Đang tải... (xem toàn văn)
Thí nghiệm được thực hiện nhằm mục đích: nghiên cứu ảnh hưởng của nguồn dinh dưỡng đến sự phát triển của nấm tím Paecilomyces javanicus; khả năng hình thành bào tử của các chủng nấm P. javanicus và ảnh hưởng của một số loại thuốc trừ nấm đến sự phát triển của nấm này. Kết quả cho thấy môi trường SDAY3 là môi trường thích hợp cho sự sinh trưởng và phát triển của nấm P. javanicus. Sau 14 ngày nuôi cấy nấm P. javanicus cho mật số bào tử 108/cm2. Trong điều kiện in vitro cho thấy cả năm loại thuốc trừ bệnh đều ảnh hưởng đến sự phát triển của nấm P. javanicus ở liều khuyến cáo (ảnh hưởng cao nhất là hoạt chất Hexaconazole và Carbendazim và thấp nhất là hoạt chất Mancozeb).
Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Số chuyên đề: Nông nghiệp (2014)(4): 105-112 KHẢO SÁT ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA CÁC CHỦNG NẤM TÍM PAECILOMYCES JAVANICUS KÝ SINH RỆP SÁP GIẢ TẠI ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG Trần Thị Tho1, Trần Văn Hai2 Trịnh Thị Xuân2 Trạm khuyến nông thành phố Sa Đéc, tỉnh Đồng Tháp Khoa Nông nghiệp & Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ Thông tin chung: Ngày nhận: 26/9/2014 Ngày chấp nhận: 07/11/2014 Title: Studies on biological characteristics of Paecilomyces javanicus fungal infection on mealybug in the Mekong Delta Từ khóa: Paecilomyces javanicus, môi trường dinh dưỡng, nấm ký sinh côn trùng, rệp sáp giả, thuốc trừ nấm Keywords: P javanicus, medium nutrion, Entomopathogenic fungi, Mealybug, fungicides ABSTRACT The experiment was conducted to aims at: examine the impact of nutritive ingredients on the growth of fungi Paecilomyces javanicus; evaluate the sporulation of fungi P javanicus; test the detrimental effect of fungicides to the growth of P javanicus The result showed that SDAY3 medium was suitable for the growth of P javanicus fungi After 14 days of inoculation, P javanicus fungi sporulated 108 conidia x cm-2, respectively In in vitro condition, the five tested fungicides had detrimental effect on the growth of P javanicus at the recommended dose Of which Hexaconazole resulted the highly adverse impact while Carbendazim shown the slightly adverse effect on the growth of two tested fungi TÓM TẮT Thí nghiệm thực nhằm mục đích: nghiên cứu ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng đến phát triển nấm tím Paecilomyces javanicus; khả hình thành bào tử chủng nấm P javanicus ảnh hưởng số loại thuốc trừ nấm đến phát triển nấm Kết cho thấy môi trường SDAY3 môi trường thích hợp cho sinh trưởng phát triển nấm P javanicus Sau 14 ngày nuôi cấy nấm P javanicus cho mật số bào tử 108/cm2 Trong điều kiện in vitro cho thấy năm loại thuốc trừ bệnh ảnh hưởng đến phát triển nấm P javanicus liều khuyến cáo (ảnh hưởng cao hoạt chất Hexaconazole Carbendazim thấp hoạt chất Mancozeb) hóa học kiểm soát côn trùng gây hại biện pháp an toàn cho trồng, động vật môi trường (Khetan, 2001) MỞ ĐẦU Việc lạm dụng thuốc trừ sâu để diệt côn trùng ngày làm gia tăng khả kháng thuốc, dẫn đến cần gia tăng số lượng liều lượng thuốc để đạt mức độ kiểm soát mong muốn Đồng thời việc sử dụng thuốc hóa học tiêu diệt hệ thiên địch, gây nhiều dịch hại mới, ảnh hưởng đến sức khỏe người, động vật môi trường Từ thực tế đó, biện pháp quản lý dịch hại theo hướng sinh học ngày phát triển Đấu tranh sinh học nấm gây bệnh côn trùng phát dần thay cho thuốc Hiện nay, có 100 chi với 700 loài nấm ký sinh côn trùng khác nhiều loài số có tiềm lớn quản lý dịch hại côn trùng (Roberts, 1989) Trong loài nấm ký sinh gây bệnh côn trùng có nấm Paecilomyces javanicus thuộc lớp nấm bất toàn (Deuteromycetes) giống Paecilomyces (Phạm Thị Thùy, 2004) Nấm P javanicus ký sinh nhiều loài thuộc cánh cứng (Coleoptera), cánh nửa cứng 105 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Số chuyên đề: Nông nghiệp (2014)(4): 105-112 pháp nuôi cấy đơn bào tử môi trường chọn lọc Định danh nấm theo Barnett and Barry (1972), Lawrence (1994), De Hoog (1972), Luangsa-ard et al (2006) (Hemiptera), cánh màng (Hymenoptera), cánh vẩy (Lepidoptera) cánh (Diptera) (Trần Văn Mão, 2002) Tại Việt Nam, nghiên cứu ứng dụng nấm ít, sở liệu đặc tính sinh học hạn chế Phương pháp tiêu theo dõi Đặc điểm khuẩn lạc; đặc điểm quan sinh bào tử hình dạng bào tử; kích thước bào tử: theo phương pháp Reza et al (2006); tỷ lệ nảy mầm bào tử: theo phương pháp Milner et al (1991) 2.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng đến phát triển chủng nấm Paecilomyces javanicus PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Phương tiện Các mẫu nấm tím Paecilomyces javanicus phân lập từ rệp sáp tự nhiên, tách lọc thu bào tử môi trường PDA Hộp nuôi sâu, giấy lót, beaker, bình tam giác, nước cất, giấy thấm, kẹp inox, cọ lông, kéo, keo dán, bút lông, lamme đếm hiệu Thoma, lamme, pipette, cồn 70% để khử trùng dụng cụ, bọc giấy, dụng cụ đo nhiệt độ,… Thí nghiệm thực theo phương pháp Kamp and Bidochka (2002) năm loại môi trường PDA, CDA, SDAY1, SDAY3 SDAY3 + K với lần lặp lại Phương pháp tiêu theo dõi Kính hiển vi tương phản pha, máy Vortex, lò vi sóng, thiết bị trùng, tủ lạnh, tủ đông, cân điện tử Đường kính khuẩn lạc (cm) số lượng bào tử/cm2 2.2.3 Ảnh hưởng số loại thuốc trừ nấm đến phát triển nảy mầm nấm Paecilomyces javanicus Các loại môi trường sử dụng nghiên cứu Môi trường phân lập ban đầu PDA (Potato Dextrose Agar): 200g khoai tây, 20g dextrose, 20g agar, 1000 ml nước cất Thí nghiệm thực theo phương pháp Rachappa, (2006) Amutha et al (2010) Thí nghiệm bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên, lần lặp lại tương ứng với đĩa petri Các nghiệm thức gồm loại thuốc trừ nấm: Carbendazim (Carzenthai 50SC), Difenoconazole (Score 250 EC), Chlorothalonil (Daconil 75WP), Hexaconazole (Tecvil 5SC), Mancozeb (Man 80WP) Nghiệm thức đối chứng không xử lý thuốc Môi trường CDA (Czapek – Dox Agar): 30g sucrose, 20g agar số vitamin dưỡng chất Môi trường SDAY1 (Sabouraud Dextrose Agar Yeast): 10g pepton, 40g dextrose, 2g yeast extract, 20g agar, 1000 ml nước cất, pH 6,5 Môi trường SDAY3 (Sabouraud Dextrose Agar Yeast có thêm khoáng chất): 10g pepton, 40g dextrose, 2g yeast extract, số chất khoáng, 1000 ml nước cất Các tiêu theo dõi: Đường kính khuẩn lạc (cm) tính phần trăm phát triển sợi nấm bị ức chế so với đối chứng theo công thức: I = [(C-T)]/C]*100 Trong đó: I: % khuẩn lạc bị ức chế C: đường kính khuẩn lạc đo nghiệm thức đối chứng T: đường kính khuẩn lạc đo nghiệm thức xử lý thuốc (Theo công thức Abbott (1925) Viện nghiên cứu cao su Việt Nam (2006)) Môi trường SDAY3 + K (Sabouraud Dextrose Agar Yeast + Chitin): 2g yeast extract, 2g pepton, 20g dextrose, 20g agar, 5g kitin, 1000 ml nước cất, pH 6,5 2.2 Phương pháp 2.2.1 Phân lập xác định loài nấm tím Paecilomyces javanicus ký sinh rệp sáp theo phương pháp truyền thống Thu mẫu rệp sáp bị nấm tím ký sinh tự nhiên phòng thí nghiệm phát triển chế phẩm sinh học (NEDO), Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông nghiệp Sinh học Ứng dụng, Trường Đại học Cần Thơ để phân lập tác nhân Nấm nuôi cấy môi trường PDA, tạo phương Ảnh hưởng thuốc đánh giá theo bốn cấp độ: cấp 1: không ảnh hưởng (90 %) (Hassan, 1989) 106 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Số chuyên đề: Nông nghiệp (2014)(4): 105-112 Số lượng bào tử tạo thành/cm2: tính lần thời điểm 15 NSKC, thu bào tử nghiệm thức xác định mật số bào tử lamme đếm hồng cầu hiệu Thomas kính hiển vi KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Xác định loài dựa vào phân loại hình thái chủng nấm Mật số bào tử/cm2 = số lượng bào tử (bt/ml)/diện tích khuẩn lạc Kết thu thập mẫu nấm ký sinh côn trùng Tp Cần Thơ, tỉnh Vĩnh Long tỉnh Sóc Trăng trình bày Bảng Bảng 1: Các chủng nấm P javanicus phân lập sử dụng thí nghiệm Địa điểm thu thập (quận, huyện, tỉnh) Rệp sáp giả (Icerya sp.) (Bộ: Homoptera, Họ: Margarodidae) Cần Thơ Rệp sáp giả (Icerya sp.) (Bộ: Homoptera, Họ: Margarodidae) Cần Thơ Rệp sáp giả (Icerya sp.) (Bộ: Homoptera, Họ: Margarodidae) Cần Thơ Rệp sáp giả (Icerya sp.) (Bộ: Homoptera, Họ: Margarodidae) Cần Thơ Rệp sáp giả (Icerya sp.) (Bộ: Homoptera, Họ: Margarodidae) Vĩnh Long Rệp sáp giả (Icerya sp.) (Bộ: Homoptera, Họ: Margarodidae) Vĩnh Long Rệp sáp giả (Icerya sp.) (Bộ: Homoptera, Họ: Margarodidae) Sóc Trăng Barnett Barry (1972), Lawrence (1994), De Qua Bảng cho thấy thu chủng nấm Hoog (1972), Luangsa-Ard et al (2006) tím ký sinh rệp sáp giả Trên mẫu nấm thu đặc điểm khuẩn lạc, kích thước quan sinh bào cho thấy rệp sáp giả nấm ký sinh thể tử, hình dạng kích thước bào tử phủ lớp bột màu trắng sau tiêu để phân biệt định danh nấm chuyển dần sang màu tím Đặc điểm quan sinh bào tử, hình dạng Đặc điểm khuẩn lạc chủng nấm bào tử Cả bảy chủng nấm thu phân lập Qua quan sát quan sinh bào tử nhận thấy môi trường PDA có đặc điểm sau: Các cuống bào tử đính dạng đơn, chúng phân nhánh chủng nấm có khuẩn lạc mọc dạng xốp, lúc dạng vòng không đều, vòng gồm 2-3 đầu có màu trắng ngà, sau chuyển dần sang màu thể bình Thể bình chủng nấm có phần đáy kem đến màu tím nhạt (khi bào tử già) Khuẩn hình trụ, phía thon dần thành cổ mỏng lạc mọc tỏa tròn, mép khuẩn lạc trơn nhẵn có Bào tử đính dạng chuỗi đính thể bình cưa Khuẩn lạc kết chặt tạo thành cột bào tử đính theo vòng tròn đồng tâm quanh điểm Hình dạng kích thước bào tử cấy Theo kết nghiên cứu số tác giả Bảng 2: Kích thước hình dạng bào tử chủng nấm P javanicus STT Ký hiệu mẫu Pae3-CT Pae4-CT Pae5-CT Pae6-CT Pae7-VL Pae8-VL Pae9-ST Ký chủ (tên thường gọi, tên khoa học, bộ, họ) T: 290C±2; H: 70%±2 Chủng nấm Pae3-CT Pae4-CT Pae5-CT Pae6-CT Pae7-VL Pae8-VL Pae9-ST Kích thước bào tử (TB ± SD) Chiều dài (µm) Chiều rộng(µm) 4,8±0,50 1,9±0,19 5,0±0,52 2,1±0,19 4,3±0,54 1,9±0,18 5,1±0,62 1,9±0,26 4,7±0,60 2,0 ±0,16 4,6±0,55 2,0±0,14 5,2±0,71 2,0±0,16 Hình dạng bào tử Hình ovan Hình ovan Hình ovan Hình ovan Hình ovan Hình ovan Hình ovan Ghi chú: Kích thước bào tử tính theo độ lệch chuẩn trung bình (TB ± SD) 40 bào tử cho chủng nấm Kích thước bào tử tiêu quan trọng để nhận biết khác loài theo phương pháp phân loại truyền thống Bào tử có kích thước lớn chủng Pae7VL với 5,2±0,71 µm chiều dài 2,0±0,16 µm chiều rộng, chủng Pae5-CT có kích thước nhỏ tương ứng chiều dài 4,3±0,54 µm chiều rộng 1,9±0,18 µm, bào tử có dạng hình ovan Thời gian bào tử nẩy mầm chủng nấm 107 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Số chuyên đề: Nông nghiệp (2014)(4): 105-112 Qua Bảng cho thấy chủng nấm có tỷ lệ bào tử nẩy mầm nhanh dao động từ 2,3 đến 6,8% sau quan sát Sau 20 GSKC, chủng nấm có tỉ lệ nảy mầm cao, riêng chủng Pae7-VL có tỷ lệ nẩy mầm thấp (84,8%) khác biệt ý nghĩa 1% chủng nấm lại Bảng 3: Tỉ lệ nảy mầm chủng nấm qua quan sát T: 290C±2; H: 70%±2 Tỉ lệ (%) bào tử nẩy mầm thời điểm sau cấy 8GSKC 12GSKC 16GSKC 2,3 f 36,8 d 91,3 b de bc 3,8 53,3 90,5 b c c 6,8 46,5 94,0 ab de de 3,0 31,3 67,5 c de e 2,5 26,3 63,5 c c b 6,3 55,8 89,8 b d c 4,0 46,8 90,8 b 9,8 5,5 5,6 ** ** ** Chủng nấm Pae3-CT Pae4-CT Pae5-CT Pae6-CT Pae7-VL Pae8-VL Pae9-ST CV (%) Mức ý nghĩa 20SKC 94,8 ab 93,3 b 96,5 ab 93,3 ab 84,8 c 94,5 ab 92,5 b 4,6 ** Ghi chú: Trong cột số trung bình có chữ theo sau giống không khác biệt qua phép thử DUNCAN GSKC: sau cấy **: Khác biệt có ý nghĩa mức 1% lạc cao (4,05 cm) có khác biệt ý nghĩa 1% với môi trường lại Tiếp theo môi trường SDAY3 có đường kính khuẩn lạc 3,88 cm có khác biệt ý nghĩa 1% với môi trường CDA (3,75 cm) SDAY1 (3,46 cm) không khác biệt với môi trường SDAY+K (3,83 cm), chủng nấm có đường kính khuẩn lạc đạt cao Pae5-CT (4,34 cm) 3.2 Ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng đến phát triển nấm Paecilomyces javanicus Tại thời điểm 14 NSKC Ở thời điểm 14 NSKC, xét tương tác môi trường chủng nấm môi trường PDA lại môi trường cho chiều dài đường kính khuẩn Bảng 4: Đường kính khuẩn lạc (cm) chủng nấm P javanicus năm loại môi trường giai đoạn 14 NSKC T0C: 28±2; H%: 70±2 Chủng nấm (A) Pae3-CT Pae4-CT Pae5-CT Pae6-CT Pae7-VL Pae8-VL Pae9-ST Trung Bình (B) Mức ý nghĩa CV (%) PDA 3,75c 3,80c 5,31a 3,89c 3,48d 4,24b 3,89c 4,05a F(A)** CDA 4,11ab 3,71d 4,21a 3,19e 3,10e 3,93c 4,00bc 3,75c Môi trường (B) SDAY1 SDAY3 3,48a 4,21a 3,41a 3,61b 3,78a 4,21a a 3,66 3,45c b 2,90 3,28d a 3,49 4,13a a 3,48 4,28a d 3,46 3,88b ** F(B) 4,0 SDAY3+K 3,96c 3,85a 4,18a 3,69c 3,09d 4,25a 3,80cd 3,83b F(AB)** Trung Bình (A) 3,90c 3,68d 4,34a 3,58e 3,17f 4,01b 3,89c Ghi chú: Các giá trị trung bình cột theo sau hay nhiều chữ giống không khác biệt ý nghĩa thống kê mức 1% qua phép thử DUNCAN; ** khác biệt mức ý nghĩa 1% Tại thời điểm 32 NSKC, xét tương quan môi trường chủng nấm cho thấy, thời điểm 32 NSKC, môi trường SDAY3 SDAY3+K môi trường thích hợp cho nhiều chủng nấm phát triển (đường kính khuẩn lạc khoảng 8,408,49 cm) không khác biệt ý nghĩa thống kê với khác biệt ý nghĩa 1% với môi trường PDA (7,92 cm), CDA (8,15 cm) môi trường SDAY1 (6,95 cm) Chủng nấm cho phát triển đường kính khuẩn lạc cao Pae3CT, Pae5-CT Pae9-ST đạt 8,26; 8,30; 8,22 cm 108 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Số chuyên đề: Nông nghiệp (2014)(4): 105-112 Bảng 5: Đường kính khuẩn lạc (cm) chủng nấm P javanicus năm loại môi trường giai đoạn 32 NSKC T0C: 28±2; H%: 70±2 Chủng nấm (A) Pae3-CT Pae4-CT Pae5-CT Pae6-CT Pae7-VL Pae8-VL Pae9-ST Trung Bình (B) Mức ý nghĩa CV (%) PDA 7,79bc 7,85bc 8,94a 7,64c 7,30d 7,90bc 8,03b 7,92c F(A)** CDA 8,60a 8,51a 8,66a 7,04b 6,93b 8,61a 8,71a 8,15b Môi trường (B) SDAY1 SDAY3 7,66a 8,58b ab 7,46 8,15c d 6,42 8,93a bc 7,29 8,16c d 6,26 7,38d d 6,44 8,70ab 7,11c 8,89a 6,95d 8,40a F(B)** 2,0 SDAY3+K 8,55a 8,41ab 8,46ab 8,45ab 8,13c 8,48a 8,25bc 8,49a F(AB)** Trung Bình (A) 8,26a 8,10b 8,30a 7,74c 7,22d 8,05b 8,22a Ghi chú: Các giá trị trung bình cột theo sau hay nhiều chữ giống không khác biệt ý nghĩa thống kê mức 1% qua phép thử DUNCAN; ** khác biệt mức ý nghĩa 1% Hình 1: Mật số bào tử chủng nấm Paecilomyces javanicus năm loại môi trường dinh dưỡng thời điểm 15 ngày sau cấy việc ứng dụng để quản lý côn trùng gây hại Môi trường thích hợp cho nấm phát triển mạnh sinh bào tử cao Trong kết nghiên cứu môi trường SDAY3, SDAY3+K PDA môi trường nuôi cấy nấm P javanicus cho đường kính khuẩn lạc mật số bào tử cao khoảng từ 0,33 – 1,15 x 108 bào tử/cm2 Kết phù hợp với nghiên cứu Boucias Pendland (1998), tác giả nhận định chi nấm Paecilomyces dễ dàng nuôi cấy môi trường Sabouraud dextrose hay potato dextrose Mật số bào tử chủng P javanicus năm loại môi trường dinh dưỡng thời điểm 15 NSKC trình bày Hình cho thấy môi trường PDA, SDAY3 SDAY3+K cho mật số bào tử cao Trong môi trường SDAY3 có nhiều chủng nấm cho mật số cao (0,351,15x108/cm2) Môi trường cho mật số bào tử cao SDAY3+K (0,33-1,02x108/cm2) môi trường PDA (0,29-0,97x108/cm2) CDA môi trường cho mật số bào tử thấp (0,130,53x108/cm2) Chủng Pae6-CT Pae7-VL cho mật số bào tử thấp hầu hết loại môi trường ngoại trừ môi trường CDA chủng Pae6-CT cho mật số bào tử cao chủng nấm (0,53x108 bào tử/cm2) Ngoài ra, nghiên cứu tiến hành nước có kết tương tự, Phạm Thị Thùy ctv (1995) xác định môi trường Sabouraud bổ sung thêm khoáng chất môi trường nhân giống nấm côn trùng tốt Theo Võ Thị Thu Oanh (2010), môi trường có thêm chất kitin cần thiết cho trình hình thành bào tử nấm ký Tóm lại, việc chọn nguồn dinh dưỡng thích hợp nấm phát triển hình thành bào tử đóng vai trò quan trọng nghiên cứu sinh học 109 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Số chuyên đề: Nông nghiệp (2014)(4): 105-112 sinh côn trùng môi trường có nguồn đạm tốt (cao nấm men pepton), thêm vào 5% chất kitin thu bào tử nhiều 3.3 Ảnh hưởng số loại thuốc trừ bệnh nấm Paecilomyces javanicus Qua kết trình bày Bảng cho thấy thời điểm 10 NSKC, năm hoạt chất thử nghiệm có hai hoạt chất Hexaconazole Bảng 6: Ảnh hưởng loại thuốc trừ nấm đoạn 10 NSKC Carbendazim ảnh hưởng lớn đến phát triển chủng nấm Khuẩn lạc bị ức chế 100%, cấp độ ảnh hưởng cấp (cấp cao nhất) Tiếp theo hoạt chất Difenoconazole cấp độ ảnh hưởng cấp 2, đường kính khuẩn lạc bị ức chế 65,8-72,1% Hai hoạt chất Chlorothalonil Mancozeb có ảnh hưởng thấp phát triển nấm, khuẩn lạc bị ức chế khoảng 12,4-49,2%, cấp độ ảnh hưởng cấp (cấp thấp nhất) đến phát triển khuẩn lạc nấm P javanicus giai T0C: 29±2; H%: 70±2 Chủng nấm Pae3-CT Pae4-CT Pae5-CT Pae6-CT Pae7-VL Pae8-VL Pae9-ST Môi trường Khuẩn lạc Cấp độ Khuẩn lạc Cấp độ Khuẩn Cấp độ Khuẩn lạc Cấp độ Khuẩn lạc Cấp độ bị ức chế ảnh bị ức chế ảnh lạc bị ức ảnh bị ức chế ảnh bị ức chế ảnh (%) hưởng (%) hưởng chế (%) hưởng (%) hưởng (%) hưởng 70,6 31,1 100 100 29,0 65,8 46,2 100 100 49,2 72,1 35,4 100 100 42,1 66,8 16,6 100 100 24,7 67,1 21,3 100 100 12 ,4 70,1 33,2 100 100 35,8 70,8 23,7 100 100 13,5 Ghi chú: (1) Difenoconazole; (2) Chlorothalonil; (3) Hexaconazole; (4) Carbendazim; (5) Mancozeb Cấp 1: không ảnh hưởng (90%) (Hassan,1989) Đến 15NSKC (Bảng 7) cấp độ ảnh hưởng hoạt chất thuốc đến phát triển khuẩn lạc khác biệt so với 10NSKC Hai hoạt chất Hexaconazole Carbendazim có cấp độ ảnh hưởng cao (cấp 4) Tiếp theo hai hoạt chất Chlorothalonil Mancozeb có ảnh hưởng thấp phát triển nấm (cấp 1), khuẩn Bảng 7: Ảnh hưởng loại thuốc trừ bệnh javanicus giai đoạn 15 NSKC lạc bị ức chế khoảng 11,1-47,3% (thấp vào giai đoạn 10NSKC), điều cho thấy hiệu lực thuốc bắt đầu giảm Riêng hoạt chất Difenoconazole so với 10NSKC, phần trăm khuẩn lạc bị ức chế cao (66,3-75,1%), nói hiệu lực hoạt chất Difenoconazole chưa giảm sau 15 ngày thí nghiệm đến phát triển khuẩn lạc nấm Paecilomyces T0C: 29±2; H%: 70±2 Chủng nấm Pae3-CT Pae4-CT Pae5-CT Pae6-CT Pae7-VL Pae8-VL Pae9-ST Khuẩn Cấp độ Khuẩn Cấp độ lạc bị ức ảnh lạc bị ức ảnh chế (%) hưởng chế (%) hưởng 71,2 27,9 67,6 32,9 75,9 34,8 73,0 17,5 66,3 16,8 75,1 32,0 73,0 20,1 Môi trường Khuẩn Cấp độ Khuẩn Cấp độ Khuẩn Cấp độ lạc bị ức ảnh lạc bị ức ảnh lạc bị ức ảnh chế (%) hưởng chế (%) hưởng chế (%) hưởng 100 100 28,1 100 100 47,3 100 100 39,3 100 100 38,0 100 100 17,9 100 100 34,0 100 100 11,1 Ghi chú: (1) D ifenoconazole; (2) Chlorothalonil; (3) Hexaconazole; (4) Carbendazim; (5) Mancozeb Cấp 1: không ảnh hưởng (90%) (Hassan,1989) 110 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Số chuyên đề: Nông nghiệp (2014)(4): 105-112 Bảng 8: Ảnh hưởng năm loại thuốc trừ nấm đến khả hình thành bào tử chủng nấm P javanicus thời điểm 15NSKC T0C: 29±2; H%: 70±2 Chủng nấm (A) Pae3-CT Pae4-CT Pae5-CT Pae6-CT Pae7-VL Pae8-VL Pae9-ST Trung bình (B) Mức ý nghĩa CV (%) 0,34ab 0,63a 0,20b 0,00c 0,00c 0,37a 0,40a 0,28d F(A)** Mật số bào tử (x10 ) 15NSKC môi trường (B) 4,47a 0,00 0,00 5,32ab 4,60a 0,00 0,00 8,23a d 0,50 0,00 0,00 0,97d c 1,05 0,00 0,00 2,31c b 2,40 0,00 0,00 3,01bc ab 3,12 0,00 0,00 2,23c c 1,12 0,00 0,00 2,27c c e e 2,47 0,00 0,00 3,48b ** F(B) F(AB)** 2,5 ĐC 7,58b 10,26a 3,18e 3,97de 4,44cd 4,49cd 5,63c 5,65a Ghi chú: (1) Difenoconazole; (2) Chlorothalonil; (3) Hexaconazole; (4) Carbendazim; (5) Mancozeb Tại thời điểm 14 ngày sau cấy nấm P javanicus cho mật số bào tử 108/cm2 Từ kết trình bày Bảng 8, xét tương tác môi trường chủng nấm cho thấy năm hoạt chất ảnh hưởng đến khả hình thành bào tử chủng nấm Paecilomyces javanicus có khác biệt ý nghĩa 1% so với đối chứng Trong hai hoạt chất Hexaconazole Carbendazim ảnh hưởng cao nhất, ức chế hoàn toàn khả hình thành bào tử chủng nấm Tiếp theo hoạt chất Difenoconazole, mật số bào tử hình thành thấp trung bình đạt 0,28 x 107 bào tử/cm2 Hai hoạt chất Mancozeb Chlorothalonil có ảnh hưởng thấp đến khả tạo bào tử chủng nấm Trong đó, hoạt chất Mancozeb có ảnh hưởng yếu nhất, mật số bào tử trung bình đạt 3,48x107 bào tử/cm2 hoạt chất Chlorothalonil mật số bào tử trung bình 2,47x107 bào tử/cm2 Hai hoạt chất Hexaconazole Carbendazim ảnh hưởng cao nhất, ức chế hoàn toàn khả phát triển nấm TÀI LIỆU THAM KHẢO Amutha, M., J Gulsar Banu, T Surulivelu, N Gopalakrishnan, 2010 Effect of commonly used insecticides on the growth of white Muscardine fungus, Beauveria bassiana under laboratory conditions Journal of Biopesticides 3: 143 - 146 Barnett H L and B H Barry, 1972 Illutrated genera of imperfect fungi Burgess Publishing company Minneapolis Minnesota 250pp Boucias d g and j c pendland, 1998 chapter 10: entomopathogenic fungi: fungi imperfecti in principles of insect pathology, pp 312 – 364 springer De Hoog G S., 1972 The genera Beauveria, Isaria, Tritirachium, and Acrodonium gen nov Centralbureau voor Schimmelcutures, Baarn Studies in Mycology 1: 1-41 Fargues J., MC Bon., S Manguin and Y Couteaudier., 2002 Genetic variability among Paecilomyces fumosoroseus isolates from various geographical and host insect origins based on the rDNA-ITS regions Mycol Res 106:pp 1066-1074 Ferron P.,1978 Biologycal control of insect pests by enthomogenous fungi Annual Review of Entomology, 23: 409-442 Tóm lại, sau 15 ngày thử nghiệm cho thấy thuốc trừ bệnh có ảnh hưởng đến phát triển chủng nấm P javanicus Trong năm hoạt chất thử nghiệm, hai hoạt chất Hexaconazole Carbendazim ảnh hưởng cao nhất, ức chế hoàn toàn khả phát triển nấm Các hoạt chất lại mức độ ảnh hưởng thấp Hoạt chất Mancozeb có ảnh hưởng thấp Vì vậy, việc sử dụng nấm ký sinh côn trùng phải thận trọng có sử dụng thuốc trừ nấm KẾT LUẬN Đã thu thập chủng nấm P javanicus ký sinh rệp sáp giả gây hại vườn ăn trái Tp Cần Thơ, tỉnh Vĩnh Long tỉnh Sóc Trăng Môi trường SDAY3 môi trường thích hợp cho sinh trưởng phát triển nấm P javanicus 111 Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Số chuyên đề: Nông nghiệp (2014)(4): 105-112 12 Steinhaus E A., 1956 Microbial control— the emergence of an idea A brief history of insect pathology through the nineteenth century Hilgardia 26, 107–160 13 Thomas M B and A F Read, 2007 Can fungal biopesticides control malaria Nature Microbiology Reviews 5: 377-383 14 Trần Văn Mão, 2002 Sử dụng côn trùng vi sinh vật có ích Tập II Sử dụng vi sinh vật có ích Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội 15 Trần Văn Mão, 2004 Sử dụng côn trùng vi sinh vật có ích Tập II Sử dụng vi sinh vật có ích Nhà xuất Nông Nghiệp – Hà Nội 16 Võ Thị Thu Oanh, 2010 Nghiên cứu đặc tính sinh học đánh giá độc tính mẫu phân lập nấm Beauveria Metarhizium ký sinh trùng gây hại Luận án tiến sĩ nông nghiệp Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh Khetan S K., 2001 Microbial Pest Control, Marcel Dekker, Inc, New York Lawrence L., 1994 Manual of techniques in insect pathology Chapter 3: Fungi: Hyphomycetes Marks G and Douglas I Biological Technnques series: 335-341 Luangsa-ard J J., N L Hywel-Jones, L Manoch, R A Samson, 2005 On the relationships of Paecilomyces sect, Isarioidea species Vol 109 (5), pp 581 – 589 Publisher British Mycological Society 10 Phạm Thị Thùy, 2004 Công nghệ sinh học bảo vệ thực vật NXB Đại học quốc gia Hà Nội 335 trang 11 Roberts D W.,1989 World picture of biological control of insects by fungi Memorias Instituto Oswaldo Cruz, 84, 89-100 112