1 TÀI LIỆU HỌC TẬP THỰC HÀNH I HÀNH CHÍNH: Tên môn học: Ký sinh trùng (KST) Tên bài: Xét nghiệm phân tìm ký sinh trùng đường ruột xét nghiệm tìm trứng giun kim (Enterobius vermicularis) Đối tượng: Thời gian: Địa điểm giảng: phòng thực tập Tên người biên soạn: II Mục tiêu học tập: 2.1 Mô tả tiến hành quy trình xét nghiệm phân trực tiếp tập trung 2.2 Mô tả tiến hành quy trình xét nghiệm tìm trứng giun kim III N ỘI DUNG: 3.1 KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM PHÂN 3.1.1 LẤY BỆNH PHẨM − Tiêu chảy: lấy phân xem − Táo bón: phải cho bệnh nhân dùng thuốc nhuận trường − Lấy chỗ phân nhão; phân sệt hay lỏng ý lấy chỗ có nhầy máu − Số lượng phân : đầu ngón tay − Cho vào lọ kín 3.1.2 XỬ LÝ BỆNH PHẨM 3.1.2.1 Quan sát mắt thường − Trạng thái: rắn, mềm, nhão hay lỏng − Màu sắc: + Phân đen xuất huyết trường hợp nhiễm giun móc + Phân đỏ xuất huyết tiêu hóa lỵ amip 3.1.2.2 Soi phân kính hiển vi − Nên soi tươi vòng sau thể hoạt động amip bị chết, khó phát − Nếu điều kiện soi ngay, cần cố định phân dung dịch F2 AM Pha chế dung dịch F2AM (Phenol, Formol, Alcool, Blue methylene) + Dung dịch mẹ: Bleu methylene 2g Alcool 95 40ml Phenol 8ml Formol 10ml Nước cất 40ml + Dung dịch sử dụng: Dung dịch mẹ 1ml Acid phenique 0,1ml Formol 10ml Nước cất 89ml Trong trường hợp trứng giun sán tập trung KST dung dịch F2AM 3.1.3 SOI TƯƠI 3.1.3.1 Soi tươi với nước muối sinh lý (NaCl 0,85%) Chủ yếu dùng để quan sát chuyển động thể tư dưỡng loại đơn bào trùng roi (Pentatrichomonas intestinalis, Embadomnas intestinalis, Retortamonas intestinalis, v.v.), amip (Entamoeba histolytica, Entamoeba coli, Iodamoeba buetschlii, ), trùng lông (Balantidium coli), ấu trùng giun lươn phôi có lông tơ (miracidium) trứng sán máng 3.1.3.2 Nhuộm sống Chủ yếu dùng cho đơn bào, thuốc nhuộm thấm từ từ làm lộ dần nhân, nguyên sinh chất lúc chúng sống, từ định tên xác Phương pháp thường dùng nhuộm Bailenger - Vật liệu: + Thuốc nhuộm : · Crystal violet 2g · Fuchsine basique 0,05g · Alcool 95 20ml · Phenol cristallise 10 ml + Pha chất liệu trên, để đêm, sau thêm 100 ml nước cất Giữ bình kín, màu nâu - Kỹ thuật nhuộm : + Nhỏ giọt dịch treo KST lên lam + Đặt giọt nhỏ thuốc nhuộm bên cạnh pipet Pasteur đầu nhọn + Dùng góc lamen trộn hai giọt + Đậy lamen + Quan sát kính hiển vi, thường với ống kính x 45, dùng ống kính dầu thấy cần - Kết : xem sau 30, 45, 60 phút, vài sau nhuộm (lúc ngưng quan sát phải để vào buồng ẩm tủ ấm 370C) Nguyên sinh chất thể hoạt động bào nang bắt màu đỏ, cấu trúc nhân bắt màu đen 3.1.3.3 Nhuộm lugol Đây kỹ thuật nhuộm phân thường quy phòng thí nghiệm Ký Sinh Trùng - Vật liệu: + Thuốc nhuộm : dung dịch lugol: · Potassium iodide 10g · Iodine crystals 5g · Nước cất 100ml + Thuốc đựng bình kín, màu nâu - Kỹ thuật nhuộm : + nhỏ giọt dung dịch lugol lên lam + dùng que tre lấy lượng nhỏ phân, đánh cho tan + đậy lamen + quan sát kính hiển vi - Kết quả: Tốt, nhuộm vàng bào nang đơn bào trứng ấu trùng giun sán Các không bào đơn bào có glycogen bắt màu nâu sẫm Tuy nhiên phương pháp không tốt cho thể hoạt động đơn bào 3.1.3.4 Thường lam, người ta làm phết phân với nước muối sinh lý bên phải phết với lugol bên trái Tiêu chuẩn phết phân lý tưởng − Đặt lên tờ báo đọc chữ − Nếu dầy phân che lấp KST khó xem − Nếu mỏng quá, mật độ ký sinh trùng thưa, khó phát 3.1.3.5 Kỹ thuật đọc mẫu phân kính hiển vi − Trước tiên xem vật kính (X10) phát vật thể nghi ngờ KST chuyển qua vật kính (X40) để xem chi tiết − Tìm KST theo hình chữ Z hết lamen − Kết quả: − Loài KST: ( giun sán, amip, ) − Dạng KST: ( trứng giun sán, bào nang, thể hoạt động, )  Ước lượng mật độ KST: đơn bào trứng giun sán · 1−2 KST/lam + · 3−6 KST/lam ++ · 7−12 KST/lam +++ · > 12 KST/lam ++++ 3.1.4 PHƯƠNG PHÁP KATO Với phương pháp Kato, ta quan sát lần 50 – 60 mg phân phương pháp thông thường khác quan sát 2mg - Vật liệu : + Lamen celophane, cắt