BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG *** ĐINH QUANG THUẤN NGHIÊN CỨU DẠNG GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CÁC QUẦN THỂ TU HÀI LUTRARIA RHYNCHAENA JONAS, 1844 Ở QUẢNG NINH, HẢI PHÒNG VÀ KHÁNH HÒA LUẬN VĂN THẠC SĨ Khánh Hòa - 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG *** ĐINH QUANG THUẤN NGHIÊN CỨU DẠNG GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN CÁC QUẦN THỂ TU HÀI LUTRARIA RHYNCHAENA JONAS, 1844 Ở QUẢNG NINH, HẢI PHÒNG VÀ KHÁNH HÒA LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngành: Nuôi trồng thủy sản Mã số: 6062301 Quyết định giao đề tài: 254/QĐ-ĐHNT ngày 25/03/2014 Quyết định thành lập HĐ: 1044/QĐ-ĐHNT ngày 10/11/2015 Ngày bảo vệ: 23/11/2015 Người hướng dẫn khoa học: TS THÁI THANH BÌNH Chủ tịch hội đồng: TS LỤC MINH DIỆP Khoa sau đại học: Khánh Hòa - 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết đề tài: “Nghiên cứu đánh giá đa dạng di truyền quần thể tu hài Lutraria rhynchaena Jonas, 1844 Quảng Ninh, Hải Phòng Khánh Hòa” công trình nghiên cứu thực cá nhân, thực hướng dẫn khoa học TS Thái Thanh Bình Các số liệu, kết luận nghiên cứu trình bày luận văn trung thực chưa công bố hình thức Tôi xin chịu trách nhiệm nghiên cứu Tác giả Đinh Quang Thuấn iii LỜI CẢM ƠN Lời xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới TS Thái Thanh Bình, người định hướng tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện để hoàn thành luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới ThS Nguyễn Thị Hiến trực tiếp giúp đỡ, hỗ trợ hoàn thành thí nghiệm Tôi xin gửi lời cảm ơn tới tập thể cán bộ, công nhân viên phòng Khoa học Hợp tác Quốc tế, phòng thí nghiệm Công nghệ sinh học Thủy sản – Trường Cao đẳng Thủy sản tạo điều kiện thuận lợi cho thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Khoa sau Đại học- Trường Đại học Nha Trang tạo điều kiện để có khóa học này, Trường Cao đẳng Thủy sản tạo điều kiện thời gian ủng hộ trình thực luận văn Cuối xin gửi lời cảm ơn tới anh chị đồng nghiệp, bạn bè, gia đình cổ vũ giúp đỡ suốt trình học tập thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn! Tác giả Đinh Quang Thuấn iv MỤC LỤC Lời cam đoan iii Lời cảm ơn iv Mục lục v Danh mục từ viết tắt vii Danh mục bảng viiviii Danh mục hình iix Trích yếu luận văn x Mở đầu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số đặc điểm sinh học tu hài 1.1.1 Nguồn gốc phân bố tu hài 1.1.2 Vị trí phân loại tu hài 1.1.3 Đặc điểm sinh trưởng 1.1.4 Đặc điểm sinh sản phát triển 1.2 Giá trị kinh tế tình hình nuôi tu hài Việt Nam 1.2.1 Giá trị kinh tế thị trường 1.2.2 Tình hình nuôi tu hài Việt Nam 1.3 Một số nghiên cứu tu hài Việt Nam 1.4 Đa dạng sinh học, giá trị đa dạng sinh học, số phương pháp đánh giá 10 1.4.1 Đa dạng di truyền 10 1.4.2 Một số phương pháp đánh giá đa dạng sinh học 10 1.5 Ứng dụng thị phân tử nghiên cứu số loài thủy sản nước nước 13 1.5.1 Những nghiên cứu đánh giá đa dạng di truyền số loài nhuyễn thể 13 1.5.2 Những nghiên cứu đánh giá đa dạng di truyền số loài thủy sản tu hài nước 16 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Thời gian, địa điểm thực đề tài 19 2.2 Vật liệu nghiên cứu 19 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 19 v 2.2.2 Thiết bị 19 2.2.3 Hóa chất 19 2.3 Phương pháp nghiên cứu 20 2.3.1 Thu mẫu bảo quản 20 2.3.2 Tách chiết ADN tổng số 22 2.3.3 Thành phần phản ứng PCR 24 2.3.4 Chương trình chạy PCR 24 2.3.5 Kiểm tra sản phẩm PCR 25 2.3.6 Thực cắt ADN enzyme giới hạn 26 2.3.7 Phương pháp định trình tự gen máy giải tự động 27 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 28 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Kết đánh giá đa dạng di truyền phương pháp RFLP 29 3.1.1 Tách chiết ADN tổng số 29 3.2.1 Kết đa dạng di truyền phương pháp RFLP 29 3.2 Kết đánh giá đa dạng di truyền quần thể tu hài nuôi tự nhiên phương pháp giải trình tự 29 3.2.1 Kết tách chiết ADN tổng số 29 3.2.2 Kết khuyếch đại đoạn gen 16S mtADN mẫu nghiên cứu 30 3.2.3 Kết giải trình tự 30 3.2.4 Hệ số biến dị di truyền 32 3.2.5 Mối quan hệ quần thể cá thể quần thể 34 3.2.6 Xây dựng quan hệ di truyền 47 3.2.7 So sánh đa dạng di truyền quần thể tự nhiên với quần thể nuôi 52 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 4.1 Kết luận 54 4.2 Kiến nghị 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 55 PHỤ LỤC 60 vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT RFLP: Restriction Fragment Length Polymorphisms bp: Base pair (cặp bazơ) Pi: Nucleotide diversity (Đa dạng Nucleotide) Hd: Haplotype diversity ĐVTM: Động vật thân mềm ADN: Acid deoxyribonucleic ddNTP: Dideoxynucleoside triphosphate dNTP: Deoxynucleoside triphosphate AFLP: Amplified Fragment Length Polymorphism RAPD: RADNom Amplified Polymorphic DNA CTAB: Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide EDTA: Ethylene diamine Tetra-acetic acid TAE: Tris-acetate- EDTA PCR: Polymerase Chain Reaction mtADN: Mitochondrial ADN- Hệ gen ty thể UPGMA: Unweighted Pain Group Method using Arithmetic mean vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Diện tích sản lượng nuôi tu hài thương phẩm tỉnh Khánh Hòa Bảng 2.1 Địa điểm, code mẫu, số lượng mẫu tu hài giải trình tự ADN 22 Bảng 2.2 Thành phần phản ứng PCR 24 Bảng 2.3.Chu trình nhiệt phản ứng PCR nhân đoạn 16S 25 Bảng 3.1 Kết so sánh trình tự ADN tu hài Việt Nam với trình tự ADN tu hài công bố Genbank 31 Bảng 3.2 Sự đa dạng di truyền quần thể quần thể tu hài Quảng Ninh, Hải Phòng Khánh Hòa 33 Bảng 3.3 Vị trí sai khác Nucleotide mẫu tu hài Quảng Ninh, Hải Phòng Khánh Hòa 34 Bảng 3.4 Khoảng cách di truyền mẫu ba quần thể Quảng Ninh, Hải Phòng, Khánh Hòa (%) 37 Bảng 3.5 Khoảng cách di truyền mẫu ba quần thể Quảng Ninh, Hải Phòng, Khánh Hòa (%) 38 Bảng 3.6 Khoảng cách di truyền mẫu ba quần thể Quảng Ninh, Hải Phòng, Khánh Hòa (%) 39 Bảng 3.7 Khoảng cách di truyền mẫu ba quần thể Quảng Ninh, Hải Phòng, Khánh Hòa (%) 40 Bảng 3.8 Khoảng cách di truyền mẫu ba quần thể Quảng Ninh, Hải Phòng, Khánh Hòa (%) 41 Bảng 3.9 Khoảng cách di truyền mẫu ba quần thể Quảng Ninh, Hải Phòng, Khánh Hòa (%) 42 Bảng 3.10 Khoảng cách di truyền mẫu quần thể tu hài Quảng Ninh (%) 44 Bảng 3.11 Khoảng cách di truyền mẫu quần thể tu hài Hải Phòng (%) 45 Bảng 3.12 Khoảng cách di truyền mẫu quần thể tu hài Khánh Hòa (%) 46 Bảng 3.13 Khoảng cách di truyền quần thể tu hài (%) 47 viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình thái cấu tạo tu hài (Lutraria rhynchaena) Hình 1.2 Tu hài giống sản xuất Yên Hưng- Quảng Ninh năm 2012 Hình 1.3 Nuôi tu hài Khánh Hòa Hình 1.4 Hệ thống giàn nuôi tu hài Vân Đồn- Quảng Ninh Hình 2.1 Sơ đồ bước phân tích mẫu phương pháp RFLP 20 Hình 2.2 Sơ đồ giải trình tự ADN tu hài 20 Hình 2.3 Địa điểm thu mẫu tu hài 21 Hình 2.4 Sơ đồ trình tự bước tách chiết ADN kít Qiagen 23 Hình 2.5 Chạy điện di sản phẩm PCR 26 Hình 3.1 Sản phẩm điện di 16S cắt enzyme hạn chế 29 Hình 3.2 Kết kiểm tra ADN tổng số số mẫu tu hài Vân Đồn 30 Hình 3.3 Kết điện di sản phẩm PCR khuyếch đại đoạn gen tu hài 16S mtADN 30 Hình 3.4 Hình thái tu hài Vân Đồn (2 mẫu Trái) tu hài Cô Tô (2 mẫu phải) 32 Hình 3.5 Cây Neighbor-Joining xây dựng từ trình tự ADN tu hài vùng gen 16S mtADN với giá trị Bootstrap tính 1.000 lần lặp, code mẫu trình bày Bảng 3.1 48 Hình 3.6 Cây Minimum Evolution xây dựng từ trình tự ADN tu hài vùng gen 16S với giá trị Bootstrap tính 1.000 lần lặp, code mẫu trình bày Bảng 3.1 49 Hình 3.7 Cây Maximum Parsimony xây dựng từ trình tự ADN tu hài vùng gen 16S với giá trị Bootstrap tính 1.000 lần lặp, code mẫu trình bày Bảng 3.1 50 Hình 3.8 Cây Unweighted Pain Group Method using Arithmetic mean (UPGMA) xây dựng từ trình tự ADN tu hài vùng gen 16S với giá trị Bootstrap tính 1.000 lần lặp, code mẫu trình bày Bảng 3.1 51 ix TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Chủ đề nghiên cứu: Tu hài loài nhuyễn thể có giá trị kinh tế cao nuôi phổ biến tỉnh Quảng Ninh, Hải Phòng Khánh Hòa Để nghề nuôi tu hài phát triển bền vững việc thực đề tài “Nghiên cứu đánh giá đa dạng di truyền quần thể tu hài Lutraria rhynchaena Jonas, 1844 Quảng Ninh, Hải Phòng Khánh Hòa” cần thiết Kết đề tài cung cấp sở liệu khoa học di truyền cho định hướng chọn giống bảo tồn quần thể tu hài Việt Nam Mục tiêu để tài: Đánh giá đa dạng di truyền tu hài phục vụ cho công tác bảo tồn, phát triển nguồn gen lựa chọn vật liệu ban đầu phục vụ cho chọn giống Phương pháp nghiên cứu sử dụng: Cách thu mẫu: Tu hài phân bố tự nhiên tu hài nuôi thu mẫu tỉnh Quảng Ninh, Hải Phòng, Khánh Hòa Tổng số mẫu thu phân tích 58 mẫu Cách bảo quản mẫu: Mẫu tu hài phân vòi tu hài (10-15g/mẫu) Mẫu bảo quản ống eppendoft (2 ml) có chứa cồn nồng độ 90% Tách chiết ADN giải trình tự ADN: ADN tổng số tách chiết từ vòi tu hài kít Qiagen Phương pháp tách chiết theo hướng dẫn nhà sản xuất Đoạn gen 16S mtADN khuếch đại cặp mồi có trình tự sau: 16Sar: (5’-3’) GGG CTA GTA TGAATG GTT TGA 16Sbr: (5’-3’) ATG CTG TTA TCC CTATGG TAACT Mỗi phản ứng PCR thực với thể tích 25μl (12,5 μl Toptaq Master Mix 2x; 5μl Coral load; 4,5μl nước tinh kiết; 1μl 16sar; 1μl 16sbr; 1μl ADN khuôn) Chu kỳ nhiệt phản ứng PCR nhân vùng gen 16S: 94oC phút, 30 chu kỳ (94oC 30 giây, nhiệt độ gắn mồi 56oC 30 giây 72oC phút), kéo dài đoạn 72oC phút Sản phẩm PCR bảo quản kiểm tra phương pháp chạy điện di gel agarose 2%/TAE1X Tiếp theo, trình tự ADN giải máy ABI/3130XL, mẫu giải trình tự mồi xuôi ngược Kết nghiên cứu: Kết tách chiết ADN khuếch đại vùng gen 16S mtADN Kết tách chiết 58 mẫu ADN tổng số mẫu tu hài thu tỉnh Quảng Ninh, Hải Phòng, Khánh Hòa gồm tu hài tự nhiên nuôi Mẫu ADN tổng số x 12 Nguyễn Thị Thảo, Quyền Đình Thi, Đào Thị Tuyết, Lê Thị Thu Giang, Phạm Anh Tuấn Đánh giá đa hình quần đàn tôm sú (Peneaus monodon) nuôi Việt Nam phương pháp microsatellite Tạp chí Công nghệ sinh học 2; 2004 (3): 315 – 324 13 Hà Đức Thắng, Hà Đình Thùy ctv Một số kết nghiên cứu công nghệ sản xuất giống tu hài (Lutraria Philippinarum Deslays) Cát Bà - Hải Phòng; 2003 14 Quyền Đình Thi, Phạm Thị Tuyết, Phạm Anh Tuấn Sử dụng thị phân tử RAPD mtDNA - RFLP Phân tích tính đa hình quần đàn cá tra (Pangasius hypophthalmus) nuôi Việt Nam, Tuyển tập hội thảo toàn quốc NC&ƯD KHCN nuôi trồng thủy sản; 2004, trang 919 - 938 15 Quyền Đình Thi, Đào Thị Tuyết, Lê Thị Thu Giang, Nguyễn Thị Thảo, Phạm Anh Tuấn Sử dụng microsatellite, mtRFLP RAPD để phân tích tính đa hình tôm sú (Peneaus monodon), Tạp chí Công nghệ sinh học 1; 2003 (3): 287 – 289 16 Nguyễn Thị Anh Thư, Đặn Thúy Bình, Châu Thị Mỹ Linh Nghiên cứu di truyền quần thể trai tai tượng (Tridacna spp.) Tridacninae vùng biển Nam Trung Bộ Nam Bộ Việt Nam, Tạp chí sinh học; 2014, 36(1se): 189-194 17 Nguyễn Thu Thúy, Nguyễn Thị Diệu Thúy, Nguyễn Văn Cường So sánh đa hình di truyền AFLP hai nhóm cá tra (Pangasius hypophthalmus) có trọng lượng phân biệt, Tạp chí di truyền học ứng dụng, số 4; 2004 18 Vũ Văn Toàn, Đặng Khánh Hùng “Kỹ thuật ương giống nuôi tu hài thương phẩm, NXB nông nghiệp; 2004 19 Ngô Anh Tuấn Giáo trình Kỹ thuật nuôi động vật thân mềm, Nhà xuất Nông Nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh; 2012: 206-217 20 Đào Thị Tuyết, Quyền Đình Thi, Nguyễn Thị Bảy, Phạm Anh Tuấn Đánh giá đa hình quần đàn cá tra nuôi (Pangasius hypophthalmus) Việt Nam phương pháp RAPD, Hội nghị công nghệ sinh học toàn quốc; 2003, trang 616 620 21 Nguyễn Thị Trang Đánh giá đa dạng di truyền số quần thể tu hài Quảng Ninh, Hải Phòng Phú Yên giải trình tự ADN ty thể, Luận Văn Thạc sĩ; 2012 22 Lê Xân, Hoàng Nhật Sơn, Hoàng Hải Bước đầu nghiên cứu tìm hiểu đặc điểm sinh học, sinh sản sản xuất giống nhân tạo tu hài (Lutraria philipinarum 56 Deshayes) vùng biển Cát Bà, Tuyến tập công trình nghiên cứu nghề cá biển, T2; 2001, Trang: 428-442 Tài liệu tiếng Anh: 23 Arnaud JF, Madec L, Guiller A, ADN Bellido, A Spartial analysis of allozyme ADN microsatellite DNA polymorphisms in the land snail Helix aspersa Mol Ecol 10; 2001: 1563-1576 24 Astanei I, Gosling E, Wilson J, ADN Powell E Genetic variability ADN phylogeography pf the invasive zebra mussel, Dreissena polymorpha (Palles) Mol Ecol 14; 2005 (6): 1655-1666 25 Bagley MJ, Anderson SL, & May B Choice of methodology for assessing genetic impacts of environmental stressors: polymorphism and reproducibility of RAPD and AFLP fingerprints Ecotoxicology, 10; 2001 (4), 239-244 26 Baumung BR, Simianer H and Hoffmann I Genetic diversity studies in farm animals- a survey, J Anim Breed, Genet, 121: 361-373, Vernesi, et al.; 2004 27 Brown WM, Georeg MJ and Wilson AC Rapid evolution of mitochondrial DNA, Proseedings of the National Academy of Sciences of USA; 1979, 76: 1967-71 28 Chiesa et al Genetic diversity of introduced Manila clam Ruditapes philippinarum populations inferred by 16S rDNA, Biochemical Systematics and Ecology; 2014: 52-59 29 Gan HM, Tan MH, Binh TT, Austin The complete mitogenome of the marine bivalvia Lutraria rhynchaena Jonas 1844 (Heterodonta: Bivalvia: Mactridae), Mitochondrial DNA march 11; 2014 30 Hall TA Bioedit: a use – frendly biological Sequence alignment editor and analysis program for windows 95/98/NT Nucl Auds Symp Ser;1999, 41: 95-98 31 Hubert S, ADN Hedgecock D Linkage Maps of Microsatellite DNA markers for the Pacific Oyster Crassostrea gigas Geneticss; 2004, 168 351-362 32 Li L, Xiao S, Yu Z Developmemt of twenty six microsatellite loci from Crassostrea hongkongensis ADN cross species amplification into closly related species Jounral of genetic; 2011, 90: 58-61 57 33 Li G, Hubert S, Bucklin K, Ribes V, Hedgecock D Characterization of 79 microsatellite DNA markers in the Pacific oyster Crassostrea gigas Molecular Ecology Notes 3; 2003: 228-232 34 Li L, Guo X AFLP based genetic linkage maps of Pacific oyster Crassostrea gigas, Marine Biotechnology 6; 2004: 26-36 35 Librado P, Rozas J DnaSP v5: a software for comprehensive analysis of DNA polymorphism data Bioinformatics; 2009, 25(11): 1451-1452 36 Luly Ong Chin Chin, Itan soon Gvan, Khatijah Yuoff ADN Jyap Chee Kong Isolation of DNA Microsatellite Markers in the Green-lipped Mussel, Perna viridis, PertanikaJ Trop Agric Sci; 2005, 28(1): 79 - 85 37 Mohamed I Genetic Diversity of Rhizobium leguminosarum as Revealed by 16S rRNA Gene Sequece, American-Eurasian J Agric & Environ Sci.; 2013, 13 (6):797-801 38 Qi Li, Choulji Park Toshimasa Kobayashi ADN Akihiro Kijima Inheritance of Microsatellite DNA Markers in the Pacific Abalone Haliotis discushannai Marine Biotechnology Volume 5, Number / August; 2003 39 Rozas J DNA Sequence Polymorphism Analysis using DnaSP Pp 337-350.In Posada, D (ed.) Bioinformatics for DNA Sequence Analysis; Methods in Molecular Biology Series Vol 537 Humana Press, NJ, USA; 2009 40 Sauvage C, Boudry P, Lapegue S Identification ADN charaterization of 18 novel polymorphic microsatellite markers derived from expressed sequence tags in the Pacific oyster Crassostrea gigas Molecular Ecology Resources 9; 2009: 853-855 41 Stepien CA, Morton B, Dabrowska KA, Guarnera RA, Radia T, Radia B Genetic diversity and evolutionary relationships of the troglodytic ‘living fossil’Congeria kusceri, Molecular Ecology; 2001, Volume 10, Issue 8, page 1873-1879 42 Tamura K, Stecher G, Peterson D, Filipski A, and Kumar S MEGA6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 6.0 Molecular Biology and Evolution 30; 2013: 2725-2729 43 Wang Y, Lu H, Zheng J, Long K, Shi HY, Gu FZ, Wang MA Eight polymorphic microsatellite marker for the spotted babylon, Babilonia areolata Genetic ADN Molecualr Research 10; 2011: 3230-3235 58 44 Xin Zhan, Hai-Yan Hu, Cai-Huan Ke, Song-Nian Hu, De-Xiang Wang ADN Fei Chen Isolation ADN characterization of eleven microsatellite loci in small abalone, Haliotis diversicolor Reeve Conservation Genetics 10; 2008: 1185-1187 45 Xu Z, Primavera, JH, de la Pena LD, Pettit P, Belak J, & Alcivar-Warren A Genetic diversity of wild and cultured Black Tiger Shrimp (Penaeus monodon) in the Philippines using microsatellites Aquaculture; 2001, 199(1), 13-40 46 Yu H, Li Q Exploiting EST databases for the development ADN characterization of EST-SSRs in the Pacific oyster (Crassostrea gigas) Journal of Heredity 2; 2008: 208-214 47 www.svbkol.org/forum/showthread.php?p=180216#post180216 59 PHỤ LỤC Phụ lục Trình tự ADN mẫu tu hài Quảng Ninh, Hải Phòng, Khánh Hòa VDN1 VDN2 VDN3 VDN4 VDN5 VDN6 VDN7 VDN8 VDN9 VDT5 VDT11 VDT29 VDT2 VDT40 VDT7 VDT10 VDT8 VDT13 NTT41 NTT46 NTT9 NTT10 NTT26 NTT25 NTT39 NTT3 NTT29 NTT5 NTN14 CBN1 CBN2 CBN3 CBN4 CBN5 CBN6 CBN7 CBN8 CBN9 CBN10 NTN16 NTN23 NTN24 NTN28 NTN29 NTN33 NTN40 CBT2 CBT42 CBT25 CBT22 CBT23 CBT33 CBT26 CBT40 CTT2 CTT14 | | | | | | | | | | 10 20 30 40 50 CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TAGCTAGCCT TAACGGTTGC AACTAGAGTT GTGTTAATGT CCGGTGGGAT TGGCTAACCT TAACGGCTGC GACGAGAGTT GTGCTAATGT CCGGTGGGAT TGGCTAACCT TAACGGCTGC GACGAGAGTT GTGCTAATGT CTT21 CTT8 CCGGTGGGAT TGGCTAACCT TAACGGCTGC GACGAGAGTT GTGCTAATGT CCGGTGGGAT TGGCTAACCT TAACGGCTGC GACGAGAGTT GTGCTAATGT VDN1 VDN2 VDN3 VDN4 VDN5 VDN6 VDN7 VDN8 VDN9 VDT5 VDT11 VDT29 VDT2 VDT40 VDT7 VDT10 VDT8 VDT13 NTT41 NTT46 NTT9 NTT10 NTT26 NTT25 NTT39 NTT3 NTT29 NTT5 NTN14 CBN1 CBN2 CBN3 CBN4 CBN5 CBN6 CBN7 CBN8 CBN9 CBN10 NTN16 NTN23 NTN24 NTN28 NTN29 NTN33 NTN40 CBT2 CBT42 CBT25 CBT22 CBT23 CBT33 CBT26 CBT40 CTT2 CTT14 CTT21 CTT8 | | | | | | | | | | 60 70 80 90 100 AGCGTAATAA TTAGCACTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCACTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCACTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCACTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCACTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCACTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCACTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCACTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCACTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCACTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATAA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATCA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATCA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATCA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA AGCGTAATCA TTAGCCTTTT AAAAGGAGGG AGGAATGAAT GGTTTGACGA VDN1 VDN2 VDN3 VDN4 VDN5 VDN6 VDN7 VDN8 VDN9 VDT5 VDT11 VDT29 VDT2 VDT40 VDT7 VDT10 VDT8 VDT13 NTT41 NTT46 NTT9 NTT10 NTT26 NTT25 NTT39 NTT3 NTT29 NTT5 NTN14 CBN1 CBN2 CBN3 CBN4 CBN5 CBN6 CBN7 CBN8 CBN9 CBN10 NTN16 NTN23 NTN24 NTN28 NTN29 NTN33 NTN40 CBT2 CBT42 CBT25 CBT22 CBT23 CBT33 CBT26 CBT40 CTT2 CTT14 CTT21 CTT8 | | | | | | | | | | 110 120 130 140 150 GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GAGACCTGCT GTCTCGGAAG TAAATTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GGGACCTGCT GTCTCAGGAG TAATTTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GGGACCTGCT GTCTCAGGAG TAATTTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GGGACCTGCT GTCTCAGGAG TAATTTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA GGGACCTGCT GTCTCAGGAG TAATTTCTAA AGTTTTCTTT TAAGTGAAAA VDN1 VDN2 VDN3 VDN4 VDN5 VDN6 VDN7 VDN8 VDN9 VDT5 VDT11 VDT29 VDT2 VDT40 VDT7 VDT10 VDT8 VDT13 NTT41 NTT46 NTT9 NTT10 NTT26 NTT25 NTT39 NTT3 NTT29 NTT5 NTN14 CBN1 CBN2 CBN3 CBN4 CBN5 CBN6 CBN7 CBN8 CBN9 CBN10 NTN16 NTN23 NTN24 NTN28 NTN29 NTN33 NTN40 CBT2 CBT42 CBT25 CBT22 CBT23 CBT33 CBT26 CBT40 CTT2 CTT14 CTT21 CTT8 | | | | | | | | | | 160 170 180 190 200 GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAGATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAAATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAAATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAAATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC GACTTAAATT TTTAAATAAG AAGAGAAGAC CCCGGTGAGC TTGATAAACC VDN1 VDN2 VDN3 VDN4 VDN5 VDN6 VDN7 VDN8 VDN9 VDT5 VDT11 VDT29 VDT2 VDT40 VDT7 VDT10 VDT8 VDT13 NTT41 NTT46 NTT9 NTT10 NTT26 NTT25 NTT39 NTT3 NTT29 NTT5 NTN14 CBN1 CBN2 CBN3 CBN4 CBN5 CBN6 CBN7 CBN8 CBN9 CBN10 NTN16 NTN23 NTN24 NTN28 NTN29 NTN33 NTN40 CBT2 CBT42 CBT25 CBT22 CBT23 CBT33 CBT26 CBT40 CTT2 CTT14 CTT21 CTT8 | | | | | | | | | | 210 220 230 240 250 TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTAATTAAGA AGTTAAGCTT TGAAGTTTTG TTGGGGCAAC AGGAAGGGAA TTGACTAAAG AGTTAAGATT TGAAGTTTTG TTGGGGAAAC AGGAAGGGAA TTGACTAAAG AGTTAAGATT TGAAGTTTTG TTGGGGAAAC AGGAAGGGAA TTGACTAAAG AGTTAAGATT TGAAGTTTTG TTGGGGAAAC AGGAAGGGAA TTGACTAAAG AGTTAAGATT TGAAGTTTTG TTGGGGAAAC AGGAAGGGAA VDN1 VDN2 VDN3 VDN4 VDN5 VDN6 VDN7 VDN8 VDN9 VDT5 VDT11 VDT29 VDT2 VDT40 VDT7 VDT10 VDT8 VDT13 NTT41 NTT46 NTT9 NTT10 NTT26 NTT25 NTT39 NTT3 NTT29 NTT5 NTN14 CBN1 CBN2 CBN3 CBN4 CBN5 CBN6 CBN7 CBN8 CBN9 CBN10 NTN16 NTN23 NTN24 NTN28 NTN29 NTN33 NTN40 CBT2 CBT42 CBT25 CBT22 CBT23 CBT33 CBT26 CBT40 CTT2 CTT14 CTT21 CTT8 | | | | | | | | | | 260 270 280 290 300 AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAAGAACCCT TCCGGTGGTG GTGAAGATCC CCTATGAGGG AAGTTAGCAA AAGGAACCCT TCCGTTAATA ATGGTGATCC CCTCTGAGGG AAGTTAGCAA AAGGAACCCT TCCGTTAATA ATGGTGATCC CCTCTGAGGG AAGTTAGCAA AAGGAACCCT TCCGTTAATA ATGGTGATCC CCTCTGAGGG AAGTTAGCAA AAGGAACCCT TCCGTTAATA ATGGTGATCC CCTCTGAGGG AAGTTAGCAA VDN1 VDN2 VDN3 VDN4 VDN5 VDN6 VDN7 VDN8 VDN9 VDT5 VDT11 VDT29 VDT2 VDT40 VDT7 VDT10 VDT8 VDT13 NTT41 NTT46 NTT9 NTT10 NTT26 NTT25 NTT39 NTT3 NTT29 NTT5 NTN14 CBN1 CBN2 CBN3 CBN4 CBN5 CBN6 CBN7 CBN8 CBN9 CBN10 NTN16 NTN23 NTN24 NTN28 NTN29 NTN33 NTN40 CBT2 CBT42 CBT25 CBT22 CBT23 CBT33 CBT26 CBT40 CTT2 CTT14 CTT21 CTT8 | | | | | | | | | | 310 320 330 340 350 AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCTT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCCT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCCT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCCT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA AAGCTACCAC GGGGATAACA GCTTAATCCT TTCTGAGAGA ACAAATTGAA VDN1 VDN2 VDN3 VDN4 VDN5 VDN6 VDN7 VDN8 VDN9 VDT5 VDT11 VDT29 VDT2 VDT40 VDT7 VDT10 VDT8 VDT13 NTT41 NTT46 NTT9 NTT10 NTT26 NTT25 NTT39 NTT3 NTT29 NTT5 NTN14 CBN1 CBN2 CBN3 CBN4 CBN5 CBN6 CBN7 CBN8 CBN9 CBN10 NTN16 NTN23 NTN24 NTN28 NTN29 NTN33 NTN40 CBT2 CBT42 CBT25 CBT22 CBT23 CBT33 CBT26 CBT40 CTT2 CTT14 CTT21 CTT8 | | | | | | | | | | 360 370 380 390 400 GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAGAAGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTGCCCTT TCGGTGCAGA GAAAGGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTACCCTT TTGGTGCAGA GAAAGGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTACCCTT TTGGTGCAGA GAAAGGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTACCCTT TTGGTGCAGA GAAAGGGATT GCGACATCGA TGTTGGATTA GGGTACCCTT TTGGTGCAGA VDN1 VDN2 VDN3 VDN4 VDN5 VDN6 VDN7 VDN8 VDN9 VDT5 VDT11 VDT29 VDT2 VDT40 VDT7 VDT10 VDT8 VDT13 NTT41 NTT46 NTT9 NTT10 NTT26 NTT25 NTT39 NTT3 NTT29 NTT5 NTN14 CBN1 CBN2 CBN3 CBN4 CBN5 CBN6 CBN7 CBN8 CBN9 CBN10 NTN16 NTN23 NTN24 NTN28 NTN29 NTN33 NTN40 CBT2 CBT42 CBT25 CBT22 CBT23 CBT33 CBT26 CBT40 CTT2 CTT14 CTT21 CTT8 | | | | | | | | 410 420 430 440 AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTGAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AATCCCTACG AGTTAAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AACCCCTACC AGTTAAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AACCCCTACG AGTTAAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AACCCCTACG AGTTAAAAAG GGGAGACTGT TCGTCTTTTA AACCCCTACG Phụ lục Tách chiết ADN tổng số Hình 2a Chuẩn bị dụng cụ tách chiết ADN Hình 2b Cắt mẫu tu hài Hình 2c Trộn hóa chất mẫu tu hài Hình 2d Ủ mẫu tu hài (mẫu tan hết) Hình 2e Ly tâm mẫu tu hài Hình 2f Cài đặt máy li tâm Hình 2g Trộn mẫu điện di Hình 2h Kiểm tra điện di ADN tu hài Phụ lục Thực phản ứng PCR 16S cắt enzyme hạn chế Hình 3a Phản ứng PCR 16S Hình 3b Kiểm tra sản phẩm PCR Hình 3c Kiểm tra điện di sản phẩm PCR Hình 3d Ủ sản phẩm PCR với enzyme hạn chế [...]... cỏch di truyn ca qun th tu hi Qung Ninh so vi qun th tu hi Hi Phũng v Khỏnh Hũa l 2% Qua phõn tớch cõy ph h cho thy tu hi Qung Ninh, Hi Phũng, Khỏnh Hũa cú th gii thớch quỏ trỡnh di ging tu hi t Bc vo Khỏnh Hũa Kt lun v ngh: Kt qu nghiờn cu ban u v gii trỡnh t ADN tu hi vựng gen 16S mtADN cho thy Vit Nam cú 2 loi tu hi v cú tờn khoa hc l Lutraria rhynchaena v Lutraria arcuata a dng di truyn tu hi... trỡnh t ADN ca cỏc mu tu hi Vit Nam vi cỏc trỡnh t ADN ca tu hi Genbank cho thy trỡnh t ADN ca cỏc mu tu hi Vit Nam cú s tng ng cao vi trỡnh t ADN ca 3 loi tu hi (Lutraria arcuata, Lutraria australis v Lutraria rhynchaena) ó cụng b trờn Genbank H s bin d di truyn Qun th tu hi Qung Ninh cú h s bin d di truyn cao nht (hd=0,6710,061; =0,02670,00828), khụng cú s sai khỏc ca cỏc cỏ th tu hi Hi Phũng v Khỏnh... Khong cỏch di truyn cho thy h s sai khỏc gia tu hi ca 3 tnh dao ng trong khong t 0-4,3%; Khong cỏch di truyn gia mt s mu tu hi Cụ Tụ so vi cỏc mu tu hi khỏc ln lt CTT14, CTT21, CTT8 dao ng t 2,5-2,7% v ln nht l mu tu hi CTT2 dao ng t 4,1-4,3% Khong cỏch di truyn thp nht cỏc mu tu hi ca qun th Khỏnh Hũa cú d=0 ng thi qua bng cho thy tu hi Cụ Tụ cú khong cỏc di truyn cao hn nhiu so vi tu hi cỏc mu... tu hi thuc qun th Vit Nam v phỏt trin ch th ỏnh giỏ a dng di truyn trong nhõn t bo tu hi nh IST, H3, Microsatellite, SNP T khúa: a dng di truyn, Lutraria sp, tu hi,16S mtADN xii M U Tớnh cp thit ca ti Tu hi (Lutraria sp) l loi nhuyn th thuc lp 2 mnh v (Bivalvia) Tht tu hi cú hm lng dinh dng cao: protein chim 11,63%, gluicid chim 0,42%, khoỏng chim 1,22% v cú ti 8 loi axit amin khụng thay th [19] Tu. .. vi khong cỏch di truyn dao ng t 2,5-4,3% xi Trong 3 qun th nghiờn cu, qun th tu hi Hi Phũng cú mi quan h di truyn gn gi nht vi qun th tu hi Khỏnh Hũa, khong cỏch di truyn ca cỏc mu tu hi Hi Phũng vi cỏc mu tu hi Khỏnh Hũa l 0, cú ngha l s tng ng v trỡnh t nucleotide gia cỏc mu tu hi Hi Phũng so vi Khỏnh Hũa l 100% Gia 3 qun th, s sai khỏc v trỡnh t nucleotide gia tu hi Qung Ninh so vi tu hi Hi Phũng... nhiờn ca tu hi vựng bin Cỏt B [4] Nm 1978, trờn c s cỏc mu vt thu c vựng bin Cỏt B, Mai Vn Minh (Sinh hc, i hc Tng hp H Ni) ó tin hnh nghiờn cu thnh phn sinh hoỏ ca tht tu hi [7] Mc dự tu hi ó c nuụi Vit Nam t lõu nhng nhng hiu bit v a dng di truyn cỏc qun th ca loi ny cũn rt hn ch 1 ngh nuụi tu hi phỏt trin bn vng thỡ vic thc hin ti Nghiờn cu ỏnh giỏ a dng di truyn cỏc qun th tu hi Lutraria rhynchaena. .. Lutraria rhynchaena Jonas, 1844 Qung Ninh, Hi Phũng v Khỏnh Hũa l rt cn thit Kt qu ca ti s cung cp nhng c s d liu khoa hc v di truyn cho nh hng chn ging v bo tn cỏc qun th tu hi Vit Nam Mc tiờu nghiờn cu ỏnh giỏ c a dng di truyn ca tu hi phc v cho cụng tỏc bo tn, phỏt trin ngun gen v la chn vt liu ban u phc v cho chn ging Ni dung nghiờn cu - ỏnh giỏ mc a dng di truyn trong cỏc qun th tu hi; - Xỏc nh... quanh nm núng m Khong 10 nm tr li õy tu hi c di ging vo tnh Khỏnh Hũa v Phỳ Yờn do iu kin mụi trng phự hp vi sn xut ging sm phc v ch yu cho cỏc tnh phớa Bc 1.1.2 V trớ phõn loi tu hi V trớ phõn loi: Ngnh ng vt thõn mm: Mollusca Lp 2 mnh v: Bivalvia B bin mang: Eulamellibranchia H vp: Mactridae Ging: Lutraria Loi: Lutraria rhynchaena Jonas, 1844 3 Tờn ting Vit: Tu hi Tờn ting Anh: Geo-Duck, Snout Otter... Ninh nhng vựng cú tu hi phõn b vi din tớch l 64.260,6 ha thỡ tr lng c tớnh khong 511,9 tn v kh nng khai thỏc trờn di 100 tn (20%) [11] Tu hi c di ging vo min trung v th nuụi mt s tiu vựng Khỏnh Hũa nh: Cam Ngha, Cam Phỳc Bc (Tp.Cam Ranh); Vn Thnh (huyn Vn Ninh) [10] Din tớch v sn lng nuụi tu hi thng phm ti Khỏnh Hũa t 2010 2014 th hin Bng 1.1 [10] Bng 1.1 Din tớch v sn lng nuụi tu hi thng phm ti... qun th tu hi í ngha khoa hc v ý ngha thc tin - L nghiờn cu mi v a dng di truyn qun th, thit lp c cỏc b ch th phõn t u tiờn cho tu hi Vit Nam - L c s d liu khoa hc quan trng, gúp phn trong nh hng la chn ngun vt liu ban u phc v cho bo tn v chn ging tu hi nhm phỏt trin ngh nuụi tu hi theo hng bn vng i tng v phm vi nghiờn cu - i tng nghiờn cu: cỏc qun n tu hi nuụi v qun th tu hi t nhiờn Qung Ninh, Hi ... cỏc tnh Qung Ninh, Hi Phũng v Khỏnh Hũa ngh nuụi tu hi phỏt trin bn vng thỡ vic thc hin ti Nghiờn cu ỏnh giỏ a dng di truyn cỏc qun th tu hi Lutraria rhynchaena Jonas, 1844 Qung Ninh, Hi Phũng... cỏc mu tu hi vũi trng cú mc tng ng vi loi Lutraria rhynchaena t 99-100% v loi tu hi Lutraria arcuata 92% Ngc li cỏc mu tu hi vũi li tng ng vi loi Lutraria arcuata 100% v loi Lutraria rhynchaena. .. mu tu hi Vit Nam vi cỏc trỡnh t ADN ca tu hi Genbank cho thy trỡnh t ADN ca cỏc mu tu hi Vit Nam cú s tng ng cao vi trỡnh t ADN ca loi tu hi (Lutraria arcuata, Lutraria australis v Lutraria rhynchaena)