:3 Khối lượng (g) 4.67 EA4.2 H:EA 1:3 3.78 EA4.3 H:EA 1:9 2.52 EA4.4 EA4.5 EA4.6 EA4.7 EA4.8 H:EA 1:9 EA EA:Me 95:5 EA:Me 85:15 EA:Me 6:4 2.75 1.59 1.86 3.40 2.80 Sắc kí lớp mỏng Vệt dài Nhiều vết kéo vệt Nhiều vết kéo vệt Vệt dài Vệt dài Kéo vệt Kéo vệt dài Kéo vệt Ghi Khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát 2.5.3 Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA4.1 bảng 2.5 Phân đoạn EA4.1 (4.67 g) hệ dung môi DCM:Me có độ phân cực tăng dần từ 0% đến 100% Me Tiến hành bước tương tự sắc kí cột phân đoạn trước Kết thu phân đoạn (EA4.1.1 – EA4.1.7) Kết trình bày bảng 2.6 18 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín Bảng 2.6 Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA4.1 STT Phân đoạn Dung môi giải ly EA4.1.1 EA4.1.2 EA4.1.3 EA4.1.4 EA4.1.5 EA4.1.6 EA4.1.7 DCM DCM:Me 95:5 DCM:Me 9:1 DCM:Me 9:1 DCM:Me 9:1 DCM:Me 8:2 DCM:Me 7:3 Khối lượng (mg) 352.4 308.0 923.6 181.4 536.1 553.0 412.1 Sắc kí lớp mỏng Ghi Nhiều vết Nhiều vết, kéo vệt Nhiều vết, kéo vệt Kéo vệt Kéo vệt Nhiều vết Kéo vết Chưa khảo sát Đã khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát Chưa khảo sát Khảo sát Chưa khảo sát Phân đoạn EA4.1.6 (553.0 mg) bảng 2.6 SKLM cho vết màu tím vết dơ kéo dài, nên tiếp tục SKC nhiều lần với hệ dung môi H:Ac:AcOH thu hợp chất có dạng hình kim màu trắng, kí hiệu PEATC1 (34.0 mg) Q trình thực tóm tắt theo sơ đồ 2.3 19 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT PEATC1 Hợp chất PEATC1 (34.0 mg) thu từ phân đoạn EA4.1.6 có đặc điểm sau: - Dạng tinh thể hình kim, màu trắng, kết tinh dung mơi acetone - Sắc kí lớp mỏng cho vết hình H SO 20%, hơ nóng bảng mỏng cho vết có màu hồng nhạt (dung môi giải ly hexane:acetone 3:1, R f = 0.36) - Phổ 1H-NMR (Aceton-d , phụ lục 1, bảng 3.1) δ H ppm 7.16 (1H, s) - Phổ C-NMR (Aceton-d , phụ lục 2, bảng 3.1) δ C ppm 167.5 (>C=O), 121.3 13 (>C=, C–1), 109.5 (=C–, C–2), 145.3 (>C=, C–3), 138.1 (>C=, C–4)  BIỆN LUẬN CẤU TRÚC Phổ 1H-NMR hợp chất PEATC1 thể tín hiệu cộng hưởng proton vịng thơm (δ H 7.16) cho thấy hợp chất có vịng thơm Phổ 13C-NMR cho thấy có tín hiệu cộng hưởng carbon >C=O (δ C 169.5) tín hiệu cộng hưởng carbon vòng benzen vùng δ C 145.3 – 109.5, cho phép dự đoán hợp chất PEATC1 có vịng thơm có cấu trúc đối xứng Từ liệu phổ NMR trên, kết hợp so sánh với liệu phổ acid gallic [3] cho thấy có tương đồng nên đề nghị cấu trúc hợp chất PEATC1 acid gallic O OH HO OH OH Acid gallic (PEATC1) 20 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín Bảng 3.1 Dữ liệu phổ NMR hợp chất PEATC1 Vị trí carbon >C=O PEATC1 (acetone-d ) δ H (ppm) δ C (ppm) 7.16 (s) 7.16 (s) 121.3 109.4 145.3 138.1 145.3 109.4 167.5 Acid gallic [3] (acetone-d ) δH (ppm) 7.15 (s) 7.15 (s) δ C (ppm) 120.8 109.1 144.9 137.8 144.9 109.1 167.4 3.2 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HỢP CHẤT PHTC2 Hợp chất PHTC2 (23.0 mg) thu từ phân đoạn H2.4.2 có đặc điểm sau: - Dạng bột màu trắng - Sắc kí lớp mỏng cho vết hình H SO 20%, hơ nóng bảng mỏng xuất vết có màu tím khơng hình đèn tử ngoại (dung môi giải ly hexan:ethyl acetate 45:5, R f = 0.45) - Phổ 1H-NMR (CDCl , phụ lục 3, bảng 3.2) δ H 4.68 (1H, d, J = Hz) , 4.56 (1H, dd, J = 1.5, 2.5 Hz), 3.18 (1H, dd, J = 5, 11.5 Hz), độ chuyển dịch khác trình bày bảng 3.2 - Phổ 13C-NMR (CDCl , phụ lục 4, bảng 3.2) δ C 151.1 (>C=, C–20), 109.5 (=CH , C–29), 79.2 (C–O, C–3), 55.5 (>CH–, C–5), 39.0 (>CCH– (0.68, 1.18, 2.37) xuất phổ 21 Khóa luận tốt nghiệp Phổ 13 Nguyễn Ngọc Tín C-NMR hợp chất PHTC2 xuất tín hiệu cộng hưởng 30 carbon Trong đó, có tín hiệu cộng hưởng carbon gắn nhóm hydroxyl δ C 79.2 (C–OH, C– 3) tín hiệu cộng hưởng carbon olefin δ C 151.1 (>C=, C–20) 109.5 (=CH , C–29) Từ kiện phổ NMR tài liệu tham khảo, hợp chất PHTC2 dự đoán triterpene có khung sườn lupane với liên kết đơi nhóm OH Bên cạnh đó, tương quan HMBC proton olefin δ H 4.68 4.56 đến carbon cộng hưởng δ C 19.5 ( –CH , C–30) δ C 48.14 (=CCH–, C–5) 28.1 (–CH , C–23) chứng minh nhóm OH gắn carbon số Các tương quan HMBC khác thể hình 3.1 Qua kiện phổ NMR kết hợp liệu phổ hợp chất lupeol [2] cho thấy có tương đồng nên đề nghị cấu trúc hợp chất PHTC2 lupeol 29 30 12 HO 28 16 15 22 17 14 10 18 26 25 21 13 11 19 20 27 23 24 Lupeol (PHTC2) 22 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR hợp chất PHTC2 PHTC2 (CDCl ) Vị trí carbon 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 δ H (ppm) (J-Hz) Lupeol (CDCl ) [2] δ H (ppm) (J-Hz) δ C (ppm) 38.9 25.3 79.2 39.0 55.5 18.2 34.5 41.0 50.6 37.3 21.1 27.6 38.2 43.0 27.6 35.7 43.2 48.5 48.1 151.1 30.0 40.2 28.1 15.5 16.3 16.1 14.7 18.5 109.5 3.18 (dd, 5.0, 11.5) 0.68 (dd, 1.5, 9.5) 1.39 (m) 2.37 (m) 1.95 (m) 1.18 (m) 0.97 (s) 0.76 (s) 0.83 (s) 1.03 (s) 0.94 (s) 0.79 (s) 4.68 (d, 2.0) 48.56 (dd, 1.5, 2.5) 1.68 (s) δC (ppm) 0.95 (s) 0.75 (s) 0.82 (s) 1.02 (s) 0.93 (s) 0.78 (s) 4.68 (s) 4.56 (s) 38.2 25.3 79.1 38.9 55.5 18.5 34.5 41.0 50.6 37.3 21.1 27.5 39.0 43.0 27.6 36.8 43.2 48.5 48.1 151.1 30.0 40.2 28.2 15.6 16.3 16.2 14.7 18.2 109.5 1.25 (s) 19.5 3.16 (dd, 5.4, 10.6) 19.5 29 30 12 25 11 26 10 23 22 17 16 28 15 21 19 13 18 14 HO 20 27 24 Hình 3.1 Một số tương quan HMBC hợp chất PHTC2 23 Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Tín CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 4.1 KẾT LUẬN Từ dịch chiết ethyl acetate, hợp chất cô lập Cấu trúc hợp chất xác định phương pháp phổ nghiệm, so sánh với