ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - NGUYỄN DUY GIANG Tên đề tài: NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY DÂU TÂY (Fragaria vesca L.) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH & CNTP Khóa học : 2010 - 2014 Thái Nguyên, 2014 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - NGUYỄN DUY GIANG Tên đề tài: NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY DÂU TÂY (Fragaria vesca L.) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Thực phẩm Khoa : CNSH & CNTP Lớp : 42 - CNSH Khóa học : 2010 - 2014 Giảng viên hướng dẫn: ThS Nguyễn Thị Tình Khoa CNSH & CNTP - Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên ThS Đào Duy Hưng Viện Khoa học Sự sống - Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên Thái Nguyên, 2014 LỜI CẢM ƠN Được trí Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhịêm khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm em tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu nhân giống Dâu Tây (Fragaria vesca L.) phương pháp nuôi cấy mô” Qua thời gian làm việc Phòng thí nghiệm Khu Công nghệ Tế bào, Viện Khoa học Sự sống, Đại học Nông Lâm Thái Nguyên đến em hoàn thành đề tài Để đạt kết ngày hôm em xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm Khoa thầy cô giáo anh chị Bộ môn tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian qua Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: ThS Nguyễn Thị Tình, ThS Đào Duy Hưng tận tình bảo, hướng dẫn em thời gian thực đề tài Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè hết lòng động viên, giúp đỡ tạo điều kiện vật chất tinh thần cho em trình học tập nghiên cứu Em mong nhận đóng góp ý kiến thầy cô bạn để đề tài em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn ! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2014 Sinh viên thực Nguyễn Duy Giang DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 4.1 Ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây (theo dõi sau 45 ngày) 21 Bảng 4.2 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây ( theo dõi sau 45 ngày) 23 Bảng 4.3 Ảnh hưởng kết hợp nồng độ BAP IBA đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây ( theo dõi sau 45 ngày) 25 Bảng 4.4 Ảnh hưởng kết hợp nồng độ BAP IAA đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây ( theo dõi sau 45 ngày) 27 Bảng 4.5 Ảnh hưởng nồng độ IBA đến khả rễ chồi Dâu Tây ( theo dõi sau 30 ngày) 29 Bảng 4.6 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ Dâu Tây 31 (theo dõi sau 30 ngày) 31 Bảng 4.7 Ảnh hưởng số loại giá thể đến tỷ lệ sống Dâu Tây vườn ươm (theo dõi sau 30 ngày) 32 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Sơ đồ trình phân hoá phản phân hoá tế bào thực vật Biểu đồ 4.1: Ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây 21 Hình 4.1.1 Chồi cấy công thức (ĐC) 22 Hình 4.1.2 Chồi cấy công thức 22 Biểu đồ 4.2 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây 23 Hình 4.2.1 Chồi cấy công thức (ĐC) 24 Hình 4.2.2 Chồi cấy công thức 24 Biểu đồ 4.3 Ảnh hưởng củasự kết hợp nồng độ BAP IBA đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây 25 Hình 4.3.1 Chồi cấy công thức (ĐC) 26 Hình 4.3.2 Chồi cấy công thức 26 Biểu đồ 4.4 Ảnh hưởng kết hợp nồng độ BAP IAA đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây 27 Hình 4.4.1 Chồi cấy công thức (ĐC) 28 Hình 4.4.2 Chồi cấy công thức 28 Biểu đồ 4.5 Ảnh hưởng nồng độ IBA đến khả rễ chồi Dâu Tây29 Hình 4.5.1 Chồi cấy công thức (ĐC) 30 Hình 4.5.2 Chồi cấy công thức 30 Biểu đồ 4.6 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ Dâu Tây 31 Hình 4.6.1 Chồi cấy CT (ĐC) 31 Hình 4.6.2 Chồi cấy CT 31 Biểu đồ 4.7 Ảnh hưởng số loại giá thể đến tỷ lệ sống Dâu Tây vườn ươm 33 Hình 4.7.1 Cây trồng giá thể đất màu 33 Hình 4.7.2 Cây trồng giá thể Đất màu +1 Trấu hun 33 DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT ADN : Acid deoxyribonucleic B1 : Thiamin B3 : Nicotinic acid B5 : Gamborg’s B6 : Pyridoxine BA : 6-Benzylaminopurine CV : Coefficient of Variation ĐC : Đối chứng IAA : Indol axetic acid Kinetin