BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG ĐINH THỊ THU THÙY NGHIÊN CỨU CÁC TÁC NHÂN GÂY BỆNH XUẤT HUYẾT TRÊN CÁ HỒI VÂN (Oncorhynchus mykiss Walbaum, 1792) GIAI ĐOẠN CÁ GIỐNG NUÔI TẠI LÂM ĐỒNG VÀ ĐỀ XUẤT BIỆN PHÁP PHÒNG TRỊ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHÁNH HÒA - 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG ĐINH THỊ THU THÙY NGHIÊN CỨU CÁC TÁC NHÂN GÂY BỆNH XUẤT HUYẾT TRÊN CÁ HỒI VÂN (Oncorhynchus mykiss Walbaum, 1792) GIAI ĐOẠN CÁ GIỐNG NUÔI TẠI LÂM ĐỒNG VÀ ĐỀ XUẤT BIỆN PHÁP PHỊNG TRỊ LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngành: Ni trồng thủy sản Mã số: 60620301 Quyết định giao đề tài: 1025/QĐ-ĐHNT ngày 07/10/2014 Quyết định thành lập HĐ: 1044/QĐ-ĐHNT ngày 10/11/2015 Ngày bảo vệ: 24/11/2015 Người hướng dẫn khoa học: 1: TS VÕ THẾ DŨNG 2: TS PHẠM QUỐC HÙNG Chủ tịch Hội đồng: TS NGUYỄN TẤN SĨ Khoa sau đại học: KHÁNH HỊA - 2015 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan kết nghiên cứu luận văn thân tơi thực bảo tận tình, chu đáo thầy hướng dẫn – TS Võ Thế Dũng TS Phạm Quốc Hùng Các số liệu, kết trình bày luận văn trung thực chưa công bố cơng trình bảo vệ học vị Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn nêu luận văn rõ nguồn gốc Đinh Thị Thu Thùy iii LỜI CẢM ƠN Trước hết tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến Ban giám hiệu trường Đại học Nha Trang, Viện Nuôi Trồng Thuỷ Sản, Khoa đào tạo sau Đại học tạo điều kiện thuận lợi cho trình học tập thực luận văn tốt nghiệp Xin gởi tới lãnh đạo Viện Nghiên cứu Nuôi Trồng Thuỷ Sản phòng ban liên quan lời cảm tạ sâu sắc tạo điều kiện thuận lợi thời gian, trang thiết bị, sở thí nghiệm thời gian thực đề tài để tơi hồn thành cách tốt Tơi xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến dẫn tận tình, chu đáo thầy hướng dẫn TS Võ Thế Dũng TS Phạm Quốc Hùng giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận văn phương pháp nghiên cứu báo cáo khoa học Xin chân thành cảm ơn giúp đỡ, đóng góp ý kiến q báu anh, chị phịng Cơng nghệ Sinh học Viện nghiên cứu NTTS 3, đặc biệt cảm ơn Ths Võ Thị Dung nhiệt tình hướng giúp đỡ thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới thầy cô giáo truyền đạt kiến thức chuyên môn xã hội quý báu Cuối cùng, cho phép bày tỏ tình cảm, lịng biết ơn đến gia đình, bạn bè ln động viên khích lệ tinh thần cho tơi suốt q trình học tập hoàn thành đề tài tốt nghiệp Xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu Đinh Thị Thu Thùy iv MỤC MỤC LỜI CAM ĐOAN iii LỜI CẢM ƠN .iv MỤC MỤC v DANH MỤC KÝ HIỆU viii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ix DANH MỤC CÁC BẢNG x DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ ĐỒ THỊ xi TRÍCH YẾU LUẬN VĂN xii MỞ ĐẦU CHƯƠNG - TỔNG QUAN 1.1.Đặc điểm sinh học sinh sản cá hồi vân .2 1.1.1.Hệ thống phân loại 1.1.2.Đặc điểm hình thái 1.1.3.Đặc điểm phân bố sinh thái 1.1.4.Đặc điểm dinh dưỡng 1.1.5.Đặc điểm sinh trưởng 1.1.6.Đặc điểm sinh sản vòng đời 1.2.Tình hình nghiên cứu bệnh cá hồi vân giới 1.2.1.Bệnh vi khuẩn gây .6 1.2.1.1.Bệnh nhọt (Furunculosis) 1.2.1.2.Bệnh nhiễm trùng máu cá hồi (Piscirickettsiosis) 1.2.1.3.Hội chứng cá hồi hương (rainbow trout fry syndrome - RTFS) 1.2.1.4.Bệnh Vibriosis 10 1.2.1.5.Bệnh vi khuẩn thận (Bacterial Kidney Disease – BKD) .10 v 1.2.2.Bệnh nấm .11 1.2.3.Bệnh ký sinh trùng .13 1.2.3.1.Bệnh đốm trắng (Ichthyophthiriasis) 13 1.2.3.2.Bệnh xoắn cá hồi Myxosporea (Whirling disease -WD) .14 1.2.3.3.Bệnh Gyrodactylus .15 1.2.3.4.Hội chứng mềm thịt cá hồi 16 1.3.Tình hình nghiên cứu bệnh cá hồi vân Việt Nam 17 CHƯƠNG - VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .19 2.1.Đối tượng, thời gian địa điểm nghiên cứu 19 2.2.Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Phương pháp thu, vận chuyển lưu giữ mẫu .20 2.2.2 Phương pháp xử lý mẫu phịng thí nghiệm 20 2.2.3 Phương pháp nghiên cứu tác nhân gây bệnh .21 2.2.3.1 Phương pháp nghiên cứu ký sinh trùng .21 2.2.3.2 Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn .23 2.2.3.3 Phương pháp nghiên cứu bệnh nấm .26 2.2.4.Phương pháp mô bệnh học 28 2.2.5.Phương pháp cảm nhiễm ngược để xác định TNGB 29 2.2.6 Phương pháp thử nghiệm điều trị bệnh xuất huyết 30 2.2.6.1 Phương pháp nghiên cứu độ nhạy kháng sinh vi khuẩn gây bệnh .30 2.2.6.2.Phương pháp điều trị bệnh xuất huyết cho ăn kháng sinh 31 2.2.Phương pháp xử lý số liệu .31 CHƯƠNG - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 33 3.1.Mô tả dấu hiệu bệnh lý cá hồi vân giống bị bệnh xuất huyết .33 3.2 Kết nghiên cứu TNGB cá hồi vân giống bị bệnh xuất huyết 34 vi 3.2.1 Kết nghiên cứu ký sinh trùng cá hồi vân giống 34 3.2.1.1 Thành phần loài ký sinh trùng cá hồi vân giống 34 3.2.1.2 Mức độ nhiễm ký sinh trùng cá hồi vân giống .37 3.2.2 Kết nghiên cứu vi khuẩn cá hồi vân giống bị bệnh xuất huyết .39 3.2.2.1 Thành phần loài vi khuẩn cá hồi vân giống bị bệnh xuất huyết .39 3.2.2.2 Tần suất bắt gặp loài vi khuẩn cá hồi vân giống .41 3.2.3 Kết nghiên cứu nấm cá hồi vân giống bị bệnh xuất huyết 42 3.2.3.1 Thành phần loài nấm cá hồi vân giống bị bệnh xuất huyết 42 3.2.3.2 Tần suất bắt gặp loài nấm cá hồi vân giống .44 3.2.4 Kết mô bệnh học cá hồi vân giống bị bệnh xuất huyết 45 3.3 Kết nghiên cứu cảm nhiễm ngược 46 3.4 Kết nghiên cứu phòng trị bệnh xuất huyết cá hồi vân giống 50 3.4.1 Kết thử kháng sinh đồ 50 3.4.2 Kết nghiên cứu trị bệnh xuất huyết cá hồi vân giống .54 CHƯƠNG - KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 57 4.1 Kết luận 57 4.2 Đề xuất ý kiến 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO .59 PHỤ LỤC vii DANH MỤC KÝ HIỆU g Gram l lít ml mililít mm milimét µm micromét µg microgram viii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BCWD Bacterial cold-water diseases (Bệnh vi khuẩn cá nước lạnh) BKD Bacteral kidney disease (Bệnh thận vi khuẩn) CĐN Cường độ nhiễm CTV Cộng tác viên IHNV Infectious Haematopoietic Necrosis (Bệnh hoại tử quan tạo máu) KST Ký sinh trùng RTFS Rainbow trout fry syndrome (Hội chứng cá hồi hương) TLN Tỷ lệ cảm nhiễm TNGB Tác nhân gây bệnh TSBG Tần số bắt gặp VK Vi khuẩn WD Whirling disease (Bệnh xoắn cá hồi Myxosporea) ix DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Khả chịu độ mặn cá hồi vân theo giai đoạn phát triển Bảng 2.1 Đặc điểm mẫu cá hồi vân giống phân tích 20 Bảng 2.2 Dãy thử phản ứng sinh hóa Test kit API – 20E 26 Bảng 3.1 Các dấu hiệu bệnh lý cá hồi vân giống bị bệnh xuất huyết .33 Bảng 3.2 Thành phần loài ký sinh trùng cá hồi vân giống 34 Bảng 3.3 Tỷ lệ cường độ nhiễm ký sinh trùng cá hồi vân giống .37 Bảng 3.4 Thành phần vi khuẩn phân lập cá hồi vân giống xuất huyết 39 Bảng 3.5 Tần số bắt gặp loài vi khuẩn cá hồi vân giống 41 Bảng 3.6 Thành phần loài nấm phân lập cá hồi vân giống bị xuất huyết 42 Bảng 3.7 Tần số bắt gặp loài nấm cá hồi vân giống .44 Bảng 3.8 Kết cảm nhiễm chủng vi khuẩn lên cá hồi vân giống khoẻ .46 Bảng 3.9 Tỷ lệ chết tích luỹ thí nghiệm cảm nhiễm A.hydrophila .48 Bảng 3.10 Tỷ lệ chết tích luỹ thí nghiệm cảm nhiễm A salmonicida 49 Bảng 3.11 Tính nhạy cảm vi khuẩn số kháng sinh 50 Bảng 3.12 Tỷ lệ sống cá sau 15 ngày sử dụng kháng sinh Ciprofloxacin .54 x 65 Jorgensen TR, Larsen TB, Buchmann K Parasite infection in recirculated rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) farms Aquaculture 2009; 289:91-4 66 Karunasagar I, Rosalind GM, Karunasagar I, Rao KG Aeromonas hydrophila septicaemia of Indian major carps in some commercial fish farms of West Godavari district, Andira Pradesh Curr Science 1989; 18:1044-5 67 Kent ML, Groff JM, Morrison JK, Yasutake WT, Holt RA Spiral swimming behavior due to cranial and vertebral lesions associated with Cytophaga psychrophila infections in salmonid fishes Diseases of Aquatic Organisms 1989; 6:11-6 68 Kirkan S, Goksoy EO, Kaya O Isolation and antimicrobial susceptibility of Aeromonas salmonicida in rainbow trout (Oncorhychus mykiss) in Turkey hatchery farms J Vet Med 2003; 50:339-42 69 Krkošek M, Gottesfeld A, Proctor B, Rolston D, Carr-Harris C, Lewis MA Effects of host migration, diversity, and aquaculture on disease threats to wild fish populations Proceedings of the Royal Society of London, Ser B 2007; 274:3141-9 70 Krkošek M, Martin Declining Wild Salmon Populations in Relation to Parasites from Farm Salmon Science 2007; 318(5857):1772-5 71 Krovacek K, Peterz M, Faris A, Mansson I Enterotoxigenicity and drug sensitivity of Aeromonas hydrophila isolated from well water in Sweden: A case study International Journal of Food Microbiology 1989; 8:149–54 72 Lehmann J, Mock D, Sturenberg FJ, Bernardet JF First isolation of Cytophaga psychrophila from a systemic disease in eel and cyprinids Diseases of Aquatic Organisms 1991; 10:217-20 73 Li S, Woo PTK Anorexia reduces the severity of cryptobiosis in Oncorhynchus mykiss J Parasitol 1991; 77:467-71 74 Lobova TI, Yemelyanova E, Andreeva IS, Puchkova LI, Repin VY Antimicrobial resistance and plasmid profile of bacterial strains isolated from the Urbanized Eltsovka-1 River (Russia) Microb Drug Resist 2015 Aug; 21(4):477-90 75 Lom J, Dykova I Protozoan parasites of fishes Elsevier, Amsterdam: Developments in Aquaculture and Fisheries Science; 1992 p.26 65 76 Lorraine B, Shawn PJ, Mark GP, Frances G, Vet MB Pharmacokinetics of single-dose orally administered Ciprofloxacin in Califonia sea lion (Zalophus califoonianus) Journal of Zoo and Wildlife Medicine 2015; 46(2):266-72 77 Madetoja J, Nyman P, Wiklund T Flavobacterium psychrophilum, invasion into and shedding by rainbow trout Oncorhynchus mykiss Diseases of Aquatic Organisms 2000; 43:27-38 78 Madsen L, Dalsgaard I Reproducible methods for experimental infection with Flavobacterium psychrophilumin rainbow trout Oncorhynchus mykiss Diseases of Aquatic Organisms 1999; 36:169-76 79 Madsen L, Arnbjerg J, Dalsgaard I Radiological examination of the spinal column in farmed rainbow trout Oncorhynchus mykiss (Walbaum): experiments with Flavobacterium psychrophilum and oxytetracycline Aquaculture Research 2001; 32:235-41 80 Madsen L, Moller JD, Dalsgard I Flavobacterium psychrophilum in rainbow trout, Oncorhynchus mykiss (Walbaum), hatcheries: studies on broodstock, eggs, fry and environment J Fish Dis 2005; 28:39-47 81 Malmberg G, Malmberg M Species of Gyrodactylus (Platyhelminthes, Monogenea) on salmonids Sweden Fisheries Research 1993; 17:59-68 82 Mauel MJ, Miller DL Piscirickettsiosis and piscirickettsiosis-like infections in fish: a review Veterinary Microbiology 2002; 87(4):279-89 83 Meyer FP Parasites of Freshwater Fishes, II, Protozoa Ichthyophthirius multifiliis Leaflet No 2: Fish and Wildlife Service Fish Disease; 1974 84 Michel C, Antonio D, Hedrick RP Production of viable cultures of Flavobacterium psychrophilum: approach and control Research in Microbiology 1999; 150:351-8 85 Mitchum DL, Sherman LE Transmission of bacterial kidney disease from wild to stocked hatchervtrout Can J Fish Aauat Sci 1981; 38:547-51 86 Morton A, Routledge R, Peet C, Ladwig A Sea lice (Lepeophtheirus salmonis) infection rates on juvenile pink (Oncorhynchus gorbuscha) and chum (Oncorhynchus keta) salmon in the nearshore marine environment of British Columbia, Canada Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences 2004; 61:147-57 66 87 Museum of History and Industry Bacterial Kidney Disease Bacterial Kidney Disease - Challenges for the 21st Century, Seattle, WA, USA; 2005 p.15-7 88 Nematollahi A, Decostere A, Pasmans F, Haesebrouck F Flavobacterium psychrophilum infections in salmonid fish J Fish Dis 2003; 26:563-74 89 Nikaido H Multidrug resistance bacteria Annual Review of Biochemistry 2009; 78:119-46 90 Nguyen Hoang Nam Kha Molecular characterization of antibiotic resistant bacteria isolated from farmed catfish and humans in Vietnam PhD thesis RMIT University, Melbourne, Victoria, Australia; 2012 91 Noble AC, Summerfelt ST Diseases incountered in raibow trout cultured in recirculating systems Annual Review of Fish Diseases 1996; 6(1):65 -92 92 Nutcharnart T, Castillo CS, Hikima J, Jung TS, Kondo H, Hirono I, Aoki T Multiple Drug-resistance strains of Aeromonas hydrophila isolated from Tilapia farm in Thailand Fish Pathology 2012; 47:56-63 93 Ogut, Abdurrezak A, Mehmet ZA Seasonality of Ichthyophthyrius multifiliis in the trout (Oncorhynchus mykiss) Farms of the Eastern Blacksea region of Turkey Turkis Journal of Fisheries and Aquatic Sciences 2005; 5:23-7 94 Özer S, Bulduklu P, Tezcan S, Dönmez E, Aydin E, Aslan G, Emekdas G Genetic diversity and antimicrobial susceptibility of motile aeromonads isolated from rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum) farms Journal of Applied Ichthyology 2009; 25:195-200 95 Pacha RE Characteristics of Cytophaga psychrophila (Borg) isolated during outbreaks of bacterial cold-water disease Applied Microbiology 1968; 16:97-101 96 Peet CR Thesis University of Victoria; 2007 97 Picker MD, Griffiths CL Alien and Invasive Animals – A South African Perspective South Africa: Randomhouse/Struik, Cape Town; 2011 p.240 98 Pickering AD, Willoughby LG Saprolegnia Infections of Salmonid Fish Microbial diseases of fish 1982; 271-97 99 Post G Text book of fish health T.F.H Publishing; 1987 p.288 67 100 Pottinger TG, Day JG A Saprolegnia parasitica challenge system for rainbow trout: assessment of Pyceze as an anti-fungal control agent for both fish and ova Diseases of Aquatic Organisms 1999; 36:129-41 101 Poulsen SB, Jensen LF, Nielsen KS, Malte H, Arestrup K, Svendsen JC Behaviour of rainbow trout Oncorhynchus mykiss presented with a choice of normoxia and stepwise progressive hypoxia J Fish Bioal 2011; 79(4):969-79 102 Prescott JF, Baggot JD, Walker RD Antimicrobial therapy in veterinary medicine Iowa State University Press/Ames; 2000 p.795 103 Saavedra MJ, Guedes-Novais S, Alves A, Rema P, Tacão M, Correia A et al Resistance to beta-lactam antibiotics in Aeromonas hydrophila isolated from rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) Int Microbiol 2004; 7(3):207-11 104 Schmidt AS, Bruun MS, Dalsgaard I, Larsen JL Incidence, distribution and spread of tetracycline resistance determinants and integron-associated antibiotic resistance genes among motile Aeromonads from a fish farming environment Applied and Environmental Microbiology 2001; 67(12):5675-82 105 Schmidtke LM, Carson J Characteristics of Flexibacter psychrophilus isolated from Atlantic salmon in Australia Diseases of Aquatic Organisms 1995; 21:157-61 106 Scott M The pathogenicity of Aeromonas salmonicida in sea and brackish waters Journalof General Microbiology 1968; 50:321-7 107 Sevki K, Erol C, Fikri B, Ilhan A Bacteria in Rainbow Trout (Oncorhynchus mykiss) in the Southern Black Sea Region of Turkey - A Survey The Israeli Journal of Aquaculture – Bamidgeh 2009; 61(4):339-44 108 Skelton PH A Complete Guide to the Freshwater Fishes of Southern Africa South Africa: Struik Publishers, Cape Town; 2001 p.395 109 Soleng A, Bakke TA (Salinity tolerance of Gyrodactylus salaris (Platyhelminthes, Monogenea): laboratory studies Can J Fish Aquat Sci 1997; 54:1837-45 110 Stead SM, Laird LM Handbook of salmon farming Birkhäuser ISBN; 2002 68 111 Stevenson JP Trout Farming Manual England: Fishing News Books Limited, Farnham, Surrey; 1987 p.259 112 Strout R, Sawyer E, Countermash BA Pathogenic vibriosis in confinementreared and feral fishes of the Maine - New Hampshire coast J Fish Res Board of Canada 1978; 35:403-88 113 Stueland S Saprolegnia infection in salmonids: Characterization of Saprolegnia species and search for new treatment of Saprolegnia infections Thesis for the degree of Philosophiae Doctor Norwegian School of Veterinary Science; 2009 114 Randy W Diagnosis of Aeromonas hydrophila infections in fish Animal Disease diagnostic Laboratory Newsletter 1991 p.1 115 Rokicka M, Lumme J, Ziettara MS Identification of Gyrodactylus ectoparasites in Polish salmonid farms by PCR-RFLT of the nuclear ITS segment of ribosomal DNA (Monogenea, Gyroductylidae) Acta Parasitological 2007; 52(3):185-95 116 Root L Rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) S.D: Department Game, Fish and Parks Rapid City; 1994 117 Rozas M, Enríquez R Piscirickettsiosis and Piscirickettsia salmonis in fish: a review Journal of Fish Diseases 2014; 37(3):163-88 118 Rowe DK, Chisnall BL Effects of oxygen, temperature and light gradients on the vertical distribution of rainbow trout, Oncorhynchus mykiss, in two North Island, New Zealand, lakes differing in trophic status New Zealand Journal of Marine and Freshwater Research 1995; 29:421-34 119 Tanrikul TT Vibriosis as an Epizootic Disease of Rainbow Trout (Onchorynchus mykiss) in Turkey Pakistan Journal of Biological Sciences 2007; 10(10):1733-7 120 Thayumanavan T, Vivekanandhan G, Savithamani K, Subashkumar R, Lakshmanaperumalsamy P Incidence of haemolysin-positive and drug-resistance Aeromonas hydrophila in freshly caught finfish and prawn collected from major commercial fishes of coastal South India FEMS Immunology and Medical Microbiology 2003; 36:41-5 69 121 Tojo JL, Santamarina MT Oral pharmacological treatments for parasitic diseases of rainbow trout Oncorhychus mykiss II: Gyrodactylus sp Diseases of Aquatic Organisms 1998; 33:187-93 122 Tojo JL, Santamarina MT Attempts at oral pharmacological treatment of Ichthyophthirius multifiliis in rainbow trout, Oncorhychus mykiss (Walbaum) J Fish Dis 2001; 24:249-52 123 Valtonen ET, Keraen SL Ichthyophthiriasis of Atlantic salmon, Salmo salar L at the Montta Hatchery in northern Finland in 1978-1979 J Fish Dis 1981; 4:405-11 124 Valdes N, Espinoza C, Sanhueza L, Gonzalez A, Corsini G, Tello M Draft genome sequence of the Chilean isolate Aeromonas salmonicida strain CBA100 FEMS Microbiol Lett 2015 Mar; 362(5) 125 Ventura MT, Grizzle JM Evaluation of portals of entry of Aeromonas hydrophila in channel catfish Aquaculture 1987; 65:205-14 126 Vincent ER Whirling disease and wild trout: the Montana experience Fisheries 1996; 21(6):32-3 127 Vivekanandan G, Savithamani K, Hatha AM., Lakshmanaperumalsamy P Antibiotic resistance of Aeromonas hydrophila isolated from marketed fish and prawn of South India Int J Food Microbiol 2002; 76(1–2):165-8 128 Wagner EJ, Wilson C, Arndt R, Goddard P, Miller M, Hodgson A et al Evaluation of disease resistance of the Fish Lake-DeSmet and Harrison Lake strains of rainbow trout exposed to Myxobolus cerebralis Journal of Aquatic Animal Health 2006; 18:128-35 129 Wahli T, Schmitt M, Meier W Evaluation of alternatives to malachite green axalate as a therapeutant for Ichthyophthiriosis in rainbow trout Oncorhynchus mykiss J Appl Ichthyol 1993; 9:237-49 130 Walker PG, Nehring RB An investigation to determine the cause(s) of the disappearance of young wild rainbow trout in the upper Colorado River in Middle Park, Colorado Colorado Division of Wildlife Department of Natural Resources, Denver, CO; 1995 70 131 Wedemeyer GA Physiology of fish in intensive culture systems New York: Chapman and Hall; 1996 p.232 132 Wen-Chen K, Hsiu-Mei W, Tsung-Chain C, Jing-Jou Y, Jiunn-Jong W Inducible beta-lactam resistance in Aeromonas hydrophila Therapeutic Challengen for Antimicrobial Therapy 1998; 36:3188-92 133 Winton J, Rohovec J, Fryer J Bacterial and Viral Diseases of Cultured salmonids in the Pasific Northwest In Bacterial and Viral of Fish, Crosa, J.H (Ed.), Washington Sea grant Seattle;1983 p 1-20 134 Wolf KE, Dunbar CE Test of 34 therapeutic agents for control of kidney disease in trout Trans Am Fish Sot 1959; 88:117-24 135 Wood EM, Yasutake WT Histopathology of fish III-peduncle (“cold water”) disease Progressive Fish Culturist 1956; 18:58-61 136 Wood SC, McCashion RN, Lynch WH Multiple low-level antibiotic resistance in Aeromonas salmonicida Antimicrob Agents Chemother 1986; 29(6):992-6 Các trang Website 137 Helping Our Peninsula's Environment [Online] 2003 [cited August 5]; [3 screens] Available from: URL:http:// www.1hope.org/steelhd.htm 138 Cultured Aquatic Species Information ProGramme Oncorhynchus mykiss (Walbaum, 1792) [Online] 2015; [11 screens] Available from: URL:http://www.fao.org/fishery/culturedspecies/Oncorhynchus_mykiss/en 139 Fishbase [Online] 2012 [cited September]; [5 screens] Available from: URL:http://www.fishbase.org 71 PHỤ LỤC Phụ lục Nội dung Số trang Đặc điểm sinh hóa lồi vi khuẩn phân lập Kích thước trọng lượng mẫu cá phân tích Kết xử lý số liệu SPSS 4 Một số hình ảnh Phụ lục ĐẶC ĐIỂM SINH HỐ CÁC LOÀI VI KHUẨN PHÂN LẬP Aeromonas Aeromonas Đặc điểm sinh hóa Flavobacterium sp hydrophila salmonicida ONPG + + ADH + + LDC + ODC CIT D H2 S + D URE TDA IND + D VP + GEL + + D GLU + + D MAN + + INO SOR RHA + SAC + MEL AMY + + ARA NO2 + + N2 D OF +/+ +/+ D Oxidase + + + Di động + + Gram Hình dạng Que ngắn Que ngắn Que mảnh dài 0% + + 3% + 5% 7% 10 % Chú thích: + phản ứng dương tính; - phản ứng âm tính; D có sai khác lần kiểm tra Phụ lục KÍCH THƯỚC VÀ TRỌNG LƯỢNG MẪU CÁ PHÂN TÍCH STT Ngày thu 10 11 12 13 14 15 16 17 11/6/2014 11/6/2014 04/7/2014 04/7/2014 27/8/2014 27/8/2014 14/9/2014 14/9/2014 06/11/2014 06/11/2014 05/12/2014 05/12/2014 27/12/2014 27/12/2014 20/1/2015 20/1/2015 20/1/2015 Kích thước trọng lượng mẫu cá khoẻ Địa điểm Cá khoẻ Kích thước (mm) Trọng lượng (g) Thung Lũng Nắng 98 16 Thung Lũng Nắng 115 20 Klong Klanh 130 19 Klong Klanh 90 13 Giang Ly 83 Giang Ly 102 18,1 Klong Klanh 120 15,5 Klong Klanh 127 20 Klong Klanh 110 20 Klong Klanh 105 23 Thung Lũng Nắng 92 16 Thung Lũng Nắng 87 11 Klong Klanh 90 Klong Klanh 139 21,3 Klong Klanh 130 12 Klong Klanh 153 29,5 Klong Klanh 190 35,8 Kích thước trọng lượng cá mẫu bệnh xuất huyết STT Ngày thu Địa điểm 10 11 12 11/6/2014 11/6/2014 11/6/2014 11/6/2014 04/7/2014 04/7/2014 04/7/2014 04/7/2014 27/8/2014 27/8/2014 27/8/2014 27/8/2014 Thung Lũng Nắng Thung Lũng Nắng Thung Lũng Nắng Thung Lũng Nắng Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Giang Ly Giang Ly Giang Ly Giang Ly Cá bệnh Kích thước (mm) Trọng lượng (g) 88 8,7 120 24,7 120 28 116 14 115 18 109 12 93 10,5 97 13,7 117 18 108 12,5 107 12 124 16 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 27/8/2014 14/9/2014 14/9/2014 14/9/2014 14/9/2014 14/9/2014 06/11/2014 06/11/2014 06/11/2014 06/11/2014 06/11/2014 06/11/2014 05/12/2014 05/12/2014 05/12/2014 05/12/2014 05/12/2014 05/12/2014 05/12/2014 27/12/2014 27/12/2014 27/12/2014 27/12/2014 27/12/2014 20/1/2015 20/1/2015 20/1/2015 20/1/2015 20/1/2015 20/1/2015 Giang Ly Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Thung Lũng Nắng Thung Lũng Nắng Thung Lũng Nắng Thung Lũng Nắng Thung Lũng Nắng Thung Lũng Nắng Thung Lũng Nắng Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh Klong Klanh 87 95 95 100 130 97 95 95 100 120 130 120 95 90 130 125 115 85 125 83 102 97 112 106 114 128 143 185 192 174 12 14 10 11,5 18 10,6 14 10 11,5 15,5 18 23 15 21,7 20 14 18 8,0 18,1 14,9 11,2 10,3 18,4 22,1 22,6 35,1 36 26 Phụ lục KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU TRÊN SPSS So sánh tỷ lệ chết tích luỹ thí nghiệm cảm nhiễm A hydrophila Descriptives TyLeChetTichLuy Ngay7 N Std Deviation Mean 95 % Confidence Interval for Mean Std Error Lower Bound Minimum Upper Bound Maximum doichung 0000 00000 00000 0000 0000 00 00 nongdo 10^2 8.8889 1.92450 1.11111 4.1082 13.6696 6.67 10.00 nongdo 10^4 72.2222 3.84900 2.22222 62.6608 81.7837 70.00 76.67 nongdo 10^6 100.0000 00000 00000 100.0000 100.0000 100.00 100.00 44.02612 12.70925 17.3049 73.2506 00 100.00 Total 12 45.2778 ANOVA TyLeChetTichLuy Ngay7 Sum of Squares Between Groups Mean Square 21284.259 37.037 21321.296 11 Within Groups Total df F Sig 7094.753 1532.467 000 4.630 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable:TyLeChetTichLuy Ngay7 95 % Confidence Interval LSD Mean Difference (IJ) doichung nongdo 10^2 -8.88889* 1.75682 001 -12.9401 -4.8377 nongdo 10^4 -72.22222* 1.75682 000 -76.2735 -68.1710 nongdo 10^6 * 1.75682 000 -104.0512 -95.9488 8.88889* 1.75682 001 4.8377 12.9401 nongdo 10^4 -63.33333* 1.75682 000 -67.3846 -59.2821 nongdo 10^6 * 1.75682 000 -95.1623 -87.0599 72.22222* 1.75682 000 68.1710 76.2735 nongdo 10^2 63.33333 * 1.75682 000 59.2821 67.3846 nongdo 10^6 -27.77778* 1.75682 000 -31.8290 -23.7265 * 1.75682 000 95.9488 104.0512 nongdo 10^2 91.11111* 1.75682 000 87.0599 95.1623 nongdo 10^4 27.77778* 1.75682 000 23.7265 31.8290 nongdo 10^2 nongdo 10^4 nongdo 10^6 doichung doichung doichung * The mean difference is significant at the 0.05 level -91.11111 100.00000 Sig Upper Bound (J) nghiemthuc -100.00000 Std Error Lower Bound (I) nghiemthuc So sánh tỷ lệ chết tích luỹ thí nghiệm cảm nhiễm A samonicida Descriptives TyLeChetTichLuyNgay7 95 % Confidence Interval for Mean N Mean Std Deviation Lower Bound Std Error Upper Bound Minimum Maximum doichung 0000 00000 00000 0000 0000 00 00 nongdo 10^2 11.1111 3.84900 2.22222 1.5497 20.6726 6.67 13.33 nongdo 10^4 71.1111 5.09175 2.93972 58.4625 83.7597 66.67 76.67 nongdo 10^6 100.0000 00000 00000 100.0000 100.0000 100.00 100.00 43.39933 12.52831 17.9809 73.1302 00 100.00 Total 12 45.5556 ANOVA TyLeChetTichLuy Ngay7 Sum of Squares Between Groups Mean Square 20637.037 81.481 20718.519 11 Within Groups Total df F Sig 6879.012 675.394 000 10.185 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: TyLeChetTichLuy Ngay7 95 % Confidence Interval LSD Mean Difference (IJ) doichung nongdo 10^2 -11.11111* 2.60579 003 -17.1201 -5.1022 nongdo 10^4 -71.11111* 2.60579 000 -77.1201 -65.1022 nongdo 10^6 * 2.60579 000 -106.0090 -93.9910 11.11111* 2.60579 003 5.1022 17.1201 nongdo 10^4 -60.00000* 2.60579 000 -66.0090 -53.9910 nongdo 10^6 -88.88889* 2.60579 000 -94.8978 -82.8799 doichung 71.11111 * 2.60579 000 65.1022 77.1201 nongdo 10^2 60.00000* 2.60579 000 53.9910 66.0090 nongdo 10^6 -28.88889 * 2.60579 000 -34.8978 -22.8799 doichung 100.00000* 2.60579 000 93.9910 106.0090 nongdo 10^2 88.88889* 2.60579 000 82.8799 94.8978 nongdo 10^4 28.88889* 2.60579 000 22.8799 34.8978 nongdo 10^2 nongdo 10^4 nongdo 10^6 doichung * The mean difference is significant at the 0.05 level Sig Upper Bound (J) nghiemthuc -100.00000 Std Error Lower Bound (I) nghiemthuc So sánh tỷ lệ sống thí nghiệm điều trị bệnh Descriptives TyLeSongNgay15 N Mean Std Deviation 95 % Confidence Interval for Mean Std Error Lower Bound Minimum Upper Bound Maximum doichung 33.3333 3.33333 1.92450 25.0529 41.6138 30.00 36.67 0,3 g/kgTA 50.0000 3.33333 1.92450 41.7195 58.2805 46.67 53.33 0,5 g/kgTA 66.6667 6.66667 3.84900 50.1057 83.2276 60.00 73.33 0,7 g/kgTA 56.6667 3.33333 1.92450 48.3862 64.9471 53.33 60.00 12 51.6667 13.21921 3.81606 43.2676 60.0658 30.00 73.33 Total ANOVA TyLeSongNgay15 Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 1766.667 588.889 155.556 19.444 1922.222 11 F Sig 30.286 000 Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: TyLeSongNgay15 (I) nghiemthuc (J) nghiemthuc LSD doichung 0,3 g/kgTA 0,5 g/kgTA 0,7 g/kgTA 95 % Confidence Interval Mean Difference (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound 0,3 g/kgTA -16.66667* 3.60041 002 -24.9692 -8.3641 0,5 g/kgTA -33.33333* 3.60041 000 -41.6359 -25.0308 0,7 g/kgTA * 3.60041 000 -31.6359 -15.0308 16.66667* 3.60041 002 8.3641 24.9692 0,5 g/kgTA -16.66667* 3.60041 002 -24.9692 -8.3641 0,7 g/kgTA -6.66667 3.60041 101 -14.9692 1.6359 33.33333* 3.60041 000 25.0308 41.6359 0,3 g/kgTA 16.66667 * 3.60041 002 8.3641 24.9692 0,7 g/kgTA 10.00000* 3.60041 024 1.6974 18.3026 doichung 23.33333* 3.60041 000 15.0308 31.6359 0,3 g/kgTA 6.66667 3.60041 101 -1.6359 14.9692 0,5 g/kgTA * 3.60041 024 -18.3026 -1.6974 doichung doichung * The mean difference is significant at the 0.05 level -23.33333 -10.00000 Phụ lục MỘT SỐ HÌNH ẢNH Trạm nghiên cứu cá nước lạnh Tây Nguyên Bể ương cá giống trạm nghiên cứu cá nước lạnh Tây Nguyên Phịng lạnh để ni cá thí nghiệm Viện NCNTTS ... giai đoạn cá giống nuôi Lâm Đồng đề xuất biện pháp phòng trị? ?? Mục tiêu đề tài: Xác định tác nhân gây bệnh xuất huyết cá hồi vân giống đề xuất biện pháp phòng trị bệnh xuất huyết cá hồi vân giống. .. huyết cá hồi vân giống đề xuất biện pháp phòng trị bệnh xuất huyết cá hồi vân giống Đối tượng nghiên cứu tác nhân gây bệnh (vi khuẩn, nấm ký sinh trùng) cá hồi vân giống thu Trạm Nghiên cứu cá nước... vân Lâm Đồng xuất số bệnh xuất huyết, lở loét, bệnh nấm,… cá thương phẩm cá giống Vì đề tài ? ?Nghiên cứu tác nhân gây bệnh xuất huyết cá Hồi vân (Oncorhynchus mykiss Walbaum, 1792) giai đoạn cá