tài liệu tham khảo đề nghị acid gallic O OH HO OH OH Acid gallic (PEATC1) Ngồi ra, chất khác lập từ dịch chiết hexane, xác định cấu trúc phương pháp phổ nghiệm so sánh tài liệu tham khảo Cấu trúc hợp chất đề nghị lupeol 29 30 12 HO 28 16 15 22 17 14 10 18 26 25 21 13 11 19 20 27 23 24 Lupeol (PHTC2) ĐỀ XUẤT Trong phạm vi khóa luận, em khảo sát me rừng Trong thời gian tới có điều kiện em tiếp tục khảo sát phân đoạn khác với nhiều hy vọng cô lập thêm hợp chất có cấu trúc tiến hành thử nghiệm hoạt tính sinh học hợp chất lập được, mong muốn đóng góp chứng khoa học có giá trị vào kho dược liệu Y học cổ truyền dân tộc 4.2 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO • Tài liệu tiếng Việt [1] Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, 695-696 • Tài liệu tiếng Anh [2] A K Jamal, W.A Yaacob, Laily B.Din (2008), A chemical study on Phyllanthus reticulates, Journal of Physical science, 19(2), 45 – 50 [3] Anchara Chanwithcesuk, Aphiwat Teerawutgulrag, Jeremy D Killburn, Nuansri Rakariyatham (2007), Antimicrobial gallic acid from Caesalpinia minosoides Lamk, Food Chemistry, 100(3), 1044-1048 [4] Chun-Bin Yang, Fan Zang, Mei-Cai Deng, Guang-Yun He, Jian-Min Yue, Run-Hua Lu (2007), A new ellagitannin from the fruit of Phyllanthus emblica L, Journal of the Chineses Chemical Society, 54, 1615-1618 [5] João B Calixto, Adair R S Santos, Valdir Cechinel Filho, Rosendo A Yunes (1998), A review of the plants of the genus Phyllanthus: their chemistry, pharmacology, and therapeutic potential, Med Res Rev, 18(4), 225-258 [6] Mahbuba Khatun, Mirajum Billah, Md Abdul Quader (2012), Sterols and sterol glucoside from Phyllanthus species, Dhaka Univ J Sci, 60(1), 5-10 [7] S.K El-Desouky, Shi Young Ryu, Young-Kyoon Kim (2008), A new cytotoxic acelated apigenin glucoside form Phyllanthus emblica L, Natural Product Research, 22(1), 91-95 [8] Sharma Bhawna , Sharma Upendra Kumar (2010), Hepatoprotective activity of some indigenous plants, Institute of pharmacy, 2(1), 568-572 [9] Sitthichai Iamsaard, Supatcharee Arun, Jaturon Burawat, Wannisa Sukhorum, Porntip Boonruangsri, Malivalaya Namking, Nongnut Uanindut, Somsak Nualkaew Bungorn Sripanidkulchai (2015), Phyllanthus emblica L branch extract ameliorates testicular damage in valproic acid – included rats, Int J Morphol, 33(3), 1016 – 1022 [10] Wei Luo, Mouming Zhao, Bao Yang, Jiaoyan Ren, Guanglin Shen, Guohua Rao (2011), Antioxidant and antiproliferative capacities of phenolics purified from Phyllanthus emblica L fruit, Food Chemistry, 126, 277-282 [11] Wei Lou, Lingrong Wen, Mouming Zhao, Bao Yang, Jiaoyan Ren, Guanglin Shen, Gouhua Rao (2012), Structural indentification of isomallotusisnin