thành miếng 22mm× 30mm + Dung dịch glycerin - xanh malachite: gồm glycerin nguyên chất 100ml, nước cất 100ml dung dịch xanh malachite 3% nước 1ml + Ngâm lamen celophane vào dung dịch ngày + Que tre + Lưới kim loại không rỉ cắt thành miếng vuông cm× cm, mắt lưới bé để ép phân qua, loại bỏ sợi rau hạt thực vật thấy cần - Kỹ thuật Bảng kiểm phương pháp Kato TT Quy trình Đặt phân lên lam Đậy lamen celophane Ép dẹp khối phân Để yên Quan sát tiêu Có không Ghi chú: Dùng que tre lấy 50 mg phân đặt mặt miếng lam Đậy lamen celophane Lật úp lam ép lên mặt phẳng có lót giấy thấm khối phân lan theo hình gần tròn đường kính 20 – 25 mm Để nhiệt độ phòng 20 –30 phút 400C Quan sát ống kính × 10 Kết quả: phương pháp Kato cho phép phát trứng giun đường ruột trứng Schistosoma mansoni tốt phương pháp tập trung Tuy nhiên phương pháp dùng để tìm đơn bào ấu trùng giun Nếu để lâu hơn, glycerin thấm xuống phân nhiều làm trứng giun móc, trứng Schistosoma spp, làm khó đọc Nếu chưa xem ngay, lật úp lam 3.1 PHƯƠNG PHÁP WILLIS: TẬP TRUNG KST BẰNG NƯỚC MUỐI BÃO HOÀ - Vật liệu: Nước muối bão hoà: NaCl tinh chế 250g Nước cất 750 ml - Kỹ thuật Bảng kiểm phương pháp Willis TT Quy trình Khuấy tan phân ống nghiệm Thêm nước muối bão hoà Đặt lam (lamen) Để yên Làm tiêu lugol Có không Ghi : Khuấy 1g phân tan – ml nước muối bão hoà ống nghiệm Vừa thêm nước muối bão hoà vừa khuấy mặt thoáng dâng lên gần miệng ống, ngưng khuấy nhỏ giọt mặt thoáng lồi lên miệng ống Đặt miếng lam (hoặc lamen) lên miệng ống, cho tiếp xúc với mặt thoáng nước muối, lưu ý bọt khí Để yên 15 – 60 phút Nhấc lam (hoặc lamen) lên, nhỏ thêm giọt lugol, đậy lamen (hoặc úp lamen lên lam có giọt lugol), quan sát kính hiển vi - Kết quả: Bào nang đơn bào trứng giun sán, đặc biệt trứng giun móc Hymenolepis nana lên mặt thoáng 3.2 Tìm trứng Enterobius vermicularis - Giun kim không đẻ trứng ruột nên tìm thấy trứng phân (trừ trường hợp giun tan rã xác ruột) Phương pháp xác dành cho giun kim băng keo dán vào hậu môn (Graham) - Giun trưởng thành bệnh nhân cha mẹ bệnh nhân bắt quanh rìa hậu môn Muốn quan sát, ta đặt giun lên lam, nhỏ giọt lactophenol, đậy lamen, chờ 10 – 15 phút đợi giun quan sát rõ đặc điểm, hình thái giun - Muốn tìm trứng giun kim móng tay,chúng ta cắt rìa móng, ngâm vào dung dịch NaOH 0,1 M chai thủy tinh, lắc giờ, sau lấy phần dung dịch ly tâm quan sát phần cặn kính hiển vi TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ môn Ký sinh trùng (1992), Thực tập Ký sinh trùng, Khoa y dược trường Đại học Tây Nguyên Bộ môn Ký sinh trùng (1998), Thực tập Ký sinh trùng, Trường Đại Học Y Khoa Thái Nguyên Bộ Môn Ký sinh trùng (1998), Ký sinh trùng y học , Trường Đại Học Y Hà Nội Bộ môn Ký sinh trùng (1998), Thực tập Ký sinh trùng - Đại Học Y Hà Nội Gillespie, S.H., Hawkey, P.M (1995), Medical Parasitology, A Practical Approach, IRLPress, OxfordUniversity Press Jitra Waikagul, et al (1997), Soil – Transmitted Helminths Trần Xuân Mai Cs (2002), Ký Sinh Trùng Y Học, Bộ Môn Ký Sinh Học Khoa Y, Đại Học Y Dược Tp Hồ chí Minh, Nhà Xuất Bản Đà Nẵng Pawlowski Z S., Schad G A and Stott G J (1991), Hookworm infection and Anaemia, Approaches to Prevention and Control, WHO, Geneva WHO (1998), Direct faecal smear, Saline and Iodine wet mount preparation WHO (1991), Basic Laboratory Methods in Medical Parasitology, Geneva, pp 10 - 109 TÀI LIỆU HỌC TẬP THỰC HÀNH I HÀNH CHÍNH: Tên môn học: Ký sinh trùng Tên bài: Hình thể giun sán Đối tượng: Thời gian: Địa điểm giảng: phòng thực tập Tên người biên soạn: II MỤC TIÊU HỌC TẬP: 2.1 Quan sát, mô tả nhận dạng hình thể trứng giun sán thường gặp tiêu 2.2 Quan sát, mô tả nhận dạng hình thể ấu trùng giun sán trưởng thành thường gặp tiêu III NỘI DUNG: ĐỊNH LOẠI GIUN SÁN Y HỌC Bảng 1: Định loại trứng giun 1/ Hình bầu dục, màu nâu đen, vỏ dầy, sần sùi (50 mcm - 25 mcm) × (40 –50 mcm) Ascaris