BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI LÊ THỊ TRÂM Mã sinh viên: 1101545 NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH PIROXICAM VÀ INDOMETHACIN TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG DƢỢC BẰNG SẮC KÝ LỚP MỎNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2016 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI LÊ THỊ TRÂM Mã sinh viên: 1101545 NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH PIROXICAM VÀ INDOMETHACIN TRỘN TRÁI PHÉP TRONG CHẾ PHẨM ĐÔNG DƢỢC BẰNG SẮC KÝ LỚP MỎNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh DS Nguyễn Thị Hà Nơi thực hiện: Bộ môn Hóa phân tích - Độc chất HÀ NỘI - 2016 LỜI CẢM ƠN Lời xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới: PGS.TS Nguyễn Thị Kiều Anh DS Nguyễn Thị Hà Là ngƣời hƣớng dẫn, tận tình bảo, tạo điều kiện cho suốt trình thực hoàn thành khóa luận Cho phép xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới ThS.Đào Thị Cẩm Minh, ngƣời động viên, nhiệt tình giúp đỡ trình thực khóa luận Tôi xin gửi lời cảm ơn đến toàn thể thầy cô anh chị kỹ thuật viên môn Hóa phân tích – Độc chất, môn Hóa Dƣợc tạo điều kiện cho hoàn thành khóa luận Qua xin cảm ơn thầy cô môn trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội truyền kiến thức niềm tự hào sinh viên trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội suốt năm qua Cuối xin dành lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè khích lệ, tạo động lực cho trình học tập vừa qua Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 12 tháng năm 2016 Sinh viên Lê Thị Trâm MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ………………………………………………………………………1 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN……………………………………………………… 1.1 Thực trạng chế phẩm đông dƣợc bị trộn trái phép tân dƣợc 1.2 Tổng quan chất nghiên cứu 1.2.1 Tổng quan Piroxicam 1.2.2 Tổng quan Indomethacin 1.3 Một số nghiên cứu xác định Piroxicam Indomethacin mẫu đông dƣợc………………… 1.4 Tổng quan phƣơng pháp dùng nghiên cứu 12 1.4.1 Phƣơng pháp xử lí mẫu 12 1.4.2 Phƣơng pháp sắc ký lớp mỏng 13 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU………………17 2.1 Nguyên liệu, thiết bị 17 2.1.1 Nguyên liệu 17 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ nghiên cứu 17 2.2 Đối tƣợng nghiên cứu 17 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 18 2.3.2 Khảo sát điều kiện xử lí mẫu 18 2.3.3 Thẩm định quy trình 19 2.3.4 Ứng dụng phƣơng pháp số chế phẩm đông dƣợc thị trƣờng 19 2.4 Phƣơng pháp xử lí số liệu 19 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN……………………20 3.1 Khảo sát lựa chọn điều kiện phân tích…………………………………… 20 3.1.1 Khảo sát hệ dung môi pha động 20 3.1.2 Khảo sát bƣớc sóng phát 22 3.1.3 Khảo sát điều kiện xử lí mẫu 23 3.1.4 Điều kiện phân tích 24 3.2 Thẩm định phƣơng pháp 25 3.2.1 Tính thích hợp hệ thống 25 3.2.2 Tính chọn lọc 26 3.2.3 Khoảng tuyến tính 28 3.2.4 Giới hạn phát hiện, giới hạn định lƣợng 30 3.2.5 Độ lặp lại độ phƣơng pháp 33 3.3 Ứng dụng xác định Piroxicam Indomethacin số mẫu chế phẩm đông dƣợc thị trƣờng 34 3.4 BÀN LUẬN 38 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT ACN Acetonitril DCM Dicloromethan EtOH Ethanol HPTLC Sắc ký lớp mỏng hiệu cao (High Performance Thin Layer Chromatography) LOD Giới hạn phát (Limit of detection) LOQ Giới hạn định lƣợng (Limit of quantitation) M Khối lƣợng NSAIDs Thuốc chống viêm không steroid (Nonsteroidal inflacmatory Drugs) Rf Hệ số lƣu giữ RSD Relative Standard Deviation (độ lệch chuẩn tƣơng đối) S Diện tích pic SKĐ Sắc ký đồ SKLM Sắc ký lớp mỏng S/N Tín hiệu/nhiễu (Signal/Noise) TB Trung bình TFA Acid trifloracetic Anti- DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số nghiên cứu xác định Piroxicam mẫu đông dƣợc 10 Bảng 1.2 Một số nghiên cứu phát Indomethacin mẫu đông dƣợc 11 Bảng 1.3 Một số chất thƣờng dùng làm pha tĩnh cho SKLM 14 Bảng 3.1 Kết khảo sát dung môi chiết 23 Bảng 3.2 Kết đánh giá độ thích hợp hệ thống 25 Bảng 3.3.Kết đánh giá độ tuyến tính Piroxicam Indomethacin 29 Bảng 3.4 Kết xác định LOD, LOQ Piroxicam Indomethacin 33 Bảng 3.5 Kết xác định độ lặp lại độ 34 Bảng 3.6 Kết kiểm tra mẫu chế phẩm đông dƣợc thị trƣờng SKLM 36 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1 Kết khảo sát dung môi pha động 20 Hình 3.2 Sắc ký đồ khảo sát tỉ lệ pha động 21 Hình 3.3 Sắc ký đồ khảo sát bƣớc sóng phát 22 Hình 3.4 Kết khảo sát lựa chọn dung môi chiết 24 Hình 3.5 Sơ đồ xử lí mẫu phân tích 24 Hình 3.6 Sắc ký đồ đánh giá độ chọn lọc phƣơng pháp 26 Hình 3.7 Sắc ký đồ analog xác định độ chọn lọc Piroxicam Indomethacin 27 Hình 3.8 Sắc ký đồ đánh giá độ tuyến tính Piroxicam Indomethacin 28 Hình 3.9 Kết đánh giá độ tuyến tính Piroxicam Indomethacin 29 Hình 3.10 Sắc ký đồ xác định LOD Piroxicam Indomethacin 30 Hình 3.11 Sắc ký đồ analog xác định LOD, LOQ Piroxicam 31 Hình 3.12 Sắc ký đồ analog xác định LOD, LOQ Indomethacin 32 Hình 3.13 Sắc ký đồ kết mẫu chế phẩm đông dƣợc thị trƣờng SKLM 35 Hình 3.14 Sắc ký đồ analog mẫu TB01 phát 254 nm 37 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm gần đây, loại thuốc có nguồn gốc tự nhiên y học truyền thống phƣơng đông (đông dƣợc) ngày đƣợc nhiều ngƣời ý sử dụng họ tin sản phẩm đáng tin cậy, an toàn, độc hại thƣờng rẻ tiền Cùng với việc sử dụng theo truyền miệng, không quan tâm đến nguồn gốc xuất xứ, sản phẩm đƣợc bán tự cửa hàng thực phẩm sức khỏe, siêu thị đƣợc quảng cáo tràn lan trang mạng, Do đó, nhiều sở sản xuất mục đích lợi nhuận cố tình trộn trái phép thuốc tân dƣợc vào chế phẩm đông dƣợc, thực phẩm chức để làm giảm nhanh triệu chứng hay tạo cảm giác đánh lừa ngƣời tiêu dùng Hậu việc dùng thuốc đông y trộn trái phép tân dƣợc nghiêm trọng khó lƣờng ngƣời tiêu dùng cho dùng thuốc có nguồn gốc tự nhiên nên an toàn dùng kéo dài Cho tới có nhiều chế phẩm đƣợc phát có chứa NSAID nhƣ: Joint-Soft, Ke Bi Gu Tai Jiao Nang đƣợc bán qua đƣờng xách tay vào Singapore, thuốc gia truyền Hou Li Bao sản xuất Malaysia (trộn Piroxicam) [14], [15], Pil Raja Urat Asli đƣợc bán mạng (trộn Piroxicam Indomethacin) [14], Zhen Feng Da Brand Xi Tong Wan, Huo Luo Jing Dan Trung Quốc sản xuất (trộn Indomethacin) [16], [17], Meizitang Botanical Slicming 100% Natural Soft Gel đƣợc bán qua mạng Trung Quốc (trộn Diclofenac) [13],… Các trƣờng hợp đƣợc báo cáo với biểu nhƣ: xuất huyết dày, có phản ứng da nghiêm trọng, rối loạn huyết học,… [17], buồn nôn, nôn [14] NSAID nhóm thuốc chống viêm không steroid với nhiều tác dụng phụ, cần đƣợc kê đơn phải theo dõi chặt chẽ dùng Với tác dụng giảm đau, chống viêm, thuốc đƣợc trộn vào chế phẩm điều trị giảm đau, viêm khớp, thấp khớp, gout,… nhằm mục đích giảm nhanh triệu chứng bệnh Nghiên cứu xác định số thuốc chống viêm giảm đau trộn lẫn chế phẩm thuốc đông dƣợc sắc ký lớp mỏng hiệu cao sắc kí lỏng hiệu cao Nguyễn Thị Hà (2016) xây dựng qui trình định tính, định lƣợng Paracetamol, Diclofenac natri trộn lẫn chế phẩm đông dƣợc phƣơng pháp HPTLC HPLC ứng dụng phƣơng pháp xây dựng để xác định hai chất chế phẩm đông dƣợc thị trƣờng [4] Piroxicam Indomethacin hai thuốc thuộc nhóm NSAID có tác dụng giảm đau, hạ sốt, chống viêm, chống kết tập tiểu cầu đƣợc sử dụng rộng rãi giá thành thị trƣờng tƣơng đối rẻ, thƣờng dễ bị trộn vào chế phẩm đông dƣợc Hiện Việt Nam, tác giả Cao Công Khánh cộng xây dựng phƣơng pháp xác định có mặt Piroxicam thực phẩm chức HPLC (2013) Nhằm mục đích góp phần công tác nghiên cứu xác định thuốc tân dƣợc đƣợc trộn trái phép chế phẩm đông dƣợc, tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu xác định Piroxicam Indomethacin trộn trái phép chế phẩm đông dược sắc ký lớp mỏng” với hai mục tiêu cụ thể sau: Xây dựng phƣơng pháp xác định Piroxicam Indomethacin chế phẩm đông dƣợc sắc ký lớp mỏng Áp dụng phƣơng pháp xây dựng đƣợc để xác định Piroxicam Indomethacin số chế phẩm đông dƣợc (dạng rắn) thị trƣờng 34 Bảng 3.5 Kết xác định độ lặp lại độ Piroxicam Indomethacin Lần phân Diện tích m chuẩn Độ thu tích pic tìm lại hồi (ng) (%) Diện tích pic m chuẩn Độ thu tìm lại hồi (ng) (%) 23976 5023 101 27075 4945 98,9 22166 4616 92,3 25974 4689 93,8 22967 4796 95,9 26189 4739 94,8 21865 4593 91,9 27515 5047 101 23696 4959 99,2 26018 4699 93,9 22753 4748 94,9 26178 4736 94,7 TB 4789 95,8 4809 96,2 RSD (%) 3,69 3,69 3,12 3,12 Theo hội đồng châu Âu, mức hàm lƣợng chất ≥ 10 µg/kg, độ thu hồi phƣơng pháp phải đạt 80-110 % độ lặp lại phƣơng pháp có RSD% ≤ 10 Từ kết Bảng 3.5 cho thấy độ thu hồi độ lặp lại Piroxicam Indomethacin nằm khoảng giới hạn cho phép, đạt yêu cầu hội đồng châu Âu Nhận xét: từ kết thẩm định trên, phƣơng pháp phù hợp để phân tích chất chế phẩm đông dƣợc (nếu có) 3.3 Ứng dụng xác định Piroxicam Indomethacin số mẫu chế phẩm đông dƣợc thị trƣờng Thu thập 20 chế phẩm đông dƣợc có công dụng chữa thấp khớp, viêm khớp, chữa gout thị trƣờng, gồm 20 mẫu có: mẫu dạng viên nén, mẫu dạng viên nang, mẫu dạng viên hoàn mẫu dạng bột Tiến hành phân tích mẫu theo quy trình xây dựng mục 3.1.4 Sau triển khai sắc ký, sấy khô mỏng quan sát dƣới ánh sáng tử ngoại 254 nm Kết thể Hình 3.13 Bảng 3.6: 35 Hình 3.13 Sắc ký đồ kết mẫu chế phẩm đông dược thị trường SKLM 36 Bảng 3.6 Kết kiểm tra mẫu chế phẩm đông dƣợc thị trƣờng SKLM TT Mẫu Đặc điểm chế phẩm Piroxicam Indomethacin Rf = 0,32 Rf = 0,5 VN01 Viên nén màu nâu nhạt - - VN02 Viên nang cứng màu xanh - - VN03 Viên nang cứng màu xanh - - VN04 Viên nén màu trắng - - VN05 Viên nang cứng màu tím hồng - - VN06 Viên nang cứng màu đỏ đậm - - HC01 Viên hoàn màu hồng - - VN07 Viên nang màu cam - - HC02 Viên hoàn cứng màu đỏ - - 10 VN08 Viên nén bao phim màu nâu đen - - 11 HC03 Viên hoàn cứng màu nâu - - 12 - + - - - - - - - - 17 VN12 viên nang cứng - - 18 HC05 Viên hoàn cứng màu đen - - 19 VN13 Viên nang cứng màu đỏ mận - - 20 VN14 Viên nén bao phim - - TB01 Gói bột màu trắng ngà 13 HC04 Viên hoàn cứng màu đen 14 VN09 Nang mềm, viên có màu, nửa đen, nửa đỏ 15 VN10 Viên nén màu đỏ đậm 16 VN11 Nang cứng, viên có màu, nửa đỏ, nửa vàng “ – ”: dƣới giới hạn phát “ +”: dƣơng tính 37 Lấy SKĐ analog mẫu TB01 cho kết nhƣ Hình 3.14: (a) (b) Hình 3.14 Sắc ký đồ analog mẫu TB01 phát 254 nm (a): Mẫu TB01 UV 254 nm (b): hỗn hợp chuẩn UV 254 nm Hàm lượng Indomethacin mẫu TB01: Công thức tính hàm lƣợng (mg/gói): Cchuẩn (µg/ml) Achuẩn Athử mTB gói (g) mthử (g) Vthử (µl) 1000 30970,5 26178 2,4781 0,5045 1000 Kết quả: 4,15 mg/gói 38 Với liều ghi nhãn gói/ngày, hàm lƣợng Indomethacin mẫu TB01 16,61 mg/ngày Từ kết cho thấy 20 mẫu chế phẩm đông dƣợc thị trƣờng có 19 mẫu chế phẩm không phát trộn lẫn Indomethacin, Piroxicam mẫu (TB01) phát trộn lẫn Indomethacin với hàm lƣợng 4,15 mg/gói 3.4 BÀN LUẬN Hiện có nhiều nghiên cứu phát tân dƣợc đƣợc trộn chế phẩm đông dƣợc, thực phẩm chức nhƣ nghiên cứu phát đồng thời Sibutramin, Furosemid, Dexamethason Piroxicam HPLC [5], phát corticoid SKLM [7], Sildenafil LC-MS, HPLC [8],… Để góp phần kiểm soát chất lƣợng chế phẩm đông dƣợc, tiến hành nghiên cứu xác định Piroxicam Indomethacin trộn trái phép chế phẩm đông dƣợc SKML Phƣơng pháp cho phép thực phân tích nhanh, đơn giản, có tính sàng lọc tốt Trên giới Việt Nam có nhiều phƣơng pháp phân tích đại nhƣ HPLC, LC-MS,… Tuy nhiên SKLM phƣơng pháp có hiệu để phân tích chất chế phẩm đông dƣợc, đơn giản, rẻ tiền nhất, dùng cho hầu hết chất, ứng dụng cho sở kiểm nghiệm tuyến dƣới chƣa có máy móc, trang thiết bị đại Trong khóa luận này, sử dụng SKLM để phát Piroxicam Indomethacin chế phẩm đông dƣợc với trợ giúp công nghệ tin học, phần mềm winCATs xử lí kết tốt - Lựa chọn điều kiện sắc ký: Tiến hành khảo sát dung môi khai triển, kích thƣớc mỏng, bƣớc sóng phát hiện, chọn điều kiện sắc ký với hệ dung môi khai triển: n-hexan : ethyl acetate : acid acetic băng (6:2,5:1,5), mỏng silica gel GF254 (20 cm × 10 cm) bƣớc sóng 254 nm, tách tốt chất nghiên cứu phân biệt với NSAID khác, tiết kiệm chi phí thời gian phân tích Với điều kiện phân tích xác định đƣợc Diclofenac natri Paracetamol từ chế phẩm đông dƣợc [4], mở rộng để xác định đồng thời thuốc Piroxicam, Indomethacin, Paracetamol, Diclofenac chế phẩm đông dƣợc SKLM 39 - Lựa chọn xử lí mẫu: Sau khảo sát với dung môi chiết khác để chọn dung môi tối ƣu nhất, nhận thấy chiết ethanol cho hiệu suất chiết cao nhiên cho vết không gọn, bị kéo đuôi Rf bị giảm, chiết methanol cho vết gọn nhƣng methanol dung môi chiết không chọn lọc nên kết cho nhiều tạp, chiết dung môi lại hiệu suất thấp Do vậy, lựa chọn ethanol dung môi chiết để có hiệu suất cao, độc hại để có vết gọn sau chiết ethanol, tiến hành cô lấy cắn, pha loãng methanol theo nồng độ thích hợp Việc lựa chọn dung môi chiết ethanol phù hợp với nghiên cứu [32], nghiên cứu tính tỉ lệ đáp ứng phân tích (diện tích pic) khối lƣợng mẫu thử để so sánh hiệu suất chiết dung môi mà nghiên cứu [12], [32] chƣa đƣa - Thẩm định phƣơng pháp: Giá trị Rf màu sắc vết dùng để phát chất nghiên cứu chế phẩm đông dƣợc có trộn Với khoảng nồng độ tuyến tính chất 200 - 4000 µg/ml, đủ rộng để ứng dụng phát chất phân tích chế phẩm đông dƣợc Hệ số hồi quy phƣơng pháp với Indomethacin Piroxicam có r lần lƣợt 0,997 0,996 Điều cho thấy tƣơng quan chặt chẽ diện tích pic với nồng độ chất phân tích Giới hạn phát giới hạn định lƣợng chất phân tích cao, LOD Indomethacin 50 ng/µl, Piroxicam 100 ng/µl LOQ Indomethacin Piroxicam 200 ng/µl Độ lặp lại phƣơng pháp Indomethacin Piroxicam nhỏ 10%, đạt yêu cầu hội đồng châu Âu, cho thấy phƣơng pháp phù hợp để phân tích chất chế phẩm đông dƣợc Độ thu hồi phƣơng pháp từ 80 – 110 % với hàm lƣợng chất ≥ 10 µg/kg, đạt yêu cầu hội đồng châu Âu - Ứng dụng phƣơng pháp SKLM để phân tích mẫu chế phẩm đông dƣợc thị trƣờng 40 Chọn 20 mẫu thuốc đông dƣợc, thuốc gia truyền thực phẩm chức dạng rắn (viên nang, viên nén, viên hoàn cứng, thuốc bột) thị trƣờng thuộc nhóm sản phẩm điều trị hỗ trợ điều trị bệnh xƣơng khớp, cảm cúm, giảm đau nhóm sản phẩm có khả trộn lẫn Piroxicam Indomethacin Có 19 mẫu chế phẩm đông dƣợc không phát trộn Indomethacin, Piroxicam mẫu (TB01) phát có trộn Indomethacin phát UV254 nm với hàm lƣợng 4,15 mg/gói tƣơng ứng với 16,61 mg/ngày, nhiên liều thấp nhiều so với liều trung bình Indomethacin, Indomethacin đƣợc trộn vào nhằm tăng cƣờng tác dụng chế phẩm 19 mẫu không phát trộn chất nghiên cứu có số đăng ký, nguồn gốc rõ ràng, mẫu TB01 thuốc gia truyền từ lƣơng y, không đƣợc kiểm tra chất lƣợng Do nên mở rộng mẫu thêm, đặc biệt lƣu ý mẫu đƣợc bán qua đƣờng xách tay, bán qua mạng 41 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT KẾT LUẬN Từ kết thu đƣợc, có số kết luận sau: Đã xây dựng điều kiện phân tích phù hợp để xác định Piroxicam Indomethacin trộn trái phép chế phẩm đông dƣợcbằng SKLM Mẫu thử đƣợc chiết siêu âm với dung môi ethanol, ly tâm lấy dịch trong, cô cắn, hòa tan cắn methanol, tiến hành sắc ký mỏng silica gel GF254 (20cm × 10cm) hệ dung môi khai triển: n-hexan : ethyl acetate : acid acetic (6:2,5:1,5), phát 254nm Piroxicam có Rf = 0,32, Indomethacin có Rf = 0,50 không lẫn với NSAIDs khác Đã thẩm định đƣợc phƣơng pháp phân tích với tiêu: khoảng tuyến tính đủ rộng hệ số hồi quy đạt yêu cầu; độ chọn lọc đảm bảo phát đƣợc chất nghiên cứu mẫu đông dƣợc; độ lặp lại, độ đạt yêu cầu AOAC Phƣơng pháp có độ nhạy cao, LOD Indomethacin 50 ng/µl, Piroxicam 100 ng/µl phát đƣợc Piroxicam Indomethacin chế phẩm đông dƣợc Đã áp dụng phƣơng pháp kiểm tra có mặt Piroxicam Indomethacin 20 mẫu chế phẩm đông dƣợc thị trƣờng, có 19 mẫu không phát trộn Indomethacin, Piroxicam mẫu phát trộn Indomethacin với hàm lƣợng 4,152 mg/gói ĐỀ XUẤT Sử dụng phƣơng pháp xây dựng khóa luận để tiếp tục khảo sát xác định Piroxicam Indomethacin chế phẩm đông dƣợc thị trƣờng dạng dung dịch, dạng nang mềm, mà đề tài chƣa bàn luận đến Trên sở điều kiện sắc ký xây dựng, tiếp tục nghiên cứu, phát triển phƣơng pháp để phát thêm chất khác nhóm thuốc chống viêm không steroid 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Trần Tử An (2010), Hóa phân tích 2, Nhà xuất Y học tr 205-213 Bộ Y tế (2015), Dược thư Quốc Gia, Nhà xuất Y học, tr 808-1162 Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học, tr 326-497 Nguyễn Thị Hà (2016), Nghiên cứu xác định số thuốc chống viêm giảm đau trộn lẫn chế phẩm thuốc đông dược sắc ký lớp mỏng hiệu cao sắc kí lỏng hiệu cao, Luận văn Thạc Sĩ Dƣợc học, Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội Cao Công Khánh, Nguyễn Tƣờng Vy cộng (2013), "Nghiên cứu quy trình xác định đồng thời sibutramin, furosemid, dexamethason piroxicam thực phẩm chức kỹ thuật HPLC", Tạp chí Dược học, 445, tr 40-44 Nguyễn Đăng Lâm (2012), "Chất lƣợng dƣợc liệu, Đông dƣợc thị trƣờng nay, thách thức", Cây thuốc quý, 216, tr Lê Đào Khánh Long, Vũ Văn Hiếu cộng (2011), "Phát corticoid pha trộn chế phẩm đông dƣợc kỹ thuật sắc ký lớp mỏng", Y học thành phố Hồ Chí Minh, 15, tr 617-621 Phan Thanh Mậu (2011), Nghiên cứu định tính định lượng Sildenafil trộn trái phép thực phẩm chức LC-MS, HPLC, Khóa luận tốt nghiệp dƣợc sĩ, Trƣờng đại học Dƣợc Hà Nội Hoàng Thị Quỳnh (2013), Nghiên cứu phát Sildenafil số chế phẩm đông dược sắc ký lớp mỏng, Khóa luận tốt nghiệp dƣợc sĩ, trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội TÀI LIỆU TIẾNG ANH 10 Alajmi Mohamed F, Alam Perwez (2013), "HPTLC finger print and anti- inflammatory activity of ethanolic extract of different Maytenus species grown in Kingdom of Saudi Arabia", Asian Pacific Journal of Tropical Disease, 3(5), pp 341-347 43 11 Bogusz Maciej J, Hassan Huda, et al (2006), "Application of LC–ESI–MS– MS for detection of synthetic adulterants in herbal remedies", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 41(2), pp 554-564 12 Haneef Jamshed, Shaharyar Mohammad, et al (2013), "Analytical methods for the detection of undeclared synthetic drugs in traditional herbal medicines as adulterants", Drug testing and analysis, 5(8), pp 607-613 13 Health Sciences Authority (2016), HSA alerts public to three health products found to contain undeclared western medicinal ingredients, Press Release, Singapor, pp 1-6 14 Health Sciences Authority (2014), HSA Alerts Public to Three Illegal Products Purchased from Overseas which Contain Undeclared Potent Western Medicinal Ingredients, Press Release, Singapor, pp 1-6 15 Health Sciences Authority (2011), Ren Sem Tu Chon Chin Kuo Pill [人参杜仲筋骨丸] and Huo Li Bao [活力宝] Found to Contain Undeclared Western Medicines, Press Release, Singapor, pp 1-8 16 Health Sciences Authority (2009), "HSA warns consumers not to take an illegal product – “Huo Luo Jing Dan", Press Release, Singapor, pp 1-7 17 Health Sciences Authority (2007), "HSA cautions consumers against taking two chinese proprietary medicines “zhen feng da brand xi tong wan” and “wellring brand yin qiao jie du tablets” found adulterated with indomethacin and paracetamol respectively", Press Release, Singapor, pp 1-5 18 Hou Mei-Ling, Chang Li-Wen, et al (2014), "Determination of bioactive components in Chinese herbal formulae and pharmacokinetics of rhein in rats by UPLC-MS/MS", Molecules, 19(4), pp 4058-4075 19 Kulkarni MB, Dange PB, et al (2012), "Stability indicating thin-layer chromatographic determination of Chlorzoxazone, Diclofenac sodium and Paracetamol as bulk drug: application to forced degradation study", J Der Pharmacia Sinica, 3(6), pp 643-52 44 20 Kumasaka Kenichi, Kojima Takashi, et al (2005), "Screening and quantitative analysis for sulfonylurea-type oral antidiabetic agents in adulterated health food using thin-layer chromatography and high-performance liquid chromatography", Journal of health science, 51(4), pp 453-460 21 Li Ning, Cui Mei, et al (2010), "A rapid and reliable UPLC‐MS/MS method for the identification and quantification of fourteen synthetic anti‐diabetic drugs in adulterated Chinese proprietary medicines and dietary supplements", Biomedical Chromatography, 24(11), pp 1255-1261 22 Li Zefei, Zhao Longshan, et al (2014), "Simultaneous determination of seven residual pharmaceuticals in wastewater by solid-phase extraction and liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry with a switching ionization mode", Analytical Methods, 6(22), pp 9045-9052 23 Lu Yaling, Chen Jitao, et al (2009), "[Simultaneous determination of illegal synthetic drugs in antihypertensive dietary supplements by high performance liquid chromatography-mass spectrometry]", Se pu= Chinese journal of chromatography/Zhongguo hua xue hui, 27(1), pp 44-49 24 Pang Wensheng, Yang Huiwan, et al (2009), "LC-MS–MS in MRM mode for detection and structural identification of synthetic hypoglycemic drugs added illegally to „natural‟anti-diabetic herbal products", Chromatographia, 70(9-10), pp 1353-1359 25 Pharmacopoeia Bristish (2010), pp 1595-1596 26 R.M Miranda, Carollo C.A, et al (2013), "Piroxicam in herbal product commercially available in Brazil", Braz J Pharmacog, pp 648-650 27 Ramsay HM, Goddard W, et al (2003), "Herbal creams used for atopic eczema in Birmingham, UK illegally contain potent corticosteroids", Archives of disease in childhood, 88(12), pp 1056-1057 28 Savaliya Akash A, Prasad Bhagwat, et al (2009), "Detection and characterization of synthetic steroidal and non‐steroidal anti‐inflammatory drugs in 45 Indian ayurvedic/herbal products using LC‐MS/TOF", Drug testing and analysis, 1(8), pp 372-381 29 Song N, Zhang K, et al (2015), "[Determination of twelve chemical drugs illegally added in herbal tea by ultra high performance liquid chromatographytandem mass spectrometry coupled with modified QuEChERS]", Se pu= Chinese journal of chromatography/Zhongguo hua xue hui, 33(10), pp 1026-1031 30 The United States Pharmacopoeia 32 (2009), pp 3316-3317 31 Wiest Johannes, Schollmayer Curd, et al (2014), "Identification and quantitation of the ingredients in a counterfeit Vietnamese herbal medicine against rheumatic diseases", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 97, pp 24-28 32 Wisnuwardhani Hilda Aprilia, Fidrianny Irda, et al (2013), "Method development for simultaneous analysis of steroid and non steroid antiinflamatory substances in jamu pegal linu using TLC spectrophotodensitometri", Int J Pharm Pharm Sci, 5(4), pp 749-53 33 Zhang Rui, Yin Lihui, et al (2014), "Detection of illegally added drugs in dietary supplements by near-infrared spectral imaging", Journal of Innovative Optical Health Sciences, 7(06), pp 1-7 46 PHỤ LỤC Danh mục mẫu chế phẩm đông dược thị trường STT Mã Tên thuốc Số lô, hạn dùng, nơi sản xuất Liều lƣợng SĐK: VD-12263-10 2-3 viên/lần Số lô: 020415 3-4 lần/ngày SP VN01 Ankitamol (viên nén) Công ty TNHH Dƣợc phẩm Hà Nội VN02 Bạch địa (viên nang) Số lô: 010814 viên/lần Công ty TNHH Dƣợc phẩm 3-4 lần/ngày Hoa Sen VN03 Cảm xuyên hƣơng Số lô: 012015 HD: 080417 Nam Hà SĐK:V1315-H12-10 (Viên nang) Công ty CPDP Hà Nam VN04 Cốt thoái vƣơng (viên nén) Số lô: 010715 HD:06072018 SĐK: 2viên/ lần 3lần/ ngày viên/ lần 25778/2014/ATTP- lần/ ngày XNCB Công ty TNHH Tƣ vấn Y Dƣợc Quốc Tế (IMC) VN05 Cốt thống HP (viên nang) Số lô: 001 HD: 150118 GCN viên/ lần 8359/2012/ATTP- lần/ ngày XNCB Công ty TNHH DP Bích Huyền VN06 Gout ATK (viên nang) Số lô: 012014.HD: 260617 viên/ lần SĐK: lần / ngày 27004/2013/ATTP- XNCB Công ty TNHH thành viên 120 Armephaco 47 HC01 Hỏa long (hoàn cứng) Số lô: 061014 gói/ lần HD: 20/10/16 lần/ ngày SĐK: VNB-3170-05 Công ty TNHH Đông nam dƣợc Bảo Long SĐK:11950/2014/ATTP-NCB viên/lần VN07 Repair Gout Công ty TNHH công nghệ 1-2 lần/ngày dƣợc phẩm Zorro HC02 Nhức hoàn Cơ sở Hạnh Hòa B12/29A, NL:15 khớp viên/ ấp 2, xã Vĩnh Lộc, huyện lần (viên hoàn) Bình Chánh, TP.Hồ Chí Minh 10 VN08 Nhức khớp Nhân Số lô: 02K14 HD: 220917 Hƣng SĐK: (viên nén) XNCB 15368/2014/ATTP- viên/lần lần/ngày Công ty TNHH Dƣợc Nhân Hƣng 11 HC03 Phong tê thấp Hydan (viên hoàn) Số lô: 032 HD: 190117 10 hoàn/ lần SĐK: VĐ-6434-08 lần/ ngày Công ty CPD VTYT Thanh Hóa 12 TB01 Viêm thấp khớp Thuốc gia truyền gói/ngày (bột) 13 HC04 Phong thấp Fido (hoàn cứng) Số lô: 100714 viên/ lần HD: 23/07/17 lần/ ngày SĐK: V289- H12-10 CTCP DP Đông dƣợc 14 VN09 Thấp diệu nang Tâm Số lô: 24082015 Bình HD: 24082018 viên/ lần lần/ ngày 48 SĐK: (viên nang) 19881/2013/ATTP- XNCB Công ty DP Tâm Bình 15 VN10 Phong tê thấp PV Số lô: 02.09.14 HD: 11.09.17 viên/lần SĐK: V784-H12-10 lần/ ngày Công ty cổ phần Dƣợc phẩm Phúc Vinh 16 VN11 Viên khớp Tâm Bình Số lô: 06112015 (viên nang) HD: 06112018 SĐK: viên/ lần lần/ ngày 19879/2013/ATTP- XNCB Công ty TNHH DP Tâm Bình 17 VN12 Viên vai gáy Thái Số lô: 0915 HD: 050918 viên/ lần Dƣơng SĐK: CB 11882/2015/ATTP- lần / ngày (viên nang) XNCB Công ty cổ phần Sao Thái Dƣơng 18 HC05 Viên xƣơng khớp Số lô: 0001.HD: 231017 SHD SĐK: (hoàn cứng) 3122/2014/ATTP-XNCB gói/ lần 2lần/ ngày Công ty Hóa Dƣợc Việt Nam 19 VN13 Viên xƣơng khớp sutong (viên nang) 20 viên/lần Công ty TNHH Giai Cảnh VN14 Xƣơng khớp Nhất HD: 29072018 Nhất (viên nén) 2-3 lần/ngày 2viên/lần Công ty TNHH DP Nhất Nhất 2lần/ ngày [...]... lên, nôn và buồn nôn, run rẩy, co giật, chóng mặt [2] 1.2.2.8 1.3 Liều dùng: 25mg/lần, uống 2-3 lần/ngày, tối đa 150-200 mg/ngày [2] Một số nghiên cứu xác định Piroxicam và Indomethacin trong nền mẫu đông dƣợc Qua một số tài liệu cho thấy đã có nhiều nghiên cứu xác định Piroxicam, Indomethacin trong nền mẫu đông dƣợc trên thế giới và ở Việt Nam Các nghiên cứu đƣợc trình bày trong Bảng 1.1 và Bảng 1.2... đông dƣợc bị trộn trái phép Piroxicam và Indomethacin, đặc điểm của Piroxicam và Indomethacin, chọn các chế phẩm đông dƣợc có công dụng chữa thấp khớp, chữa gout, giảm đau 18 - Mẫu thử: chế phẩm đông dƣợc và thực phẩm chức năng dạng bào chế viên nén, viên nang cứng và viên hoàn, thuốc bột đƣợc sử dụng điều trị các bệnh về xƣơng khớp, giảm đau, gout đang lƣu hành tại Việt Nam - Nền mẫu: từ 5 loại chế. .. 28 - Trên sắc ký đồ của mẫu trắng thêm chuẩn xuất hiện vết có Rf và màu sắc tƣơng đƣơng với vết thu đƣợc trên sắc ký đồ của mẫu chuẩn Rf của Piroxicam là 0,32, Rf của Indomethacin là 0,50 - Sắc ký đồ của mẫu trắng không xuất hiện vết tƣơng ứng về vị trí với vết Piroxicam và Indomethacin chuẩn Do đó phƣơng pháp có tính chọn lọc đảm bảo để phát hiện Piroxicam và Indomethacin trong chế phẩm đông dƣợc... sát ở Bảng 3.1 và Hình 3.4 cho thấy khả năng chiết của Piroxicam và Indomethacin ở mẫu chế phẩm đông dƣợc bằng dung môi ethanol là cao nhất Do vậy, lựa chọn chiết đồng thời 2 chất phân tích trên bằng ethanol Tuy nhiên khi chiết bằng ethanol và tiến hành sắc ký thì các vết của chất phân tích bị kéo đuôi và Rf bị giảm Do vậy, sau khi chiết bằng ethanol, tiến hành cô lấy cắn và pha loãng bằng methanol... Drug, Quảng Đông, Trung Quốc, trộn Dexamethasone and Chlorpheniramin [15] - Joint-Soft đƣợc đƣa vào Singapore qua đƣờng xách tay trộn Piroxicam, Dexamethason [14] - Ke Bi Gu Tai Jiao Nang đƣợc đƣa vào Singapore qua đƣờng xách tay, trộn Hydrochlorothiazid, Piroxicam và Prednison [14] - Pil Raja Urat Asli đƣợc bán trên mạng, trộn Piroxicam và Indomethacin [14] - Zhen Feng Da Brand Xi Tong Wan trộn Indomethacin. .. mg/ml vào 0,50 g bột nền mẫu, trộn đều, tiến hành xử lý mẫu nhƣ chỉ dẫn ở mục 3.1.4 Tiến hành sắc ký các dung dịch mẫu chuẩn, mẫu trắng và mẫu tự tạo bằng SKLM trên 5 nền mẫu đông dƣợc: VN03, HC05, VN12, VN13, VN09 thu đƣợc kết quả: Hình 3.6 Sắc ký đồ đánh giá độ chọn lọc của phương pháp 1: Hỗn hợp 2 chất chuẩn 2: Mẫu tự tạo 3: Nền mẫu 27 Hình 3.7 Sắc ký đồ analog xác định độ chọn lọc của Piroxicam và Indomethacin. .. ether ethylic vào dung môi không phân cực nhƣ methylbenzen thì sẽ làm tăng đáng kể trị số Rf [1] 1.4.2.4 Ứng dụng SKLM đƣợc sử dụng phổ biến để nghiên cứu, sàng lọc trong phòng thí nghiệm hóa học, hóa sinh hoặc lâm sàng với 3 mục đích sau: a) Định tính Thƣờng dựa vào trị số Rf và màu sắc vết của mẫu thử và chất chuẩn chạy sắc ký trong cùng điều kiện, đôi khi do sắc ký liên tục không xác định đƣợc tuyến... valerat, Clobetasol propionat trong các chế phẩm đông dƣợc [27] Ở Châu Á, ngay cả nƣớc phát triển nhƣ Nhật Bản vẫn phát hiện trộn trái phép các thuốc điều trị tiểu đƣờng nhóm sulfonylurea trong thực phẩm chức năng [20] Rất nhiều nhóm thuốc tân dƣợc đƣợc trộn trong thuốc đông dƣợc, thực phẩm chức năng bị phát hiện tại Ấn Độ và Trung Quốc [21], [24], [28] Đặc biệt khu vực Đông Nam Á, các nƣớc nhƣ Thái... có 2 cách để định lƣợng các chất trong vết sắc ký [1]: - Định lƣợng sau khi tách các chất ra khỏi bản mỏng: Tách chiết chất phân tích trong vết sắc ký bằng dung môi thích hợp Sau khi làm sạch dịch chiết, định lƣợng chất phân tích bằng một kỹ thuật thích hợp (phổ hấp thụ, huỳnh quang, cực phổ…) Phƣơng pháp này hiện nay ít dùng vì nhiều trở ngại, mất thời gian - Định lƣợng trực tiếp lên bản mỏng: Đo diện... độ màu của vết sắc ký, hiện nay dùng 2 kỹ thuật:  Densitometer: chiếu chùm tia vào vết sắc ký và đo cƣờng độ hấp thụ hoặc huỳnh quang 16  Xử lý ảnh với camera kỹ thuật số: Quét bản mỏng với hệ thống phân tích hình ảnh, nhất là camera kỹ thuật số có độ phân giải cao thể thu nhận hình ảnh của vết sắc ký Xử lý dữ liệu ảnh bằng máy tính 1.4.2.5 Ƣu nhƣợc điểm của phƣơng pháp sắc ký lớp mỏng a) Ƣu điểm