LSD : 6-Furfurylaminopurine : Least Significant Difference Test MS : Murashige and Skoog’s NAA : α - Naphlene axetic acid TN : Thí nghiệm WPM : Woody Plant Medium (A/C) : Auxin/Cytokinin MS : (Murashinge &Skoog , 1962) IBA : Indole - - butiric acid BAP : - benzylaminopurine ETDA : Ethylen Diamin Tetraacetic Acid MỤC LỤC Trang PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa đề tài PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu phân loại 2.1.1 Nguồn gốc 2.1.2 Phân loại 2.1.3 Đặc điểm thực vật học 2.1.4 Tác dụng 2.2 Cơ sở khoa học phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.1 Tính toàn tế bào 2.2.2 Sự phân hoá phản phân hoá tế bào 2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến nuôi cấy mô tế bào 2.3.1 Môi trường nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.3.2 Yếu tố vô trùng 10 2.4 Các công đoạn nuôi cấy mô tế bào 12 2.5 Tình hình nghiên cứu Dâu Tây Thế Giới Việt Nam 14 2.5.1 Tình hình nghiên cứu Thế Giới 14 2.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 14 PHẦN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU15 3.1 Vật liệu phạm vi nghiên cứu 15 3.1.1 Vật liệu nghiên cứu 15 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 15 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 15 3.3 Nội dung nghiên cứu 15 3.4 Phương pháp nghiên cứu 15 3.4.1 Phương pháp nghiên cứu nội dung 15 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung 17 3.4.3 Phương pháp nghiên cứu nội dung 18 3.5 Xử lý số liệu 19 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 21 4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng đơn lẻ kết hợp số chất kích thích sinh trưởng (BAP, Kinetin, IAA, IBA) đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây21 4.1.1 Ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chồi 21 4.1.2 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây 23 4.1.3 Ảnh hưởng kết hợp nồng độ BAP IBA đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây 25 4.1.4 Ảnh hưởng kết hợp nồng độ BAP IAA đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây 27 4.2 Ảnh hưởng nồng độ IBA NAA đến khả rễ chồi Dâu Tây 29 4.2.1 Ảnh hưởng nồng độ IBA đến khả rễ chồi Dâu Tây29 4.2.2 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ chồi Dâu Tây31 4.3 Ảnh hưởng số loại giá thể đến tỷ lệ sống Dâu Tây vườn ươm 32 PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 35 5.1 Kết luận 35 5.2 Đề nghị 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Cây Dâu tây (Fragaria vesca L.) thuộc họ hoa hồng (Rosaceae) [4], trồng châu Âu cuối kỷ XV, kết lai ghép giống F chiloensis duch F virgiana duch [17] Là loài thân thảo, giả nhiều đóng tập hợp đế hoa lồi nạc, mọng nước [9] Quả có vị ngọt, chua se, tính mát, cung cấp nhiều loại vitamin cần thiết cho thể người vitamin A, B1, B2 đặc biệt lượng vitamin C cao, cam, dưa hấu Ngoài có tác dụng lợi tiểu, chữa sỏi tiết niệu, dùng làm rượu bổ [6] Cây Dâu tây trồng đất nhiều nước khắp giới, đồng thời Dâu tây sản xuất nhà kính công nghệ nhân giống vô tính kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào phương pháp nhân giống vô tính với ưu điểm trội là: Cho hệ số nhân giống cao, sản xuất quanh năm không phụ thuộc vào mùa vụ, cần diện tích sản xuất vật liệu nhân giống ban đầu, giống sản xuất hoàn toàn bệnh, đồng mặt di truyền, việc vận chuyển giống xa thuận tiện, tổn thất ít, chất lượng đảm bảo đáp ứng yêu cầu sản xuất giống với số lượng mang tính công nghiệp Ở nước ta, Dâu tây mẻ so với trồng khác loại trồng có giá trị kinh tế ý phát triển Đây loại trồng tiềm trồng chủ yếu Đà Lạt (Lâm Đồng) số tỉnh phía Bắc Cây nhân giống nhiều cách gieo hạt, tách chồi, tách thân bò, giâm hom Các phương pháp cho hệ số nhân giống thấp, không đồng hiệu thấp Trong năm gần đây, nhằm tạo giống trồng chất lượng tốt, không phụ thuộc vào mùa vụ, nhiều địa phương nước ứng dụng phương pháp giâm hom vào công tác nhân giống Tuy nhiên phương pháp cho kết không cao nhiều đối tuợng trồng không đáp ứng số lượng lớn giống [11] Trên sở đó, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu nhân