lumbricoides Hình bầu dục, màu nâu cam vỏ dầy, có hai nút nhầy cực 50 mcm × 20 mcm Trichuris trichiura 2/ vỏ mỏng Vỏ dầy 3/ Trứng không đối xứng, có 16 phôi bào, 80 mcm × mcm - Ternidens deminutus Trứng đối xứng - 4/ Có – phôi bào 60 mcm × 40 mcm - Ancylostoma duodenale 70 mcm × 40 mcm Necator americanus Có 16 phôi bào hay 80 mcm × 50 mcm -Trichostrongylus sp 5/ Không đối xứng, có phôi, 50 mcm × 20 mcm -Enterobius vermicularis (*) Đối xứng có khối tế bào màu nâu, (50 -75 mcm) × (40 - 50 mcm) Ascaris lumbricoides (∗∗ ) (*) Hiếm thấy phân (∗∗) Trứng thụ tinh, lớp albumin Bảng 2: Định giống ấu trùng rhabditoid 1/ Ancylostoma, Necator: thực quản không phình phần giữa, xoang miệng dài hẹp, đuôi nhọn 2/ Strongyloides: thực quản không phình phần giữa, xoang miệng ngắn, đuôi nhọn 3/ Trichostrongylus: thực quản không phình phần giữa, xoang miệng dài hẹp, đuôi nhọn, có mang bướu nhỏ 4/ Rhabditis: thực quản có phình phần giữa, xoang miệng dài hẹp, đuôi nhọn Bảng 3: Định giống ấu trùng filariform 1/ Ancylostoma: thường có bao, đầu bằng, gai miệng không rõ, đuôi dài 2/ Necator: thường có bao, đầu tròn, gai miệng rõ, đuôi ngắn nhọn 3/ Strongyloides: bao, thực quản dài đến ½ thân, đuôi chẻ làm hai 4/ Trichostrongylus: bao, ruột uốn khúc, đuôi nhọn, mang bướu nhỏ Bảng 4: Định loại trứng sán dải 1/ Có nắp, 75×45 mcm - Diphyllobothrium latum Không có nắp 2/ Một vỏ dầy, màu nâu, có sọc theo bề dày vỏ - Hai lớp vỏ - 3/ Trứng rời rạc, 40 mcm Toenia saginata, Toenia solium –10 trứng bọc -Dipylidium caninum 4/ 48 – 60 mcm, có sợi hai cực - Hymenolepis nana 60 –80 mcm, sợi hai cực Hymenolepis diminuta Bảng 5: Định loại trứng sán Trứng có gai: 1/ Gai to đầu cực 150 mcm × 50 mcm Schistosoma haematobium (*) Gai bên cạnh cực - Gai lớn nhọn - 2/ Gai lớn nhọn 150 mcm × 50 mcm Schistosoma mansoni Gai nhỏ cong 90 mcm × 60 mcm S japonicum S mekongi Trứng có nắp: 1/ Nhỏ 25 mcm – 30 mcm Trung bình 40 mcm × 25 mcm Dicrocoelium dendriticum Lớn 75 – 150 mcm 2/ Phôi đối xứng, 25 mcm × 15 mcm -Heterophyes Phôi không đối xứng 3/ Hẹp, 30 mcm × 10 mcm Opisthorchis felineus Rộng 30 mcm × 15 mcm Clonorchis sinensis 4/ Nắp dẹp, vai rõ, 100 mcm × 50 mcm Paragonimus westemani Nắp lồi, vai không rõ - 5/ 140 mcm × 70 mcm -Fasciola hepatica hay Fasciolopsis buski 100 mcm × 60 mcm Echinostoma ilocanum (*) thấy phân có lẫn nuớc tiểu Bảng 6: Đối chiếu kích thước trứng giun sán HÌNH THỂ MỘT SỐ GIUN SÁN Y HỌC I HÌNH THỂ GIUN 1.1 GIUN TÓC (Trichuris trichiura) 1.1.1.Giun trưởng thành: phần đầu mảnh sợi tóc, phần đuôi phình to chứa ruột quan sinh dục Con đực dài - 4,5 cm, đuôi cong có gai giao hợp, đuôi thẳng đầu tròn 1.1.2 Trứng: 50 x 22 mcm, giống mo cau, có hai nút nhầy hai đầu, phôi lúc sinh Trichuris trichiura đực Trichuris trichiura Trứng 1.2 GIUN ĐŨA (Ascaris lumbricoides) 2.1 Giun trưởng thành: màu trắng sữa hay màu hồng - Con đực dài khoảng 20 cm , đuôi cong có hai gai giao hợp - Con dài khoảng 25 cm, đuôi thẳng, lỗ sinh dục 1/3 thân trước 1.2.2 Trứng: Có dạng - Trứng điển hình, thụ tinh, có vỏ albumin, khoảng 70 mcm , màu nâu sắc tố mật - Trứng không điển hình lớp vỏ albumine - Trứng lép: vỏ sần sùi không thụ tinh, hình dài 90 x 40 mcm, bên có nhiều hạt Giun đũa đực (nhỏ, đuôi cong), (lớn, đuôi thẳng) trứng thụ tinh trứng không thụ tinh (lép) 1.3 GIUN MÓC Giun móc có loài: - Ancylostoma duodenale - Necator americanus 1.3.1.Giun trưởng thành: 1.3.1.1 Ancylostoma duodenale: miệng có đôi móc - Con đực: dài khoảng mm , đuôi xòe ,có sườn bên sườn lưng chẻ đôi chẻ - Con đuôi thẳng dài khoảng 15 mm Lỗ sinh dục gần cuối thân 1.3.1.2 Necator americanus: miệng có hai dao hình bán nguyệt 10 - Con đực : đuôi xòe dài khoảng 8mm có sườn bên sườn lưng chẻ chẻ - Con :đuôi thẳng, dài khoảng 15mm lỗ sinh dục nằm cuối thân 1.3.2 Trứng: khó phân biệt hai loài, có hình trái xoan vỏ mỏng, có - phôi bào Kích thước 60-70 mcm