Tuyể n cho ̣n các chủng vi sinh vâ ̣t ta ̣o chế phẩ m nhằ m xử lý nước thải nuôi trồng thủy sản Nguyễn Thi ̣Quỳnh Trang Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn Thạc sĩ ngành: Vi sinh vâ ̣t ho ̣c; Mã số: 60 42 40 Người hướng dẫn: TS Bùi Thị Việt Hà Năm bảo vệ: 2011 Abstract: Tổng quan tài liệu tình hình nuôi trồ ng thủy sản thế giới ; ảnh hưởng của một số điều kiện môi trường lên quá trình nuôi trồng thủy sản : nhiệt độ, độ ph, độ mặn Nghiên cứu tình hình ứng du ̣ng biê ̣n pháp sinh ho ̣c xử lý môi trường nước nuôi trồ ng thủy sản ; vai trò của các vi sinh vật quá trình làm nước nuôi tôm, cá biện pháp sử dụng các chế phẩm sinh học (probiotic) vai trò của việc cải tạo nước đầm nuôi trồ ng thủy sản Qua đưa ưu điể m và nhươ ̣c điể m của biê ̣n phấ p sử du ̣ng vi sinh vâ ̣t xử lý nước nuôi trồ ng thủy sản Nghiên cứu tuyển chọn các chủng vi khuẩn phân lập từ các mẫu đất, nước địa bàn Hà Nội Trình bày các phương pháp nghiên cứu khả chuyển hóa các hợp chất chứa nitơ của tế bào Nghiên cứu ảnh hưởng của một số điều kiện nuôi cấy đến khả sinh trưởng của vi sinh vật Đưa kết quả và thảo luận: tuyển chọn các chủng vi sinh vật; tạo chế phẩm Keywords: Sinh học; Vi sinh vật; Xử lý nước thải; Nuôi trồng thủy sản Content Tổng quan tài liệu Hiện nay, nuôi trồng thủy sản là một ngành kinh tế quan trọng của dât nước ta Tuy nhiên, việc nuôi trồng thủy sản gặp không khó khăn Nguyên nhân là các loài thủy hải sản nhạy cảm với môi trường, môi trường không đảm bảo thì chúng dễ mắc bệnh và chết gây thiệt hại lớn cho người nuôi Điều ảnh hưởng không nhỏ tới lợi ích quốc giá Việc dùng các hóa chất và chất kháng sinh nuôi trồng thủy sản bộc lộ các nhược điểm gây ô nhiễm môi trường, ảnh hưởng tới sức khỏe người tiêu dùng… hiện nay, người ta biết đến một biện pháp cải thiện hiểu quả chất lượng nuôi trồng thủy sản là sử dụng chế phẩm sinnh học Chế phẩm sinh học (probiotic) biết đến là “những vi sinh vật sống đưa vào thể với một lượng đầy đủ có lợi cho sức khỏe” Đối với nuôi trồng thủy sản, probiotic hiện coi là một liệu pháp an toàn và hiệu quả xử lý nước ô nhiễm nhằm thay cho các loại thuốc kháng sinh và hóa chất sử dụng trước Ở nước ta việc sử dụng các chế phẩm sinh học nuôi trồng thủy sản mới ứng dụng nhiều từ năm 2000 trở lại đây, qua thực tế sử dụng cho thấy kết quả tốt hiện Việt Nam, hầu hết các sở nuôi tôm các sử dụng chế phẩm vi sinh vật Hiện các loài vi sinh vật Bacillus, Lactobacillus, nhón vi khuẩn quang dương,hóa dưỡng… sẻ dụng chủ yếu để sản xuất các chế phẩm sinh hoc Nguyên liêu phương pháp nghiên cứu 2.1 Vi sinh vật - Các chủng vi sinh vật phân lập từ các mẫu đất, nước thuộc địa bàn Hà Nội 2.2 Phân lập và tuyển chọn Các mẫu phân lập pha loãng tới độ pha loãng cần thiết rồi cấy gạt môi trường thạch dinh dưỡng Nuôi nhiệt độ 28 – 30oC 24 Các khuẩn lạc mọc lên kiểm tra hiển vi và kiểm tra các đặc điểm khác, phù hợp tuyển chọn cho các thí nghiệm 2.3 Xác định các hoạt tính enzym, kháng khuẩn, khả oxy hóa nitrat: - Xác định hoạt tính enzym, hoạt tính kháng khuẩn phương pháp nhỏ dịch - Xác định khả oxy hóa nitrat cách đo hàm lượng nitrit theo phương pháp Therner và đo hàm lượng nitrat theo phương pháp Bruice 