and other phenolics in Phyllanthus emblica L fruit hull, Food Chemistry, 132, 1527-1533 [12].Wei-Yan Qi, Ya Li, Lei Hua, Ke Wang, Kun Gao (2013), Cytotoxicity and structure activity relationships of phytosterol from Phyllanthus emblica, Fitoterapia, 84, 252-256 [13] Xiaoli Liu, Chun Cui, Mouming Zhao, Jinshui Wang, Wei Luo, Bao Yang, Yueming Jiang (2008), Identification of phenolics in the fruit of emblica (Phyllanthus emblica L.) and their antioxidant activities, Food Chemistry, 109, 909-915 [14] Xiaoli Liu, Mouming zhao, JinshuiWang Weilou (2007), Antimicrobial and antioxidant activity of emblica extracts obtained by supercritical carbon dioxide extraction methanol extraction, Journal of Food Biochemistry, 33, 307-330 [15] Xiaoli Liu, Mouming Zhao, Kegang Wua, Xianghua Chai, Hongpeng Yu, Zhihua Tao, Jinshui Wang (2012), Immunomodulatory and anticancer activities of phenolics from emblica fruit (Phyllanthus emblica L.), Food Chemistry, 131, 685-690 [16] Xinxian Zhu, Jianjun Wang, Yang Ou, Weiwei Han Huaifang Li (2013), Polyphenol extract of Phyllanthus emblica (PEEP) induces inhibition of cell proliferation and triggers apoptosis in cervical cancer cells, European Journal of medical research, 18, 2-5 [17] Yangfei Xiang, Ying Pei, Chang Qu, Zhicai Lai, Zhe Ren, Ke Yang, Sheng Xiong, Yingjun Zhang, Chongren Yang, Dong Wang, Qing Liu, Kaio Kitazato and Yifei Wang (2011), In vitro anti-Herpes simplex virus activity of 1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-D-glucose from Phyllanthus emblica L (Euphorbiaceae), Phytotherapy research, 25, 978-979 [18] Yin-Jun Zhang, Takashi Tanaka, Chong-Ren Yang, Isao Kouno (2001), New phenolic constituents from the fruit juice of Phyllanthus emblica, Chem Pharm Bull, 49(5), 537-540 [19] Ying-Jung Zhang, Takashi Tanaka, Yoko Iwamoto, Chong-Ren Yang, Isao Kouno (2000), Novel norsesquiterpenoids from the roof of Phyllanthus emblica, American Chemical Society and American Society of Pharmacognosy, 63, 1507-1510 [20] Ying-Jung Zhang, Takashi Tanaka, Yoko Iwamoto, Chong-Ren Yang, Isao Kouno (2000), Phyllaemblic acid, a novel highly oxygenated norbisabolane form the roof of Phyllanthus emblica, Tetrahedron Letters, 41, 1781-1784 [21] Ying-Jung Zhang, Takashi Tanaka, Yoko Iwamoto, Chong-Ren Yang, Isao Kouno (2001), Phyllanemblinins A-F, new ellagitannins from Phyllanthus emblica, American Chemical Society and American Society of Pharmacognosy, 64, 1527-1532 [22].Ying-Jung Zhang, Takashi Tanaka, Yoko Iwamoto, Chong-Ren Yang, Isao Kouno (2007), Novel sesquiterpenoids from the roof of Phyllanthus emblica, American Chemical Society and American Society of Pharmacognosy, 64, 870-873 PHỤ LỤC