Lao động cha đẻ hạnh phúc! ĐỀ CƯƠNG THƯC HÀNH VI SINH Y HỌC (ĐỐI TƯỢNG SV Y2 CHÍNH QUY) Câu Kể tên loại hình thể vi khuẩn cho ví dụ minh họa với loại vi khuẩn mà anh (chị) biết qua học thực hành? Các loại hình thể vi khuẩn : cầu khuẩn, trực khuẩn, xoắn khuẩn Cầu khuẩn: vi khuẩn có hình cầu, ví dụ: tụ cầu vàng, liên cầu A, lậu cầu, phế cầu… Trực khuẩn: vi khuẩn có hình que, ví dụ: trực khuẩn lao, trực khuẩn shigella gây bệnh lỵ, trực khuẩn salmonella gây bệnh thương hàn… Xoắn khuẩn: vi khuẩn xoắn theo dạng lò xo, ví dụ: xoắn khuẩn giang mai, leptospira… Câu Nêu phương pháp chẩn đoán vi sinh vật, cho ví dụ minh họa? Các phương pháp chẩn đoán vi sinh vật gồm: chẩn đoán trực tiếp chẩn đoán gián tiếp: Chẩn đoán trực tiếp: phương pháp nhằm xác định có mặt vi sinh vật, thành phần cấu tạo vi sinh vật (enzym, thành phần kháng nguyên: lông, vỏ, vách), sản phẩm vi sinh vật tạo ta (độc tố, độc lực) Bao gồm kỹ thuật: Soi tươi: Soi trực tiếp vi khuẩn sống Nhuộm soi: Giết vi khuẩn nhuộm màu Nuôi cấy: tạo môi trường dinh dưỡng cho vi sinh vật phát triển tồi cấy lên môi trường để xác định tính chất, định danh Gây bệnh thực nghiệm: lên loài động vật Phát kháng nguyên phản ứng miễn dịch kháng thể mẫu Kỹ thuật sinh học phân tử: phát AND/ARN (quá trình tổng hợp AND thực bên phân tử sống) VD: để chẩn đoán vi khuẩn lao: Nhuộm Ziel-Neelsen Nuôi cấy (từ đến tuần tạo khuẩn lạc) Gây bệnh thực nghiệm chuột lang Phản ứng miễn dịch (nhuộm miễn dịch huỳnh quang) PCR để xác định DNA vi khuẩn lao Chẩn đoán gián tiếp: Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page Lao động cha đẻ hạnh phúc! Là phương pháp xác định có mặt kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên vi sinh vật huyết bệnh nhân Kháng thể tìm thấy huyết bệnh nhân nên phản ứng gọi phản ứng huyết học Nguyên lý: dùng kháng nguyên mẫu để tìm kháng thể Tùy theo loại vi sinh vật áp dụng kỹ thuật hiệu nhất, phù hợp Câu Tiệt trùng gì? Nêu phương pháp sử dụng tiệt trùng? Khái niệm: Tiệt trùng tiêu diệt tất vi sinh vật (kể nha bào) bất hoạt virus loại bỏ hoàn toàn khỏi vật cần tiệt trùng Các biện pháp tiệt trùng Nguyên tắc chung: tất biện pháp phải tiêu diệt vi sinh vật nha bào vật cần tiệt trùng 2.1 Khí nóng khô Không khí sấy nóng tủ sấy 170-180 oC/1h Áp dụng: để tiệt trùng vật dụng chịu nhiệt kim loại, thủy tinh, đồ gốm Không dùng để tiệt trùng vật dễ cháy nhựa, cao su… 2.2 Hơi nước áp suất cao (to cao) Sử dụng lò hấp (nồi hấp) tạo nước căng bão hòa nhiệt độ >100oC dùng để tiệt trùng Áp dụng: tiệt trùng dụng cụ kim loại, thủy tinh, đồ vải, cao su, số chất dẻo, dung dịch lỏng, môi trường nuôi cấy vi khuẩn Sử dụng thận trọng, đảm bảo quy tắc an toàn 2.3 Tia Gama Là xạ ion hóa giàu lượng tiêu diệt vi sinh vật Áp dụng: tiệt trùng katgut vật dụng nhạy cảm với Ethylenoxid hay nhiệt độ cao catheter mảnh ghép Tiệt trùng dụng cụ băng túi đóng sẵn 2.4 Sử dụng hóa chất Thường dùng ethylenoxid Formaldehyd Hạn chế: ethylenoxid chất độc, gây dị ứng, kích thích niêm mạc mạnh dễ gây cháy, ung thư Vì sử dụng phải cẩn thận, đề phòng cháy nổ 2.5 Lọc vô trùng Lọc màng: dùng màng lọc với khe hở nhỏ đủ để giữ lại vi sinh vật Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page Lao động cha đẻ hạnh phúc! Lọc sâu: dòng chảy qua lớp vật liệu có cấu tạo sợi, hạt gắn vi sinh vật vào cấu trúc mạng Áp dụng: để lọc chất khí, lỏng, sản phẩm sinh học áp dụng biện pháp tiệt trùng khác Câu Khử trùng gì? Các phương pháp sử dụng khử trùng ? Định nghĩa: khử trùng làm cho vật khử trùng không khả gây nhiễm trùng (tiêu diệt mầm bệnh mà tất vi sinh vật) Nguyên tắc: bất hoạt không phục hồi lại mầm bệnh Vai trò: Có vai trò quan trọng tác nhân gây bệnh tồn nhiều nơi mà việc tiệt trùng nhiều lý kinh tế thực áp dụng rộng rãi Các biện pháp vật lý 2.1 Hơi nước nóng Thường dùng luồng nước nóng 80-100oC tiêu diệt tế bào sinh trưởng trạng thái tự vài phút Áp dụng: khử trùng chăn, màn, quần áo, dụng cụ dùng người bệnh 2.2 Tia cực tím Cơ chế: tia cực tím làm biến đổi cấu trúc phân tử vi sinh vật acid nucleic dẫn đến đột biến làm hỏng vật liệu di truyền chết Áp dụng: khử trùng không khí hay nước Hạn chế: - diệt hầu hết vi khuẩn không tiêu diệt nha bào bào tử nấm, gây viêm kết mạc giác mạc Các biện pháp hóa học 3.1 Cồn Cơ chế: làm biến tính protein phá hủy cấu trúc màng tế bào Áp dụng: khử trùng da, khử trùng bàn tay phẫu thuật vệ sinh phòng bệnh Hạn chế: không tiêu diệt nha bào, tác dụng diệt virus có nhiều ý kiến khác Cồn dễ cháy dễ bay Khi sử dụng dùng cồn 70o để tránh bỏng da 3.2 Phenol dẫn xuất phenol Cơ chế: phá hủy màng tế bào, bất hoạt enzym biến tính protein Áp dụng: dùng để đánh giá tác dụng sát khuẩn hóa chất Chỉ số phenol [P]min/[chất sát khuẩn]min có tác dụng lên loài vi khuẩn thời gian định Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page Lao động cha đẻ hạnh phúc! Hạn chế: không diệt nha bào virus, ăn da, niêm mạc gây độc với thần kinh 3.3 Nhóm Halogen Cơ chế: phá hủy màng tế bào, gây bất hoạt enzym Một số halogen thường dùng: clo thường dùng khuẩn nước ăn nước hồ bơi Clorua vôi dùng để khử trùng chất nôn, chất thải dụng cụ thô rắc hố xí 3.4 Muối kim loại nặng Hoạt tính kháng khuẩn theo thứ tự Hg, Ag, Cu, Zn Cơ chế: làm bất hoạt protein Hạn chế: không diệt nha bào, virus khả tiêu diệt vi khuẩn kháng acid yếu Áp dụng: hợp chất hữu Hg thường dùng sát trùng vết thương, da niêm mạc dùng lưu trữ chế phẩm sinh học (vaccine, kháng huyết thanh) Nitrat bạc pha chế dung dịch nhỏ mắt cho trẻ sơ sinh Sulfat kẽm kem/mỡ oxid kẽm thường dùng để điều trị bệnh da da nhiễm vi khuẩn nấm 3.5 Aldehyd Dung dịch Formaldehyd: tiêu diệt vi khuẩn, nấm virus, đủ thời gian nhiệt độ cao tiêu diệt nha bào Áp dụng: dung dịch nước để lau chùi sàn nhà đồ dùng, dùng để khử trùng không khí máy móc lớn Hạn chế: gây kích thích da, niêm mạc, dẫn tới dị ứng nghi ngờ gây ung thư Nó làm tủa protein nên không dùng để khử trùng chất thải 3.6 Một số chất khác Các chất oxi hóa (H2O2, KmnO4) thuốc nhuộm (ví dụ: xanh methylen, tím tinh thể) pha chế thành dung dịch lỏng, thường dung làm chất sát khuẩn, có tác dụng ức chế giết chế vi khuẩn Acid base có tác dụng diệt vi khuẩn tính điện phân thành H+ OH- mạnh Câu Trình bày bước chuẩn bị tiêu nhuộm? Sau chuẩn bị đầy đủ vi khuẩn bệnh phẩm để nhuộm dụng cụ khác đèn cồn, que cấy, máy lửa, nước muối sinh lý, lam kính sạch… Để đảm bảo có tiêu tốt sau nhuộm, trình làm tiêu để Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page Lao động cha đẻ hạnh phúc! nhuộm chia bước theo trình tự sau: dàn phiến đồ, để khô, cố định nhuộm Dàn phiến đồ: nhằm mục đính rải lớp mỏng vi khuẩn bệnh phẩm lên lam kính, giúp cho việc quan sát vi khuẩn rõ ràng Nếu dàn phiến đồ dày không vi khuẩn chồng đống chỗ thưa chỗ dày, khó quan sát Với phương pháp nhuộm Gram: dàn hình tròn theo vòng xoáy trôn ốc, từ ngoài, đường kính cm Với phương pháp nhuộm Ziehl-Neelsen: dàn theo hình elip, đường kính 2-3 cm Để khô phiến đồ: nhằm mục đích giúp cho vi khuẩn dính chặt vào lam kính, chúng không bị rửa trôi rửa nước cố định hóa chất Ngoài để khô có tác dụng giữ cho hình thể vi khuẩn không bị biến dạng cố định nhiệt độ Bởi vì, phiến đồ ướt cố định nhiệt độ (thường dùng lửa đèn cồn) vi khuẩn bị nước đột ngột, gây biến dạng hình thể vi khuẩn tế bào có bệnh phẩm Khi việc nhận định hình thể vi khuẩn tế bào gặp khó khăn Cố định: nhằm giết chế vi khuẩn trước nhuộm Phải giết chết vi khuẩn trước nhộm vì: khả bắt màu thuốc nhuộm vi khuẩn tốt chúng bị chết, sống khả chúng Có thể cố định hóa chất nhiệt độ Nhuộm: nhằm mục đích cho vi khuẩn có màu sắc bắt màu thuốc nhuộm chúng Câu Trình bày kỹ thuật nhuộm đơn (nhuộm xanh methylen) cách nhận định kết Có nhiều kỹ thuật nhuộm khác nhau, nhiên, bản, người ta chia làm hai phương pháo nhuộm đơn nhuộm kép: Nhuộm đơn: kỹ thuật nhuộm dùng loại thuốc nhuộm trình nhuộm Ví dụ nhuộm đơn xanh methylen, đỏ fucxin, tím gentian… Nhuộm đơn đơn giản cho biết hình thể cách xếp vi khuẩn, không cho biết khả bắt màu khác vi khuẩn Vì vậy, nhuộm đơn có ý nghĩa việc phân loại chẩn đoán vi khuẩn Kỹ thuật nhuộm đơn đơn giản, sau cố định tiêu bản, nhỏ thuốc nhuộm phủ kín phiến đồ, để phút, rửa nước, để khô Nhận định vi khuẩn: vi khuẩn có bệnh phẩm bắt màu xanh Câu Trình bày kỹ thuật nhuộm Gram cách nhận định kết quả? Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page Lao động cha đẻ hạnh phúc! Các hóa chất thuốc nhuộm: Các hóa chất thuốc nhuộm dùng kỹ thuật nhuộm Gram gồm có: Thuốc nhuộm gentian có màu tím Dung dịch lugol: hỗn hợp iod KI pha cồn, có tác dụng tạo phức hợp màu tím với thuốc nhuộm gentian Dung dịch cồn – aceton (pha theo thể tích 1:1) dùng để tẩy màu phức hợp tím Thuốc nhuộm fucxin có màu đỏ Trình tự bước tiến hành nhuộm Gram Sau chuẩn bị xong tiêu nhuộm trình tự bước thực sau: Bước 1: nhuộm màu vi khuẩn thuốc nhuộm gentian (30s) Bước 2: nhỏ dung dịch lugol (30s) Bước 3: tẩy màu tím nhỏ dung dịch cồn – aceton: thấy ánh tím từ phiến đồ vừa hòa tan hết cồn aceton (30s) Bước 4: nhuộm màu vi khuẩn thuốc nhuộm fucxin (30s) Chú ý: sau bước phải rửa nhẹ phiến đồ nước Sau nhuộm xong, phải để khô tiêu nhỏ dầu để soi Nhận định kết nhuộm Gram Các vi khuẩn có màu tím vi khuẩn Gram (+) Các vi khuẩn có màu đỏ Gram (-) Câu 8: Trình bày chế bắt màu thuốc nhuộm vi khuẩn kỹ thuật nhuộm Gram Tùy theo cấu tạo hóa học vách vi khuẩn, bước tạo phức hợp tím tạo vách tế bào vi khuẩn Phức hợp tím có khả bền hay không bền với cồn aceton Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page Lao động cha đẻ hạnh phúc! Phức hợp tím bền với cồn aceton: tẩy cồn bước 3, phức hợp màu tím vách tế bào vi khuẩn không bị hòa tan cồn Do nhuộm tiếp đỏ fucxin bước 4, vách không bắt màu đỏ fucxin vi khuẩn có màu tím Các vi khuẩn có khả vi khuẩn G (+) (do lớp peptidoglycan thành tế bào vi khuẩn G (+) dày G(-) Phức hợp tím không bền với cồn aceton: tẩy cồn bước 3, phức hợp màu tím vách tế bào vi khuẩn bị hòa tan cồn, bị trôi rửa nước vách màu Vì vậy, nhuộm tiếp đỏ fucxin bước vách vi khuẩn bắt màu đỏ fucxin Các vi khuẩn bắt màu đỏ gọi vi khuẩn G (-) Câu Trình bày kỹ thuật nhuộm Ziehl-Neelsen cách nhận định kết quả? Các hóa chất thuốc nhuộm Thuốc nhuộm đỏ fucxin: nồng độ đặc fucxin dùng kỹ thuật nhuộm Gram Dung dịch cồn acid: cồn 90 độ pha loãng với H2SO4 4% theo tỷ lệ nhau: dùng để tẩy màu thuốc nhuộm từ vách vi khuẩn Thuốc nhuộm xanh methylen có màu xanh Trình tự bước nhuộm Ziehl-Neelsen Sau chuẩn bị xong tiêu nhuộm, trình tự bước thực sau: Bước 1: Nhuộm màu vi khuẩn thuốc nhuộm fucxin: sau dùng đèn cồn hơ nóng phía tiêu bản, thấy bốc lên Hơ nóng dùng nhiệt để làm giãn nở cấu trúc lớp sáp bao bọc vách vi khuẩn kháng cồn kháng acid, tạo điều kiện cho thuốc nhuộm ngấm vào vách vi khuẩn Bước 2: Tẩy màu cồn acid: tẩy đến thấy hết màu đỏ Bước 3: Nhuộm màu vi khuẩn thuốc nhuộm methylen: giúp cho vi khuẩn bị màu đỏ tẩy cồn bắt màu xanh  Nhận định kết quả: Vi khuẩn bắt màu đỏ fucxin vi khuẩn kháng cồn kháng acid (viết tắt AFB – acid fast bacilli) vi khuẩn lao, vi khuẩn hủi… Các vi khuẩn bắt màu xanh methylen: bao gồm tất loại vi khuẩn tính kháng cồn kháng acid, tất nhiên gồm loại tế bào nhuộm bệnh phẩm Trên thực tế, có trực khuẩn kháng cồn kháng acid hình ảnh tiêu nhuộm Ziehl-Neelsen là: vi trường Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page Lao động cha đẻ hạnh phúc! màu xanh ( tạo từ tạp khuẩn tế bào…có bệnh phẩm), có trực khuẩn mảnh bắt màu đỏ nằm rải rác với số lượng khác tùy theo có mặt chúng bệnh phẩm Câu 10 Giải thích trực khuẩn lao bắt màu đỏ Fucshin nhuộm Ziehl-Neelsen? Tùy theo vi khuẩn có khả kháng cồn kháng acid hay không mà vi khuẩn bắt màu đỏ fucxin hay màu xanh methylen kỹ thuật nhuộm ZiehlNeelsen Ở bước 1, tất phiến đồ bắt màu đỏ fucxin Khi tẩy cồn bước 2, vi khuẩn kháng cồn kháng acid không bị dung dịch cồn acid tẩy màu đỏ vách Trong đó, vi khuẩn khác khả bị dung dịch cồn acid hòa tan bị nước rửa trôi hết màu đỏ vách Khi nhuộm xanh methylen bước 3, vách vi khuẩn kháng cồn kháng acid giữ màu đỏ nên không bắt màu thuốc nhuộm Trong vi khuẩn bị màu đỏ bước tẩy cồn acid bắt màu methylen có màu xanh  Trực khuẩn lao vi khuẩn kháng cồn kháng acid nên bắt màu đỏ fucxin nhuộm Câu 11 Kể tên kỹ thuật xét nghiệm chẩn đoán vi sinh mà anh (chị) nhận biết trình học thực hành? Các kỹ thuật xét nghiệm chẩn đoán vi sinh gồm: Chẩn đoán trực tiếp Là phương pháp nhằm xác định có mặt vi sinh vật, thành phần cấu tạo vi sinh vật ( enzym, thành phần kháng nguyên: lông, vỏ, vách), sản phẩm vi sinh vật tạo (độc lực, độc tố) Bao gồm kỹ thuật Soi tươi: soi trực tiếp vi khuẩn sống Nhuộm soi: giết vi khuẩn nhuộm màu (bao gồm nhuộm đơn (nhuộm xanh methylen), nhuộm kép (Nhuộm Gram nhuộm Ziehl-Neelsen) Nuối cấy: tạo môi trường dinh dưỡng cho vi sinh vật phát triển cấy lên môi trường để xác định tính chất, định danh Gây bệnh thực nghiệm: lên loài động vật Phát kháng nguyên phản ứng miễn dịch kháng thể mẫu Kỹ thuật sinh học phân tử: phát AND/ARN (quá trình tổng hợp AND thực bên phân tử sống) Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page Lao động cha đẻ hạnh phúc! Chẩn đoán gián tiếp Là xác định có mặt kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên vi sinh vật huyết bệnh nhân Kháng thể tìm thấy huyết bệnh nhân nên phản ứng gọi phản ứng huyết học ASLO, RPR, ELISA, Sắc ký miễn dịch, MDHQ gián tiếp Câu 12 Kể tên loại bệnh phẩm thường lấy từ bệnh nhân để nuôi cấy tìm vi khuẩn gây bệnh? Cho ví dụ minh họa? Các loại bệnh phẩm thường lấy từ bệnh nhân để nuôi cấy tìm vi khuẩn gây bệnh gồm Bệnh phẩm phân: Sallmonela, Shigella, E coli, V cholera, S aureus Bệnh phẩm máu: liên cầu A, HIV, HBC,… Bệnh phẩm mủ dịch: dịch tiết, ổ áp xe vỡ, ổ áp xe kín, dịch khoang thể (dịch màng bụng, màng phổi, màng tim) lao, lậu cầu, mủ xanh,… Câu13 Trình bày cách lấy bệnh phẩm mủ dịch? Để đảm bảo cho kết xét nghiệm xác, việc lấy bệnh phẩm khâu đóng vai trò quan trọng Nguyên tắc lấy bệnh phẩm mủ dịch giống nguyên tắc chung lấy bệnh phẩm sớm tốt, lấy trước dùng kháng sinh, phải đảm bảo vô trùng gửi đến phòng xét nghiệm, chậm sau lấy bệnh phẩm Ở phòng xét nghiệm chưa xét nghiệm ngay, phải bảo quản bệnh phẩm ngăn mát tủ lạnh Một số bệnh phẩm xa phòng xét nghiệm phải giữ môi trường bảo quản riêng để giữ cho vi khuẩn không chết thời gian vận chuyển Riêng cấy mủ tìm lậu cầu phải tiến hàng phòng thí nghiệm vi khuẩn lậu chết nhanh môi trường Trường hợp bệnh nhân điều trị kháng sinh toàn thân chỗ, phải ngừng kháng sinh sau 48h trước lấy mủ dịch để xét nghiệm Lấy bệnh phẩm từ ổ áp xe kín dịch khoang vô trùng Trong trường hợp trên, việc lấy bệnh phẩm phải đảm bảo tuyệt đối vô trùng Bởi vì, làm việc xác định nguyên gây nhiễm trùng dễ dàng Nếu để vi khuẩn bên nhiễm vào bệnh phẩm gây khó khăn cho việc xác định nguyên vi khuẩn gây bệnh Để thực vô trùng lấy bệnh phẩm, người ta thường dùng cồn iot 2% sát khuẩn da trước chọc hút mủ dịch bơm tiêm vô khuẩn Ống nghiệm chứa bệnh phẩm mủ dịch phải ống vô trùng có nút đậy kín Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page Lao động cha đẻ hạnh phúc! Động tác bơm bệnh phẩm từ bơm tiêm vào ống nghiệm tốt phải thực cạnh lửa đèn cồn để đảm bảo vô trùng Trong trường hợp hút mủ dịch phả gửi bơm tiêm đến phòng xét nghiệm, không nên bơm bệnh phẩm vào ống nghiệm Lấy bệnh phẩm từ ổ áp xe vỡ tổn thương hở có tiết mủ dịch Trong trường hợp này, lấy bệnh phẩm phải cố gắng thực theo nguyên tắc vô trùng tốt Nếu thương tổn ổ áp xe có vẩy khô bao phủ có nhiều mủ phải dùng gạc vô khuẩn làm bong vẩy dùng bơm tiêm vô khuẩn chọc hút mủ vị trí sát đáy ổ áp xe dùng tăm chấm lấy mủ dịch tiết Nếu tổn thương vẩy khô bao phủ có nhiều mủ dịch dùng bơm tiêm vô khuẩn hút mủ vị trí sát đáy ổ áp xe tổn thương có chiều sâu Nếu tổn thương nông mủ dịch dùng tăm vô khuẩn chấm vào chỗ có mủ Chú ý: tăm ống nghiệm vô khuẩn khoa Vi sinh vật cung cấp Câu 14 Trình bày cách lấy bệnh phẩm phân? Khi cần thiết lấy bệnh phẩm làm xét nghiệm? Cách lấy bệnh phẩm phân: Nguyên tắc: giống nguyên tắc chung Để đảm bảo cho kết xét nghiệm xác, việc lấy bệnh phẩm khâu đóng vai trò quan trọng Nguyên tắc lấy bệnh phẩm mủ dịch giống nguyên tắc chung lấy bệnh phẩm sớm tốt, lấy trước dùng kháng sinh, phải đảm bảo vô trùng gửi đến phòng xét nghiệm, chậm sau lấy bệnh phẩm Ở phòng xét nghiệm chưa xét nghiệm ngay, phải bảo quản bệnh phẩm ngăn mát tủ lạnh Một số bệnh phẩm xa phòng xét nghiệm phải giữ môi trường bảo quản riêng để giữ cho vi khuẩn không chết thời gian vận chuyển Trường hợp bệnh nhân điều trị kháng sinh toàn thân chỗ, phải ngừng kháng sinh sau 48h trước lấy mủ dịch để xét nghiệm Dụng cụ: Que tăm đóng typ thủy tinh hấp vô trùng Sonde thủy tinh: gồm typ thủy tinh nhỏ, đường kính khoảng 0.6 – 0.7 cm, có lỗ hở hình ovan kích thước 0.4*0.6 cm cách phần đầu tròn kín Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page 10 Lao động cha đẻ hạnh phúc! Câu 25 Nguyên tắc vận dụng kết kháng sinh đồ khoanh giấy vào điều trị? Nguyên tắc vận dụng kết kháng sinh đồ khoanh giấy vào điều trị: Ưu tiên dùng kháng sinh phổ hẹp, đường dùng để kháng sinh phát huy hiệu tối đa Ưu tiên trọn kháng sinh “S”, sử dụng theo khuyến cáo thông thường Nếu “S” chọn “I”, với liều lượng nhiều tùy theo kinh nghiệm bác sĩ Trong trường hợp có S I I có độ tập trung cao nơi nhiễm khuẩn lựa chọn I Khả chi trả người bệnh Sự phổ biến, sẵn có loại kháng sinh Câu 26 Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) gì? Trình bày kỹ thuật xác định nồng độ ức chế tối thiểu (kỹ thuật kháng sinh đồ định lượng)? Nồng độ chất ức chế tối thiểu (MIC) nồng độ nhỏ thuốc kháng sinh có tác dụng kìm hãm phát triển vi khuẩn gây bệnh Kỹ thuật xác định: kỹ thuật kháng sinh đồ định lượng thực dựa sở chung lượng vi khuẩn cần thử đưa vào môi trường có thuốc kháng sinh pha loãng dần theo bậc Sau thời gian nuôi cấy tủ ấm qua đêm (18-24h), MIC nồng độ kháng sinh ống pha loãng mà không quan sát thấy phát triển vi khuẩn, có nghĩa MIC nồng độ kháng sinh nhỏ mà có tác dụng ức chế phát triển vi khuẩn gây bệnh Câu 27 Kể tên loại phản ứng kết hợp kháng nguyên-kháng thể dùng chẩn đoán vi sinh vật? Cho ví dụ minh họa Các loại phản ứng kết hợp kháng nguyên-kháng thể dùng chẩn đoán vi sinh vật là:  Các phản ứng tạo thành hạt: phản ứng mà phức hợp kháng nguyênkháng thể hình thành dạng “hạt” quan sát mắt thường nhờ trợ giúp kính lúp Phản ứng kết tủa Phản ứng ngưng kết  Các phản ứng dựa vào hoạt động sinh học kháng thể Phản ứng trung hòa Các phản ứng gây ly giải tế bào  Các phản ứng dùng kháng nguyên kháng thể đánh dấu: Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page 27 Lao động cha đẻ hạnh phúc! Miễn dịch huỳnh quang Phản ứng miễn dịch phóng xạ Phản ứng miễn dịch enzym ELISA Sắc ký miễn dịch  Ví dụ phản ứng ngưng kết dùng chẩn đoán trực tiếp: Phản ứng ngưng kết phiến kính xác định vi khuẩn S typhi cấy máu chẩn đoán bệnh thương hàn, phản ứng ngưng kết chủ động Phản ứng ngưng kết phiến kính xác định vi khuẩn S flexneri cấy máu chẩn đoán bệnh lỵ trực khuẩn, phản ứng ngưng kết chủ động  Ví dụ phản ứng ngưng kết dùng chẩn đoán gián tiếp: Phản ứng Widal chẩn đoán vi khuẩn thương hàn, phản ứng ngưng kết chủ động Phản ứng RPR chẩn đoán vi khuẩn giang mai, phản ứng ngưng kết thụ động Phản ứng ASLO chẩn đoán liên cầu nhóm A, phản ứng ngưng kết thụ động Phản ứng Serodia chẩn đoán nhiễm virus HIV, phản ứng ngưng kết thụ động ELISA dùng chẩn đoán chủ yếu virus HIV, HBV, virus Dengue, cúm… Ngoài ra, ELISA sử dụng vào chẩn đoán vi khuẩn, ricketsia, chlamydia… Câu 28 Hiệu giá kháng thể gì? Ý nghĩa hiệu giá kháng thể ? Hiệu giá kháng thể nồng độ pha loãng huyết lớn mà phản ứng dương tính Hiệu giá kháng thể phản ánh nồng độ kháng thể huyết bệnh nhân  Ý nghĩa : Nếu HGKT lớn ngưỡng khả mắc bệnh cao Nếu HGKT bé ngưỡng khả mắc bệnh thấp Tuy nhiên việc xác định HGKT thời điểm thường chưa đủ, cần xác định thêm động lực kháng thể Câu 29 Động lực kháng thể ? Ý nghĩa động lực kháng thể ?  Là đại lượng đặc trưng cho mức độ thay đổi HGKT theo thời gian, tiến hành phản ứng huyết kép Lấy máu lần : Lần bệnh nhân vào viện, lấy cất Lần cách lần từ đến 10 ngày Tiến hành xét nghiệm với mẫu vào thời điểm Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page 28 Lao động cha đẻ hạnh phúc!  Động lực kháng thể = HGKT2/HGKT1  Ý nghĩa: Khi kháng thể tăng ĐLKT >1, kháng thể giảm ĐLKT=2 Bệnh nhân bị nhiễm virus ĐLKT >=4 Câu 30 Phản ứng huyết kép gì? Ý nghĩa thực tế phản ứng? Phản ứng huyết kép phản ứng xác định độ thay đổi HGKT theo thời gian cách: lấy máu lần Lần bệnh nhân vào viện, lấy cất Lần cách lần từ đến 10 ngày Tiến hành xét nghiệm với mẫu vào thời điểm  Động lực kháng thể = HGKT2/HGKT1  Ý nghĩa: Khi kháng thể tăng ĐLKT >1, kháng thể giảm ĐLKT=2 Bệnh nhân bị nhiễm virus ĐLKT >=4 Câu 31 Trình bày nguyên lý ứng dụng thực tế phản ứng kết tủa? Cho ví dụ minh họa  Nguyên lý: phản ứng kết tủa kết hợp kháng nguyên hòa tan (kháng nguyên tầm phân tử) với kháng thể tương ứng, tạo thành hạt quan sát trực tiếp mắt thường nhờ trợ giúp kính lúp  Ứng dụng thực tế: Các phản ứng kết tủa thường có độ nhạy thấp nên chúng sử dụng phản ứng ngưng kết vào chẩn đoán vi sinh  Ví dụ: phản ứng VDRL chẩn đoán bệnh giang mai Câu 32 Trình bày nguyên lý ứng dụng thực tế phản ứng ngưng kết trực tiếp? Cho ví dụ minh họa  Nguyên lý chung phản ứng ngưng kết là: kết hợp kháng nguyên hữu hình (tế bào mầm tế bào) với kháng thể, tạo thành phức hợp kháng nguyên-kháng thể dạng hạt ngưng kết quan sát mắt thường  Nguyên lý phản ứng ngưng kết trực tiếp là: phản ứng ngưng kết trực tiếp, thành phần kháng nguyên tế bào vi khuẩn (hoặc tế bào khác), kết hợp với kháng thể đặc hiệu tạo thành mạng lưới ngưng kết Các tế bào góp phần tạo lên kích thước hạt ngưng kết Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page 29 Lao động cha đẻ hạnh phúc!  Ứng dụng thực tế: có độ nhạy cao, phản ứng ngưng kết bao gồm ngưng kết chủ động ngưng kết thụ động, áp dụng phổ biến để chẩn đoán vi khuẩn virus chẩn đoán trực tiếp gián tiếp Câu 33 Trình bày nguyên lý ứng dụng thực tế phản ứng ngưng kết gián tiếp? Cho ví dụ minh họa  Nguyên lý chung phản ứng ngưng kết là: kết hợp kháng nguyên hữu hình (tế bào mầm tế bào) với kháng thể, tạo thành phức hợp kháng nguyên-kháng thể dạng hạt ngưng kết quan sát mắt thường  Nguyên lý phản ứng ngưng kết gián tiếp: phản ứng ngưng kết gián tiếp, kháng nguyên dạng hòa tan gắn lên mượn hữu hình ( thường hồng cầu hạt latex) Khi kháng nguyên gặp kháng thể đặc hiệu, tượng ngưng kết xảy mượn tụ tập lại cách ‘thụ động”  Ứng dụng thực tế: có độ nhạy cao, phản ứng ngưng kết bao gồm ngưng kết chủ động ngưng kết thụ động, áp dụng phổ biến để chẩn đoán vi khuẩn virus chẩn đoán trực tiếp gián tiếp  Ví dụ phản ứng ngưng kết dùng chẩn đoán gián tiếp: Phản ứng Widal chẩn đoán vi khuẩn thương hàn, phản ứng ngưng kết chủ động Phản ứng RPR chẩn đoán vi khuẩn giang mai, phản ứng ngưng kết thụ động Phản ứng ASLO chẩn đoán liên cầu nhóm A, phản ứng ngưng kết thụ động Phản ứng Serodia chẩn đoán nhiễm virus HIV, phản ứng ngưng kết thụ động Câu 34 Trình bày nguyên lý ứng dụng phản ứng miễn dịch gắn enzym (ELISA)  Nguyên lý: phức hợp kháng nguyên-kháng thể phát nhờ enzym gắn với kháng thể kháng kháng thể tác động lên chất đặc hiệu  Ứng dụng: lý an toàn, rẻ tiền dễ thực hiện, ELISA áp dụng phổ biến phòng xét nghiệm toàn giới  Ví dụ: ELISA dùng chẩn đoán chủ yếu virus như: HIV, HBV, virus Dengue, cúm… Ngoài ra, ELISA sử dụng vào chẩn đoán vi khuẩn, ricketsia, chlamydia… Câu 35 Trình bày nguyên lý phản ứng sắc ký miễn dịch? Nêu ứng dụng phản ứng này? Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page 30 Lao động cha đẻ hạnh phúc!  Nguyên lý: phức hợp kháng kháng thể gắn chất màu phân bố sắc ký Kháng nguyên đặc thù vi sinh vật gắn cố định “vạch PƯ” Khi nhỏ huyết cần xác định kháng thể lên sắc lý, kháng thể đặc hiệu (nếu có) huyết kết hợp với kháng kháng thể gắn màu, phức hợp kháng thể-kháng kháng thể gắn màu di chuyển giấy sắc ký bị giữ lại ‘vạch PƯ” kháng thể kết hợp với kháng nguyên vi sinh vật, kết “vạch PƯ” màu Nếu huyết kháng thể đặc hiệu, “vạch PƯ” kháng nguyên giữ kháng kháng thể gắn màu, không màu  Ứng dụng: phản ứng sắc lý miễn dịch áp dụng chủ yếu vào công tác sàng lọc tác nhân gây bệnh, thực phòng khám tuyến y tế sở điều kiện trang thiết bị để làm phản ứng có giá trị chẩn đoán cao Ví dụ phản ứng sắc ký miễn dịch chẩn đoán sàng lọc HIV, HBV… Câu 36 Nêu phương pháp vi sinh chẩn đoán nhiễm trùng vi khuẩn liên cầu nhóm A? Chẩn đoán trực tiếp: nhuộm soi, nuôi cấy Chẩn đoán gián tiếp: phản ứng ASLO, phản ứng ngưng kết thụ động ASLO phản ứng dùng để định lượng kháng thể kháng lại liên cầu A huyết bệnh nhân, nên huyền dịch chứa sẵn kháng nguyên Chứng + có kháng thể kháng liên cầu A, chứng âm Dùng que khấy lắc phút đọc kết quả, huyết bệnh nhân có kháng thể kháng liên cầu A kết giống chứng dương, âm tính Nếu bệnh nhân dương tính với liên cầu A có trường hợp, bệnh nhân mắc liên cầu A khỏi bệnh nhân bị mắc liên cầu A Cần làm thêm hiệu giá kháng thể để đánh giá, tiên lượng bệnh [ASLO] máu = HGKT × 200 Bình thường ASLO < 200IU/ml phản ứng âm tính, ngược lại dương tính Chứng + Chứng Tên bệnh nhân Chứng + giọt (50µl) Chứng giọt (50µl) Huyết 50µl Huyền dịch giọt giọt giọt KẾT QUẢ + tính + tính có Âm tính hạt ngưng kết, Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page 31 Lao động cha đẻ hạnh phúc! âm tính đục Câu 37 Nêu phương pháp vi sinh chẩn đoán bệnh thương hàn?  Bệnh phẩm: phân, nước tiểu, máu  Chẩn đoán trực tiếp: Nhuộm soi phân: 20 bạch cầu/vi trường Cấy phân môi trường MC, DC Cấy máu: sốt cao, chưa điều trị kháng sinh Cấy nước tiểu: tuần thứ  Chẩn đoán gián tiếp: Phản ứng Widal chẩn đoán vi khuẩn thương hàn, phản ứng ngưng kết chủ động Test MDHQ, ELISA, PCR HGKT, ĐLKT Câu 38 Nêu kỹ thuật chẩn đoán lao người ( M Tuberculosis)?  Chẩn đoán trực tiếp (chủ yếu): Nhuộm Ziehl-Neelsen: bệnh phẩm đờm, dịch não tủy, dịch màng phổi, nước tiểu Lấy bệnh phẩm đờm mẫu liên tiếp vào buổi ngày, đờm Kết quả: >10vk/vi trường/20 vi trường +++ 1-9vk/ vi trường/ 50 vi trường ++ 10-99vk/100 vi trường + 1-9vk/100 vi trường ghi số lượng cụ thể 0/300 vi trường  âm tính Gây bệnh thực nghiệm chuột: lâu, tốn Nuôi cấy: chậm, để tạo khuẩn lạc đến tuần PCR: nhanh, độ nhạy cao, phát gen kháng thuốc  Chẩn đoán gián tiếp: nhiều kháng nguyên chéo Câu 39 Nêu phương pháp vi sinh chẩn đoán bệnh giang mai?  Chẩn đoán trực tiếp: dùng Bệnh phẩm: dịch tiết săng, dịch chọc hạch Soi tươi, nhuộm F-T  Chẩn đoán gián tiếp (chủ yếu): Phản ứng không đặc hiệu: lipid chiết xuất từ tim bò VDRL, RPR Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page 32 Lao động cha đẻ hạnh phúc! Dương tính giả trong: thận hư nhiễm mỡ, sốt rét, phụ nữ có thai Xét nghiệm lần kết Phản ứng đặc hiệu: Bất động xoắn khuẩn giang mai TP: XK + HT  bất động Kết hợp FTA: XK + HT + KKT gắn huỳnh quang  phát sáng Ngưng kết hồng cầu thụ động TPHA: XK/HC + HT  HC ngưng kết Câu 40 Nêu kỹ thuật chẩn đoán nhiễm virus viêm gan B (HBV)?  Chẩn đoán trực tiếp: Tìm kháng nguyên HBsAg sắc ký miễn dịch, ELISA… Tìm kháng nguyên HBeAg, HBcAg Tìm virus PCR  Chẩn đoán gián tiếp: anti HBs (HBsAb), anti HBe (HBeAb), anti HbcAg (IgM) ELISA, sắc ký giấy Câu 41 Nêu kỹ thuật chẩn đoán virus viêm gan C (HCV)?  Chẩn đoán trực tiếp PCR phát ARN Tìm kháng nguyên HCV (NS4)  Chẩn đoán gián tiếp: Tìm kháng thể anti HCV ELISA, RIBA (kỹ thuật thấm miễn dịch), sắc ký miễn dịch nhiều kỹ thuật khác, sinh thiết tế bào gan để tìm tổn thương bào tương nhân tế bào với dấu hiệu tăng men transaminase Câu 42 Nêu kỹ thuật chẩn đoán nhiễm virus gây suy giảm miễn dịch HIV?  Chẩn đoán gián tiếp: tìm kháng thể Test nhanh: Phản ứng Serodia (ngưng kết gián tiếp) Sắc ký miễn dịch Elisa nhanh Test khác: ELISA, WESTERN-BLOT, MDHQ  Chẩn đoán trực tiếp: PCR: sử dụng đoạn mồi làm cho ARN virus nhân P24-assay Phân lập virus tế bào lympho T II PHỤ LỤC Phân biệt huyết tương huyết Thuốc luôn cần thiết niềm tin khỏi bệnh điều luôn cần! Page 33 Lao động cha đẻ hạnh phúc! Huyết tương bị lấy phần fibrinogen gọi huyết thanh, hay huyết + yếu tố đông máu = huyết tương Huyết tương có chứa chất đông máu nên bị đông, huyết yếu tố nên không bị đông dạng lỏng Cách đánh giá mức độ nhạy cảm vi khuẩn với kháng sinh: Nếu đường kính khuyến cáo có dạng a – b x>a,b S, x[...]... kháng sinh đồ khoanh gi y là: C y vi khuẩn lên mặt đĩa thạch Muller Hinton nhằm mục đích phủ một lớp vi khuẩn mỏng và đều lên bề mặt thạch Đặt khoanh gi y kháng sinh các loại lên bề mặt đĩa thạch đã được c y vi khuẩn, khoảng cách giữa các khoanh gi y kháng sinh là 2 cm, khoanh gi y cách thành đĩa thạch 1 cm Nếu các khoanh gi y được đặt quá gần nhau hoặc sát thành đĩa sẽ làm sai lệch kết quả kháng sinh. .. không rõ là căn nguyên nhiễm trùng máu hay chỉ là vi khuẩn nhiễm vào, tốt nhất là nên c y máu 2 lần trở lên Khi kết quả ở các lần c y máu là giống nhau thì vi c xác định vi khuẩn g y bệnh sẽ dễ dàng và chính xác hơn  Thời gian theo dõi bình máu và trả kết quả c y máu: Sau khi c y máu, thực ra người xét nghiệm vi n mới chỉ hoàn thành công vi c l y bệnh phẩm máu cho vào môi trường nuôi c y Sau đó bình máu... lactose, phân h y tryptophan thành indol, phân h y ure thành amoniac, khả năng sinh khí H2S, tính di động 3 Xác định tên vi khuẩn Tên của vi khuẩn được xác định chủ y u dựa vào các tính chất sinh vật hóa học được thể hiện trên các môi trường chẩn đoán Ngoài ra, trong một số trường hợp còn dựa thêm vào tính chất kháng nguyên để xác định tên của vi khuẩn tới nhóm hoặc typ hoặc dưới typ huyết thanh Tính... là cha đẻ của hạnh phúc! khoảng 0.7-0.8 cm Typ th y tinh nhỏ n y được đựng trong typ th y tinh lớn đường kính 1.5 cm Chú ý: tăm bông vô trùng và dụng cụ l y phân th y tinh đều do khoa vi sinh của bệnh vi n cung cấp 3 L y bệnh phẩm Có thể l y phân sau khi bệnh nhân đã đi đại tiện, hoặc có thể l y phân từ trực tràng của người bệnh bằng dụng cụ th y tinh 3.1 L y phân sau khi bệnh nhân đi đại tiện Cho bệnh... c y bệnh phẩm tìm vi khuẩn g y bệnh? Ý nghĩa của từng bước? 1 Phân lập vi khuẩn C y bệnh phẩm vào môi trường phân lập (thường là đĩa thạch máu, có thể gồm cả đĩa thạch Socholate) Khi c y bệnh phẩm lên mặt thạch, y u cầu phải c y phân vùng tốt để vi khuẩn đủ thưa và cho các khuẩn lạc riêng rẽ sau khi mọc Thực chất của vi c c y phân vùng là phải thực hiện đốt que c y giữa chừng trong quá trình ria c y. .. hiện diện của vi sinh vật trong máu lúc đó được coi là căn nguyên g y nhiễm trùng máu Vì v y, để xác định đúng và sớm căn nguyên g y nhiễm trùng máu thì vi c c y máu phải tuân thủ nghiêm ngặt các nguyên tắc c y máu, cụ thể là phải đảm bảo vô trùng và đúng lúc 1 Vô trùng khi c y máu Vô trùng khi c y máu nhằm để tránh các trường hợp các vi khuẩn từ trên da, trong không khí hoặc từ dụng cụ l y máu nhiễm... thuật kháng sinh đồ mà kết quả của chúng chỉ xác định được hiện tượng vi khuẩn còn nh y cảm hay đã đề kháng lại các loại kháng sinh được thử Kết quả của kháng sinh đồ định tính sẽ giúp cho vi c lựa chọn kháng sinh thích hợp để điều trị Nguyên lý: tất cả các kỹ thuật định tính đều được thực hiện dựa trên cơ sở chung là các thuốc kháng sinh đều có khả năng khuếch tán tốt trên môi trường thạch Vì v y, người... hoặc nấm men thì nguyên nhân là do loạn vi khuẩn đường ruột Câu 16 Nêu nguyên tắc c y máu, thời gian theo dõi bình máu và trả kết quả c y máu? Nguyên tắc c y máu Nhiễm trùng máu hay nhiễm trùng huyết là một bệnh lý thường gặp trên lâm sàng Căn nguyên g y nhiễm trùng máu có thể là vi khuẩn, virus, nấm, đơn bào ký sinh trùng… Bình thường máu là môi trường vô trùng Khi nhiễm trùng huyết, cơ thể thường... các kháng sinh thử nghiệm Kết quả phân tích ra các mức độ nh y cảm sẽ quyết định đến vi c lựa chọn kháng sinh để điều trị, cụ thể như sau: S: (d>a,b) có nghĩa là vi khuẩn còn nh y cảm với kháng sinh, có thể dùng các kháng sinh n y để điều trị bệnh nhiễm trùng do vi khuẩn được thử, với liều điều trị thông thường như đã được khuyến cáo I(a≤d≤b): vi khuẩn nh y cảm ở mức trung gian với loại kháng sinh, có... là: tên vi khuẩn g y bệnh phân lập được và kết quả kháng sinh đồ của nó Câu 24 Nêu các y u tố có thể làm sai lệch kết quả của kỹ thuật kháng sinh đồ khoanh gi y?  Tất cả các y u tố khi thực hiện làm kháng sinh đồ khoang gi y đều có thể ảnh hưởng đến kết quả của kỹ thuật n y Độ đục của huyển dịch đục hơn so với ống đối chiếu Độ đục của huyền dịch trong hơn so với ống đối chiếu Đĩa thạch quá d y hoặc