2.4 Nghiên cứu một số điều kiện nuôi cấy ảnh hưởng lên khả sinh trưởng của vi sinh vật 2.5 Phương pháp tạo chế phẩm: - Xác định một số điều kiện lên men xốp thích hợp cho các vi sinh vật lựa chọn - Thử nghiệm chế phẩm vừa tạo xử lý nước NTTS bị ô nhiễm với bình đối chứng và bình thí nghiệm Kết quả và thảo luận 3.1 Phân lập và tuyển chọn - Từ các mẫu đất và nước địa bàn Hà Nội, phân lập 31 chủng vi khuẩn Bacillus Thử hoạt tính enzym của các chủng này thì thu năm chủng có hoạt tính mạnh tiếp tục tiến hành thí nghiệm thì thu kết quả bảng sau: Bảng 3.1: Hoạt tính enzym chủng lựa chọn Kí hiệu chủng Hoạt tính enzym (D-d,mm) Kitinaza Proteaza Xenlulaza Amylaza TL1 35 26 32 30 BD2 23 19 23 21 A4 25 20 22 24 D3 20 22 21 20 A2 26 20 23 23 Như vậy, chủng TL1 có hoạt tính enzym mạnh cả Tiến hành xem xét các đặc điểm hình thái, sinh thái của chủng này xác đinh TL1 thuộc chi Bacillus 3.1.2 Lactobacillus: Chúng phân lập chủng L5 có khả kháng một số vi khuẩn gây bệnh Bảng 3.8: Hoạt tính ức chế vi sinh vật kiểm định chủng L5 Hoạt tính kháng khuẩn (D-d,mm) Chủng V parahaemolyticus Salmonella typhi 25 L5 E coli 20 Tiến hành xem xét đặc điểm hình thái sinh thái của chủng này cho thấy L5 thuộc chi Lactobacillus Sau tiến hành giải trình tự ARN 16s chủng L5 xác định là loài L plantarum 3.1.3 Các chủng oxy hóa nitrat Phân lập 13 chủng oxy hóa amôni và 10 chủng oxy hóa nitrit Trong hai chủng NA7 và NT2 có khả sinh trưởng và chuyển hóa các hợp chất nito cao Sau nghiên cứu các đặc điểm hình thái, sinh hóa xác định NA7 thuộc chi Nitrosomonas và NT2 thuộc chi Nitrobacter 3.2 Các yếu tố ảnh hưởng lên khả sinh trưởng: Chủng Bacillus phát triển tốt môi trường LB với pH = 7, thời gian thích hợp là 48h, với nguồn cacbon là bột ngô và nguồn nito là bột đậu tương Chủng L plantarum L5 phát triển tốt môi trường có pH = 6-7, sau 48h với nồng độ muối là 2% 3.3 Tạo chế phẩm 3.3.1 Điều kiện lên men xốp thích hợp: Môi trường lên men xố p thích hơ ̣p : môi trường cám trấu, tỷ lệ cám: trấu thích hợp: tỷ lệ 5:5, thời gian lên men xốp: với Bacillus: ngày; với Lactobacillus L5: ngày, nhiệt độ: với Bacillus TL1: 30oC và với L plantarum L5: 35oC; độ ẩm (tỷ lệ nước: cám + trấu): 5: 3.3.2 Thử nghiệm chế phẩm xử lý nước NTTS: Sau xử lý 10 ngày, thu kết quả sau: Bình thí nghiệm các thông đơn vi ̣ Bình đối chứng Ngày Sau đầ u số Sau Sau 10 Ngày ngày ngày đầ u ngày ngày ngày Sau Sau Sau 10 pH đv pH 7,4 7,2 7,1 7,0 7,4 7,4 7,2 7,1 Độ muối ‰ 21 19 19 20 21 20 19 20 7,00± 5,30± 5,00± 4,36± 0,30 0,42 0,15 0,11 7,00 7,01 6,98 6,92 1,34± 0,52± 0,15± 0,07± 1,34 1,33 1,35 1,32 0,21 0,023 0,032 0,015 0,23± 0,17± 0,13± 0,12± 0,02 0,01 0,03 0,01 0,23 0,19 0,17 0,18 15± 11,02± 7,08± 5,10± 15 14,2 13,9 13,5 0,5 0,49 0,20 0,36 8,9± 6,8± 4,7± 3,5± 8,9 8,2 8,0 7,8 0,17 0,16 0,20 0,10 Nitơ tổ ng số mg/l N NH3 N NO2- mg/l COD mg/l BOD mg/l Kết quả cho thấy sau 10 ngày thí nghiệm các bình thí nghiệm (có thêm chế phẩm) các số lý hóa sinh hóa của nước giảm rõ rệt và đạt dưới mức ô nhiễm: Nito tổng giảm 37,7% sau 10 ngày xử lý, NH3 giảm 91,8%, NO2 giảm 47,8%, COD giảm 66,0% và BOD giảm 60,6% Còn bình đối chứng (không thêm chế phẩm), các số giảm chậm và ít, nước tình trạng bị ô nhiễm Kết luận Đã tuyển chọn chủng vi sinh vật có khả làm nước sử dụng để tạo chế phẩm vi sinh vật: chủng Bacillus TL1, chủng L plantarum L5, chủng Nitrosomonas NA7 và chủng Nitrobacter NT2 Tạo chế phẩm probiotic dạng rắn, bước đầu thử nghiệm chế phẩm xử lý nước NTTS Kết quả cho thấy chất lượng nước chuyển biến đáng kể theo chiều hướng tích cực sau 10 ngày xử lý The sellection of microorganism strains to produce probiotic to treat aquaculture wastewater Preface: Nowadays, aquaculture is one of key industry in our country However, aquaculture also faces many difficulties It causes mainly by the high sensitive of aquatic animals to environment, if the environment is good enough, the animals will get deseases easily and die causing big loss for people That also effect to national benefit The use of chemic and antibiotic in aquaculture is disclosing their weaknesses, such as causing polluted environment, affect to consumers’ health… At present time, it is known that there is a method that can improve effectively the quality of aquaculture, it is the use of probiotic Probiotic is known as “alive microorganisms that given into the body an enough amount will useful for body health” For aquaculture, probiotic is considered as a safety and effective method to treat wastewater aiming to replace antibiotic and chemical substances that used before Microorganisms and research methods: 2.1 Microorganisms - Strains isolated from soil, water pattern in Hanoi 2.2 Isolation and selection These patterns to isolate were mixed into water to the right level, then grow in a culture medium Put in 28 – 30oC for 24 hours The developed colonies were studied with microscope studied other characters, if it was suitable to the demand, select it for farther experiments 2.3 Specify the enzyme, anti-bacteria activities, nitrate oxidation: - Specify the enzyme, anti-bacteria activities by drop method - Specify the nitrate oxidation activity by measure nitrite and measure nitrate 2.4 Study some conditions of culture affecting growth’s abitity of microorganisms 2.5 Method of produce probiotic: - Identify some suitable fermentation condition for selected organisms - Experiment probiotic in treating aquaculture wastewater with control vessel and exrperimental vessels Result and discuss: - Isolated 31 Bacillus strains Study their enzyme activities and find out strains have the highest actitivities Then continue to experiment the strains’ enzyme activities and result to the table: Table 3.1: The selected strains’ enzyme activities Strains Enzyme activities (D-d, mm) Kitinaza Proteaza Xenlulaza Amylaza TL1 35 26 32 30 BD2 23 19 23 21 A4 25 20 22 24 D3 20 22 21 20 A2 26 20 23 23 So, TL strains has the highest enzyme activities Study its complexition we identify this strain as Bacillus genus 3.1.2 Lactobacillus: We isolated L5 that can resist some bacteria c90ausing deseases Strain Anti-bacteria activities (D-d, mm) V parahaemolyticus Salmonella typhi 25 L5 E coli 20 Study this strain’s complexition, we found out that it be longs to Lactobacillus genus Then we study the sequence of RNA 16s and found that it was L plantarum species 3.1.3 Nitrate oxidation strains Isolated 13 amonia oxidation strains and 10 nitrite oxidation strains NA7 strain and NT2 strain are able to grow and convert the highest nitrogen compounds After studied their complexition, we specified NA7 strain belongs to Nitrosomonas genus and NT2 belongs to Nitrobacter genus 3.2 The elements affect growth ability: Bacillus TL1 grow best in LB culture medium with pH = in 48 hours and has a carbon source as may flour and has a nitrogen source as soybean flour L plantarum L5 grow best in culture medium with pH = 6-7 in 48 hours with 2% NaCl 3.3 Produce probiotic 3.3.1 The suitable condition for fermentation Medium for fermentation: bran + rice husk; the suitable rate: brans : rice husk; time: days for Bacillus and days for L plantarum L5; temperature: 30oC for Bacillus and 35oC for L plantarumL5; moisture: 5:5 3.3.2 Experiment probiotic in aquaculture wastewater: After 10 days of treatment, we had the following result: Experimental vessels First After After After First day days days pH unit Indexed Control vessel 7,4 7,2 ‰ 21 unit mg/l N NH3 N NO2- mg/l COD days days 7,1 7,0 7,4 7,4 7,2 7,1 19 19 20 21 20 19 20 7,00± 5,30± 5,00± 4,36± 0,30 0,42 0,15 0,11 7,00 7,01 6,98 6,92 1,34± 0,52± 0,15± 0,07± 1,34 1,33 1,35 1,32 0,21 0,023 0,032 0,015 0,23± 0,17± 0,13± 0,12± 0,02 0,01 0,03 0,01 0,23 0,19 0,17 0,18 11,02± 7,08± 5,10± 15 14,2 13,9 13,5 0,49 0,20 0,36 6,8± 4,7± 3,5± 8,9 8,2 8,0 7,8 0,17 Total nitrogen days 8,9± concentration 10 days day 0,5 Salt After After 10 15± pH After 0,16 0,20 0,10 mg/l BOD mg/l After ten days of experiment, the result shown that the chemiphysical and chembiotic indexes in the experimental vessels decreased considerably and no more polluted: totol nitrogen decreased 37,7%; NH3 decreased 91,8%; NO2 decreased 47,8%; COD decreased 66,0% and BOD decreased 60,6% Meanwhile, in the control vessels these indexes decreased slowly and a little, the water was still polluted Conclusion Selected strains can clean the water to use to produce probiotic: Bacillus TL1, L plantarum L5, Nitrosomonas NA7 and Nitrobacter NT2 Produce solid probiotic, experiment to use the probiotic for treating aquaculture wastewater The result shown that water quality was changed to good condition considerablely after 10 days of treatment References Tiế ng Viêt: ̣ Nguyễn Tác An (1996), Phương pháp quản lý chấ t lượng nước phục vụ nuôi trồ ng thủy hải sản, Giáo trình cao học, Đa ̣i ho ̣c thủy sản Nha Trang Nguyễn Tác An (1998), Báo cáo đề tài “Điều tra hiện trạng môi trường ven biển thành phố Nha Trang và đề xuấ t các giải pháp cải thiê ̣n và phát triể n môi trường” , Nha Trang Bộ khoa học công nghệ và môi trường (2000), Tiêu chuẩn nước sinh hoạt TCVN 67722000, tiêu chuẩn nước cho bảo vệ đời sống thủy sinh TCVN 6773-2000, Hà Nội Lê Văn Cát (2007), Xử lý nước giàu hợp chất nitơ và photpho, Nhà xuất bản Khoa học tự nhên và Công nghệ, Hà Nội Lê Văn Cát, Đỗ Thị Hồng Nhung, Ngô Ngọc Cát (2006), Nước nuôi thủy sản: Chất lượng và biện pháp cải thiện chất lượng, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội Công ty cổ phầ n chứng khoán An Binh – Phòng phân tích (2010), Báo cáo Ngành Thủy ̀ sản Việt Nam Cục Bảo vệ nguồn lợi thủy sản (2000), “Hiện trạng sử dụng thuốc kháng sinh, hóa chất và chế phẩm môi trường nuôi tôm”, Trích tham luận hội nghị phát triển nuôi tôm tạo sản phẩm vệ sinh thực phẩm khu vực miền chung và miền nam, Thông tin Khoa học công nghệ, số 9, tr 11-12 Cục Khai thác và Bảo vệ Nguồn lợi thủy sản (2003), Chuyên đề : Tình hình nuôi trồng thủy sản thế giới và các vấn đề đáng quan tâm – số / 2003 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (2002), Vi sinh vật học, Nhà xuất bản Giáo dục, Hà Nội 10 Nguyễn Thành Đạt, Nguyễn Duy Thảo (1996), Vi sinh vật học, Nhà xuất bản Giáo dục, Hà Nội 11 Hồ Thanh Hải (1999), Tiề m về điề u kiê ̣n tự nhiên và nguồ n lợi sinh vật vùng triề u cửa sông ven biể n cho phát triể n thủy hả i sản, Báo cáo hội thảo khoa học quản lý và sử dụng bền vững tài nguyên và môi trường đất ngập nước cửa sông ven biển , Hà Nội 12 Nguyễn Văn Hảo (2002), Một số vấn đề về kĩ thuật nuôi tôm sú công nghiệp, Nhà xuất bản Nông nghiệp, thành phố Hồ Chí Minh 13 Lại Thúy Hiền (1998), “Một số đặc điểm sinh lí, sinh hóa của một số chủng vi khuẩn khử sulphat phân lập từ mỏ dầu Bạch Hổ”, Tạp chí sinh học, 8, tr 37-38 14 Nguyễn Đức Hô ̣i (1996), Phương pháp thu và phân tích mẫu lý – hóa học nước, Trung tâm thông tin KHKT và kinh tế thủy sản , Viê ̣n nghiên cứu thủy sản 1, Hà Nội 15 Hoàng Huệ (1996), Xử lý nước thải, Nhà xuất bản Xây dựng, Hà Nội 16 Khoa Thuỷ Sản, trường Đại học Cần Thơ (2000), Cẩm nang ki ̃ thuật nuôi thủy sản nước lợ, Nhà xuất bản Nông nghiệp, Hà Nội 17 Lê Văn Khoa (Chủ biên) (2003), Chỉ thị sinh học môi trường, Nhà xuất bản Giáo dục 18 Trần Tường Lưu (1994), “Đánh giá một số khía cạnh môi trường liên quan đến bệnh tôm khu vực phía Nam”, Báo cáo kết quả nghiên cứu chương trình khảo sát nguyên nhân gây chết tôm nuôi tại khu vực phía Nam và biện pháp phòng trừ để phát triển nghề nuôi tôm, Phần I, Viện nghiên cứu môi trường thủy sản II, thành phố Hồ Chí Minh 19 “Một số bệnh tôm nuôi và biện pháp phòng chống”, Thông tin khoa học công nghệ thủy sản, số 9/2002 20 Nguyễn Văn Nam, Phạm Văn Ty “Vai trò của chế phẩm sinh học nuôi trồng thủy sản”, Tạp chí Thông tin Khoa học Công nghệ - Kinh tế thủy sản, số 3/2007, tr 27 – 28 21 Nguyễn Trọng Nho (1994), Tình hình nuôi tôm thế giới và Việt Nam, số đặc điểm tôm sú, Đại học Thủy sản 22 Nguyễn Tro ̣ng Nho – Tạ Khắc Thường và ctv (1996), Các chỉ tiêu sinh thái chủ yếu các ao nuôi tôm ở các tỉnh Nam Trung bộ và vấ n đề nâng cao suấ t ở đây, Báo cáo tổng kết đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ, Nha Trang 23 Nguyễn Tro ̣ng Nho, Tạ Khắc Cường, Lục Minh Diệp , Nguyễn Thi ̣Xuyế n (1997), Nghiên cứu cải tiế n quy trình nuôi tôm sú thi ̣t tại Khánh Hòa đạt h iê ̣u quả kinh tế cao và suấ t ổ n ̣nh, Báo cáo đề tài nghiên cứu khoa học, Nha Trang 24 Lương Đức Phẩm (2000) Vi sinh vật lương thực và thực phẩm, Nhà xuất bản Giáo dục, Hà Nội 25 Lương Đức Phẩm (2002), Công nghệ xử lý nước thải các biện pháp sinh học, Nhà xuất bản Giáo dục, Hà Nội 26 Văn Phú (2003), “Bio – niề m tin trọn ve ̣n của người nuôi tôm ”, Tạp chí thủy sản , (12/2002, 1/2003) 27 Lê Thi ̣Phươ ̣ng (2010), Nghiên cứu chấ t lượng nước các đầ m nuôi tôm vùng rừng ngập mặn ven biển huyê ̣n Giao Thủy , tỉnh Nam Định và số biện pháp sinh học làm sạch nước các đầm nuôi tôm, Luâ ̣n án tiế n si ̃ sinh ho ̣c 28 Vũ Trung Tạng (2001), Cơ sở sinh thái học, Nhà xuất bản giáo dục, Hà Nội 29 Phan Lương Tâm và ctv (1998), “Kết quả bước đầu đánh giá nguyên nhân gây chết tôm các tỉnh phía Nam”, Tạp chí thủy sản, Hà Nội, tr 149-162 30 Bùi Quang Tề (2003), Bệnh tôm nuôi và biện pháp phòng trị, Nhà xuất bản Nông nghiệp, Hà Nội 31 Đặng Ngọc Thanh (1974), Thủy sản họ c đại cương , Nhà xuất bản đại học và trung học chuyên nghiê ̣p , Hà Nội 32 PGS TS Ngô Tự Thành (2001), “ Sự phân bố, sinh trưởng và sinh tổng hợp protease ngoại bào của Bacillus vùng Hà Nội”, Tạp chí sinh học 23, tr 153-157 33 Nguyễn Việt Thắng (1998), “Xác định nguyên nhân gây bệnh cho tôm Đồng sông Cửu Long và các giải pháp tổng hợp”, Các công trình nghiên cứu khoa học công nghệ thủy sản 1991-1995, Vụ Khoa học công nghệ, Hà Nội, tr 163-173 34 Nguyễn Hữu Thọ (2001), “Biến động của sulfite, ammonia, nitrite, BOD, COD, chlo hữu môi trường nước ảnh hưởng đến khả xảy bệnh đốm trắng, bệnh đàu vàng tôm nuôi Khánh Hòa”, Tạp trí thủy sản, 43, Bộ Thủy sản-Trung tâm nghiên cứu thủy sản III, tr 5-15 10 35 Võ Thị Thứ , La Thi ̣ Nga, Trương Ba Hùng , Nguyễn Minh Dương , Nguyễn Liêu Ba (2003), Nghiên cứu tạo chế phẩm Biochie và đánh giá tác dụng của chế phẩm đế n môi trường nước nuôi tôm cá, Hô ̣i nghi ̣Công nghê ̣ sinh ho ̣c toàn quố c 12/2003 36 Phạm Văn Tình (2003), Kĩ thuật nuôi tôm sú thâm canh, Nhà xuất bản Nông nghiệp, Hà Nội 37 Lê Trình (1997), Quan trắ c và kiể m soát ô nhiễm môi trường nước , Nhà xuất bản Khoa học kỹ thuật 38 Vũ Thế Trụ (1994), Cải tiến kĩ thuật nuôi tôm tại Việt Nam, Nhà xuất bản Nông nghiệp, Hà Nội Tiế ng Anh 39 Artemia Internation LLC (2002), “Sprirulina superfood for ornamental fish”, Technical Information Shrimp Larval and Enrichment Feeds, Dec 40 Block E., Koops H.P., Ahlers B (1991), The biochemistry of nitriflying organisms, In Variations in Autotrophic Life, Academic Press Limited, San Diego, pp 171-177 41 Block E., Sundermeyer-Klinger, Stackebraandt E (1993), New facultative lithoautotrophic nitrite- oxidizing bacteria, Arcg Microbiol, 136, pp.281-284 42 Bothe, Jost, Schloter M., Ward B and Witzel (2000), Molecular analysis of ammonia oxidation and denitrification in the natural environments, FEMS Microbiol Rev.,24, pp 673-682 43 Boyd C E and Tucker C S (1998), Pond aquaculture water quality Management, Kluwer Academic Publishers, London, pp 44 Chanratchakool P., Turnbull J F and liusuwan C (1995), Health management in shrimp pond, Aquatic animal health research institute kasetsart university campus, Jatujak, Bangkok 10900 Thailand 45 Chiu Liao P (1992), Marine prawn culture industry of Taiwan, In marine shrimp culture principle and practies Elsevier – Amsterdam – London – Newyork – Tokyo, pp 653-674 46 Diana J.S., Lin C.K., Schneeberger P.J (1991), “Relationships amônig nutrient inputs, water nutrient concentration, primary production, and yield of Oroechromis niloticus in pond”, Aquaculture, pp 323-341 11 47 Emanuel V., Adrian V., Ovidiu P., Gheorghe C (2005), “Isolation of a Lactobacillus plantarum strain used for obtaining a product for the preservation of fodders”, African Journal of Biotechnology, 50(3), pp 403-404 48 FAO/WHO (2001), “Health and Nutritional Properties of Probiotics in Food including Powder Milk with Live Lactic Acid Bacteria”, Report of a Joint FAO/WHO Expert Consultation on Evaluation of Health and Nutritional 49 Franson (1995), Standard methods for the Examinaition of Water and Wastewater, Publication Office American Public Health Association-Washington, DC 2005, 19th Edition, pp 225-227; 240-243 50 Gaudiosa Almazan-Gonzales (1995), Pond limnology and water quality parameters, Aquaculture derpartment southeast fisheries development center training and information division techno-transfer section tigbanan Hoilo city, Philippines 51 Hebe M Dionisi, Alice C Layton, Gerda Harms, Igrid R Gregory, Kevin G Robinson and Gray S Sayler (2002), “Quantification of Nitrosomonas oligotropha - like Ammonia Oxidizing Bacteria & Nitrospira spp from Full-Scale Wastewater Treatment Plants by Competitive PRC”, Application and Evironmental Microbiology, pp 245-253 52 Hung-Hung Sung, Shi-Fang Hsu, Chih-Kun Chemical, Yun-Yuan Tinh, Wei-Liang Chao “Relationship between desease outbreak in cultured tiger shrimp (Penaeus monodon) and the composition of Vibrio communites in pond water and shrimp hetopancreas during cultivation”, Inc, Jan 53 Hung-Soo, Mitsuyo, H and Makoto (2005), Characteritics of ammonium removal by heterotrophic nitrification - Aerobic denitrification by Alcalgenes faecali, 100(2), pp 184-191 54 Ian L Brown, Kenneth J Mc Naught, Robert N Ganly, Patric Lynne Conway, Anthony John Evans, David Lioyd, Topping, XinWang (2000),Probiotic compositions, US patent No: 6, 060, 050 55 Kakani (2003), “Probiotics: their role in aquaculture, Energee - American Standard Products”, Inc, Jan 10 56 Keeton Jimmie A, William Diane P (2000) “Probiotic formulation and method for reduction of pathogenic bacteria” US patent No: US 200331049091Nichols, 12 Andrew W (2007) "Probiotics and athletic performance: A systematic review", Current Sports Medicine Reports (Current Medicine Group LLC), pp 269–273 57 Paez-osuna F (2001), “The environmental inpact of Shrimp aquaculture: cause, effects, and mitigating alternatives”, Environ Manage, 46, pp 65-69 58 Sambasivam S., Chandrran R & Ajmal Khan S (2003), “Role of probiotics on the environment of shrimp pond”, Environ Bio, 34, pp 13-17 59 Shan H., Obbanrd J P (2001), “Ammonia removal from prawn aquaculture water using immobilized nitrifying bacteria”, Appl Microbiol Biotechnol, 71, pp 24-30 60 Sirirat Dengripat et all (1998), Effects of probiotic bacterium on black tiger shrimp Penaeus monodon survival and growth, In Aquaculture 167 61 Wang-Xiang-Hong, LiJun, JiWei-Shang, Xu-Huai-Shu (2002), Application of Probiotics in Aquaculture, Ocean University of Chindo, China, May 20, pp 145-147 62 William et all (1994), Bergey’s Manual of detereminative Bacteriology, 9th, edition, pp 559-560 Website: 63 http://www.atcvietnam.com.vn 64 http://opac.lrc.ctu.edu.vn 65 http://vi.wikipedia.org/wiki 13