giống Dâu tây (Fragaria vesca L.) phương pháp nuôi cấy mô ” 1.2 Mục đích nghiên cứu - Nghiên cứu khả nhân giống Dâu tây (Fragaria vesca L.) phương pháp nuôi cấy mô tế bào 1.3 Yêu cầu đề tài - Nghiên cứu ảnh hưởng riêng rẽ kết hợp số chất điều tiết sinh trưởng (Kinetin, BAP, IAA, IBA) đến khả nhân nhanh chồi - Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ IBA NAA đến khả rễ - Nghiên cứu ảnh hưởng số loại giá thể đến sinh trưởng phát triển vườn ươm 1.4 Ý nghĩa đề tài - Ý nghĩa học tập nghiên cứu + Giúp sinh viên củng cố lại kiến thức học nghiên cứu khoa học + Thông qua đề tài, tìm hiểu vai trò số chất điều tiết sinh trưởng trình tái sinh, nhân nhanh tạo rễ cho chồi + Biết phương pháp nghiên cứu vấn đề khoa học, xử lí phân tích số liệu, biết cách trình bày báo cáo khoa học - Ý nghĩa thực tiễn + Cung cấp cho công tác nuôi cấy mô môi trường nuôi cấy tối ưu cho trình nhân chồi, tạo hoàn chỉnh phòng thí nghiệm phát triển vườn ươm + Tạo tiền đề cho việc sản xuất số lượng lớn giống có chất lượng cao, đồng cho sản xuất 32 Chú thích: TN6: Ả nh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ Dâu Tây CT1: Sử dụng 0,0 mg/l NAA CT2: Sử dụng 0,2 mg/l NAA Qua bảng 4.6 Biểu đồ 4.6 cho thấy : - Ở tiêu Số rễ TB chồi với giá trị LSD.05 đạt 0,22 công thức thí nghiệm CT3, CT4, CT5 có sai khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% Với giá trị LSD.05 đạt 0,22 công thức thí nghiệm CT2 có sai khác ý nghĩa mức độ tin cậy 95% Ở môi trường đối chứng chưa bổ sung NAA Dâu Tây rễ số rễ trung bình/cây đạt 6,12 rễ, nhiên rễ mảnh yếu Khi bổ sung NAA vào môi trường rễ số lượng rễ chất lượng rễ giảm so với công thức đối chứng số rễ trung bình chồi giảm từ 5,89 xuống 4,73 Và chồi có gốc bị sùi to thể dị dạng bắt đầu hình thành rễ, rễ ngắn có màu nâu thể chất lượng rễ Vậy thí nghiệm cho thấy việc bổ sung NAA vào môi trường rễ ý nghĩa 4.3 Ảnh hưởng số loại giá thể đến tỷ lệ sống Dâu Tây vườn ươm Bảng 4.7 Ảnh hưởng số loại giá thể đến tỷ lệ sống Dâu Tây vườn ươm (theo dõi sau 30 ngày) Số Công Số thức (Cây) sống (Cây) Giá thể Đất màu 30 30 Tỷ lệ sống (%) Chiều cao Số TB/cây (Lá) TB/cây (cm) 100,00 Đất màu +1 Trấu hun 30 30 100,00 Đất màu+1 Mùn hữu 30 27 90,00* ns 2,93 5,07 3,37* 6,27* 3,11* 5,58* 3,11* 5,08ns Đất màu+1 Sơ dùa 30 30 100,00 Đất màu + Trấu hun + Mùn hữu 30 29 96,67ns 3,30* 4,99ns CV (%) 2,7 1,7 1,10 LSD 5% 4,8 0,1 0,10 Chú thích: Ns: Sai khác ý nghĩa *: Sai khác có ý nghĩa so sánh LSD độ tin cậy 95% ns 33 Biểu đồ 4.7 Ảnh hưởng số loại giá thể đến tỷ lệ sống Dâu Tây vườn ươm Hình 4.7.1 Cây trồng giá thể đất màu Hình 4.7.2 Cây trồng giá thể Đất màu +1 Trấu hun Qua bảng 4.7 Biểu đồ 4.7 cho thấy: - Ở số tỷ lệ sống với giá trị LSD.05 đạt 4,8 công thức thí nghiệm Đất màu + Mùn hữu có sai khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% Với giá trị LSD.05 đạt 4,8 công thức thí nghiệm lại có sai khác ý nghĩa mức độ tin cậy 95% - Ở số chiều cao với giá trị LSD.05 đạt 0,1 công thức thí nghiệm có sai khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% 34 - Ở số số TB với giá trị LSD.05 đạt 0,1 công thức thí nghiệm Đất màu + Mùn hữu, Đất màu có sai khác có ý nghĩa mức độ tin cậy 95% Với giá trị LSD.05 đạt 0,1 công thức thí nghiệm lại có sai khác ý nghĩa mức độ tin cậy 95% Trong điều kiện thí nghiệm giá thể khác cho kết khác Các tiêu như: Số sống, tỷ lệ sống (%), chiều cao TB/cây (cm), biến động số TB/cây tiêu khách quan để đánh giá hiệu việc giống phù hợp giá thể sử dụng Giá thể đất (CT1) tỷ lệ sống sau 30 ngày đạt giá trị (100%), biến động chiều cao biến động số là: 2,93 cm 5,07 ,cây sinh trưởng bình thường, nhỏ xanh Ở công thức giá thể đất màu + trấu hun có số sống đạt 100%, chiều cao trung bình/cây đạt cm, biến động số 6,27 Giá thể đất màu + trấu hun ngày phát triển tốt, sau 30 ngày trồng giá thể cho phát triển khoẻ mạnh, cứng cáp, mở rộng, xanh đậm Ở công thức giá thể Đất màu + Mùn hữu tỷ lệ sống đạt (90%) thấp so với công thức Cây 30 ngày đầu sinh trưởng bình thường ,chiều cao trung bình/cây biến động đạt 3,11 cm, xanh nhạt Ở công thức giá thể Đất màu + Sơ dừa tỷ lệ sống đạt 100% sinh trưởng phát triển bình thường , xanh tốt Ở công thức giá thể Đất màu + Trấu hun + Mùn hữu tỷ lệ sống đạt 96,67 % sinh trưởng chậm ,lá xanh nhạt So sánh với kết thu việc giống công thức giá thể đất màu + trấu hun tốt cho Dâu Tây thí nghiệm 35 PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu đề tài đến số kết luận sau: Môi trường MS + Saccarose 30g/l + agar 6,5g/l + Myo Inositol 100mg/l, pH = 5,6 - 5,8 bổ sung nồng độ BAP 0,5 mg/l cho kết hệ số nhân 9,11 lần sử dụng làm môi trường nhân nhanh chồi Môi trường ½ MS + Saccarose 30g/l + agar 7g/l + Myo Inositol 100mg/l, pH = 5,6 - 5,8 bổ sung nồng độ IBA 0,2mg/l cho số rễ trung bình chồi đạt 8,50 rễ sử dụng làm môi trường rễ Giá thể thích hợp hỗn hợp đất màu trấu hun với tỷ lệ 1:1 Cây giá thể có tỷ lệ sống 100%, sinh trưởng phát triển tốt chiều cao trung bình/chồi đạt 3,37 cm số trung bình/cây đạt 6,27 5.2 Đề nghị - Cần nghiên cứu môi trường khác để nhân giống tốt - Ứng dụng kết nghiên cứu vào sản xuất Dâu Tây giống phương pháp nuôi cấy mô tế bào quy mô công nghiệp - Cần tiếp tục đưa giống nuôi cấy mô sản xuất đồng ruộng để khảo sát sinh trưởng, phát triển, suất kiểm tra chất lượng giống 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhi, Lê Thị Muội (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội Ngô Xuân Bình, Bùi Bảo Hoàn, Nguyễn Thị Thúy Hà (2003), Giáo trình công nghệ sinh học, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội Võ Văn Chi (2003), Từ điển thực vật thông dụng, Tập 1, NXB Khoa học Kỹ thuật Lê Trần Đức (1997), Cây thuốc Việt Nam, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội Trịnh Đình Đạt (2009), Công nghệ sinh học (công nghệ di truyền), tập 4, NXB Giáo Dục Thanh Hương (2004) Hoa dinh dưỡng vị thuốc NXB Thanh hóa Nguyễn Như Hiền (2009), Công nghệ sinh học – Tập – Sinh học phân tử tế bào – sở khoa học công nghệ sinh học, NXB Giáo Dục Dương Tấn Nhựt - Viện Nghiên cứu Khoa học Tây Nguyên, Tạp chí Công nghệ sinh học – Viện Hàn Lâm Khoa học Công Nghệ Việt Nam Hoàng Thị Sản (2009), Phân loại học thực vật NXB Giáo dục 10 Nguyễn Văn Uyển (1984), Nuôi cấy mô thực vật phục vụ công tác giống trồng Nhà xuất Thành phố Hồ Chí Minh 11 Nguyễn Văn Uyển tác giả (1995), Nuôi cấy mô thực vật phục vụ công tác giống trồng NXB Nông Nghiệp, Hà Nội 12 Đỗ Năng Vịnh (2005), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng NXB Nông Nghiệp 13 Vũ Văn Vụ (1999), Sinh lý thực vật ứng dụng Nhà xuất giáo dục 14 Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2006), Công nghệ sinh học NXB Giáo dục 15 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tân (2009), Sinh lý học thực vật, NXB Giáo Dục TIẾNG ANH 16 Mudnic, Modun, Brizic, Vukovic, Generalic, Katalinic, Bilusic, Ljubenkov , Boban M, (2009 ), Cardiovascular effects in vitro of aqueous extract of wild strawberry (Fragaria vesca, L.) leaves, Phytomedicine 16(5):462-16 17 Darrow G.M: 1966 The Strawberry, New York: Holt, Rinehart and Winston 18 Yoana Kiselova, Diana Ivanova*, Trifon Chervenkov, Daniela Gerova, Bistra Galunska and Tatyana Yankova ( 2006) Volume 20, Issue 11, pages 961–965 37 19 Belitsky, I and V.N.A Bersenev (1999), Jewel Orchids In: Orchids Magazine Am Orcchid Soc pp 33-37 20 Ernst, R., (1974) The use of activated charcoal in asymbiotic seedling culture of Paphiopedilum Am Orhid Soc Bull 43:35-38 21 Murat Top and Bill Tatura, (2002), Growing Chrysanthemum, Agriculture Note Farm Diversiffication Service (Bendigo) 22 Nayak, N.R., S.N Patnaik, and S.P Rath, (1997) a Direct shoot regeneration from foliar explants of an epiphytic orchid, Acampe praemorsa (Roxb.) Blatter and McCann Plant Cell Reports 16:583-586 23 Passey A.J, Barrett K.J, Jame D.J (2002), Adventitious shoot regeneration from seven commercial strawberry cultivars (Fragaria x ananassa Duch.) using a range of explant types, Plant Cell Rep 21: 397-401 24 Juan Jesus Media, Isabel Clavero-Ramirez, Maria Elena Gonzalez-Benito (2007), Field performance characterization of strawberry (Fragaria x ananassa Duch.) plants derived from cryopreserved apices, Scientia Horticulturae 113: 28-32 25 Brain F Chabot, Jean Fincher Chabot, ( 1977), Effects of light and temperature on leaf anatomy and photosynthesis in Fragaria vesca, Volume 26, Issue 4, pp 363-377 26 E.F George et al(eds.) (2008), Plant propagation by Tissue Culture 3rd Edition Published by Spring, P.O Box 17, 3300 AA Dordrecht, The Netherlands, page 65113 PHỤ LỤC Kết xử lí số liệu Ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE TN14 21/ 5/14 22:16 :PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 943294 235823 31.70 0.000 R 493334E-03 246667E-03 0.03 0.968 * RESIDUAL 595067E-01 743834E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.00329 716638E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TSLTB FILE TN14 21/ 5/14 22:16 :PAGE VARIATE V004 TSLTB SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 332265E-01 830663E-02 1.41 0.314 R 457332E-02 228666E-02 0.39 0.694 * RESIDUAL 470933E-01 588666E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 848931E-01 606380E-02 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN14 21/ 5/14 22:16 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS HSNC 3 3 TSLTB 1.95333 2.11000 2.34333 2.69000 2.36667 5.08333 5.11667 5.09667 5.21667 5.14000 SE(N= 3) 0.497940E-01 0.442970E-01 5%LSD 8DF 0.162373 0.144448 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 HSNC 2.28600 2.29200 2.30000 TSLTB 5.12600 5.11200 5.15400 SE(N= 5) 0.385703E-01 0.343123E-01 5%LSD 8DF 0.125774 0.111889 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN14 21/ 5/14 22:16 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 15) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | | | 15 2.2927 0.26770 0.86246E-01 3.8 0.0001 15 5.1307 0.77870E-010.76725E-01 1.5 0.3137 OBS HSNC TSLTB |R | | | | | 0.9681 0.6937 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE TC2 21/ 5/14 23:29 :PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 85.5057 21.3764 742.89 0.000 R 714134E-01 357067E-01 1.24 0.340 * RESIDUAL 230196 287745E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 85.8073 6.12909 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TSLTBC FILE TC2 21/ 5/14 23:29 :PAGE VARIATE V004 TSLTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 2.28571 571427 47.26 0.000 R 123333E-01 616665E-02 0.51 0.623 * RESIDUAL 967333E-01 120917E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.39477 171055 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TC2 21/ 5/14 23:29 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS HSNC 3 3 TSLTBC 2.16667 9.11000 7.92000 7.45667 6.33333 5.01333 4.09667 4.12667 3.92667 4.06000 SE(N= 3) 0.979363E-01 0.634867E-01 5%LSD 8DF 0.319360 0.207024 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 HSNC 6.64000 6.50000 6.65200 TSLTBC 4.27800 4.24800 4.20800 SE(N= 5) 0.758611E-01 0.491765E-01 5%LSD 8DF 0.247375 0.160360 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TC2 21/ 5/14 23:29 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T |R | OBS HSNC TSLTBC (N= 15) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | | | 15 6.5973 2.4757 0.16963 2.6 0.0000 15 4.2447 0.41359 0.10996 2.6 0.0000 | | | | 0.3402 0.6226 Ảnh hưởng nồng độ BAP IBA đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE AHKETHOP 1/ 6/14 22: :PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 35.5873 8.89683 687.17 0.000 R 211600E-01 105800E-01 0.82 0.478 * RESIDUAL 103576 129470E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 35.7120 2.55086 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TSLTB FILE AHKETHOP 1/ 6/14 22: :PAGE VARIATE V004 TSLTB SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 732373 183093 156.05 0.000 R 208000E-02 104000E-02 0.89 0.452 * RESIDUAL 938669E-02 117334E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 743840 531314E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE AHKETHOP 1/ 6/14 22: :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 HSNC 8.96667 5.98000 5.38000 5.03333 4.68000 TSLTB 4.04333 3.48667 3.50667 3.47333 3.50000 SE(N= 3) 0.656938E-01 0.197766E-01 5%LSD 8DF 0.214221 0.644893E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 HSNC 5.96200 6.00800 6.05400 TSLTB 3.61800 3.59800 3.59000 SE(N= 5) 0.508862E-01 0.153189E-01 5%LSD 8DF 0.165935 0.499532E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE AHKETHOP 1/ 6/14 22: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 15) NO STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | |R | | | | | HSNC TSLTB OBS 15 6.0080 15 3.6020 TOTAL SS 1.5971 0.23050 RESID SS 0.11378 0.34254E-01 | 1.9 0.0000 1.0 0.0000 | 0.4783 0.4516 | Ảnh hưởng nồng độ BAP IAA đến khả nhân nhanh chồi Dâu Tây BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE AHKETHP2 1/ 6/14 22:11 :PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 53.2602 13.3151 696.35 0.000 R 368933E-01 184466E-01 0.96 0.423 * RESIDUAL 152970 191212E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 53.4501 3.81786 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLTBC FILE AHKETHP2 1/ 6/14 22:11 :PAGE VARIATE V004 SLTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 332400E-01 831000E-02 0.74 0.590 R 386534E-01 193267E-01 1.73 0.237 * RESIDUAL 894800E-01 111850E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 161373 115267E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE AHKETHP2 1/ 6/14 22:11 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 HSNC 9.03333 5.01333 4.46667 4.09000 4.04333 SLTBC 3.99000 3.94333 4.08333 4.04000 4.02000 SE(N= 3) 0.798358E-01 0.610601E-01 5%LSD 8DF 0.260336 0.199111 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 HSNC 5.34600 5.26200 5.38000 SLTBC 4.01000 4.08000 3.95600 SE(N= 5) 0.618405E-01 0.472969E-01 5%LSD 8DF 0.201656 0.154231 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE AHKETHP2 1/ 6/14 22:11 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T |R | (N= 15) NO OBS 15 5.3293 15 4.0153 HSNC SLTBC SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.9539 0.13828 2.6 0.0000 0.10736 0.10576 2.6 0.5903 | | | 0.4235 0.2374 | | | Ảnh hưởng nồng ảnh hưởng NAA đến khả rễ Dâu Tây BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTBC FILE DARE1 22/ 5/14 8:12 :PAGE VARIATE V003 SRTBC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 4.65843 1.16461 78.68 0.000 R 133200E-01 666000E-02 0.45 0.657 * RESIDUAL 118413 148017E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 4.79016 342154 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDRTBC FILE DARE1 22/ 5/14 8:12 :PAGE VARIATE V004 CDRTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 3.45980 864950 440.17 0.000 R 110800E-01 554000E-02 2.82 0.118 * RESIDUAL 157203E-01 196504E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.48660 249043 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE DARE1 22/ 5/14 8:12 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS SRTBC 3 3 CDRTBC 6.12333 4.84667 5.89000 4.73000 5.19000 1.12333 2.04000 2.11333 2.01333 2.61000 SE(N= 3) 0.702416E-01 0.255932E-01 5%LSD 8DF 0.229051 0.834569E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 SRTBC 5.31400 5.38000 5.37400 CDRTBC 1.94200 1.99400 2.00400 SE(N= 5) 0.544089E-01 0.198244E-01 5%LSD 8DF 0.177422 0.646454E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE DARE1 22/ 5/14 8:12 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T (N= 15) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | | | 15 5.3560 0.58494 0.12166 2.3 0.0000 15 1.9800 0.49904 0.44329E-01 2.2 0.0000 OBS SRTBC CDRTBC |R | | | | | 0.6566 0.1175 Ảnh hưởng nồng ảnh hưởng IBA đến khả rễ Dâu Tây BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTBC FILE DARE 22/ 5/14 8: :PAGE VARIATE V003 SRTBC LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 29.3679 7.34198 461.85 0.000 R 316002E-02 158001E-02 0.10 0.906 * RESIDUAL 127174 158968E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 29.4982 2.10702 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDRTBC FILE DARE 22/ 5/14 8: :PAGE VARIATE V004 CDRTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 