kĩ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau

146 3.9K 8
kĩ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác BỆNH PHẨM TAI, MẮT, MŨI, XOANG Mục tiêu · Hướng dẫn lâm sàng hay chí thực tốt bước lấy chuyên chở mẫu nhờ biết cách lấy chuyên chở mẫu bệnh phẩm tai mắt mũi xoang · Thực đầy đủ bước qui trình xét nghiệm vi sinh lâm sàng mẫu bệnh phẩm lấy từ tai, mắt, mũi xoang để không bỏ sót hội phát tác nhân vi khuẩn gây bệnh · Sử dụng phương tiện cần thiết thích hợp để thực xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm lấy từ tai, mắt, mũi, xoang; nhờ phát tác nhân gây bệnh cho dù tác nhân khó mọc Chỉ đònh ¦ Các bệnh phẩm tai, mũi, xoang đònh lấy trước trường hợp viêm cấp tính hay kinh niên vùng tai, mũi, xoang ¦ Cụ thể viêm tai cấp tính, viêm tai cấp hay kinh niên, viêm xoang cấp hay kinh niên, viêm mũi cấp hay kinh niên, viêm kết mạc cấp hay kinh niên Thời điểm lấy bệnh phẩm Tốt trước bệnh nhân dùng kháng sinh hệ thống hay chỗ Cách lấy bệnh phẩm Trường hợp viêm tai Ư Nếu chưa bể mủ, sát trùng da cồn 70%, chờ khô, sau chọc hút hay rạch lấy mủ cho vào tube vô trùng (tube nắp vàng vô trùng hay tube Eppendorf biopure) Nếu bể mủ, lau mủ dùng tăm vô trùng ép nặn mủ thấm vào tăm (dùng tăm vô trùng lấy mẫu) Các mẫu mủ lấy môi trường chuyên chở phải gửi đến phòng thí nghiệm để yêu cầu cấy 69 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Ư Thích hợp dùng tăm thấm hay lấy mủ cho vào môi trường chuyên chở (dùng cặp tube đũa tăm bộng vô trùng/ tube đũa Stuart Amies hay cặp tube đũa tăm mãnh vô trùng*/tube đũa Stuart-Amies) lấy hay thấm mủ Mủ lấy ra, cho vào lọ hay tube nắp chặt vô trùng hay thấm vào tăm vô trùng cho vào tube nắp chặt vô trùng, gửi đến phòng thí nghiệm Trong trường hợp chậm trễ cho vào tube môi trường chuyên chở Stuart-Amies gửi đến phòng thí nghiệm Trường hợp viêm tai Ư Nếu cấp tính chưa bể mủ, bác só chuyên khoa lấy qua chọc hút xuyên màng cho vào tube vô trùng (tube nắp vàng vô trùng hay tube Eppendorf biopure) Nếu bể mủ hay chảy mủ kinh niên, lau mủ vùng tai dùng tăm vô trùng thấm mủ vào tăm (dùng tăm vô trùng lấy mẫu, hay tốt tăm mãnh vô trùng*) Các mẫu mủ lấy môi trường chuyên chở phải gửi đến phòng thí nghiệm để yêu cầu cấy Ư Thích hợp dùng tăm thấm hay lấy mủ cho vào môi trường chuyên chở (dùng cặp tube đũa tăm bộng vô trùng/ tube đũa Stuart Amies hay cặp tube đũa tăm mãnh vô trùng*/tube đũa Stuart-Amies) lấy hay thấm mủ Mủ lấy ra, cho vào lọ hay tube nắp chặt vô trùng hay thấm vào tăm vô trùng cho vào tube nắp chặt vô trùng, gửi đến phòng thí nghiệm Trong trường hợp chậm trễ cho vào tube môi trường chuyên chở Stuart-Amies gửi đến phòng thí nghiệm Trường hợp viêm xoang Ư Nếu cấp tính lấy quệt mũi sau hay quệt mủ khe Để lấy quệt mũi sau, bác só chuyên khoa dùng kẹp nong mũi bệnh nhân lấy quệt mũi sau tăm nhỏ, cọng mềm (tăm mãnh vô trùng*), luồn từ lổ mũi qua vách mũi trước mũi sau, đưa sâu vào cản lại hầu Để lấy quệt mủ khe cần phải lấy qua nội soi tai mũi họng Quệt mũi sau quệt mủ khe cho vào tube vô trùng hay vào môi trường chuyên chở Stuart-Amies gửi đến phòng thí nghiệm (dụng cụ thích hợp để lấy mẫu cặp tube đũa tăm mãnh vô trùng*/tube đũa Stuart-Amies) 70 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Ư Nếu kinh niên, lấy mẫu thử mẫu sinh thiết hay dòch rửa xoang nước muối sinh lý chất sát trùng Mãnh sinh thiết hay dòch rửa cho vào lọ vô trùng (dùng lọ vô trùng lấy mẫu) hay tube vô trùng (tube Eppendorf biopure) gửi đến phòng thí nghiệm * Trường hợp vùng phải lấy mủ hẹp mủ khe giữa, mủ tai ngoài, mủ tai Trường hợp viêm mũi Ư Bác só chuyên khoa lấy quệt mũi sau hay quệt mủ khe gửi đến phòng thí nghiệm Ư Quệt mũi trước lấy để khảo sát tình trạng mang vi khuẩn S pneumoniae, H influenzae bệnh nhân trẻ em bò nhiễm trùng hô hấp cấp Ngoài ra, quệt mũi trước lấy để điều tra tình trạng người lành mang S aureus Dụng cụ thích hợp để lấy quệt mũi trước dùng cặp tube đũa tăm vô trùng/tube đũa Stuart-Amies Trường hợp viêm kết mạc mắt Ư Bệnh phẩm quệt mủ kết mạc mắt Bác só chuyên khoa lấy kỹ thuật vô trùng Ư Dụng cụ thích hợp để lấy mẫu cặp tube đũa tăm vô trùng/ tube đũa Stuart Amies hay cặp tube đũa tăm mãnh vô trùng*/tube đũa Stuart-Amies Các vi khuẩn gây bệnh tìm thấy bệnh phẩm Các trường hợp viêm xoang, mũi cấp tính kinh niên Ư S pneumoniae, Ư H influenzae, Ư M catarrhalis, Ư Các Streptococci tiêu huyết b, Ư S aureus, Ư Klebsiella vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae, Ư Vi khuẩn kỵ khí (Bacteroides vi khuẩn khác) 71 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Trường hợp viêm tai cấp Ư S pneumoniae Streptococci khác, Ư M catarrhalis, Ư H influenzae Trường