Xoang miệng Ancylostoma duodenale Xoang miệng Necator americanus 1.3.3 Ấu trùng : (chung cho hai loài) Ấu trùng rhabditoid - Miệng hở - Thực quản có ụ phình - Đuôi nhọn trứng Ấu trùng filariform - Miệng kín - Thực quản hình trụ, chiều ngang 1/2 thân - Đuôi nhọn 1.4 GIUN LƯƠN (Strongyloides stercoralis) 1.4.1 Giun trưởng thành 1.4.1.1 Giun sống ký sinh Có hình ống mảnh mai, dài 1,5- 10 mm, rộng 27- 95 mcm Thực quản hình ống Ruột gồm 40 tế bào xếp thành hai cột lưng bụng Trực tràng ngắnm, hệ tiết mở bụng sau dây thần kinh Hệ sinh dục gồm tử cung, buồng trứng, âm hộ nằm 2/3 trước thân Trứng xếp thành hàng tử cung 1.4.1.2 Giun sống tự do: Hình suốt dài 1,5mm, rộng 85mcm thành thể mỏng có vân mỏng Ruột gồm 22 tế bào xếp thành hai hàng lưng bụng Trực tràng ngắn Hệ sinh dục gồm có tử cung, buồng trứng âm hộ nằm thân 1.4.1.3 Giun đực sống tự do: Hơi nhỏ dài 1.2mm, rộng 55 mcm Đuôi ngắn rộng Bộ phận sinh dục gồm dịch hoàn túi chứa tinh 1.4.2 Trứng: Trứng giun lươn giống trứng giun móc, có hình ellip, dẹp hai đầu vỏ mỏng, phôi bào có từ 8- 18 tế bào 1.4.3 Ấu trùng: 1.4.3.1 Ấu trùng rhabditoid Dài 400 mcm, rộng 20 mcm, thực quản dài 1/3 thân có ụ phình, đuôi nhọn 56 3.1.2 MỘT SỐ BỆNH PHẨM KHÁC - PHẾT HỌNG: cần thiết trường hợp bệnh vi nấm Candida, bệnh vi nấm Histoplasma, cần xử lý nhanh tốt - PHẾT ÂM ĐẠO: dùng tăm phết túi Douglas hay phết mảng trắng, cho vào ống nghiệm có dung dịch NaCl 0,85% vô trùng - SINH THIẾT CÁC CƠ QUAN: chia mẫu sinh thiết làm mảnh, ngâm dung dịch cố định (formaline 10%, Bouin) để làm tiêu giải phẫu bệnh lý, ngâm dung dịch NaCl 0,85% để tìm vi nấm - NƯỚC TIỂU: tốt nước tiểu dòng, cho vào ống nghiệm 15x3 cm vô trùng 3.2 LÀM TIÊU BẢN ĐỂ SOI TƯƠI TÌM VI NẤM (quan sát trực tiếp) - SOI TƯƠI CÁC BỆNH PHẨM LỎNG PHA LOÃNG TRONG DUNG DỊCH NaCl 0,85% (huyết trắng, phết họng, đàm ….) : lắc cho bệnh phẩm tan dung dịch NaCl, nhỏ giọt lên lam, đậy kính mỏng, xem kính hiển vi - SOI TƯƠI CÁC BỆNH PHẨM RẮN (móng, tóc), ĐẬM ĐẶC (sinh thiết mô, da, mủ …) ĐẶt mảnh bệnh phẩm lên phiến kính, nhỏ giọt dung dịch KOH 10-20%, đậy lamen, hơ lửa đèn cồn cho phiến kính ấm lên, quan sát sau phút; để nhiệt độ phòng, chờ 45 phút quan sát kính hiển vi KOH làm cho bệnh phẩm trong, từ quan sát rõ vi nấm bên - NHUỘM MỰC TẦU TÌM CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS Nhỏ giọt bệnh phẩm (dịch não tủy, đàm …) lên lam, nhỏ giọt mực Tầu bên cạnh Dùng góc lamen hoà giọt vào Đậy lamen quan sát kính hiển vi 3.3 HÌNH THỂ MỘT SỐ VI NẤM Y HỌC 3.3.1 Malassezia furfur Cạo vẩy da dán băng keo lên chỗ mảng da, làm phết ướt với dung dịch KOH 20% , quan sát kính hiển vi thấy sợi tơ nấm ngắn cong, đường kính mcm phân nhánh thành hình chữ S, V hay Y; tế bào hạt men tròn đường kính - mcm xếp thành đám 10 - 30; hình ảnh trông giống thịt nui (meat on noodle) Vi nấm mọc môi trường Sabouraud có thêm dầu olive hay thạch Dixon: khúm nấm màu kem vàng nhạt, bề mặt phẳng nhăn nheo; nhiệt độ ủ thích hợp 35 – 37o C, vi nấm mọc yếu ủ nhiệt độ phòng (25 o C) Bào tử hình cầu, hình ellip kéo dài hình trụ, búp mọc từ đáy rộng Đám tế bào hạt men tế bào biểu bì 3.3.2 Các vi nấm da 3.3.2.1 Soi tươi tiêu KOH 20% - Da móng Khúm Malassezia furfur môi trường Dixon 57 Trên tế bào biểu bì có sợi tơ nấm phân nhánh, có vách ngăn; sợi tơ nấm đứt thành chuỗi bào tử đốt Xét nghiệm móng thường khó xét nghiệm da lớp tế bào dầy đặc chen lẫn vi nấm Khoảng 30 % mẫu móng lấy từ người nghi ngờ có bệnh quan sát trực tiếp cấy âm tính Cần lập lại xét nghiệm nhiều lần có chẩn đoán lâm sàng nấm móng - Tóc Có thể gặp kiểu tóc nhiễm nấm, xếp vào nhóm : + Nhóm phát ngoại - nội (i) Kiểu Microsporum : bào tử nhỏ, tròn, đường kính mcm, nằm thành bao chặt chẽ đặn quanh sợi tóc, bên sợi tóc có sợi tơ nấm Vi nấm gây bệnh loại Microsporum sp 58 (ii) Kiểu giống Microsporum (type microide): bào tử nhỏ, tròn, đường kính - mcm