1.18236 295590 213.42 0.000 R 785332E-02 392666E-02 2.84 0.116 * RESIDUAL 110802E-01 138502E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 1.20129 858067E-01 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE DARE 22/ 5/14 8: :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS SRTBC 3 3 CDRTBC 6.08667 8.50000 8.31000 6.20000 4.86333 1.04333 1.87333 1.62333 1.37333 1.62333 SE(N= 3) 0.727938E-01 0.214866E-01 5%LSD 8DF 0.237373 0.700657E-01 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 SRTBC 6.77200 6.80600 6.79800 CDRTBC 1.47600 1.51600 1.53000 SE(N= 5) 0.563858E-01 0.166435E-01 5%LSD 8DF 0.183868 0.542727E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE DARE 22/ 5/14 8: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |T |R | OBS SRTBC CDRTBC (N= 15) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | | | 15 6.7920 1.4516 0.12608 1.9 0.0000 15 1.5073 0.29293 0.37216E-01 2.5 0.0000 | | | | 0.9060 0.1165 Nghiên cứu ảnh hưởng số loại giá thể đến tỷ lệ sống Dâu Tây vườn ươm BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLCS FILE 123 4/ 6/14 9:24 :PAGE VARIATE V003 TLCS LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 226.667 56.6667 8.50 0.006 R 13.3333 6.66667 1.00 0.412 * RESIDUAL 53.3333 6.66667 * TOTAL (CORRECTED) 14 293.333 20.9524 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCTBC FILE 123 4/ 6/14 9:24 :PAGE VARIATE V004 CCTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 495627 123907 40.94 0.000 R 545334E-02 272667E-02 0.90 0.446 * RESIDUAL 242133E-01 302666E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 525293 375209E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLTBC FILE 123 4/ 6/14 9:24 :PAGE VARIATE V005 SLTBC SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= T 3.53287 883217 251.86 0.000 R 401332E-02 200666E-02 0.57 0.590 * RESIDUAL 280537E-01 350672E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.56493 254638 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 123 4/ 6/14 9:24 :PAGE MEANS FOR EFFECT T T NOS 3 3 TLCS 100.000 100.000 90.0000 100.000 96.6667 CCTBC 2.93333 3.37333 3.42000 3.10667 3.30333 SLTBC 5.06667 6.27333 5.57667 5.07667 4.99000 SE(N= 3) 1.49071 0.317630E-01 0.341893E-01 5%LSD 8DF 4.86106 0.103576 0.111488 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 TLCS 98.0000 98.0000 CCTBC 3.20200 3.23200 SLTBC 5.40400 5.37400 96.0000 3.24800 5.41200 SE(N= 5) 1.15470 0.246035E-01 0.264829E-01 5%LSD 8DF 3.76536 0.802296E-01 0.863580E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 123 4/ 6/14 9:24 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLCS CCTBC SLTBC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 97.333 15 3.2273 15 5.3967 STANDARD DEVIATION C OF V |T SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 4.5774 2.5820 2.7 0.0060 0.19370 0.55015E-01 1.7 0.0001 0.50462 0.59218E-01 1.1 0.0000 |R | | | 0.4115 0.4462 0.5896 | | | | PHỤ LỤC MÔI TRƯỜNG MS (1lít) Thành phần dinh dưỡng môi trường MS (Murashinge &Skoog , 1962) Nhóm I II III IV Hàm lượng Thành phần (mg/l) NH4NO3 1650 KNO3 1900 MgSO4 7H2O 370 MnSO4 H2O 22.3 ZnSO4 7H2O 10.6 CuSO4 H2O 0.025 CaCl2 2H2O 440 KI 0.83 CoCl2 6H2O 0.025 KH2PO4 170 H3BO3 6.2 Na2M0O4 2H2O 0,25 FeSO4 7H2O 27.85 Na2EDTA 2H2O 37.25 Nicotinic acid 0,5 Glycine Thiamine HCl 0,1 Pyridoxine HCl 0,5 V mg/l Vitamins [...]... án việc tạo giống dâu bằng mô tế bào đã thành công [8] 15 PHẦN 3 VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Vật liệu và phạm vi nghiên cứu 3.1.1 Vật liệu nghiên cứu Mẫu cây Dâu Tây đang ở giai đoạn nhân nhanh trong điều kiện vô trùng được nuôi cấy tại Bộ môn Công nghệ Tế Bào, Viện Khoa học Sự sống, Đại học Nông Lâm Thái Nguyên 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu nhân giống in vitro (nhân nhanh... thuật nhân giống, cũng như chọn lọc và tạo giống mới Một trong những nhân tố tạo nên thành công cho ngành sản xuất dây tây ở một số nước trên thế giới là đã sử dụng công nghệ nhân giống in vitro để sản xuất cây giống Ngoài chồi đỉnh, nhiều nhà nghiên cứu sử dụng các bộ phận khác của cây để nuôi cấy như đoạn thân, mẩu lá, cánh hoa Tạo cây Dâu tây bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bào và tái sinh cây dâu. .. [11] Tạo cây Dâu Tây sạch bệnh và virut nhờ nuôi cấy mô phân sinh đỉnh [23] Nghiên cứu ảnh hưởng của ánh sáng và nhiệt độ đến quang hợp của cây Dây Tây [25] Chất lượng chồi cây giống in vitro là yếu tố có ảnh hưởng quan trọng đến hiệu quả sản xuất cây giống tiêu chuẩn cũng như khả năng sinh trưởng Để hoàn thiện quy trình nuôi cấy mô cây Dâu Tây, việc nghiên cứu giai đoạn cuối cùng là đưa cây in vitro... 