TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÀ RỊA VŨNG TÀU KHOA HÓA HỌC & CNTP  ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC: NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT SINH KHỐI SPIRULINA PLATENSIS TRÊN MÔI TRƯỜNG NƯỚC BIỂN PHẠM THỊ KIM NGỌC Vũng Tàu, tháng 03 năm 2013 i LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tơi xin chân thành cảm ơn Khoa Hóa học & CNTP, môn Công nghệ Thực phẩm Trường Đại học Bà Rịa Vũng Tàu hỗ trợ trang thiết bị, máy móc, vật tư, phịng thí nghiệm giúp tơi hồn thành đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Ngơ Kế Sương, người tận tình hướng dẫn, hỗ trợ tơi nhiều suốt q trình nghiên cứu Tôi xin cảm ơn TS Nguyễn Thị Minh Nguyệt, sinh viên Lê Thị Khánh bạn đồng nghiệp trường Đại học Bà Rịa – Vũng Tàu giúp đỡ nhiều thời gian nghiên cứu Vũng Tàu, tháng 08 năm 2013 Tác giả Phạm Thị Kim Ngọc ii TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Trong nghiên cứu này, tơi tiến hành khảo sát tính chất hóa lý nguồn nước biển bãi biển Thủy Tiên, vùng biển tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu từ dùng nước biển để làm môi trường nuôi Spirulina platensis Tối ưu yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng Spirulina platensis môi trường nước biển vừa khảo sát Chúng tiến hành khảo sát tối ưu nhóm yếu tố: điều kiện nuôi cấy thành phần dinh dưỡng môi trường nuôi cấy Kết sau: - Xác định phương trình hồi quy thể ảnh hưởng điều kiện nuôi đến khối lượng sinh khối thu được: Y1= 0,9624 + 0,0636x1 + 0,0424x2 - 0,0772x3 + 0,039x1x2 + 0,025x1x3 + 0,038x2x3 x1, x2 x3 mã hóa yếu tố tỉ lệ giống cấy ban đầu, tỉ lệ nước biển nước cất sử dụng, pH môi trường - Xác định phương trình hồi quy thể ảnh hưởng hàm lượng chất dinh dưỡng bổ sung đến khối lượng sinh khối thu được: Y2= 1,1344 + 0,0032x1 + 0,0061x2 – 0,0013x3 x1, x2 x3 mã hóa yếu tố hàm lượng NaHCO3, NaNO3 Phospho bổ sung - Các điều kiện nuôi tối ưu xác định là: Mật độ giống cấy ban đầu: 0,35 g/l Tỉ lệ nước biển sử dụng: 29% pH môi trường: 8,5 Hàm lượng NaHCO3 bổ sung: 17 g/l Hàm lượng NaNO3 bổ sung: 3,0 g/l Hàm lượng phospho bổ sung: 70 mg/l - Đồng thời đề tài tiến hành so sánh nhận thấy sinh khối thu nuôi điều kiện nuôi tối ưu mơi trường nước biển có hàm lượng protein cao nuôi môi trường Zarrouk iii MỤC LỤC Trang Lời cảm ơn i Tóm tắt ii Mục lục iii Danh mục hình vi Danh mục bảng viii Lời mở đầu Chương Tổng quan tài liệu 1.1 Giới thiệu Spirulina 1.2 Phân loại học 1.3 Phân bố 1.4 Đặc điểm sinh học 1.4.1 Đặc điểm hình thái 1.4.2 Đặc điểm cấu tạo 1.4.3 Đặc điểm sinh sản 1.4.4 Đặc điểm sinh hóa 1.5 Giá trị dinh dưỡng 10 1.6 Nuôi trồng Spirulina 19 1.7 Các nghiên cứu Spirulina công bố 25 1.8 Tổng quan thành phần hóa học nước biển 26 Chương Nguyên vật liệu phương pháp nghiên cứu 29 2.1 Nguyên vật liệu 29 2.1.1 Nguyên liệu 29 2.1.2 Hóa chất 29 2.1.3 Dụng cụ, thiết bị 30 2.2 Phương pháp nghiên cứu 31 2.2.1 Sơ đồ nghiên cứu 31 2.2.2 Các phương pháp phân tích nước biển 32 iv 2.2.2.1 Xác định pH 32 2.2.2.2 Phương pháp xác định độ muối nước biển 32 2.2.2.3 Phương pháp phân tích hàm lượng HCO3- CO32- nước biển 33 2.2.2.4 Phương pháp phân tích hàm lượng nitrat có nước biển 33 2.2.2.5 Phương pháp phân tích hàm lượng phosphate có nước biển 35 2.2.2.6 Phân tích hàm lượng kim loại nặng 36 2.2.3 Phương pháp giữ giống, nhân giống xác định thời gian thu sinh khối 36 2.2.4 Phương pháp tối ưu hóa mơi trường nuôi Spirulina platensis 39 2.2.4.1 Tối ưu điều kiện ni cấy cho q trình ni cấy Spirulina platensis môi trường nước biển 39 2.2.4.2 Tối ưu hàm lượng chất dinh dưỡng cần bổ sung cho q trình ni cấy Spirulina platensis môi trường nước biển 41 2.2.4.3 Xây dựng đường chuẩn mối liên hệ hàm lượng sinh khối Spirulina platensis OD420 43 2.2.4.4 Phương pháp xác định hàm lượng sinh khối tảo khô 44 2.2.4.5 Phương pháp xác định suất sinh khối 45 2.2.5 Các phương pháp phân tích chất lượng sinh khối thu 45 2.2.5.1 Xác định hàm lượng protein thô theo TCVN 4328:2001 45 2.2.5.2 Xác định hàm lượng lipid tổng phương pháp Soxhlet 47 2.2.5.3 Phương pháp phân tích hàm lượng chất vơ 48 2.2.5.4 Xác định hàm lượng carotene 49 2.2.5.5 Phương pháp xác định hàm lượng diệp lục tố 50 2.2.6 Phương pháp xử lý số liệu 50 Chương Kết - Thảo luận 51 3.1 Kết phân tích tiêu hóa lý nước biển 51 3.2 Kết quan sát hình thái Spirulina platensis kính hiển vi 52 3.3 Kết thí nghiệm tìm tâm cho tốn tối ưu điều kiện ni cấy 52 3.3.1 Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ nước biển sử dụng đến khối lượng sinh khối Spirulina platensis thu suất tạo sinh khối 52 3.3.2 Khảo sát ảnh hưởng mật độ giống cấy ban đầu đến khối v lượng sinh khối Spirulina platensis thu suất tạo sinh khối 55 3.3.3 Khảo sát ảnh hưởng pH môi trường đến khối lượng sinh khối Spirulina platensis thu 57 3.4 Tối ưu toàn phần yếu tố điều kiện nuôi 59 3.4.1 Xác định phương trình hồi quy 59 3.4.2 Kiểm định tương thích phương trình hồi quy 61 3.4.3 Xác định điểm tối ưu 62 3.4.4 Mơ hình bề mặt đáp ứng thể ảnh hưởng điều kiện nuôi đến khối lượng sinh khối thu 62 3.5 Kết thí nghiệm tìm tâm cho tốn tối ưu thành phần dinh dưỡng bổ sung 63 3.5.1 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng NaHCO3 bổ sung 63 3.5.2 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng NaNO3 bổ sung 65 3.5.3 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng Phospho bổ sung 67 3.6 Tối ưu toàn phần yếu tố dinh dưỡng bổ sung 69 3.6.1 Xác định phương trình hồi quy 69 3.6.2 Kiểm định tương thích phương trình hồi quy 71 3.6.3 Xác định điểm tối ưu 71 3.6.4 Mơ hình bề mặt đáp ứng thể ảnh hưởng hàm lượng chất dinh dưỡng bổ sung đến lượng sinh khối thu 72 3.7 Làm thực nghiệm đối chứng so sánh nuôi Spirulina platensis môi trường Zarrouk môi trường nước biển điều kiện tối ưu 72 Chương Kết luận – Đề nghị 77 Tài liệu tham khảo 80 Phụ lục vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Lát cắt thành tế bào Spirulina platensis Hình 1.2: Mơ hình xếp vách tế bào Spirulina platensis Hình 1.3: Chu trình Calvin 10 Hình 1.4: Ni Spirulina theo hệ thống hở 23 Hình 1.5: Ni Spirulina theo hệ thống kín 24 Hình 1.6: Thu hoạch Spirulina 24 Hình 2.1: Giống Spirulina platensis 30 Hình 2.2: Sơ đồ nghiên cứu 31 Hình 2.3: Mơ hình nhân giống phịng thí nghiệm 37 Hình 2.4 Đường cong sinh trưởng Spirulina platensis nuôi thau nhựa 38 Hình 2.5: Spirulina platensis sau 10 ngày nuôi 38 Hình 2.6: Quy trình ni Spirulina platensis phịng thí nghiệm 39 Hình 2.7: Đường chuẩn mối quan hệ OD420 hàm lượng sinh khối khơ 44 Hình 3.1: Hình dạng Spirulina platensis 51 Hình 3.2: Đường cong sinh trưởng Spirulina platensis tỉ lệ nước biển sử dụng khác 54 Hình 3.3: Đường cong sinh trưởng Spirulina platensis mật độ giống cấy ban đầu khác 56 Hình 3.4: Spirulina sau ngày ni pH khác 57 Hình 3.5: Đường cong sinh trưởng Spirulina platensis pH môi trường khác 58 Hình 3.6: Spirulina platensis sau ngày ni thí nghiệm tối ưu yếu tố điều kiện nuôi 60 Hình 3.7: Mặt đáp ứng thể ảnh hưởng mật độ giống cấy ban đầu tỉ lệ nước biển sử dụng so với nước cất đến khối lượng sinh khối thu 63 Hình 3.8: Spirulina sau ni hàm lượng NaHCO3 khác 64 vii Hình 3.9: Đường cong sinh trưởng Spirulina platensis hàm lượng NaHCO3 bổ sung khác 65 Hình 3.10: Spirulina sau nuôi hàm lượng NaNO3 khác 66 Hình 3.11: Đường cong sinh trưởng Spirulina platensis hàm lượng NaNO3 bổ sung khác 67 Hình 3.12: Spirulina sau nuôi hàm lượng phospho khác 68 Hình 3.13: Đường cong sinh trưởng Spirulina platensis hàm lượng phospho bổ sung khác 69 Hình 3.14: Mặt đáp ứng thể ảnh hưởng hàm lượng phospho NaNO3 bổ sung đến lượng sinh khối thu lượng NaHCO3 bổ sung 17 g/l 72 Hình 3.15: Đường cong sinh trưởng Spirulina platensis nuôi môi trường nước biển điều kiện tối ưu môi trường Zarrouk 74 viii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Thành phần acid amin Spirulina 12 Bảng 1.2: Thành phần acid béo Spirulina 13 Bảng 1.3: Hàm lượng sắc tố tự nhiên sinh khối Spirulina platensis 15 Bảng 1.4: Hàm lượng acid nucleic số thực phẩm 16 Bảng 1.5: Thành phần vitamin Spirulina 17 Bảng 1.6: Thành phần khoáng Spirulina 18 Bảng 1.7: Các nguyên tố hóa học có nước biển 27 Bảng 2.1: Mức khảo sát mật độ giống cấy ban đầu, pH môi trường, tỉ lệ nước biển nước cất sử dụng để tìm thí nghiệm tâm 39 Bảng 2.2: Ma trận quy hoạch thực nghiệm tối ưu yếu tố 39 Bảng 2.3: Mức biến thiên yếu tố điều kiện nuôi cấy 41 Bảng 2.4: Mức khảo sát hàm lượng NaHCO3, NaNO3 Phospho bổ sung để tìm thí nghiệm tâm 42 Bảng 2.5: Mức biến thiên yếu tố điều kiện nuôi cấy 42 Bảng 3.1: Ảnh hưởng lượng nước biển sử dụng tới khối lượng sinh khối 53 Bảng 3.2: Ảnh hưởng mật độ giống cấy ban đầu tới khối lượng sinh khối thu suất sinh khối 55 Bảng 3.3: Ảnh hưởng pH môi trường tới khối lượng sinh khối thu 58 Bảng 3.4 Khối lượng sinh khối Spirulina platensis thu từ thực nghiệm tối ưu điều kiện nuôi cấy 60 Bảng 3.5 Các số bj tính theo số liệu thực nghiệm tối ưu điều kiện nuôi cấy 61 Bảng 3.6 Các hệ số hồi quy tj tính theo số liệu thực nghiệm tối ưu điều kiện nuôi cấy 61 Bảng 3.7 Các phương sai F tính theo số liệu thực nghiệm tối ưu điều kiện nuôi cấy 62 Bảng 3.8: Ảnh hưởng hàm lượng NaHCO3 bổ sung tới khối lượng sinh khối 64 Bảng 3.9: Ảnh hưởng hàm lượng NaNO3 bổ sung tới khối lượng sinh khối 66 ix Bảng 3.10: Ảnh hưởng hàm lượng phospho bổ sung tới khối lượng sinh khối thu 69 Bảng 3.11: Khối lượng sinh khối Spirulina platensis thu từ thực nghiệm tối ưu hàm lượng chất dinh dưỡng bổ sung 70 Bảng 3.12: Các số bj tính theo số liệu thực nghiệm tối ưu hàm lượng chất dinh dưỡng bổ sung 71 Bảng 3.13: Các hệ số hồi quy tj tính theo số liệu thực nghiệm tối ưu hàm lượng chất dinh dưỡng bổ sung 71 Bảng 3.14: Các phương sai F tính theo số liệu thực nghiệm tối ưu điều kiện nuôi cấy 71 Bảng 3.15: Khối lượng sinh khối thu nuôi đối chứng môi trường nước biển điều kiện tối ưu môi trường Zarrouk 74 Bảng 3.16: Khối lượng sinh khối theo ngày nuôi nuôi môi trường nước biển điều kiện tối ưu môi trường Zarrouk 74 Bảng 3.17: Thành phần hóa học sinh khối Spirulina platensis nuôi môi trường nước biển điều kiện tối ưu môi trường Zarrouk 75 90 yu : Giá trị thí nghiệm thứ u theo thực tế So sánh F tính (theo 4.6) với F1-p(f1,f2), f1 = N – l, f2 = n0 - Nếu F tính < F1-p(f1,f2): mơ hình tốn học phù hợp với thực nghiệm PHỤ LỤC 6: Kết thí nghiệm tối ưu yếu tố điều kiện nuôi 6.1 Bảng số liệu thô x1: pH môi trường, x2: mật độ giống cấy ban đầu, x3: Tỉ lệ nước biển sử dụng x1 x2 x3 Khối lượng sinh khối (theo chất khô, g/l) Lần Lần -1 -1 -1 1,023 1,029 -1 -1 1,047 1,045 -1 -1 0,975 0,977 1 -1 1,1101 1,1103 -1 -1 0,764 0,766 -1 0,842 0,844 -1 1 0,829 0,827 1 1,1048 1,105 0 1,0424 1,0422 0 1,0059 1,0077 0 6.2 Xác định hệ số bj 1,0072 1,007 x1 x2 x3 Y Y.x1 Y.x2 Y.x3 Y.x1.x2 Y.x1.x3 Y.x2.x3 Y.x1.x2.x3 -1 -1 -1 1,026 -1,026 -1,026 -1,026 -1 -1 1,046 -1 -1 0,976 1 -1 1,1102 1,1102 1,1102 -1,11 -1 -1 0,765 -1 -1 1 1,026 1,026 1,026 -1,026 1,046 -1,046 -1,046 -1,046 -1,046 1,046 1,046 -0,976 0,976 0,976 -0,976 0,976 1,1102 -1,11 -1,11 -1,1102 -0,765 -0,765 0,765 0,765 -0,765 -0,765 0,765 0,843 0,843 -0,843 0,843 -0,843 0,843 -0,843 -0,843 0,828 -0,828 0,828 -0,828 -0,828 0,828 -0,828 -0,976 -0,976 0,828 91 1 1,1049 1,1049 1,1049 1,1049 1,1049 1,1049 1,1049 1,1049 7,6991 0,5091 0,3391 -0,617 0,3131 0,2007 0,3107 0,0847 0,9624 0,0636 0,0424 -0,0772 0,0391 0,0251 6.3 Xác định hệ số Sth Sbj 0,0388 0,0106  Y x i bj  N N  Y x ij Y0 Y0-Ytb (Y0-Ytb)^2 x1 x2 x3 0 1,0423 0,0236 0,000555 0 1,0068 -0,012 0,000142 0 1,0071 -0,012 0,000135 Ytb 1,0187 Sth2 0,000417 Sbj 6.4 Xác định hệ số tj 0,002551 b0 b1 b2 b3 b12 b13 b 23 b 123 0,9624 0,0636 0,0424 -0,0772 0,0391 0,0251 0,0388 0,0106 t0 t1 t2 t3 t12 t13 t23 t123 16,6 30,2 15,3 9,8 15,2 4,15 377 24,9 6.5 Tính hệ số F - Tính S2dư x1 x2 x3 Y Yptrinh (Yptrinh– Y)^2 -1 -1 -1 1,026 1,0356 9,216E-05 -1 -1 1,046 1,0348 0,0001254 -1 -1 0,976 0,9664 9,216E-05 1 -1 1,1102 1,1216 0,00013 -1 -1 0,765 0,7552 9,604E-05 -1 0,843 0,8544 0,00013 -1 1 0,828 0,838 0,0001 1 1,1049 1,0932 0,0001369 0,0009026 S du2  f du N (y u u 1  yu )  0, 0009626  0, 0009626 87 92 - Tính F F  S 2du 0, 000   ,1 S th 0, 00 042 PHỤ LỤC 7: Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng NaHCO3 bổ sung 7.1 Bảng số liệu thô Bảng 7.1 Khối lượng sinh khối Spirulina platensis thu hàm lượng NaHCO3 bổ sung khác Sinh khối thu (g/l) Hàm lượng NaHCO3 bổ sung (g/l) Lần Lần Lần 12 1,0351 1,0281 1,0314 14 1,0862 1,0817 1,0902 16 1,1057 1,1062 1,1044 18 1,0745 1,0785 1,0699 7.2 Bảng số liệu thô dùng để vẽ đường cong sinh trưởng Spirulina platensis hình 3.9 Bảng 7.2 Mức độ tăng trưởng Spirulina platensis bổ sung NaHCO3 hàm lượng khác (thí nghiệm lần 1) Khối lượng sinh khối (theo chất khô, g/l) Ngày 0,1 0,2 0,3 0,4 0,3500 0,3500 0,3500 0,3500 0,3603 0,3621 0,3679 0,3617 0,3753 0,3801 0,3894 0,3786 0.4612 0,4695 0,4818 0,4692 0,5548 0,5613 0,5825 0,5622 0,6727 0,6874 0,7040 0,6869 0,8469 0,8945 0,9430 0,8934 0,9805 1,0129 1,0513 1,0070 1,0351 1,0862 1,1057 1,0745 0,9127 0,9213 1,0060 0,9312 93 7.3 Bảng phân tích ANOVA One-Way Analysis of Variance Data: NAHCO3.sinhkhoi Level codes: NAHCO3.NaHCO3 Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation SS d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 0088078 0029359 Within groups 0000995 0000124 236.150 0000 Total (corrected) 0089073 11 Table of means for NAHCO3.sinhkhoi - Level Count Average Stnd Error Stnd Error (internal) (pooled s) 95 % LSD intervals for mean 12 1.0315333 0020218 0020357 1.0282130 1.0348537 14 1.0860333 0024552 0020357 1.0827130 1.0893537 16 1.1054333 0005364 0020357 1.1021130 1.1087537 18 1.0743000 0024846 0020357 1.0709796 1.0776204 Total 12 1.0743250 0010179 0010179 1.0726648 1.0759852 Multiple range analysis for NAHCO3.sinhkhoi Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 12 1.0315333 18 1.0743000 14 1.0860333 16 1.1054333 X X X X - 94 PHỤ LỤC 8: Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng NaNO3 bổ sung đến sinh trưởng Spirulina platensis 8.1 Bảng số liệu thô Bảng 8.1 Khối lượng sinh khối Spirulina platensis thu hàm lượng NaNO3 bổ sung khác Sinh khối thu (g/l) Hàm lượng NaNO3 bổ sung (g/l) Lần Lần Lần 1,5 1,0278 1,0198 1,0311 2,5 1,1094 1,1037 1,1062 3,5 1,0927 1,0649 1,0876 8.2 Bảng số liệu thô dùng để vẽ đường cong sinh trưởng Spirulina platensis hình 3.11 Khối lượng (theo ck, g/l) Ngày 1.5 2.5 3.5 0,3500 0,3500 0,3500 0,3551 0,3717 0,3659 0,3623 0,3982 0,3913 0,4531 0,4964 0,4902 0,5579 0,5942 0,5864 0,6980 0,7560 0,7179 0,8928 0,9657 0,9273 0,9654 1,0856 1,0521 1,0278 1,1094 1,0927 0,9020 1,0420 0,9600 95 8.3 Bảng phân tích Anova One-Way Analysis of Variance Data: NANO3.sinhkhoi Level codes: NANO3.NaNO3 Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation SS d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 0101224 0050612 58.186 0001 Within groups 0005219 0000870 Total (corrected) 0106443 Table of means for NANO3.sinhkhoi Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 1.5 1.0262333 0033548 0053846 1.0169138 1.0355528 2.5 1.1064333 0016496 0053846 1.0971138 1.1157528 3.5 1.0817333 0085445 0053846 1.0724138 1.0910528 Total 1.0714667 0031088 0031088 1.0660861 1.0768473 Multiple range analysis for NANO3.sinhkhoi Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 1.5 1.0262333 X 3.5 1.0817333 X 2.5 1.1064333 X contrast difference +/limits 1.5 - 2.5 -0.08020 0.01864 * 1.5 - 3.5 -0.05550 0.01864 * 2.5 - 3.5 0.02470 0.01864 * - 96 PHỤ LỤC 9: Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng phospho bổ sung đến sinh trưởng Spirulina platensis 9.1 Bảng số liệu thô Bảng 9.1 Khối lượng sinh khối Spirulina platensis thu hàm lượng NaNO3 bổ sung khác Sinh khối thu (g/l) Hàm lượng phospho bổ sung (mg/l) Lần Lần Lần 60 1,1067 1,1018 1,1046 90 1,1322 1,1329 1,1278 120 1,1118 1,1204 1,1183 9.2 Bảng số liệu thô dùng để vẽ đường cong sinh trưởng Spirulina platensis hình 3.13 Khối lượng sinh khối (theo chất khô, g/l) Ngày 60,0 90.0 120 0,3500 0,3500 0,3500 0,3716 0,3721 0,3709 0,4008 0,4135 0,3978 0,5216 0,5384 0,5314 0,6735 0,6870 0,6813 0,8372 0,8561 0,8421 0,9623 0,9846 0,9736 1,1009 1,1058 1,1015 1,1067 1,1322 1,1118 0,9883 1,0543 1,0369 97 9.3 Bảng phân tích anova One-Way Analysis of Variance Data: P.sinhkhoi Level codes: P.phospho Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation SS d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 0010627 5.31364E-004 Within groups 0000676 1.12633E-005 47.176 0002 Total (corrected) 0011303 Table of means for P.sinhkhoi by P.phospho - Level Count Average Stnd Error Stnd Error 95 % LSD (internal) (pooled s) intervals for mean 60 1.1043667 0014193 0019376 1.1010131 1.1077202 90 1.1309667 0015962 0019376 1.1276131 1.1343202 120 1.1168333 0025887 0019376 1.1134798 1.1201869 Total 1.1173889 0011187 0011187 1.1154527 1.1193251 Multiple range analysis for P.sinhkhoi Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 60 1.1043667 120 1.1168333 90 1.1309667 X X X 10.PHỤ LỤC 10: Kết thí nghiệm tối ưu yếu tố hàm lượng chất dinh dưỡng bổ sung 10.1 Bảng số liệu thô x1: hàm lượng NaHCO3, x2: hàm lượng NaNO3, x3: hàm lượng phospho bổ sung 98 x1 x2 Khối lượng sinh khối (theo chất khô, g/l) x3 Lần Lần -1 -1 -1 1,1264 1,1266 -1 -1 1,1338 1,1334 -1 -1 1,1389 1,1395 1 -1 1,1433 1,1431 -1 -1 1,1217 1,1213 -1 1,1316 1,1314 -1 1 1,1373 1,1377 1 1,142 1,1418 0 1,1392 1,1394 0 1,1435 1,1441 0 10.2 Xác định hệ số bj 1,1409 1,1405 x1 x2 x3 Y -1 -1 -1 1,1265 -1 -1 -1 1 Y.x1.x2 Y.x1.x3 Y.x2.x3 Y.x1.x2.x3 -1,127 -1,1265 -1,1265 1,1265 1,1265 1,1265 -1,1265 1,1336 1,1336 -1,1336 -1,1336 -1,134 -1,134 1,1336 1,1336 -1 1,1392 -1,139 1,1392 -1,1392 -1,139 1,1392 -1,139 1,1392 -1 1,1432 1,1432 1,1432 -1,1432 1,1432 -1,143 -1,143 -1,1432 -1 -1 1,1215 -1,122 -1,1215 1,1215 1,1215 -1,122 -1,122 1,1215 -1 1,1315 1,1315 -1,1315 1,1315 -1,132 1,1315 -1,132 -1,1315 -1 1 1,1375 -1,138 1,1375 1,1375 -1,138 -1,138 1,1375 -1,1375 1 1,1419 1,1419 1,1419 1,1419 1,1419 1,1419 1,1419 1,1419 9,0749 0,0255 0,0487 -0,0101 -0,009 0,0033 0,0041 -0,0025 1,1344 0,0032 0,0061 -0,0013 -0,0011 0,0004 0,0005 -0,0003  Y x i bj  N Y.x1 Y.x2 Y.x3 N  Y x ij 10.3 Xác định hệ số Sth Sbj 99 x1 x2 x3 Y0 0 1,1393 -0,002 3,87E-06 0 1,1438 0,0025 6,42E-06 0 1,1407 -6E-04 3,21E-07 Ytb Y0-Ytb (Y0-Ytb)^2 1,1413 Sth2 5,3E-06 Sbj 10.4 Xác định hệ số tj 0,000288 b0 1,1344 b1 0,0032 b2 0,0061 b3 -0,0013 b 12 -0,0011 b 13 0,0004 b23 0,0005 b123 -0,0003 t0 3940,7 t1 11,073 t2 21,147 t3 4,39 t12 3,778 t13 1,433 t23 1,78 t123 1,09 10.5 Tính hệ số F - Tính S2dư x1 x2 x3 Y Yptrinh (Yptrinh– Y)^2 -1 -1 -1 1,1265 1,1264 1E-08 -1 -1 1,1336 1,1264 5,184E-05 -1 -1 1,1392 1,1328 4,096E-05 1 -1 1,1432 1,1328 0,0001082 -1 -1 1,1215 1,136 0,0002102 -1 1,1315 1,136 2,025E-05 -1 1 1,1375 1,1424 2,401E-05 1 1,1419 1,1424 2,5E-07 0,0001776 S du2  - f du N (y u u 1  yu )  0, 0001776  4, 4392 E  05 84 Tính F F  S du 4, 439 E  05   8, S th 5, E  100 11 PHỤ LỤC 11: Thí nghiệm ni so sánh nuôi Spirulina platensis môi trường Zarrouk môi trường nước biển điều kiện tối ưu 11.1 Kết phân tích Anova khối lượng sinh khối thu One-Way Analysis of Variance Data: DOICHUNG.sinhkhoi Level codes: DOICHUNG.dkien Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation SS d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 4.81667E-005 4.81667E-005 Within groups 1.46667E-005 3.66667E-006 13.136 0223 Total (corrected) 6.28333E-005 Table of means for DOICHUNG.sinhkhoi Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 1.1430000 0015275 0011055 1.1408288 1.1373333 0003333 0011055 1.1351621 1.1451712 1.1395046 Total 1.1401667 0007817 0007817 1.1386314 1.1417019 Multiple range analysis for DOICHUNG.sinhkhoi Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 1.1373333 1.1430000 X X - 101 11.2 Kết phân tích thành phần hóa học sinh khối thu nuôi môi trường khảo sát 11.2.1 Bảng số liệu thô Thành phần (% khối lượng) Môi trường Zarrouk Điều kiện tối ưu Lần Protein 53,31 Lipid 9,96 Chlorophyll 1,85 Carotene 0,58 Tro 2,16 11.2.2 Kết xử lý anova Lần 53,30 9,95 1,85 0,57 2,15 Lần 53,32 9,97 1,84 0,59 2,13 Lần Lần 53,26 10,04 1,86 0,59 2,03 53,25 10,02 1,86 0,58 2,01 Lần a Hàm lượng protein One-Way Analysis of Variance Data: PROTEIN.protein Level codes: PROTEIN.dk Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation SS d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 0054000 0054000 54.000 0018 Within groups 0004000 0001000 Total (corrected) 0058000 Table of means for PROTEIN.protein by PROTEIN.dk Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 53.310000 0057735 0057735 53.298661 53.321339 53.250000 0057735 0057735 53.238661 53.261339 Total 53.280000 0040825 0040825 53.271982 53.28801 Multiple range analysis for PROTEIN.protein by PROTEIN.dk Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 53.250000 X 53.310000 X 53,24 10,01 1,85 0,60 1,99 102 b Hàm lượng lipid One-Way Analysis of Variance Data: LIPID.lipid Level codes: LIPID.dk Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation SS d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 0088167 0088167 37.786 0036 Within groups 0009333 0002333 Total (corrected) 0097500 Table of means for LIPID.lipid by LIPID.dk Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 9.946667 0088192 0088192 9.929346 9.963987 10.023333 0088192 0088192 10.006013 10.040654 Total 9.985000 0062361 0062361 9.972753 9.997247 Multiple range analysis for LIPID.lipid by LIPID.dk Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 9.946667 X 10.023333 X contrast difference +/limits - -0.07667 0.03464 * c Hàm lượng chlorophyll One-Way Analysis of Variance Data: CHLOROPH.chl Level codes: CHLOROPH.dk Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation SS d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 1.50000E-004 1.50000E-004 4.500 1012 Within groups 1.33333E-004 3.33333E-005 Total (corrected) 2.83333E-004 103 Table of means for CHLOROPH.chl by CHLOROPH.dk Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 1.8466667 0033333 0033333 1.8401202 1.8532131 1.8566667 0033333 0033333 1.8501202 1.8632131 Total 1.8516667 0023570 0023570 1.8470376 1.8562957 Multiple range analysis for CHLOROPH.chl by CHLOROPH.dk Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 1.8466667 X 1.8566667 X - d Hàm lượng carotene One-Way Analysis of Variance -Data: CAR.CRO Level codes: CAR.DK Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation SS d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 1.50000E-004 1.50000E-004 1.500 2879 Within groups 4.00000E-004 1.00000E-004 Total (corrected) 5.50000E-004 Table of means for CAR.CRO by CAR.DK Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 5800000 0057735 0057735 5686612 5913388 5900000 0057735 0057735 5786612 6013388 Total 5850000 0040825 0040825 5769823 5930177 Multiple range analysis for CAR.CRO by CAR.DK Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 5800000 X 5900000 X 104 e Hàm lượng tro One-Way Analysis of Variance Data: TRO.tro Level codes: TRO.dk Means plot: LSD Confidence level: 95 Range test: LSD Analysis of variance Source of variation SS d.f Mean square F-ratio Sig level Between groups 0280167 0280167 88.474 0007 Within groups 0012667 0003167 Total (corrected) 0292833 Table of means for TRO.tro by TRO.dk Stnd Error Stnd Error 95 % LSD Level Count Average (internal) (pooled s) intervals for mean 2.1466667 0088192 0102740 2.1264891 2.1668442 2.0100000 0115470 0102740 1.9898224 2.0301776 Total 2.0783333 0072648 0072648 2.0640656 2.0926010 Multiple range analysis for TRO.tro by TRO.dk Method: 95 Percent LSD Level Count Average Homogeneous Groups 2.0100000 X 2.1466667 X -