bao không quanh sợi tóc, có rời rạc thành chuỗi bên sợi tóc có sợi tơ nấm, vi nấm gây bệnh T mentagrophytes (iii) Kiểu bào tử lớn : bào tử lớn tròn, đường kính - mcm bao quanh sợi tóc, bên sợi tóc có sợi tơ nấm Vi nấm gây bệnh từ thú nhiễm sang người : T verrucosum, T rosaceum, T ochraceum + Nhóm phát nội (i) Kiểu phát nội : bên sợi tóc có bào tử tròn đường kính - mcm Vi nấm gây bệnh T tonsurans, T.violaceum (ii) Kiểu lõm chén: sợi nấm nằm sợi tóc, đứt thành bào tử đốt, có nhiều bọt khí Vi nấm gây bệnh T schoenleinii 59 3.3.2.2 Hình ảnh khúm nấm cấu trúc hiển vi Sau cấy lên môi trường Sabouraud, vi nấm mọc thành khúm Quan sát khúm mắt thường kính hiển vi thu thập nhữngdữ kiện cần thiết để định danh vi nấm Giống Bào tử đính lớn Số lượng Kích thước (mcm) Số vách ngăn Bề dầy vách tế bào Bề mặt vách tế bào Cách đính vào sợi tơ nấm Số loại biết Microsporum Trichophyton Epidermophyton nhiều nhiều (5-100) x (3-8) - 15 dầy xù xì, có gai hiếm, (20-50) x (4-6) 2-8 mỏng nhẵn (20-40) x (6-8) 2-4 trung bình nhẵn chùm 2, 15 21 - Trichophyton rubrum + Khúm nhuyễn bột, có sắc tố màu đỏ rượu nho, thạch khoai đường Thử nghiệm urease (-), thử nghiệm xuyên tóc (-) mặt khúm Trichophyton rubrum mặt trái khúm với sắc tố đỏ rượu nho điển hình + Xem kính hiển vi: nhiều bào tử dính nhỏ hình lê, thấy bào tử đính lớn Bào tử đính nhỏ Sabouraud Bào tử đính lớn sinh nhiều 60 - Trichophyton mentagrophytes + Khúm nhuyễn bột (T mentagrophytes var granulosum) hay mượt nhung (T mentagrophytes var interdigitale), có sắc tố màu kem, màu đỏ, chuyển sang màu kem thạch khoai đường) Thử nghiệm urease (+), thử nghiệm xuyên tóc (+) + Bào tử đính nhỏ, tròn, thường có nhiều, thành đám, sợi tơ xoắn, bào tử đính ít, vách nhẵn Khúm T mentagrophytes var granulare điển hình Khúm T mentagrophytes var interdigitale Bào tử đính nhỏ thường sinh nhiều thử nghiệm xuyên tóc (+) Bào tử đính lớn sợi tơ nấm xoắn thường gặp - Trichophyton tonsurans + Khúm mượt, trụi, bờ gỗ cao trông miệng núi lửa (T tonsurans var crateriforme), khúm có cục u (T tonsurans var acuminatum), khúm nhăn nheo (T tonsurans var cerebriforme), khúm có sắc tố màu vàng lưu huỳnh (T tonsurans var sulfureum); khúm mọc nhanh bào tử sinh nhiều có sinh tố B1 61 T tonsurans var crateriforme bào tử đính nhỏ + Rất nhiều bào tử đính nhỏ hình lê, kích thước không dính dọc theo sợi tơ nấm - Trichophyton concentricum + Khúm giống sáp, gồ cao có nhiều nếp nhăn + Xem kính hiển vi thấy sợi tơ nấm có vách ngăn, không thấy bào tử khúm Trichophyton concentricum điển hình - Trichophyton schoenleinii + Khúm nhẵn, gồ cao, nhăn nheo, màu kem + Xem kính hiển vi thấy sợi tơ nấm hình sừng nai, bào tử bao dầy mặt mặt trái khúm Trichophyton schoenleinii sợi tơ nấm hình sừng nai 62 - Microsporum audouinii + Khúm mượt nhung, sắc tố màu hồng nhạt + Sợi tơ nấm cong queo, nhiều bào tử bao dầy, có sợi tơ nấm hình vợt, gặp bào tử đính Vi nấm mọc môi trường cơm (rice grain medium) Khúm Sabouraud Bào tử bao dầy sinh nhiều Sabouraud M audouinii mọc còi cọc môi trường cơm - Microsporum canis + Khúm mượt nhung, sắc tố cam, mọc tốt sinh nhiều bào tử đính lớn môi trường cơm + Bào tử đính lớn sinh nhiều, hình thoi, vách dầy, bề mặt có gai, bào tử đính nhỏ hình lê, gặp Khúm Microsporum canis Sabouraud Khúm Microsporum canis môi trường cơm Bào tử đính lớn - Microsporum ferrugineum + Khúm nhẵn, mọc chậm, nhô lên cao, bề mặt nhăn nheo, màu vàng nâu nhạt + Thường sinh sợi tơ nấm, phân nhánh không đặn, đứt khúc hay phình đầu 63 Khúm Microsporum ferrugineum thường vi nấm sinh sợi tơ, Sabouraud bào tử - Microsporum gypseum + Khúm nhuyễn bột hạt lăn tăn, sắc tố màu vàng nâu nhạt + Rất nhiều bào tử đính lớn hình thoi, vách mỏng, có gai; bào tử đính nhỏ hình lê, gặp Khúm Microsporum gypseum Bào tử đính lớn - Epidermophyton floccosum + Khúm nhuyễn bột, sắc tố màu vàng - xanh nhạt, dễ bị biến hình + Rất nhiều bào tử đính lớn hình chùy dài, vách nhẵn, có - tế bào, thường đính thành chùm - Khúm Epidermophyton floccosum Bào tử đính lớn - Cryptococcus neoformans Bệnh phẩm quan sát sau nhuộm mực Tầu Nếu mực Tầu, dùng nigrosin hay mực Parker 51 đen thay Qua kính hiển vi thấy đen vi 64 trường, Cryptococcus neoformans dạng tế bào hạt men tròn đường kính - 20 mcm, chung quanh có bao dầy sáng trắng, đường kính 20 - 40 mcm Bệnh phẩm cấy lên môi trường Sabouraud chloramphenicol, không cho cycloheximid Crytococcus neoformans nhạy cảm, ủ 37o C nhiệt độ phòng thí nghiệm Sau - ngày, vi nấm mọc tốt hai nhiệt độ thành khúm nhão, màu vàng nâu nhạt, xem kính hiển vi thấy nhiều tế bào hạt men tròn, có bao dầy tế bào hạt men điển hình có nang dầy tiêu nhuộm mực Tầu Khúm Cryptococcus neoformans môi trường Sabouraud - Candida spp Bệnh phẩm đặc móng, da, sinh thiết mô : làm phết ướt với dung dịch KOH 20% quan sát kính hiển vi Ngoài tế bào mô ký chủ, bệnh nhân bị vi nấm Candida ta phải thấy nhiều tế bào hạt men sợi tơ nấm giả Bệnh phẩm cấy lên môi trường Sabouraud - chloramphenicol, ủ 25 o C Nếu nghi có nhiễm trùng huyết hút máu bơm thẳng vào môi trường BHI (tim - óc hầm) lỏng, ủ 37o C 10 ngày để tăng dân số vi nấm sau cấy chuyển lên môi trường Sabouraud chloramphenicol Vài ngày sau cấy, vi nấm mọc thành khúm trắng, nhão Tế bào hạt men sợi tơ nấm giả da, tiêu KOH 20 % Tế bào hạt men sợi tơ nấm giả huyết trắng, nhuộm Gram Khúm Candida spp Sabouraud (*) Cấy vi nấm lên thạch khoai tây - cà rốt - mật, thạch bột bắp -Tween 80 hay thạch bào tử bao dầy theo kỹ thuật Dalmau : - Vạch vạch sâu song song, dài 1,5 cm - Đốt kim cấy vạch đường zig - zag mặt thạch - Đậy miếng kính mỏng vô trùng - ủ nhiệt độ phòng thí nghiệm 48 - 96 giờ, kết đọc 65 ống kính nhỏ x10 : Candida albicans sinh tế bào hạt men , sợi tơ nấm giả bào tử bao dầy Vi nấm sinh ống mầm sau ủ huyết 37o C Bào tử bao dầy điển hình Candida albicans Thử nghiệm huyết (+) : tế bào hạt men C albicans sinh ống mầm - Sporothrix schenckii Thường bệnh vi nấm Sporothrix, người ta không soi tươi số lượng vi nấm ít, hạt men vi nấm lại bé, khó quan sát Bệnh phẩm cấy lên môi trường Sabouraud - chloramphenicol cycloheximide ủ nhiệt độ phòng, lên thạch tim óc hầm - chloramphenicol cycloheximid thạch máu ủ 35o C Trên môi trường Sabouraud, sau - ngày vi nấm mọc thành khúm nhỏ, phẳng, màu kem Để thêm tuần khúm trở nên nhăn nheo có màu đen Quan sát mảnh khúm kính hiển vi, ta thấy sợi tơ nấm mảnh mai, tú, màu nâu, có bào đài ngắn, đầu có bào tử đính kích thước (2 - mcm) x (2 - mcm); có bào tử đính mọc trực tiếp từ sợi tơ nấm Khúm Sporothrix schenckii, thể sợi tơ Hình ảnh Sporothrix schenckii, thể sợi tơ 66 Trên môi trường tim óc hầm hay thạch máu, sau - ngày vi nấm mọc thành khúm nhỏ, nhão khúm vi khuẩn, màu vàng hay xám nhạt Quan sát kính hiển vi, ta thấy tế bào hạt men dài, kích thước (1 - mcm) x (4 - 10 mcm), tế bào có hình tròn hay hình trứng Khúm Sporothrix schenckii thạch BHI, ủ 37oC Tế bào hạt men thạch BHI - Aspergillus spp Trên tiêu KOH 20% tiêu cắt theo phương phảp giải phẫu bệnh lý nhuộm Haematoxylin Eosin, Periodic Acid Schiff hay Gomori, ta thấy phần mô ký chủ, có nhiều sợi tơ nấm rộng 2,5 – 4,5 mcm, có vách ngăn, phân nhánh theo lối chia hai, nhánh trục luôn tạo thành góc 45o đặc sắc Đôi lúc, thấy thêm đầu bào đài với tiểu bào đài bào tử đính Xâm nhập huyết quản, cục huyết, hoại tử phát tán hình ảnh giải phẫu bệnh lý thường gặp Sợi tơ nấm phân nhánh tiêu soi tươi trực tiếp, nhuộm đơn Sợi tơ nấm phân nhánh, tạo góc 45o tiêu thiết mô, nhuộm Gomori Đôi thấy đầu bào đài tiêu mô Bệnh phẩm cấy lên môi trường Sabouraud có hay chloramphenicol, ủ 37o C nhiệt độ phòng thí nghiệm Sau - ngày, vi nấm mọc thành khúm Cấy 67 chuyển sang môi trường chuẩn Aspergillus spp Czapek Dox, khúm nấm phát triển đặc điểm loại mà ta vào để định tên Mặt trái khúm Aspergillus fumigatus Bào đài bào tử đính Aspergillus fumigatus Trong chẩn đoán bệnh vi nấm Aspergillus cấy lô nhiệt độ quan trọng để phân biệt vi nấm Aspergillus gây bệnh với vi nấm Apergillus hoại sinh không khí bám vào môi trường thao tác kỹ thuật : Tốc độ mọc Aspergillus hoại sinh Aspergillus gây bệnh chậm nhanh Nhanh chậm Nhiệt độ ủ 37o C To phòng thí nghiệm - Histoplasma capsulatum Đàm, máu, tủy xương v.v trải lên miếng kính, phết ấn (impression smear) quan sinh thiết cố định methanol nhuộm Giemsa Wright Các mẫu sinh thiết gan, lách, hạch bạch huyết v.v cố định 24 dung dịch formalin 10% dung dịch Bouin, sau cắt theo phương pháp giải phẫu bệnh lý nhuộm Haematoxylin Eosin, PAS hay Gomori.Trên tiêu nhuộm Giemsa, vi nấm nằm nguyên sinh chất mô bào dạng tế bào hạt men 2-3 mcm, nguyên sinh chất co lại, tạo khoảng trống trông tựa nang Histoplasma capsulatum tủy xương nhuộm Giemsa Histoplasma capsulatum mô bào 68 Vì vi nấm chết nhanh, cần cấy bệnh phẩm vòng Trên Sabouraud, sau - ngày vi nấm bắt đầu mọc thành sợi tơ trắng mịn, nhô lên không khí; sau - tuần, khúm có đường kính khoảng cm, mượt nhung, màu trắng, vàng - nâu nhạt Lấy mảnh khúm xem kính hiển vi thấy nhiều bào tử đính lớn (macroconidia), đường kính - 14 mcm (đôi 20 mcm), có vách dầy, bề mặt có gai hay cục u, mọc đầu bào đài ngắn Ngoài ra, có số bào tử đính nhỏ (microconidia) hình tròn đường kính - mcm mọc từ bào đài ngắn Khúm Histoplasma capsulatum thạch Sabouraud Thể sợi tơ Histoplasma capsulatum với bào tử đính lớn điển hình Cần phân biệt Histoplsma capsulatum với Sepedonium sp Chrysosporium sp chuyển sang giai đoạn hạt men, khả gây bệnh cho thú phòng thí nghiệm đầu dò DNA Trên thạch tim óc hầm hay thạch máu, sau - 10 ngày ủ 35 o C, vi nấm mọc thành khúm nhão, màu kem, bề mặt nhẵn hạt lăn tăn Khúm để lâu chuyển sang màu nâu nhạt Xem mảnh khúm nấm kính hiển vi thấy nhiều tế bào hạt men hình tròn hình trái xoan, kích thước (2 -3 mcm) x (3 - 4) mcm Khúm Histoplasma capsulatum thạch BHI, ủ 37oC Tế bào hạt men thạch BHI Hai thể sợi tơ hạt men chuyển hóa cho Người ta cho thêm 10 % máu cừu cycloheximid vào môi trường BHI để tăng thêm chất bổ dưỡng cho vi nấm tránh tạp nhiễm vi nấm hoại sinh Chỉ nên bỏ ống cấy sau 12 tuần mà không thấy vi nấm mọc 69 - Penicillium marneffei Nhuộm Giemsa phết ấn mô hay tiêu tủy xương phương pháp chẩn đoán nhanh nhạy cảm để tìm tế bào hạt men điển hình mô bào rải rác mô Tế bào hạt men hình cầu đến hình trứng, đường kính - mcm, sinh sản cách nứt đôi nảy búp, đặc điểm quan trọng để phân biệt Penicillium marneffei với Histoplasma capsulatum Trên tiêu giải phẫu bệnh lý, người ta dễ dàng thấy tế bào hạt men nhỏ hình tròn hay hình oval , đường kính mcm, chất đầy mô bào rải rác mô Thỉnh thoảng có tế bào hình xúc xích, kéo dài tới mcm, có vách ngăn rõ Nên nhuộm tiêu phương pháp Grocott methenamine bạc để xem tế bào hạt men rõ ràng Tiêu mô nhuộm Grocott cho thấy tế bào hạt men với vách ngăn điển hình Bệnh phẩm (tủy xương, máu, sinh thiết da, niêm mạc ) nên cấy lên thạch Sabouraud dextrose có kháng sinh, ủ nhiệt độ phòng 37 o C Ở nhiệt độ phòng, vi nấm mọc sau vài ngày thành khúm màu xanh lục hay xám lục, bề mặt có sợi tơ mịn nỉ, sắc tố màu đỏ rượu vang điển hình sinh nhiều khuếch tán nhanh thạch Quan sát kính hiển vi cho thấy sợi tơ nấm mảnh, có vách ngăn, bào đài ngắn, nhẵn, có nhánh, tận 3-7 tiểu bào đài hình lục bình, bào tử đính hình tròn hay oval, đường kính 2-3 mcm, xếp thành chuỗi 70 Khúm Penicillium marneffei với sắc tố điển hình Penicillium marneffei kính hiển vi điện tử Ở 37o C, khúm có dạng nấm men, màu vàng nâu , quan sát kính hiển vi thấy bào tử nhỏ hình cầu hay dài, kích thước 2-6 mcm, sinh sản cách tách từ vách ngăn TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ môn Ký sinh trùng (1992), Thực tập Ký sinh trùng, Khoa y dược trường Đại học Tây Nguyên Bộ môn Ký sinh trùng (1998), Thực tập Ký sinh trùng, Trường Đại Học Y Khoa Thái Nguyên Bộ Môn Ký sinh trùng (1998), Ký sinh trùng y học , Trường Đại Học Y Hà Nội Bộ môn Ký sinh trùng (1998), Thực tập Ký sinh trùng - Đại Học Y Hà Nội Gillespie, S.H., Hawkey, P.M (1995), Medical Parasitology, A Practical Approach, IRLPress, OxfordUniversity Press Trần Xuân Mai Cs (2002), Ký Sinh Trùng Y Học, Bộ Môn Ký Sinh Học Khoa Y, Đại Học Y Dược Tp Hồ chí Minh, Nhà Xuất Bản Đà Nẵng Trần Xuân Mai Cs (2002), Ký Sinh Trùng Y Học, Bộ Môn Ký Sinh Học Khoa Y, Đại Học Y Dược Tp Hồ chí Minh, Nhà Xuất Bản Đà Nẵng Trần Xuân Mai (2003), Vi Nấm Y Học, CDROM Bộ Môn Ký Sinh Học Khoa Y, Đại Học Y Dược Tp Hồ chí Minh [...]... Iodamoeba buetschli Endolimax nana Entamoeba histolytica (thể minuta) 3/ Chuyển động nhanh và có định hướng, nội và ngoại tế bào chất trong: -Entamoeba histolytica 4/ Chuyển động chậm và không định hướng, nội tế bào chất có nhiều hạt: Entamoeba coli 3.1.2 Chuyển động nhanh và không đều: các trùng roi 1/ Thân hình quả lê, lớn hơn 10 mcm ... Lau sạch ngón tay với bông có tẩm cồn − Dùng bông sạch lau khô ngón tay (2) Dùng kim chích máu đâm nhanh vào đầu ngón tay − Bóp nhẹ ngón tay và nặn ra giọt máu đầu và lau đi bằng miếng bông khô nhưng đảm bảo không còn dính sợi bông nào ở đầu ngón tay (3) Cầm lam sạch dọc theo bờ lam lấy máu với động tác nhanh như sau: − Bóp nhẹ ngón tay lấy một giọt máu có đường kính khoảng 1,5mm vào giữa lam để làm phết... Không có màng lượn sóng 3 3/ Các roi hướng về phía sau: -Giardia lamblia Các roi hướng về phía trước, thân có xoắn ốc - Chilomatix mesnili Chuyển động nhanh và đều, kích thước lớn (50 –70 mcm) có miệng, hậu môn, nhân và không bào Balantidium coli 3.2 ĐỊNH LOẠI BÀO NANG ĐƠN BÀO 1 Kích thước nhỏ hơn 30 mcm -2 Lớn hơn... thân, nội tế bào chất lấm tấm những hạt nhuyễn và có chứa hồng cầu kích thước khác nhau tùy theo mức độ bị tiêu hóa Nhân : tròn 4 - 7 mcm, hạt nhiễm sắc bám sát màng nhân, trung thể ở giữa Chuyển động nhanh E h histolytica trên tiêu bản nước muối sinh lý E h histolytica với các hồng cầu trong nguyên sinh chất E h.histolytica, thể hoạt động, nhuộm Trichrom 1.2 Thể hoạt động không ăn hồng cầu (Entamoeba... dịch Giemsa III NỘI DUNG: 3.1 KỸ THUẬT LÀM TIÊU BẢN MÁU 3.1.1 Vị trí lấy máu: − Máu tĩnh mạch − Máu mao mạch: thường lấy ở đầu ngón thứ ba hay tư phía cạnh trong là tiện nhất, cũng có thể lấy máu ở dái tai Riêng trẻ nhỏ có thể lấy máu ở ngón chân cái hay gót chân vì ngón tay em bé quá nhỏ 3.1.2 Thời điểm lấy máu: Tốt nhất là lấy máu trước khi điều trị vì khi điều trị mật độ KSTSR giảm đi rất nhiều, rất... ngay giọt máu đầu (còn tìm ký sinh trùng sốt rét bỏ giọt máu đầu) Phương pháp soi tươi: 1- Hoà 1 giọt máu trong 1 giọt NaCl 0,9 % 2- Đậy lamelle 3- Tìm phôi giun chỉ sống dưới kính hiển vi: - Di chuyển nhanh, lượn sóng rộng: Wuchereria bancrofti - Di chuyển chậm, lượn sóng hẹp: Brugia malayi Soi sau khi nhuộm Giemsa (xem phần sốt rét) Song song với soi tươi, làm 2 giọt máu dầy, nhuộm Giemsa và tìm phôi... đệm ta được dung dịch Giemsa nhuộm Dung dịch này chỉ pha đủ dùng vì để lâu sẽ bị lắng cặn khi nhuộm không đẹp Dung dịch Giemsa nhuộm có thể pha với hai nồng độ khác nhau tùy theo thời gian muốn nhuộm nhanh hay chậm: + Dung dịch Giemsa 10% : 1ml Giemsa mẹ + 9ml dung dịch đệm + Dung dịch Giemsa 3% : 0,3ml Giemsa mẹ + 9,7ml dung dịch đệm 3.2.3 Kỹ thuật nhuộm tiêu bản Bảng kiểm nhuộm Giemsa TT 1 2 3 4 Quy... tương ứng với 200 bạch cầu trên giọt máu dầy, đếm càng nhiều độ chính xác càng cao như với 500 bạch cầu - Hệ thống dấu cộng: phương pháp nầy đơn giản thích hợp choviệc xét nghiệm ở bệnh viện cho kết quả nhanh chóng Đếm KSTSR ở giọt dầy và dựa trên số lương KST SR trên vi trường Kết quả ghi nhận như sau: + ++ +++ ++++ N : : : : 1−10 KSTSR / 100 vi trường 11−100 KSTSR / 100 vi trường 1−10 KSTSR / 1 vi trường