2.5.2 Tình hình nghiên cứu trong nước Cây Dâu Tây là cây có nhiều nguồn lợi kinh tế, chính vì nguồn lợi kinh tế đó mà việc đầu tư cho những nghiên cứu tại các Cơ quan nghiên cứu nhiều tiêu biểu trong đó có Phân viện Sinh học Tây nguyên, Trung tâm Nghiên cứu Khoai tây Rau và Hoa, Trung tâm nghiên cứu và ứng dụng nông nghiệp Lâm Đồng… Dự án “Hoàn thiện quy trình nhân giống và cung cấp cây giống sạch bệnh,... Kinetin, IAA, IBA) đến khả năng nhân nhanh chồi Dâu Tây Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất kích thích sinh trưởng (IBA, NAA) đến khả năng ra rễ của chồi Dâu Tây Nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng một số loại giá thể đến sinh trưởng phát triển của cây ngoài điều kiện tự nhiên 3.4 Phương pháp nghiên cứu 3.4.1 Phương pháp nghiên cứu nội dung 1 Nghiên cứu ảnh hưởng đơn lẻ hoặc kết hợp của một số... Chiều dài trung bình rễ /cây (cm) = ∑ Số rễ thu được ∑ Số cây thí nghiệm ∑ Chiều dài rễ thu được ∑ Số cây thí nghiệm + Màu sắc rễ: Vàng, trắng, nâu 3.4.3 Phương pháp nghiên cứu nội dung 3 Nghiên cứu ảnh hưởng một số loại giá thể đến sinh trưởng và phát triển của cây Dâu Tây ngoài vườn ươm * Các bước tiến hành - Vật liệu là cây Dâu Tây giai đoạn sau nuôi cấy mô - Trước khi đưa cây con ra trồng ngoài tự... BAP với IBA sẽ ức chế sự nhân chồi ở cây Dâu Tây Qua kết quả ở trên cho thấy việc bổ sung kết hợp BAP và IBA vào trong môi trường nuôi cấy nhân nhanh cây Dâu Tây là không phù hợp ở thí nghiệm này 27 4.1.4 Ảnh hưởng của sự kết hợp nồng độ BAP và IAA đến khả năng nhân nhanh chồi cây Dâu Tây Bảng 4.4 Ảnh hưởng của sự kết hợp nồng độ BAP và IAA đến khả năng nhân nhanh chồi cây Dâu Tây (theo dõi sau 45 ngày)... Trong môi trường nuôi cấy đặc, người ta thường sử dụng agarose để làm rắn hoá môi trường Nồng độ agarose sử dụng thường là 0,6-1%, đây là loại agarose được đặc chế từ rong biển để tránh hiện tượng mô chìm trong môi trường hoặc bị chết vì thiếu O2 nếu nuôi trong môi trường lỏng và tĩnh [1] 2.3.2 Yếu tố vô trùng 2.3.2.1 Ý nghĩa của việc nuôi cấy vô trùng tế bào nuôi cấy mô tế bào thực vật - Môi trường nuôi. .. nuôi cấy là: Đỉnh sinh trưởng, chồi nách, hoa tự, hoa, đoạn thân, mảnh, lá, rễ - Giai đoạn 2: Tái sinh mẫu nuôi cấy Mục đích của giai đoạn này là tái sinh một cách định hướng sự phát triển của mô nuôi cấy Quá trình này được điều khiển chủ yếu bằng các chất kích thích sinh trưởng (A/C) đưa vào môi trường nuôi cấy Tuy nhiên bên cạnh đó cũng phải quan tâm đến tuổi của mẫu đem vào nuôi cấy Thường các mô. .. bổ sung nồng độ Kinetin 1,5 mg/l là môi trường phù hợp cho giai đoạn nhân nhanh chồi cây Dâu Tây ở trong thí nghiệm này 23 4.1.2 Ảnh hưởng của nồng độ BAP đến khả năng nhân nhanh chồi cây Dâu Tây Bảng 4.2 Ảnh hưởng của nồng độ BAP đến khả năng nhân nhanh chồi cây Dâu Tây ( theo dõi sau 45 ngày) Nồng độ Số lá TB Số mẫu ban đầu Hệ số nhân Chất lượng CT BAP chồi (chồi) chồi (lần) chồi (mg/l) (lá) 1(ĐC) ... cứu đề tài: Nghiên cứu nhân giống Dâu tây (Fragaria vesca L.) phương pháp nuôi cấy mô ” 1.2 Mục đích nghiên cứu - Nghiên cứu khả nhân giống Dâu tây (Fragaria vesca L.) phương pháp nuôi cấy mô. .. Cần nghiên cứu môi trường khác để nhân giống tốt - Ứng dụng kết nghiên cứu vào sản xuất Dâu Tây giống phương pháp nuôi cấy mô tế bào quy mô công nghiệp - Cần tiếp tục đưa giống nuôi cấy mô sản... thời gian nghiên cứu 15 3.3 Nội dung nghiên cứu 15 3.4 Phương pháp nghiên cứu 15 3.4.1 Phương pháp nghiên cứu nội dung 15 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung