Đang tải... (xem toàn văn)
BÀI BÁO CÁO HÓA SINH THỰC PHẨM BÀI 1: KHẢO SÁT HOẠT TÍNH INVERTASE I. Nguyên tắc Invertase là một enzyme thủy phân sacharose thanh glucose va fructose. Dựa vào tính chất Iod trong dung dịch kiềm có khả năng oxi hóa glucose để xác định lượng glucose sinh ra bằng các h định phân Iod dư với dung dịch Na2S2O3. II. Cách tiến hành 1. Sơ đồ quy trình 2. Giải thích quy trình Cân 1g men bánh mì, hòa tan vào 5ml nước cất, cho vào bình định mức 100ml, định mức tới vạch, lắc đều trong 5 phút. Để lắng, lọc ta thu được dịch enzyme. Chuẩn bị 3 ống nghiệm cho lần lượt các chất theo bảng sau. Số ống 1 2 3 Dung dịch sacharose 10%(ml) 0 10 10 Nước cất(ml) 10 0 0 Dịch enzyme (ml) 10 10 0 Dịch enzyme đã đun sôi(ml) 0 0 10 Để 3 ống nghiệm ở nhiệt độ phòng thí nghiệm trong 30 phút sau đó đem đi đun cách thủy trong 2 phút và làm lạnh dưới vòi nước. ở từng ống nghiệm, hút ra 5ml hỗn hợp dung dịch cho vào một bình tam giác 250ml để xác định hàm lượng glucose. Xác định hàm lượng glucose: cho thêm vào mỗi bình tam giác 10ml dung dịch Iod 0,1N và 15ml NaOH 0,1N. Chú ý nhỏ chậm từng giọt NaOH vào sao cho thời gian nhỏ kéo dài khoảng 2 phút.Để yên trong bóng tối 1020 phút.Lấy ra thêm vào 2ml H2SO4 1N định phân lượng iod thừa bằng Na2S2O3 với hồ tinh bột 1% làm chất chỉ thị. Lặp lại thí nghiệm 3 lần. III. Kết quả thí nghiệm. Lần TN Thể tích Lần 1 Lần 2 Lần 3 V 1 4.3 4.8 4.8 V2 4.15 4.7 4.75 V3 4.2 4.6 4.6 Tổng thể tích 4,22 4,7 4,72 Hoạt tính của invertase được biểu thị bằng số mol sacharose thủy phân bởi lượng enzyme có trong 1g men trong một phút ở nhiệt độ phòng thí nghiệm. Được tính bằng công thức: IV. Nhận xét. Qua quá trình thực hành khảo sát hoạt tính invertase cho ta thấy ở ống nghiệm số 3 ống nghiệm có chứa dịch enzyme đã đun sôi thì bị bức hoạt không thủy phân sacharose thành glucose va fructose. Xác định hoạt tính enzyme phụ thuoc5 vào 3 yếu tố: Nồng độ cơ chất Thời gian Nồng độ enzyme BÀI 2: KHẢO SÁT HOẠT ĐỘNG VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH ENZYME UREASE I. Nguyên tắc Urease là một enzyme thủy phân đặc hiệu theo phản ứng: NH2 – C = O + H2O NH3 + CO2 NH2 Khi thêm formaldehyde vào môi trường sẽ tạo thành hexamethylene tetramine và giải phóng acid carbonic. 2(NH4)2CO3 + 6HCHO (CH2)6N4 +2H2CO3+6H2O Dùng dung dịch kiềm chuẩn định phân lượng acid tạo thành sẽ tính được lượng urea bị thủy phân. II. Cách tiến hành 1. Sơ đồ tiến hành Sau 20phút lấy ra Lắc đều 2 phút 2. Giải thích quy trình 2.1 Điều chế dung dịch urease Cân 10g đậu nành đã được xay thành khối bột vào 150ml, cho vào bình định mức 250ml, định mức tới vạch bằng nước cất. Lọc và thu dịch lọc. 2.2 Khảo sát động học Chuẩn bị 2 dãy ống nghiệm, mỗi dãy 6 ống nghiệm.ở từng dãy cho lần lượt các dung dịch theo bảng sau: Ống nghiệm 1 2 3 4 5 6 Ure M3(ml) 0 1 2 3 4 5 Nước cất(ml) 5 4 3 2 1 0 Dd urease(ml) 5 5 5 5 5 5 Đặt dãy thứ nhất vào bể ổn nhiệt 40oC, dãy thứ 2 vào tủ ấm 30oC trong thời gian 20 phút.Sau khi kết thúc thời gian thủy phân thì thêm vào mỗi ống nghiệm 5ml fromol trung tính, lắc đều trong 2 phút. Chuyển từng ống nghiệm sang erlen 100ml, tráng ống nghiệm với một vài nước cất. Thêm vài giọt phenolphthalein 1%, định phân với NaOH 0,05N. Lặp lại thí nghiệm 2 lần. 2.3 Xác định hoạt tính Thực hiện các ống nghiệm sau Ống nghiệm 1 2 3 Ure 2% (ml) 0 5 5 Nước cất (ml) 5 0 0 Dd urease (ml) 5 5 0 Dd urease đã đun sôi (ml) 0 0 5 Mang tất cả các ống nghiệm đặt ở 40oC.Sau 20 phút cho vào mỗi ống nghiệm 5ml formol trung tính, lắc đều trong 2 phút. Đổ lần lượt mỗi ống ra một erlen 100ml. Định phân bằng NaOH0,05N với phenolphthalein 1% làm chất chỉ thị. Cho đến khi dung dịch chuyển sang màu hồng nhạt. Lặp lại thí nghiệm 2 lần.
BÀI BÁO CÁO HÓA SINH THỰC PHẨM BÀI 1: KHẢO SÁT HOẠT TÍNH INVERTASE I Nguyên tắc Invertase enzyme thủy phân sacharose glucose va fructose Dựa vào tính chất Iod dung dịch kiềm có khả oxi hóa glucose để xác định lượng glucose sinh h định phân Iod dư với dung dịch Na 2S2O3 II Cách tiến hành Sơ đồ quy trình Men bánh mì 1(g) Định mức 100ml Nước cất 50ml Lọc Đun cách thủy (2’) Hút 5ml ống nghiệm ống ống ống Dung dịch Để yên tối 10-20’ Mất màu dd sacharose 10% Nước cất Iod 10ml NaOH 15ml Định phân dd emzyme dd Na2SO3 Đun sôi 2 Giải thích quy trình Cân 1g men bánh mì, hòa tan vào 5ml nước cất, cho vào bình định mức 100ml, định mức tới vạch, lắc phút Để lắng, lọc ta thu dịch enzyme Chuẩn bị ống nghiệm cho chất theo bảng sau Số ống Dung dịch sacharose 10%(ml) 10 10 Nước cất(ml) 10 0 Dịch enzyme (ml) 10 10 Dịch enzyme đun sôi(ml) 0 10 Để ống nghiệm nhiệt độ phòng thí nghiệm 30 phút sau đem đun cách thủy phút làm lạnh vòi nước ống nghiệm, hút 5ml hỗn hợp dung dịch cho vào bình tam giác 250ml để xác định hàm lượng glucose Xác định hàm lượng glucose: cho thêm vào bình tam giác 10ml dung dịch Iod 0,1N 15ml NaOH 0,1N Chú ý nhỏ chậm giọt NaOH vào cho thời gian nhỏ kéo dài khoảng phút.Để yên bóng tối 10-20 phút.Lấy thêm vào 2ml H2SO4 1N định phân lượng iod thừa Na 2S2O3 với hồ tinh bột 1% làm chất thị Lặp lại thí nghiệm lần Kết thí nghiệm III Lần TN Lần Lần Lần V1 4.3 4.8 4.8 V2 4.15 4.7 4.75 V3 4.2 4.6 4.6 4,22 4,7 4,72 Thể tích Tổng thể tích Hoạt tính invertase biểu thị số mol sacharose thủy phân lượng enzyme có 1g men phút nhiệt độ phòng thí nghiệm Được tính công thức: IV Nhận xét Qua trình thực hành khảo sát hoạt tính invertase cho ta thấy ống nghiệm số ống nghiệm có chứa dịch enzyme đun sôi bị hoạt không thủy phân sacharose thành glucose va fructose Xác định hoạt tính enzyme phụ thuoc5 vào yếu tố: Nồng độ chất Thời gian Nồng độ enzyme BÀI 2: KHẢO SÁT HOẠT ĐỘNG VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH ENZYME UREASE I Nguyên tắc Urease enzyme thủy phân đặc hiệu theo phản ứng: NH2 – C = O + H2O NH3 + CO2 NH2 Khi thêm formaldehyde vào môi trường tạo thành hexamethylene tetramine giải phóng acid carbonic 2(NH4)2CO3 + 6HCHO (CH2)6N4 +2H2CO3+6H2O Dùng dung dịch kiềm chuẩn định phân lượng acid tạo thành tính lượng urea bị thủy phân II Cách tiến hành Đậu nành 10g Định mức 250ml Lọc Khảo sát động học Xác định hoạt tính ống nghiệm thành dãy ống nghiệm Tủ ấm 30oC Bể ổn nhiệt 40oC Dung dich Định phân Dung dich Định phân Hồng nhạt Bể ổn nhiệt 40oC Dung dich Định phân Hồng nhạt Nước cất 150ml dd urease Sơ đồ tiến hành Sau 20phút lấy Lắc phút Giải thích quy trình 2.1 Điều chế dung dịch urease Cân 10g đậu nành xay thành khối bột vào 150ml, cho vào bình định mức 250ml, định mức tới vạch nước cất Lọc thu dịch lọc 2.2 Khảo sát động học Chuẩn bị dãy ống nghiệm, dãy ống nghiệm.ở dãy cho dung dịch theo bảng sau: Ống nghiệm Ure M/3(ml) Nước cất(ml) Dd urease(ml) 5 5 5 Đặt dãy thứ vào bể ổn nhiệt 40 oC, dãy thứ vào tủ ấm 30 oC thời gian 20 phút.Sau kết thúc thời gian thủy phân thêm vào ống nghiệm 5ml fromol trung tính, lắc phút Chuyển ống nghiệm sang erlen 100ml, tráng ống nghiệm với vài nước cất Thêm vài giọt phenolphthalein 1%, định phân với NaOH 0,05N Lặp lại thí nghiệm lần 2.3 Xác định hoạt tính Thực ống nghiệm sau Ống nghiệm Ure 2% (ml) 5 Nước cất (ml) 0 Dd urease (ml) 5 Dd urease đun sôi (ml) 0 Mang tất ống nghiệm đặt 40oC.Sau 20 phút cho vào ống nghiệm 5ml formol trung tính, lắc phút Đổ ống erlen 100ml Định phân NaOH0,05N với phenolphthalein 1% làm chất thị Cho đến dung dịch chuyển sang màu hồng nhạt Lặp lại thí nghiệm lần III Kết thí nghiệm Khảo sát hoạt động Kết thí nghiệm • Ống nghiệm V1 1,2 (ml) 1,5 (ml) 1,6 (ml) 1,75 (ml) 1,8 (ml) 1,9(ml) V2 1,1(ml) 3,2 (ml) (ml) (loại) 2,3 (ml) 2,4 (ml) 2,8 (ml) 1,5 ml ml 2,1 ml 2,35ml Tổng thể 1,15 ml tích • 1,8 ml Tính toán kết Ta có phương trình phản ứng: H2CO3+ 2NaOH -> Na2CO3 + H2O 1ml 1,15ml 2ml ? nNaOH = 1/3 VNaOH 10-3= 1/3 1,15 10-3 = 0,383 10-3 nH2CO3 tỉ lệ 1:2 nH2CO3= nNaOH = 0,383 10-3 = 0,00076 (mol) Số mol ban đầu tính công thức: CM ure = 1/3 M nure= 1/3 Vure 10-3 = 1/3 0.10-3 = (mol) Cách tính tương tự ta bảng sau: Ống nghiệm 1,15 (ml) 1.5 (ml) 1.8(ml) (ml) 2.1(ml) 2.35(ml) Y= số mol ure bị thủy phân (mol) 0,0076 0,001 0,0012 0,0013 0,0014 0,00157 Vận tốc phản ứng = Y/20 0,0038 0,00005 0,00006 0,000065 0,00007 0,000078 S = số mol ure ban đầu 0,003 0,0067 NaOH dùng chuẩn độ ml 0,001 0,0013 0,00167 Đồ thị biểu diễn vận tốc phản ứng thủy phân 1/v Phương trình y=0,0141x với R2 =0,243 Y1, v = 0,0038 => x = 0,0038/0,0141 =0,27 Y2,v = 0,00005thay vào phương trình ta 0,00005 = 0,0141 x => x=0,0035 Theo công thức phương trình động học Micheaelis –Menten Xác định hoạt tính • Lần TN Kết thí nghiệm Lần Lần V1 1,1 1,25 V2 1,6 2,15 V3 1,2 1,1 Tổng thể tích 1,3 1,5 Thể tích Hoạt tính urease biểu diễn số mol ure bị thủy phân lượng enzyme urease có 1g bột đậu nành thời gian phút 40oC 10 Bài PHẦN I: XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ CỦA LIPASE Nguyên tắc Dưới tác dụng Lipase,lipid bị thủy phân giải phóng acid béo,lượng acid béo chuẩn độ kiềm.Lượng kiềm cẩn để trung hòa lượng acid sinh hoạt độ enzyme cần tìm Đậu nành (10g) Đệm acetate erlen 10ml Nghiền Lắc Tủ ấm (20-24) Dung dịch Hồng nhạt Giọt toluene Cồn 96o Ether 15ml Chuẩn độ NaOH 0,05N Cách tiến hành Giải thích quy trình Nghiền nhỏ a) Cân 5g đậu nành +5ml nước cất dạng đồng thể Lắc đều(300C) +1ml dầu đậu nành erlen hỗn hợp tủ ấm(20-24h) 5ml acetate +vài giọt toluen b) Bình kiểm chứng làm (a) dịch enzyme đun sôi 3-5p( hoạt tính enzyme) 11 Bước Sau lấy hỗn hợp từ tủ ấm ta cho 25ml cồn 96 + 15ml ether lắc để yên hai phút Bước Đem chuẩn độ NaOH 0,05N dung dịch trteen + phenolphthalein 1% đến dung dịch chuyển sang hồng nhạt Kết thí nghiệm: Hoạt độ lipase biểu thị số ml NaOH 0.1N dùng để chuản độ lượng acid tự sinh lipase trích từ 5g hạt thủy phân a Bảng kết V NaOH (ml) chuẩn độ mẫu Mẫu Mẫu Mẫu VTB 37 36 38 37 V NaOH (ml) chuẩn độ mẫu kiểm chứng b 32.5 Tính toán kết Trong đó: a: số ml NaOH để chuẩn độ bình thí nghiệm b: số ml NaOH để chuẩn độ bình kiểm chứng k: hệ số hiệu chỉnh nồng độ NaOH 0.1N m: khối lượng hạt sử dụng Kết luận: Vậy hoạt độ enzyme lipase thủy phân lipid 5g hạt đạu nành để giải phóng acid béo Hiện tượng giải thích a Hiện tượng: 12 o Bổ sung dung dịch đệm acetate vài giọt toluene o Khi đem mẫu dung dịch thêm vài giọt thị phenolphatalein (không có màu) chuẩn độ NaOH 0.1N xuất màu hồng b Gỉai thích o Vì thủy phân giá trị pH môi trường thay đổi không ổn định, hoạt tính Enzyme bị giảm nên cần bổ sung dung dịch đệm để ổn định giá trị pH môi trường o Bổ sung vài giọt Toluen để làm dung môi hòa tan chất dầu đậu nành o Vì lượng NaOH chuẩn độ cho vào ban đầu làm trung hòa muôi trường acid dung dịch, tiếp tục chuẩn độ lượng NaOH dư làm thị phenolphthalein chuyển sang màu hồng PHẦN II: XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH ENZYM AMYLASE THEO WOHLGEMUTH I Nguyên tắc Phương pháp dựa vào tìm nồng độ enzyme thấp có thề, để thủy phân tinh bột đến erytrodextrin Đơn vị Wohlgemuth lượng enzyme cần thiết để thủy phân 1mg tinh bột sau 30 phút 37˚C có Cl làm chất hoạt hóa II Cách tiến hành Chuẩn bị chiết dịch amylase Malt(10g) Nước cất Định mức 100ml Nghiền Lắc Ngâm 15 phút Lọc Dung dịch Sơ đồ tiến hành: Giải thích tiến hành: 13 -Cân 10g Matl (hạt đại mạch) đem nghiền sau chuyền vào bình định mức 100ml định mức vạch, lắc thật kỉ Ngâm dung dịch định mức 15 phút lắc bình định mức sau lọc qua giấy lọc mịn ta thu dung dịch suốt chứa Enzyme amylase NaCl 0,5% (1ml) Enzym amylase(1ml) H SO 10%(1ml ) Iod/KI (2giọt) Lắc Ống nghiệm Tủ điều nhiệt 37˚(30phút) Dung dịch Lắc Dung dịch Tiến hành khảo sát hoạt tính amylase Sơ đồ tiến hành: Nước cất (3ml) Iod/KI (2giọt) ống nghiệm Lắc Dung dịch • Sơ đồ 2: Giải thích tiến hành : -Lấy 10 ống nghiệm đánh số thứ tự Hút vào ống nghiệm 1ml dung dịch NaCl 0,5% ống nghiệm 1cho vào ml dung dịch enzym amylase lắc sau lấy 1ml dung dịch từ ống nghiệm cho vào ống nghiệm thứ lắc sau lặp lại đến ống nghiệm thứ 10 hút 1ml bỏ Tiếp theo mổi ống nghiệm ta cho vào 1ml dung dịch hồ tinh bột 0,5 % lắc 14 -Để vảo tự nhiệt 37ºC sau 30 phút lấy thêm vào ống nghiệm 1ml dung dịch H2S04 10% giọt Iod/KI ,lắc Nhằm mục đích thay đổi nồng độ enzym -Lấy 1ống nghiệm khác cho vào 3ml nước cất giọt Iod lắc ta thu dung dịch nàu vàng nhạt sau so sánh với 10 ống nghiệm để xác định ống có nồng độ enzym amylase thấp thủy phân hoàn toàn tinh bột III Kết thí nghiệm tính toán kết Bảng kết màu ống nghiệm Độ pha loãng (F) Nồng độ enzyme Màu n/2 Vàng n/4 n/8 Vàng Vàng + ++ 10 16 32 64 128 256 512 1024 n/16 n/32 n/64 n/128 n/256 n/512 n/1024 Nâu Nâu Nâu Nâu Nâu Nâu Nâu Nâu nhạt đến đậm dần 2.Nhận xét: Ống nghiệm ống nghiệm có màu gần giống so với ống số 11 (màu vàng) Hình 2: Kết màu 10 ống nghiệm (tính từ trái sang phải) 15 Hình 3: Chọn ống nghiệm (ống số 01) có màu gần giống với ống số 11 Hiện tượng giải thích a Hiện tượng: - Để 10 ống nghiêm bể ổn nhiệt 650C - Các ống nghiệm có màu khác từ vàng nhạt đến nâu đậm dần 3.2.2 Gỉai thích - Để 10 ống nghiệm 650C nhằm tăng khả hoạt động enzyme - Các ống nghiệm có màu vàng đến nâu đậm dần nồng độ enzyme bị giảm dần pha loãng Enzyme nhiều thủy phân tinh bột mạnh (làm ống nghiệm có màu vàng) ngược lại 4.Tính toán kết quả: Lượng enzyme cho vào ống nghiệm (1): Một đơn vị Wohlgemuth: Số đơn vị Wohlgemuuth có 1ml dịch chiết enzyme ( ): Trong đó: V1: Thể tích dịch enzyme cho vào ống nghiêm (1) V2: Thể tích dịch enzyme amylase định mức (100ml) V: Thể tích dung dịch Tẻmamyl (ml) 16 F: Độ pha loãng ống nghiệm có nồng độ enzyme thấp thủy phân hoàn toàn tinh bột (ống nhiệm có màu trùng với màu ống nghiệm 11) 17 BÀI KHẢO SÁT HOẠT TÍNH BROMELIN Nguyên tắc: Cho enzyme Bromelin thủy phân,các chất protein hemoglobin hay casein.Để xác định lượng tyrosin peptid giải phóng ta cho tác dụng với thuốc thử Folin Tiến hành: Sơ đồ quy trình Thơm Gọt vỏ Xay Xác định hoạt tính ống nghiệm Dung dich Lắc đều, để yên 10 25oC Lọc dd urease ống nghiệm khác Để yên 15’ NaOH 0,5N 18 Đem OD Folin 1ml Lọc Giải thích quy trình Chiết enzyme Quả thơm đem gọt vỏ dem xay nát đem lọc ta thu dịch chiết enzyme Khảo sát hoạt tính Chuẩn bị ống nghiệm cho chất theo thứ tự Sao lắc ống để yên 10’ nhiệt dộ 25o C , đem lọc 19 Lấy ống nghiệm khác cho vào ống nghiệm 5ml NaOH 0,5N hút thêm vào ống 2,5 ml dung dịch mẫu sau lọc, cuối cho thuốc thử Folin vào ống nghiệm lắc kỹ để yên 15’ đem di đo mật độ quang điện Kết thí nghiệm: Kết đo OD bước sóng 650nm Mẫu Mẫu lần Mẫu lần TB OD mẫu 0.098A 0.080A 0.089A OD tyrosin 0.173A 0.176A 0.175A Hiện tượng giải thích : a Hiện tượng: Sau cho Folin vào ống nghiệm để yên 15 phút ta thấy ống nghiệm có màu xanh dương suất b Giải thích: Trong ống nghiệm có màu xanh enzyme bromelin thủy phân casein tạo tyrosin tyrosin tác dụng với thuốc thử Folin tạo màu xanh Tính kết quả: Hoạt tính enzyme bromelin: CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH ENZYME Người ta xác định khả xúc tác enzyme thông qua việc xác định hoạt độ hoạt động enzyme Người ta định lượng enzyme trực tiếp mà phải xác định gián tiếp thông qua hoạt độ hoạt động chúng thông qua khả làm giảm chất sau thời gian phản ứng Hiện nhiều phòng thí nghiệm sử dụng nhóm phương pháp sau để xác định khả xúc tác enzyme: 1/Tiến hành đo lượng chất bị hay lượng sản phẩm tạo thành sau thời gian định lượng enzyme xác định trước Phương pháp áp dụng rộng rãi xác định tương đối xác 20 2/Tiến hành xác định thời gian cần thiết để thu nhận lượng biến đổi nhấy định lượng chất hay lượng sản phẩm tương ứng với lượng enzyme định 3/Tiến hành chọn nồng độ enzyme cần thiết để khoảng thời gian định thu biến đổi định chất hay sản phẩm Có thể tóm tắt nhóm phương pháp bảng sau: Nhóm phương pháp Các thông số cố định -Thời gian Các thông số thay đổi -Nồng độ enzyme Biến đổi chất sản phẩm -Lượng chất hay lượng sản phẩm tạo thành Thời gian -Nồng độ enzyme Thời gian lượgn chất hay lượgn sản phẩm tạo thành Nồng độ enzym 21 [...]... được sự biến đổi nhất định về cơ chất hay sản phẩm Có thể tóm tắt các nhóm phương pháp trong bảng sau: Nhóm phương pháp 1 2 Các thông số cố định -Thời gian Các thông số thay đổi -Nồng độ enzyme Biến đổi của cơ chất và của sản phẩm -Lượng cơ chất mất đi hay lượng sản phẩm tạo thành Thời gian -Nồng độ enzyme 3 Thời gian lượgn cơ chất mất đi hay lượgn sản phẩm tạo thành Nồng độ enzym 21 ... enzyme: 1/Tiến hành đo lượng cơ chất bị mất đi hay lượng sản phẩm được tạo thành sau một thời gian nhất định và lượng enzyme đã xác định trước Phương pháp này được áp dụng rộng rãi và đã được xác định là tương đối chính xác 20 2/Tiến hành xác định thời gian cần thiết để thu nhận được một lượng biến đổi nhấy định của lượng cơ chất hay lượng sản phẩm tương ứng với một lượng enzyme nhất định 3/Tiến hành... Phương pháp dựa vào tìm nồng độ enzyme thấp nhất có thề, để thủy phân tinh bột đến erytrodextrin Đơn vị Wohlgemuth là lượng enzyme cần thiết để thủy phân 1mg tinh bột sau 30 phút ở 37˚C có Cl làm chất hoạt hóa II Cách tiến hành 1 Chuẩn bị chiết dịch amylase Malt(10g) Nước cất Định mức 100ml Nghiền Lắc đều Ngâm 15 phút Lọc Dung dịch Sơ đồ tiến hành: Giải thích tiến hành: 13 -Cân 10g Matl (hạt đại mạch)...Bài 3 PHẦN I: XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ CỦA LIPASE 1 Nguyên tắc Dưới tác dụng của Lipase,lipid bị thủy phân và giải phóng acid béo,lượng acid béo được chuẩn độ bằng kiềm.Lượng kiềm cẩn để trung hòa lượng acid sinh ra là hoạt độ enzyme cần tìm Đậu nành (10g) Đệm acetate erlen 10ml Nghiền Lắc đều Tủ ấm (20-24) Dung dịch Hồng nhạt Giọt toluene Cồn 96o Ether 15ml Chuẩn độ NaOH 0,05N 2 Cách tiến hành Giải thích... bằng NaOH 0,05N dung dịch trteen + phenolphthalein 1% đến khi dung dịch chuyển sang hồng nhạt 3 Kết quả thí nghiệm: Hoạt độ của lipase được biểu thị bằng số ml NaOH 0.1N dùng để chuản độ lượng acid tự do sinh ra do lipase trích từ 5g hạt thủy phân a Bảng kết quả V NaOH (ml) chuẩn độ mẫu Mẫu 1 Mẫu 2 Mẫu 3 VTB 37 36 38 37 V NaOH (ml) chuẩn độ mẫu kiểm chứng b 32.5 Tính toán kết quả Trong đó: a: số ml NaOH