hợp viêm tai kinh niên Ư P.aeruginosa, Ư Proteus spp., Ư Các vi khuẩn kỵ khí, Ư Các vi khuẩn khác: gặp Trường hợp viêm kết mạc mắt cấp tính hay kinh niên Ư Haemophilus spp., Ư Moraxella spp., Ư N gonorrhoeae, Ư S aureus, Ư S pneumoniae, Ư S pyogenes, Ư P aeruginosa, Ư Các vi khuẩn khác: gặp Khảo sát trực tiếp ¦ Làm phết nhuộm Gram (sau tiến hành nuôi cấy bệnh phẩm que tăm bông) ¦ Ghi nhận diện vi khuẩn mẫu trả lời sơ cho Bác só lâm sàng Tiến hành nuôi cấy Cấy phân lập hộp thạch phân lập, tối thiểu là: Ư Thạch máu (BA) thường hay BA có Nalidixic acid (BANg) Ư Có thể thêm BAGe (thạch máu có Gentamicin chọn lọc vi khuẩn Pneumococci Streptococci) 72 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Ư Thạch nâu chọn lọc H influenzae (CAHI) Ư Thạch chọn lọc trực khuẩn Gram [-] dễ mọc (EMB hay MC) Ư Có thể thêm thạch nâu chọn lọc Neisseria (CATM) có yêu cầu Ư Có thể thêm Sabouraud Dextrose Agar có hay kháng sinh để cấy chọn lọc vi nấm Các hộp thạch BA, BA-Ge, CAHI, CATM phải ủ bình nến, hộp thạch khác ủ khí trường bình thường Tất để tủ ủ 35-37oC quan sát ngày liên tiếp ngày Các khúm mọc hộp thạch phân lập phải tiến hành đònh danh làm kháng sinh đồ Câu hỏi ôn tập Cho biết đònh lâm sàng để lấy bệnh phẩm từ tai mắt mũi xoang làm xét nghiệm vi sinh lâm sàng Hãy cho biết các loại bệnh phẩm lấy từ tai mắt mũi xoang cách lấy chuyên chở loại bệnh phẩm đến phòng thí nghiệm để làm xét nghiệm vi sinh lâm sàng Hãy cho biết phương tiện lấy chuyên chở thích hợp cho bệnh viện để lấy bệnh phẩm từ tai mắt mũi xoang, phân tích ưu khuyết điểm phương tiện Hãy cho biết qui trình xét nghiệm vi sinh lâm sàng thực phòng thí nghiệm bệnh phẩm lấy từ tai mắt mũi xoang Hãy cho biết vi khuẩn gây bệnh cần phải phân lập mẫu bệnh phẩm lấy từ tai mắt mũi xoang 73 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác CẤY TAI MẮT MŨI XOANG – Các câu hỏi thường gặp Trước bệnh nhân bò viêm mũi, lâm sàng có lấy bệnh phẩm tăm cho vào mũi quệt lấy dòch mũi xanh hay vàng chảy từ mũi bệnh nhân để làm xét nghiệm vi sinh; cách lấy bệnh phẩm có giá trò không? ¦ Với cách lấy bệnh phẩm lấy quệt mũi trước bệnh phẩm bò ngoại nhiễm với vi khuẩn thường trú vùng mũi trước S pneumoniae, H influenzae, S aureus mà vi khuẩn tác nhân gây viêm mũi hay viêm xoang lan từ nơi thường trú sang xoang hay mũi sau Chính kết cấy bệnh phẩm khẳng đònh tác nhân vi khuẩn phân lập có phải tác nhân gây bệnh hay không ¦ Vậy bệnh phẩm thích hợp bệnh nhân bò viêm mũi? Cũng viêm xoang cấp, bệnh phẩm thích hợp phải quệt mủ lấy từ khe mũi quệt mũi sau Các bệnh phẩm lấy que tăm thông thường tránh khỏi bò đụng vào mũi trước lấy mẫu Phương tiện thích hợp để lấy quệt mủ khe mủ quệt mũi sau phải que tăm mãnh làm sợi nhôm Với que tăm này, lâm sàng dễ dàng lấy mẫu quệt mủ khe hay quệt mũi sau qua nội soi hay que kẹp nong lổ mũi, tránh chạm vào mũi trước Vì nhiều bệnh viện, kết vi sinh lâm sàng bệnh phẩm lấy từ tai mắt mũi xoang thường cho kết âm tính hay không phù hợp với hiệu điều trò kháng sinh bệnh nhân? ¦ Có thể kết âm tính thật bệnh nhân điều trò kháng sinh trước làm cho vi khuẩn phân lập bò tiêu diệt kháng sinh hay lẫn trốn vò trí sâu hơn, tác nhân vi khuẩn mà tác nhân khác ¦ Những nguyên nhân khác làm kết âm tính liên quan đến vấn đề kỹ thuật lấy chuyên chở bệnh phẩm, quan trọng bệnh phẩm sau lấy không cho vào môi trường chuyên chở đến phòng thí nghiệm lại không cấy đa số tác nhân gây bệnh đường tai mắt mũi xoang lại tác nhân vi khuẩn khó mọc H influenzae, S pneumoniae, M catarrhalis Ngoài nguyên nhân khác thường gặp bệnh viện phòng thí nghiệm dùng môi 74 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác trường tự pha chế thông thường thạch máu người thạch Mac Conkey hay chí dùng thạch dinh dưỡng thường (Nutrient Agar) mà không dùng thạch phân lập thích hợp cho bệnh phẩm lấy từ tai mắt mũi xoang thạch máu cừu thạch CAXV để phân lập vi khuẩn thường gặp khó mọc nêu ¦ Nguyên nhân làm cho có khác biệt kết vi sinh với hiệu điều trò kháng sinh bệnh nhân vi khuẩn phân lập vi khuẩn gây bệnh mà vi khuẩn thường trú vùng mũi trước, vùng tai nguyên nhân thường lâm sàng lấy bệnh phẩm bò tạp nhiễm với vùng dùng phương tiện lấy mẫu không thích hợp đề cập phần trên; hay vi khuẩn phân lập vi khuẩn tạm trú bệnh phẩm ví dụ vi khuẩn tạm trú mủ tai ngoài, mủ xoang hay mủ tai chảy vào tai để giải quết nguyên lâm sàng cần phải chùi mủ vùng lấy mủ chảy hay nặn Xin cho biết làm để lấy bệnh phẩm từ loét giác mạc? ¦ Lấy bệnh phẩm từ loét giác mạc đòi hỏi phải sử dụng nạo kim loại để nạo vết loét cho vào ống môi trường BHI bổ sung XV chuyển phòng thí nghiệm Nếu nạo này, lâm sàng dùng que tăm mãnh vô trùng quệt lấy mủ từ vết loét cho vào ống BHI-XV ¦ Tại phòng thí nghiệm, ống BHI-XV ủ tủ ấm 35 - 37oC hay qua đêm để hôm sau cấy phân lập tiếp lên môi trường phân lập hướng dẫn qui trình Ống BHI-XV phải tiếp tục ủ tủ ấm theo dõi liên tục ngày để phát vi khuẩn hay vi nấm mọc lần phân lập đầu vi khuẩn mọc ¦ Trong trường hợp nghi tác nhân gây bệnh nấm, nạo hay quệt mủ vết loét phải cấy môi trường Sabouraud agar bên cạnh việc tăng sinh ống BHI-XV 75 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Hình 23: Tăm mãnh vô trùng thích hợp để lấy quệt mủ từ khe hẹp mủ khe giữa, mủ chảy từ tai giữa, quệt mủ niệu nạo lòng niệu đạo; hay lấy mủ loét giác mạc vết loét nhỏ dùng tăm bình thường để quệt Tăm mãnh thiết kế vừa vặn vào tube đũa môi trường chuyên chở Stuart-Amies BHI-VX BHI-VX BHI-VX BHI-VX BHI-VX BHI-VX Hình 24: Môi trường tăng sinh BHI-XV chứa tube 5ml cần thiết để tăng sinh quệt mủ loét giác mạc vốn dó chứa vi khuẩn gây bệnh 76 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Ly tâm lấy cặn từ bệnh phẩm dòch rửa xoang Các bệnh phẩm mủ tai hay mủ xoang, lấy trực tiếp hay cho vào môi trường chuyên chở Làm phết nhuộm Gram D0 Cấy phân lập : · BAGe (chọn lọc PNE, STR)* · CAHI (chọn lọc HIN, BRA) · BANg (chọn lọc Gr[+] cocci)* · MC/EMB (chọn lọc Gr[-] rod) Ủ 37oC qua đêm · BAGe (bình nến) · CAHI (bình nến ) · BANg (bình nến) · MC/EMB (bình thường) Kết sơ bộ: KSTT * Nếu BANg BAGe, thay BA D1 Chọn khúm vi khuẩn đích hộp thạch phân lập chọn lọc Cấy tăng sinh đường zic-zac lên mặt thạch BA hay mặt thạch thích hợp Ủ 37oC/CO2 4-6 Đònh danh sơ Gặt vi khuẩn tăng sinh từ đường cấy zic-zac Kháng sinh đồ Đònh danh D2 Kết chung Sơ đồ 7: QUI TRÌNH VI SINH LÂM SÀNG MẪU MỦ TAI, MỦ XOANG, DỊCH RỬA XOANG 77 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác CÁC MẪU MỦ VÀ CHẤT DỊCH Mục tiêu · Hướng dẫn lâm sàng hay thực lấy bệnh phẩm cho mẫu mủ chất dòch biết loại bệnh phẩm cách lấy bệnh phẩm thích hợp trường hợp làm xét nghiệm vi sinh mẫu mủ chất dòch · Thực qui trình cách xác làm xét nghiệm mẫu mủ chất dòch biết qui trình thực vi sinh lâm sàng bao gồm khảo sát trực tiếp, nuôi cấy phân lập vi khuẩn gây bệnh diện mẫu mủ chất dòch · Lựa chọn phương tiện thích hợp cho cấy mủ chất dòch bệnh viện nhờ biết phương tiện thích hợp để thực xét nghiệm vi sinh lâm sàng mẫu mủ chất dòch; nhờ Chỉ đònh Tất trường hợp có mủ, chất dòch như: ¦ Mủ áp xe ¦ Vết thương nhiễm trùng, bao gồm vết loét, cắt, lở, mổ hậu phẩu, loét nằm lâu ¦ Các mạch lươn ¦ Các mạch dẫn từ xoang hay hạch bạch huyết ¦ Các dòch tiết dòch màng phổi, khớp, màng bụng ¦ Các mẫu nạo mủ xương giải phẩu Các loại bệnh phẩm cách lấy ¦ Mủ áp xe, dòch màng phổi, màng bụng, khớp: lấy phương pháp vô trùng làm tiểu phẩu, sau sát trùng vùng da bên chờ khô, chọc kim hút lấy mủ hay chất dòch Cho mủ hay chất dòch vào lọ lấy bệnh phẩm vô trùng (nắp vặn chật) hay tube Eppendorf biopure (tinh sinh học), hay để nguyên ống kim hút mủ, gửi đến phòng thí nghiệm để yêu cầu cấy Có thể tẩm mủ vào tăm cho vào môi 25 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác THỬ NGHIỆM HUYẾT THANH HỌC Mục tiêu · Biết mục đích thử nghiệm huyết học, nhờ phân tích ý nghóa hữu dụng lâm sàng thử nghiệm huyết học · Biết cách biện luận kết xét nghiệm huyết học, nhờ thêm bình luận kèm kết xét nghiệm để lâm sàng phân tích sử dụng kết xét nghiệm chẩn đoán phát tác nhân gây bệnh Mục đích thử nghiệm huyết học Thử nghiệm huyết học có mục đích tìm kháng thể đặc hiệu loại kháng nguyên vi sinh vật gây bệnh có huyết bệnh nhân, nhờ gián tiếp xác đònh tác nhân vi sinh vật gây bệnh Ví dụ: Thử nghiệm Widal chẩn đoán bệnh thương hàn, thử nghiệm tìm HBsAb để xác đònh bệnh nhân có kháng thể đặc hiệu viêm gan B Biện luận kết thử nghiệm huyết học Vì mục đích tìm kháng thể đặc hiệu kháng nguyên vi sinh vật nên thử nghiệm huyết học thử nghiệm trực tiếp phát tác nhân vi sinh vật gây bệnh Do vậy, biện luận thử nghiệm huyết học phải dựa vào giá trò đònh lượng kết thử nghiệm Kết đònh lượng thử nghiệm huyết học thường hiển thò hiệu giá kháng thể đặc hiệu, tức độ pha loãng cao huyết bệnh nhân mà thử nghiệm dương tính (ví dụ thử nghiệm Widal, kết cho biết TO 1/100, có nghóa huyết bệnh nhân pha loãng 1/100 tụ với kháng nguyên O S typhi thử nghiệm) Hiện nay, với số thử nghiệm ELISA, kết đònh lượng thường hiển thò giá trò OD thực thử nghiệm độ pha loãng huyết bệnh nhân Có nhiều cách biện luận kết thử nghiệm huyết học dựa vào giá trò đònh lượng để nhờ phát tác nhân vi sinh vật gây bệnh: Dựa vào huyết kép ü Thử nghiệm huyết lấy lần cách 7-14 ngày 147 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác ü Kết [+] hiệu giá huyết lần cao ³ lần hiệu giá huyết lấy lần Đối với kết đònh lượng hiển thò giá trò OD nhà sản xuất thường đưa công thức tính toán biết có gia tăng có ý nghóa giá trò đònh lượng huyết lần so với huyết lần ü Phương pháp huyết kép thường hữu dụng lâm sàng thời gian tính, có ý nghiã để chẩn đoán xác đònh Dựa vào hiệu giá kháng thể đặc hiệu thuộc lớp IgM ü Có thể cần thử nghiệm huyết lấy lần xác đònh kháng thể đặc hiệu thuộc lớp IgM, lớp globulin miễn dòch xuất giai đọan sớm bệnh, tồn có diện tác nhân vi sinh vật gây bệnh thể, biến nhanh sau hết bệnh-không diện vi sinh vật gây bệnh thể ü Kết coi [+], tức có diện tác nhân vi sinh vật gây bệnh thể hiệu giá kháng thể hay giá trò OD kết thử nghiệm cao hiệu giá hay giá trò OD cắt, tức hiệu giá hay giá trò OD trung bình người bình thường ü Xét nghiệm phát kháng thể đặc hiệu thuộc lớp IgM hữu dụng lâm sàng không thời gian tính, có ý nghiã để chẩn đoán phát tác nhân vi sinh vật gây bệnh mà không cần phải thử nghiệm huyết lấy lần Tuy nhiên, có thử nghiệm miễn dòch ELISA, IFA (miễn dòch huỳnh quang), RIA (miễn dòch phóng xạ) xác đònh kháng thể đặc hiệu thuộc lớp Dựa vào hiệu giá kháng thể đặc hiệu so với giá trò cắt ü Phải xác đònh hiệu giá hay giá trò OD cắt quần thể điều tra huyết dòch tễ học ü So sánh hiệu giá hay giá trò OD huyết thử nghiệm với hiệu giá hay giá trò OD cắt cuả quần thể; Nếu hiệu giá huyết thử nghiệm cao ³ lần hiệu giá cắt, hay OD huyết thử nghiệm cao k x OD giá trò cắt (k trò số nhà sản xuất thử nghiệm qui đònh) cho kết [+] tức cho chẩn đoán xác đònh tác nhân vi sinh vật gây bệnh ü Kết nầy hữu dụng lâm sàng không thời gian tính, nhiên có ý nghiã vừa phải để chẩn đoán xác đònh 148 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Câu hỏi ôn tập Cho biết mục đích thử nghiệm huyết học Thử nghiệm huyết học huyết kép nào? Tại phài làm thử nghiệm huyết học huyết kép? Làm để biện luận kết quả? Thử nghiệm huyết học tìm kháng thể thuộc lớp IgM đặc hiệu kháng nguyên vi sinh vật gây bệnh có ý nghóa chẩn đoán phát tác nhân gây bệnh? Có cần dựa vào kết thử nghiệm huyết học huyết bệnh nhân lấy có lần mà chẩn đoán tác nhân gây bệnh, không cần phải xác đònh kháng thể đặc hiệu tìm thuộc lớp IgM? THỬ NGHIỆM HOÁ MIỄN DỊCH HỌC Mục tiêu · Biết mục đích thử nghiệm hoá miễn dòch học, nhờ phân tích ý nghóa hữu dụng lâm sàng thử nghiệm hóa miễn dòch học · Biết cách biện luận kết xét nghiệm hoá miễn dòch học, nhờ thêm bình luận kèm kết xét nghiệm để lâm sàng phân tích sử dụng kết xét nghiệm chẩn đoán phát tác nhân gây bệnh Mục đích thử nghiệm hoá miễn dòch học Mục đích thử nghiệm hoá miễn dòch học phát kháng nguyên tác nhân vi sinh vật bệnh phẩm, nhờ chẩn đoán xác đònh cách tương đối trực tiếp tác nhân vi sinh vật gây bệnh Ví dụ thử nghiệm phát kháng nguyên hoà tan vi khuẩn thường gây viêm màng não mủ thuốc thử tụ latex có tên Meningitex thử 149 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác nghiệm hoá miễn dòch; thử nghiệm phát kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B (tìm HBsAg) huyết để phát tình trạng nhiễm viêm gan siêu vi B thử nghiệm hoá miễn dòch học bệnh phẩm để thử huyết bệnh nhân; hay thử nghiệm tụ kính vi khuẩn Shigella spp phân lập với kháng huyết đặc hiệu để đònh nhóm A , B, C, D thử nghiệm hoá miễn dòch học; hay thử nghiệm miễn dòch huỳnh quang trực tiếp phát Chlamydia trachomatis phết cổ tử cung thử nghiệm hoá miễn dòch Các loại thử nghiệm hoá miễn dòch Tuỳ thuộc vào kháng nguyên phát hiện, có hai loại thử nghiệm hoá miễn dòch, là: Phát kháng nguyên hòa tan Thường, thử nghiệm tụ latex, ELISA, CCIE (Counter Current Immuno- Electrophoresis = điện di miễn dòch đối lưu), thử nghiệm hay dùng để phát kháng nguyên hòa tan có bệnh phẩm Đối với tụ latex, thường nhà nghiên cứu hay sản xuất gắn kháng thể đặc hiệu kháng nguyên lên hạt latex polystyrene, nhờ gặp kháng nguyên đặc hiệu hạt latex tụ lại kết thấy dễ dàng mắt thường Đối với thử nghiệm ELISA, nhà nghiên cứu hay sản xuất thường phủ kháng thể đặc hiệu kháng nguyên giếng ELISA polystyrene nhờ tóm bắt kháng nguyên bệnh phẩm (gọi kỹ thuật ELISA tóm bắt kháng nguyên) Đối với thử nghiệm CCIE, nhà nghiên cứu hay sản xuất thường cho kháng thể đặc hiệu kháng nguyên vào giếng bệnh phẩm vào giếng đối diện thạch diện di, sau điện di để kháng thể di chuyển phía cực âm hướng giếng chứa bệnh phẩm kháng nguyên bệnh phẩm di chuyển phía cực dương hướng giếng chứa kháng thể; nhờ gặp gở kháng nguyên-kháng thể hình thành vạch kết tủa thấy thạch hai giếng Thử nghiệm phát kháng nguyên hòa tan vi khuẩn thường gây viêm màng não mủ N meningitidis, H influenzae, S pneumoniae phản ứng tụ latex với thuốc thử MENINGITEX; hay thử nghiệm phát Rotavirus phân kỹ thuật CCIE; thử nghiệm phát HBsAg kỹ thuật ELISA tóm bắt kháng nguyên minh họa ba phương pháp nói dùng phát kháng nguyên hoà tan 150 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Phát kháng nguyên hữu hình Thường, thử nghiệm miễn dòch huỳnh quang trực tiếp (Direct-ImmunoFluorescent), hay nhuộm kháng thể gắn men peroxidase (Immuno-Peroxidase-Staining), thử nghiệm hay dùng Trong thử nghiệm miễn dòch huỳnh quang, bệnh phẩm phết lame kính hiển vi, sau để khô cố đònh acetone Nhỏ kháng thể đặc hiệu kháng nguyên vi sinh vật muốn tìm gắn huỳnh quang (thường FITC = Fluorescent Thio Cyanate) lên phết bệnh phẩm này, sau soi kính hiển vi huỳnh quang Nếu bệnh phẩm có vi sinh vật muốn tìm vi sinh vật bò bám kháng thể đặc hiệu gắn huỳnh quang, bò phát huỳnh quang người làm xét nghiệm dễ dàng thấy hình ảnh vi sinh vật bò phát huỳnh quang tối không phát huỳnh quang Thử nghiệm nhuộm kháng thể gắn men có bước thực giống nhuộm kháng thể huỳnh quang, không cần phải quan sát phết bệnh phẩm qua kính huỳnh quang mà cần qua kính hiển vi quang học thường Nếu phết bệnh phẩm có chứa kháng nguyên vi sinh vật muốn tìm bò kháng thể gắn men bám vào bò sinh màu kết tủa tác động men đài chất sinh màu Thử nghiệm nhuộm miễn dòch huỳnh quang trực tiếp phát vi khuẩn Chlamydia trachomatis quệt cổ tử cung, phát vi khuẩn không điển hình mẫu đàm thử nghiệm thường dùng để chẩn đoán phát tác nhân gây bệnh nói phương pháp nuôi cấy khó thực phòng thí nghiệm lâm sàng Biện luận kết thử nghiệm hoá miễn dòch học Vì mục đích phát có hay không kháng nguyên vi sinh vật gây bệnh bệnh phẩm nên thử nghiệm hoá miễn dòch học thường cần thử nghiệm đònh tính, xác đònh có (dương) hay (âm), mà không cần giá trò đònh lượng Vì trả lời kết thử nghiệm hoá miễm dòch, người làm xét nghiệm không cần thiết phải trả lời số đònh lượng Mặc dù với nhiều thử nghiệm hóa miễn dòch dựa phản ứng ELISA, kết phải đọc máy quang phổ với giá trò OD, giá trò OD cần cho người làm xét nghiệm để so với OD nhờ biết kết mẫu bệnh phẩm [+] hay [-] Khi trả lời 151 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác kết cho lâm sàng, không cần thiết phải đưa kết giá trò OD thử nghiệm làm có làm rối trí lâm sàng hay có lâm sàng hiểu nhầm trò số OD lớn nhiễm trùng nặng so với kết có trò số OD nhỏ Câu hỏi ôn tập Cho biết mục đích thử nghiệm hoá miễn dòch học Các thử nghiệm thường dùng để phát kháng nguyên hoà tan kháng nguyên hữu hình vi sinh vật gây bệnh có bệnh phẩm? Nói qua nguyên tắc thử nghiệm cho ví dụ minh họa Hãy cho biết có thử nghiệm hoá miễn dòch cho kết có giá trò đònh lượng không? Nếu có, người làm xét nghiệm có cần thiết phải trả lời cho lâm sàng kết thử nghiệm hóa miễn dòch học với kết đònh lượng kèm theo hay không? Tại cần? không cần? Hình 42: Hình quan sát qua kính hiển vi huỳnh quang phết quệt cổ tử cung nhuộm kháng thể huỳnh quang đặc hiệu C trachomatis (trái) phết đàm nhuộm kháng thể huỳnh quang đặc hiệu Legionella pneumophila (phải) 152 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Sản phẩm liên quan: TYPHELISAM - Bộ thuốc thử ELISA phát đònh lượng kháng thể IgM đặc hiệu Salmonella typhi để chẩn đoán phát sớm thương hàn Nguyên tắc hoạt động Bộ thuốc thử hoạt động nguyên tắc phản ứng ELISA gián tiếp phát kháng thể: kháng nguyên S typhi gắn giếng nhựa polystyrene tóm bắt kháng thể đặc hiệu có huyết người, sau phát kháng thể đặc hiệu bám kháng nguyên xác đònh kháng thể thuộc lớp IgM cộng hợp kháng IgM người đánh dấu men peroxidase Sàn phẩm kết nghiên cứu CN Phạm Thái Bình hướng dẫn TS BS Phạm Hùng Vân với tài trợ chương trình vườn ươm Thành Đoàn công ty Nam Khoa Trình bày Có thành phần sau đây, tất giữ 4oC R1: Bản nhựa polystyrene làm ELISA, với 12 rời, có giếng, giếng nầy phủ kháng nguyên trích từ S typhi R2: dung dòch rửa PBS-T, 100ml x R3: dung dòch pha loãng PBS-T-BSA, 60ml x R4: cộng hợp kháng thể kháng IgM người gắn men peroxidase (HRPO), 12ml R5a: Cơ chất TMB, 0.65ml x tube R5b: Peroxide UPR, 0.65ml x R5c: dung dòch đệm chất, 12ml x R6: dung dòch ngưng phản ứng, 12ml x R7a: Huyết chứng (+), 1.5ml x 10 R7b: Huyết chứng (-), 1.5ml x 11 R7c: Huyết chuẩn, 1.5ml x 153 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Tiến hành phản ứng Pha loãng huyết thử nghiệm 1/160 tube eppendorf (10ml huyết cho vào 1590ml R2) Cho vào giếng, giếng 100ml huyết pha loãng Để giếng cho 100ml chứng [+], giếng cho 100ml chứng [-], giếng cho 100ml chứng chuẩn Ủ 37oC 30 phút Rửa giếng lần với R2, ngâm phút lần rửa cuối Lưu ý phải giủ sau lần đổ bỏ dung dòch rửa Cho vào giếng 100ml cộng hợp, gãi nhẹ đáy giếng để trộn Ủ 37oC 30 phút Rửa giếng lần với R2, ngâm phút lần rửa cuối Lưu ý phải giủ sau lân đổ bỏ dung dòch rửa Pha 1ml chất tube Eppendorf cách hút 0.9ml R5c cho vào tube thêm 50ml R5a 50ml R5b Lắc trộn thật Dung dòch pha sau xong bước Cho vào giếng, giếng 100ml chất vừa chuẩn bò xong Giữ tối 15 phút Đọc kết máy đọc ELISA bước sóng 450nm Đọc kết Xác đònh giá trò OD450 điểm cắt cách lấy gía trò OD450 chứng chuẩn đo (OF) nhân với giá trò OD450 chứng chuẩn (CF) ghi tài liệu hướng dẫn kèm theo thử nghiệm Xác đònh số kháng thể huyết chứng [+], chứng [-], huyết thử nghiệm cách lấy giá trò OD450 đo mẫu chia cho giá trò OD450 điểm cắt Biện luận sau: · Chỉ số kháng thể huyết chứng [+] phải > 1.05, huyết chứng [-] phải < 0.95 · Các mẫu huyết thử có số kháng thể > 1.05 dương tính, < 0.95 âm tính · Các mẫu huyết thử có số kháng thể từ 0.95 đến 1.05 dương tính âm tính Cần phải làm lại mẫu lấy sau tuần đònh 154 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác THỬ NGHIỆM LAL PHÁT HIỆN ENDOTOXIN (limulus amebocytes lysate) Mục tiêu · Hiểu nguyên tắc thử nghiệm LAL phát endotoxin đònh áp dụng để đưa vào thành phương tiện chẩn đoán vi sinh lâm sàng giúp chẩn đoán phát nhanh nhiễm trùng số trường hợp cần thiết · Thực xét nghiệm LAL với kết xác không bò âm tính hay dương tính giả nhờ biết đòi hỏi đặc biệt vật liệu tiến hành lấy, chứa bệnh phẩm, tiến hành làm xét nghiệm · Làm thử nghiệm LAL đònh tính đònh lượng cách xác, không sơ sót Nguyên tắc Endotoxin lipopolysaccharide có nguồn gốc từ vách tế bào vi khuẩn Gram [-], có tính chất đặc trưng ly giải tế bào amebocyte tuần hoàn máu sam (horseshoes = Limulus polyphemus) Dòch ly giải amebocytes bò đục bò đông lại thành gel độ nhớt bò gia tăng, độ đục độ đông cứng tùy thuộc vào lượng endotoxin có mẫu thử Cơ chế tượng thật chưa rõ, giống tượng đông máu người có hai trình xãy ra: (1) Endotoxin với diện ion calcium kích hoạt hệ thống men tiền đông giống trypsin (2) Hệ thống men bò kích hoạt nầy làm biến đổi chất gây đông (coagulogen) trình ly giải protein có giới hạn để sản sinh protein đông đặc Để đọc kết thử nghiệm LAL, có hai phương pháp: Phương pháp phát dung dòch thử nghiệm bò tăng độ nhớt, kết độ đục tăng lên bò đông đặc lại (đọc mắt thường, hay đọc máy đo độ đục) Phương pháp sinh màu dựa nguyên tắc protein bò ly giải làm protein khác (có mã số S-2423) dung dòch sinh màu sinh màu, độ đậm nhạt màu tùy 136 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác thuộc vào hàm lượng endotoxin thử nghiệm nhờ đònh lượng endotoxin Chỉ đònh áp dụng Thử nghiệm LAL đònh để phát đònh lượng endotoxin mẫu dòch truyền hay thuốc tiêm sản xuất dược phẩm có độ nhạy cao thử nghiệm phát chí nhiệt tố thực thỏ Thử nghiệm LAL áp dụng phòng thí nghiệm vi sinh lâm sàng để phát cách gián tiếp nhiễm trùng vi khuẩn Gram [-] dòch không tạp nhiễm thể : Dòch não tuỷ, dòch màng phổi, dòch mật, dòch ổ bụng Phương pháp có lợi điểm có kết nhanh vài sau gửi mẫi làm xét nghiệm Tuy nhiên phương pháp thay nuôi cấy không cho biết vi khuẩn gây nhiễm trùng vi khuẩn gì, cho biết kết kháng sinh đồ Để có kết qủa không bò dương tính giả mẫu bò tạp nhiễm endotoxin lấy chứa mẫu, vật liệu dùng để lấy chứa mẫu phải thật tinh endotoxin Tốt dùng vật liệu nhựa polystyrene vô trùng gamma để chứa mẫu (lọ vô trùng nắp đỏ công ty Nam Khoa), lấy mẫu ống chích thuỷ tinh vô trùng (đã xử lý hướng dẫn mục tiếp theo) Để kết không bò âm tính giả vật liệu để lấy chứa mẫu đặc tính hấp phụ endotoxin, nghóa phải tránh dùng vật liệu nhựa polypropylene (nhựa PP) Chuẩn bò vật liệu Vật liệu thủy tinh Tốt nên dùng vật liệu thủy tinh Với vật liệu thủy tinh mới, cần bọc giấy nhôm hấp khử trùng 121oC giờ, sau sấy khô 175oC Với vật liệu thủy tinh dùng rồi, cần phải ngâm dung dòch 1% tẩy kiềm, vd dung dòch 1% E-TOXA-CLEANâ Sigma (Catalog No 210-3), thời gian ngâm tốt qua đêm Khi ngâm dùng chổi để chà Sau ngâm rửa 8-10 lần vòi nước nóng chảy, sau rửa lần vòi nước cất hay nước khử ion Cuối tráng lại lần với nước khử endotoxin Sấy khô dụng cụ tủ sấy, sau bọc giấy nhôm khử trùng giống 137 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Vật liệu nhựa Chỉ dùng vật liệu nhựa vô trùng, không nhiễm endotoxin để pha thuốc thử Chỉ dùng lần, không dùng lại Ở khuyên dùng pipette Pasteur nhựa vô trùng, đầu type nhựa vô trùng dùng phòng thí nghiệm thao tác vô trùng Riêng vật liệu dùng pha gam chuẩn endotoxin hay pha bệnh phẩm cần phải polystyrene polypropylene polypropylene hấp phụ endotoxin Ở khuyên dùng pipette vô trùng có chia độ, polystyrene, vô trùng (loại đóng gói riêng lẽ, dùng lần ) Tiến hành thử nghiệm Ở trình bày phương pháp thử nghiệm dùng thuốc thử E-toxate Sigma Phương pháp dùng với số lượng mẫu nhỏ Pha gam endotoxin chuẩn Dùng micropipette với tip vô trùng không nhiễm endotoxin hút thể tích nước cất không nhiễm endotoxin (Sigma, catalog No 210-7) cho vào chai chứa endotoxin đông khô (Sigma, catalog No 210-SE) để đạt nồng độ endotoxin 4000 EU/ml (n ộ gốc) Vortex để trộn vòng phút Sau vortex thêm lần vòng 30 phút (mỗi lần 30 giây, nghó 10 phút) Sau pha, dung dòch endotoxin chuẩn nầy giữ tủ lạnh, bền tuần không bò tạp nhiễm Tránh giữ tủ đông Mỗi lần dùng phải vortex trộn Pha gam endotoxin chuẩn tube polystyrene vô trùng, không nhiễm endotoxin, có nắp đậy Nếu tube polystyrene phải dùng tube thủy tinh khử trùng khử endotoxin Pha trình bày bảng Cứ độ pha loãng, cần phải vortex khoảng 30-60 giây trước pha độ pha loãng kế Bất độ pha loãng để lâu 30 phút phải vortex trở lại trước dùng Endotoxin với nồng độ từ 400 EU/ml trở lên bền đến tuần giữ tủ lạnh (không giữ đông đá) 138 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Bảng 6: Cách pha dung dòch endotoxin chuẩn Ống số Thể tích dung dòch Endotoxin lấy Nướckhông Nồng độ endotoxin endotoxin 0.2 ml n ộ gốc 1.8 ml 400 EU 0.2 ml từ ống 1.8 ml 40 EU 0.2 ml từ ống 1.8 ml EU 0.3 ml từ ống 2.1 ml 0.5 EU ml từ ống ml 0.25 EU ml từ ống ml 0.125 EU ml từ ống ml 0.06 EU ml từ ống ml 0.03 EU ml từ ống ml 0.015 EU Tiến hành thử nghiệm Trước hết mẫu thử nghiệm phải chỉnh pH đạt từ 6-8 (thích hợp 6.8 đến 7.5) Chỉnh pH với dung dòch HCl 0.1M không lẫn endotoxin, dùng giấy thử pH không dùng pH kế Vổ nhẹ chai chứa E-TOXATE (Sigma, catalog No 210-20) xuống mặt bàn để E-TOXATE không dính nắp cao su Dùng micropipette với tip vô trùng không nhiễm endotoxin hút ml nước cất không nhiễm endotoxin cho vào chai Không lắc mạnh, lăn tròn chai để hòa tan Ngay sau hòa tan, cho lọ vào đá bào Phân phối vào tube thủy tinh vô trùng khử endotoxin có đậy miệng tube giấy nhôm, tube 0.1 ml Các tube E-TOXATE nầy phải giữ đá bào Dung dòch E-TOXATE pha xong nên dùng ngày Các tube dung dòch E-TOXATE chưa dùng phải giữ tủ đông độ nhạy giảm Tránh rã đông nhiều lần độ nhạy giảm nhanh Phương pháp đònh lượng: Đó trường hợp kiểm tra chất lượng phát endotoxin thuốc tiêm, dòch truyền; mẫu thử nghiệm riêng lẽ phải dùng tube E-TOXATE đánh 139 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác số từ đến cho vào tube mẫu thử, chứng [-], chứng ức chế (ƯC), nồng độ endotoxin chuẩn theo hướng dẫn trình bày bảng Phương pháp đònh tính: Đó trường hợp phát endotoxin bệnh phẩm máu, huyết thanh, dòch não tuỷ, dòch mật để tìm chứng sớm phát nhiện có vi khuẩn Gram [-] mẫu Trong mục đích này, mẫu thử phải lấy vô trùng dụng cụ không chứa endotoxin tính chất hấp phụ endotoxin Mỗi mẫu thử nghiệm riêng lẽ phải dùng tube E-TOXATE đánh số từ đến cho vào tube mẫu thử, chứng [-], chứng [+], chứng ức chế (ƯC) theo hướng dẫn trình bày bảng Sau đó, đậy miệng tube lại giấy nhôm Ủ tube máy cách thủy 37oC, không dao động ống nghiệm suốt trình ủ dù thử nghiệm [+] dung dòch tube đông lại mà tăng độ nhớt mà Bảng 7: Cách chuẩn bò tube thử nghiệm phương pháp đònh lượng Tube Để phát Mẫu thử Endotoxin ml Nước không endotoxin 0.1 ml ddòch 0.03 0.03 EU/ml Endotoxin 0.06 EU/ml Endotoxin chuẩn EU/ml ml 0.1 ml ddòch 0.06 EU/ml Endotoxin 0.125 EU/ml ml 0.1 ml ddòch 0.125 EU/ml Chứng [-] ml 0.1 ml 0.0 ml Chứng ƯC 0.1 ml 0.0 ml 0.01ml ddòch 4EU/ml Endotoxin 0.1 ml mẫu thử 140 0.0 ml 0.0 ml Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Bảng 8: Cách chuẩn bò tube thử nghiệm phương pháp đònh tính Tube Để phát Mẫu thử Chứng [+] ml Nước không endotoxin Endotoxin chuẩn 0.1 ml ddòch EU/ml Chứng [-] ml 0.1 ml 0.0 ml Chứng ƯC 0.1 ml 0.0 ml 0.01ml ddòch EU/ml Endotoxin 0.1 ml 0.0 ml 0.0 ml mẫu thử Đọc kết Sau ủ 37oC giờ, cẩn thận lấy tube khỏi máy cách thủy nghiêng nhẹ từ từ đến góc 180o, vừa nghiêng vừa quan sát gel hình thành ống nghiệm Kết đọc [+] dung dòch ống hoàn toàn thành gel cứng cho phép nghiêng hoàn toàn ống nghiệm mà gel không vỡ Nếu gel cứng kết phải đọc [-] Lưu ý động tác nghiêng ống thử nghiệm để đọc kết làm lần làm lại gel bò vỡ Đối với phương pháp đònh lượng, kết đònh lượng biện luận ví dụ trình bày bảng Đối với phương pháp đònh tính, kết mẫu thử có endotoxin chứng [+] cho kết [+], chứng [-] cho kết [-], ức chế (kết chứng ức chế [+]), mẫu thử cho kết [+] Mẫu thử endotoxin chứng [+] cho kết [+], chứng [-] cho kết [-], ức chế (chứng ức chế [+]), mẫu thử cho kết [-] Kết không đọc có ức chế (tức kết chứng ức chế [-]) Mẫu có kết [+] mẫu có nhiễm vi khuẩn Gram [-] endotoxin thành phần lipopolysaccharide vách vi khuẩn Gram [-] 141 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng bệnh phẩm khác Bảng 9: Cách biện luận kết phương pháp đònh lượng Tube Kết Tube Kết [-] [-] [+] [+] [+] [+] [-] [-] [+] [-] [+] [-] Mẫu có chứa Mẫu có chứa chất endotoxin ³ 0.06 IU/ml ức chế thử nghiệm Câu hỏi ôn tập Cho biết nguyên tắc thử nghiệm LAL Cho biết áp dụng thử nghiệm LAL, đặc biệt xét nghiệm vi sinh lâm sàng Để có kết xác, cho biết vật liệu dùng để lấy chứa bệnh phẩm phải đáp ứng điều kiện gì? Và muốn đáp ứng điều kiện phải dùng vật liệu gì? Các vật liệu nhựa thuỷ tinh dùng thí nghiệm LAL phải đáp ứng điều kiện gì? Và muốn đáp ứng điều kiện phải dùng vật liệu gì? Hãy trình bày cách làm thí nghiệm LAL cách đọc – phân tích kết 142 [...]... Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Hình 4: Tube đũa tăm bông vô trùng được thiết kế rất thuận lợi để lấy các quệt bệnh phẩm Hình 5: (A) Cặp tube đũa tăm bông vô trùng/môi trường chuyên chở Stuart- Amies; (B) Cặp tube đũa tăm bông mãnh vô trùng/môi trường chuyên chở StuartAmies 31 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Sơ đồ 2: QUI TRÌNH VI SINH LÂM SÀNG... để cấy mủ và các chất dòch 2 Hãy cho biết các loại bệnh phẩm mủ và chất dòch, và cách lấy các loại bệnh phẩm này 3 Hãy cho biết phương tiện lấy và chuyên chở các bệnh phẩm mủ và các chất dòch thích hợp nhất cho các bệnh vi n hiện nay, và phân tích các ưu khuyết điểm của các phương tiện này 4 Hãy cho biết qui trình xét nghiệm vi sinh lâm sàng thực hiện tại phòng thí nghiệm đối với các bệnh phẩm mủ và... (colostomy stomata) Ư Các bệnh phẩm lấy từ bề mặt các vết loét do nằm lâu, các quệt từ các bề mặt khác, đường dẫn từ xoang (sinus tract), và các hoại tử (eschar) Ư Bệnh phẩm lấy gần da và niêm mạc bằng các phương pháp không thích hợp, dễ bò ngoại nhiễm Ư Nước tiểu (voided urine), quệt âm đạo hay cổ tử cung 107 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Các phương pháp lấy bệnh phẩm để cấy kỵ... kháng sinh đồ với ATB-ANA Ủ kỵ khí/37oC/24 giờ D3 Sơ đồ 11: QUI TRÌNH VI SINH LÂM SÀNG CÁC MẪU KHẢO SÁT KỴ KHÍ Đọc kết quả chung cuộc: Đònh danh và kháng sinh đồ 115 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau MẪU MÁU Mục tiêu · Giúp được lâm sàng cho các chỉ đònh cấy máu thích hợp nhất vì biết được chỉ đònh cấy máu và thời điểm tốt nhất để thực hiện cấy máu, · Thực hiện đúng cách xét nghiệm. .. Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Hãy cho biết phương tiện thích hợp nhất để lấy và chuyên chở các quệt mủ, các chất dòch, và các mủ abcess? ¦ Không nên dùng các phương tiện tự chế trong bệnh vi n như: các que tăm bông tự quấn cho vào ống nghiệm nhét gòn rồi hấp hay sấy khử trùng; hay các lọ kiểu chai peni hay tube thuỷ tinh nhét gòn rồi hấp sấy vô trùng để lấy các bệnh phẩm. .. nhiều vi khuẩn hầu họng khác, (C, D) thạch máu với nhiều khúm vi khuẩn nghi ngờ Streptococcus feacalis, (E) thạch MC với các khúm vi khuẩn nghi ngờ Acinetobacter 96 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau CẤY KỴ KHÍ Mục tiêu · Chỉ đònh lâm sàng được để cấy kỵ khí và các trường hợp nào không nên cấy kỵ khí và có thể giúp được lâm sàng cho đúng chỉ đònh cấy kỵ khí và tránh các chỉ... tạo khí trường kỵ khí Câu hỏi ôn tập 1 Cho biết lâm sàng nên cho chỉ đònh cấy kỵ khí trước các trường hợp nào? 2 Các bệnh phẩm nào có thể lấy để làm xét nghiệm tìm vi khuẩn kỵ khí? Các bệnh phẩm nào không nên cho làm xét nghiệm tìm vi khuẩn kỵ khí gây bệnh, phân tích lý do tại sao? 3 Cho biết các cách lấy và chuyên chở bệnh phẩm để làm xét nghiệm tìm vi khuẩn kỵ khí và phân tích lý do tại sao? 4 Cho... hiện được khâu lấy bệnh phẩm cấy kỵ khí một cách chính xác và hoàn hảo nhờ vậy tăng được cơ hội phân lập được vi khuẩn kỵ khí gây bệnh từ các bệnh phẩm vì biết được các phương tiện và các cách lấy và chuyên chở các mẫu bệnh phẩm để cấy kỵ khí · Thực hiện được cấy kỵ khí nhờ đó có thể triển khai được xét nghiệm cấy kỵ khí tại phòng thí nghiệm lâm sàng tại các bệnh vi n vì biết được các phương tiện cần... hơn Ư Các trực khuẩn Enterobacteriaceae, Ư Pseudomonas và các trực khuẩn Gram (-) không lên men, Ư Streptococci (các loài khác) , Ư Clostridium perfringens, Ư Bacteroides và các vi khuẩn kỵ khí khác Rất hiếm gặp Ư Bacillus anthracis, Ư M tuberculosis, Ư M ulcerans, Ư Pasteurella multocida 27 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau Câu hỏi ôn tập 1 Cho biết các chỉ đònh lâm sàng để... đàm 92 Kỹ thuật xét nghiệm vi sinh lâm sàng các bệnh phẩm khác nhau CẤY ĐỊNH LƯNG MẪU ĐÀM – Các câu hỏi thường gặp Trong trường hợp vi m phổi cộng đồng, có cần thiết phải cấy đònh lượng mẫu đàm? ¦ Vi m phổi cộng đồng nếu là nhẹ hay trung bình thì không nhất thiết phải cấy đònh lượng vì các vi khuẩn gây bệnh thường là H influenzae, M catarrhalis và S pneumoniae Các vi khuẩn này dù đều có thể là vi khuẩn

Ngày đăng: 09/06/2016, 19:19

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan