Đang tải... (xem toàn văn)
Tài liệu này cung cấp cho sinh viên khóa nông học, các kĩ sư những kiến thức sơ đẳng về một số bệnh hại trên cây trồng và cách phòng trừ hiệu quả trên thực tiễn.
11 Các bệnh phổ biến số trồng quan trọng Trong phần ví dụ bệnh phổ biến nhiều loại rau màu đưa nhằm minh họa đa dạng bệnh trồng Việt Nam Các bệnh liệt kê bảng cung cấp danh sách kiểm tra nhằm giúp việc quan sát đồng ruộng Các tác nhân gây nhiều bệnh số chẩn đoán xác phòng thí nghiệm Việc chẩn đoán xác tác nhân gây bệnh vô cần thiết trước đưa biện pháp quản lý bệnh hại tổng hợp Chẳng hạn thối rễ nấm nhiều tác nhân gây Pythium, Phytophthora, Rhizoctonia Phoma Việc phòng trừ loại nấm đòi hỏi có chiến lược quản lý bệnh hại tổng hợp khác Sơ đồ minh họa cho trồng đưa nhằm giúp người đọc nhận biết vị trí tìm triệu chứng bệnh Hiểu biết toàn diện bệnh giúp người đọc việc chẩn đoán bệnh nhiều trồng khác 11.1 Các bệnh phổ biến ớt Bảng 11.1 cung cấp danh mục bệnh phổ biến ớt Việt Nam (các số tương ứng với số biểu đồ) Tất bệnh xuất vụ, bị hay nhiều bệnh gây hại (Hình 11.1) Thối rễ Phytophthora, thối gốc thân, héo vi khuẩn, sưng rễ tuyến trùng sâu đục thân gây triệu chứng héo tương tự Phần 11 Các bệnh phổ biến số trồng quan trọng 151 Bảng 11.1 Các bệnh phổ biến ớt Bệnh Tác nhân gây bệnh Dấu hiệu chẩn đoán Thối rễ Phytophthora Phytophthora capsici thối rễ héo Thối gốc Sclerotium rolfsii Các hạch nấm nhỏ tròn màu nâu sợi nấm trắng gốc thân Héo vi khuẩn Ralstonia solanacearum Dịch khuẩn xuất thân, thân bị biến màu nâu Thán thư Colletotrichum sp Vết bệnh màu đen, lõm xuống Bệnh virút Vi rút thực vật Lá non còi cọc, phát triển Sưng rễ tuyến trùng Meloidogyne sp U sưng rễ 152 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam a b c d e f Hình 11.1 Các bệnh ớt: (a) ớt khỏe (trái) bị héo (phải) số bệnh gây ra, (b) thân biến màu nâu, triệu chứng điển hình bệnh héo xanh vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây ra, (c) thối gốc mốc trắng Sclerotium rolfsii gây ra, (d) thối rễ Phytophthora nấm Phytophthora capsici gây ra, (e) ớt bị nhiễm vi rút héo đốm cà chua, (f ) ớt bị bệnh thán thư nấm Colletotrichum sp gây Phần 11 Các bệnh phổ biến số trồng quan trọng 153 11.2 Các bệnh phổ biến cà chua Cà chua mẫn cảm với nhiều loại bệnh khác (Bảng 11.2) Cần có điều tra thêm bệnh cà chua Việt Nam nhằm xác định tất loại bệnh nghiêm trọng có Đặc biệt cần có nghiên cứu chẩn đoán virút vi khuẩn gây bệnh cà chua Các vụ trồng cà chua Việt Nam thường bị ảnh hưởng số bệnh Một bị nhiễm nhiều bệnh, làm cho việc chẩn đoán trở nên khó khăn Bảng 11.2 Các bệnh phổ biến cà chua Bệnh Tác nhân Dấu hiệu chẩn đoán Héo vi khuẩn Ralstonia solanacearum Héo, dịch khuẩn xuất thân, thân biến màu nâu Thối gốc Sclerotium rolfsii Hạch nấm nhỏ màu nâu, tròn sợi nấm màu trắng xuất gốc thân Sưng rễ tuyến trùng Meloidogyne sp Héo, u sưng rễ Mốc sương Phytophthora infestans Nấm màu xám mọc mặt Thối vi khuẩna Clavibacter michiganensis Lá vàng, héo, thân biến màu nâu, đốm Đốm vi khuẩna Pseudomonas syringae Đốm hoại Virút héo đốm cà chuaa Virút Lá non bị biến màu nâu cục bộ, có đốm vòng màu tối già Héo Fusariuma Fusarium oxysporum f sp lycopersici Héo, mạch dẫn biến màu nâu Đốm vòng Alternaria solani Các vòng tròn đồng tâm màu đen 10 Mốc Cladosporium fulvum (Fulvia fulva) Nấm màu xám/tía mọc mặt 11 Virút vàng Virút Lá quăn, nhỏ, biến màu vàng a Cần xác nhận có mặt tác nhân gây bệnh Việt Nam 154 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam 10 11 b a d c e Hình 11.2 Các bệnh cà chua: (a) triệu chứng quăn, vàng vi rút gây chồi mọc (b) vết loét vi khuẩn Pseudomonas syringae gây cà chua, (c) Sưng rễ tuyến trùng Meloidogyne sp gây ra, (d) đốm mốc Cladosporium fulvum, (e) đốm vòng Alternaria solani Phần 11 Các bệnh phổ biến số trồng quan trọng 155 11.3 Các bệnh phổ biến lạc Lạc dễ bị nhiễm bệnh rễ, quả, thân (Bảng 11.3 Hình 11.3) Cần nghiên cứu chẩn đoán thêm để xác định nguyên nhân gây thối rễ vỏ Bảng 11.3 Các bệnh phổ biến lạc Bệnh Tác nhân Dấu hiệu chẩn đoán Thối rễ Pythium/Rhizoctonia Chết con/thối rễ Cây biến vàng héo Còi cọc Rễ bên bị biến màu giai đoạn vụ Rễ thối vào cuối vụ thối Thối gốc mốc trắng Sclerotium rolfsii Hạch nấm tròn nhỏ màu nâu sợi nấm màu trắng gốc Thối gốc mốc trắng Aspergillus niger Cây còi cọc héo Sợi nấm bào tử màu đen gốc thân mầm Thối thân Sclerotinia sclerotiorum Héo, thối ướt thân lá, hạch nấm lớn màu đen Gỉ sắt Puccinia arachidis Mụn gỉ sắt màu đỏ Đốm Cercospora Cercospora arachidicola Vết bệnh màu nâu sô-cô-la đậm Virút khảm Virút Khảm, cần chẩn đoán phòng thí nghiệm 156 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam e a b c d f g Hình 11.3 Các bệnh lạc: (a) gỉ sắt lạc nấm Puccinia arachidis gây ra, (b) đốm Cercospora (Cercospora arachidicola) gỉ sắt, (c) lạc bị thối rễ gây triệu chứng biến vàng còi cọc, (d) thối rễ thối Pythium sp., (e) vết bệnh mầm lạc với nhiều bào tử nấm Aspergillus niger, (f ) thối rễ Pythium con, (g) khỏe (trái) bị thối rễ gây còi cọc (phải) Phần 11 Các bệnh phổ biến số trồng quan trọng 157 11.4 Các bệnh nấm phổ biến hành Hành bị nhiễm nhiều bệnh nấm lá, thân củ rễ (Bảng 11.4) Hầu hết nấm gây bệnh phân lập dễ dàng môi trường nhân tạo Lưu ý tác nhân gây bệnh sương mai nấm ký sinh chuyên tính nuôi cấy môi trường nhân tạo Những bệnh liệt kê Bảng 11.4 có triệu chứng điển hình thường dễ dàng phân biệt đồng ruộng sau xác nhận phòng thí nghiệm Nấm gây thối củ tiếp tục lây nhiễm trình bảo quản Bảng 11.4 Các bệnh nấm phổ biến hành Bệnh Tác nhân Dấu hiệu chẩn đoán Cháy đầu Colletotrichum sp Đầu biến màu nâu trắng, có đĩa cành Sương mai Peronospora sp Nấm xám mọc Đốm Stemphylium Stemphylium sp Đốm dạng giống đốm vòng Thối cổ rễ Botrytis byssoidea Nấm màu nâu xám khối bào tử xuất củ Thối gốc mốc trắng Sclerotium rolfsii Sợi nấm màu trắng hạch nấm màu nâu gốc Thối (ướt) cuống Sclerotinia sclerotiorum Sợi nấm màu trắng, hạch nấm to màu đen Thối Fusarium Fusarium spp Sợi nấm có màu trắng đến tím nhạt, hạch nấm Mốc đen (thối củ) Aspergillus niger Các đám bào tử bột màu đen (cũng bệnh gây thối trình bảo quản ) Thối rễ màu hồng Phoma terrestris (Pyrenochaeta terrestris) Rễ màu hồng vảy màu hồng 10 Thối thân củ Rhizopus stolonifer (R nigricans) Nấm mọc dày trông gòn với túi bào tử đen rõ rệt Hành bị nhiễm bệnh cháy vi khuẩn, thối thân củ vi khuẩn, số virút thực vật, vài bệnh rễ tuyến trùng (Hình 11.4) Các bệnh tuyến trùng chủ yếu gây còi cọc làm chết, thường không ý đến 158 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam 10 a b c Hình 11.4 Các bệnh hành: (a) đốm Stemphylium, (b) sương mai nấm Peronospora sp., (c) Các triệu chứng thối rễ màu hồng nấm Phoma terrestris Phần 11 Các bệnh phổ biến số trồng quan trọng 159 11.5 Các bệnh nấm phổ biến ngô Ngô khuyến cáo trồng luân canh với rau để phòng trừ nhiều tác nhân gây bệnh tồn đất Ngô có khả kháng bệnh héo vi khuẩn (Ralstonia solanacearum), Sclerotinia sclerotiorum, hầu hết loài Phytophthora tuyến trùng gây sưng rễ Tuy nhiên, ngô mẫn cảm với loài Pythium phổ biến tương đối mẫn cảm với Sclerotium rolfsii Rhizoctonia spp (Bảng 11.5 Hình 11.5) Ngô dễ bị nhiễm bệnh thối thân bắp số loài Fusarium loài lại thường không ảnh hưởng đến rau Danh sách chi tiết bệnh ngô tìm thấy trang web http://www.cimmyt.org/english/docs/field_guides/maize/diseases.htm Bảng 11.5 Các bệnh nấm phổ biến ngô Bệnh 160 Tác nhân Các dấu hiệu chẩn đoán Ung thư ngô Ustilago maydis Các u sưng lớn màu trắng hạt, đám bào tử đen; gây nhiễm hoa đực thân Thối rễ, bắp thân Fusarium Fusarium graminearum Thối thân thường dẫn đến tượng lõi thân bị chẻ vụn Thân bắp thối có màu hồng tới đỏ, có xuất sợi nấm Fusarium verticillioides Fusarium subglutinans Fusarium proliferatum Thối thân thường dẫn đến tượng lõi thân bị chẻ vụn Lõi thường có màu tím đến tía Sợi nấm trắng phát triển bắp bị bệnh bên lớp vỏ Gỉ sắt Puccinia sorghi Các mụn hoại tử dài Khô vằn rễ, thân Rhizoctonia spp Gây vết bệnh lớn màu nâu nhạt, loang lổ thân Các hạch nấm màu nâu hình dạng bất định xuất vị trí bị bệnh Cháy Bipolaris maydis (Cochliobolus heterostrophus) Các vết hoại tử hình thành Cháy Turcicum Exserohilum turcicum Vết bệnh có kích thước nhỏ hình bầu dục mọng nước sau hình thành vết hoại tử lớn Thối Pythium rễ thân Pythium spp Thối ướt mô thân vết bệnh màu nâu rễ Sương mai Peronosclerospora spp Sclerospora sp Sclerophthora spp Nấm màu xám (cành mang bọc bào tử) mọc mặt Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Hình 12.5 Aspergillus ochraceus, ba tản nấm môi trường Czapek yeast autolysate agar (trái), bào tử vô tính mọc đầy đầu cành bào tử phân sinh (giữa), bào tử vô tính (phải) 12.3 Các loài Fusarium có độc tính Fusarium verticillioides F graminearum hai loài Fusarium có độc tính phổ biến ngô Việt Nam Những loài xuất vùng Các loài Fusarium khác xuất ngô, thường phổ biến hai loài bàn đến 12.3.1 Fusarium verticillioides Nguồn Liên quan chủ yếu đến ngô phân lập từ khác Phát sinh bệnh Gây thối bắp, thân rễ ngô Phổ biến điều kiện ấm, nóng, khô, bị thiếu nước Bệnh thối bắp trở nên trầm trọng bắp bị sâu bọ phá hại Nấm gây nhiễm không triệu chứng thân ngô điều kiện thích hợp Độc tố Fusarium verticillioides tạo nhóm độc tố fumonisin hạt ngô Fumonisin B1 chất độc phổ biến Fumosisin B1 gây phù phổi lợn hóa lỏng não ngựa Fumonisin B1 liên quan đến ung thư thực quản người Có quy định hạn chế việc buôn bán ngô có lẫn tạp Fumonisin B1 168 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Mô tả Sản sinh sợi nấm màu trắng môi trường PDA sắc tố tím thạch (Hình 12.6) Trên môi trường thạch nước cất có chứa cẩm chướng mẩu thân lúa xanh tiệt trùng, F verticillioides sản sinh bào tử lớn dài, thon thẳng tập trung thành khối mẩu thân/lá sản sinh chuỗi dài bào tử nhỏ hình bầu dục từ tế bào sinh bào tử đơn Chúng không tạo bào tử hậu Hình 12.6 Thối Fusarium ngô Fusarium verticillioides (trái), mẫu nuôi cấy môi trường PDA (phải) 12.3.2 Fusarium graminearum Nguồn Ở Việt Nam, Fusarium graminearum phổ biến ngô Cũng phát số loại cỏ vùng Sapa Phát sinh bệnh Gây thối lõi, rễ thân ngô điều kiện nhiệt độ ấm Nấm gây bệnh bạc lúa mì kê Phần 12 Nấm, người động vật: vấn đề sức khỏe 169 Độc tố Sản sinh trichothecenes, deoxynivalenol nivalenol Có thể tìm thấy chúng thực phẩm cho người động vật làm từ hạt ngô bị nhiễm bệnh Deoxynivalenol (đôi viết ngắn DON) biết đến 'độc tố gây ói mửa', khiến lợn biếng ăn ói mửa tùy theo nồng độ thức ăn F graminearum tạo zearalenone, độc tố nấm gây động dục Độc tố gây vô sinh, lợn, ảnh hưởng đến trâu bò động vật khác Mô tả Tạo sợi nấm từ màu hồng đến màu đỏ tía PDA sắc tố đỏ tía thạch (Hình 12.7) Một số trường hợp sợi nấm có màu vàng nhạt Bào tử lớn hình cong với chiều dài trung bình tập trung thành khối nhỏ môi trường CLA mẩu thân lúa xanh môi trường thạch nước cất Không tạo bào tử nhỏ hay bào tử hậu Tạo nhiều thể màu đen đồng tản CLA môi trường thạch nước cất có chứa giá thể thực vật thích hợp 20-23°C điều kiện chiếu sáng Quả thể thường không hình thành điều kiện 25°C môi trường nhân tạo Quả thể hình thành thân ngô vỏ bắp cũ điều kiện ẩm mát Hình 12.7 Thối Fusarium ngô F graminearum (trái), mẫu nuôi cấy môi trường PDA (phải) 170 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam 13 Phòng thí nghiệm chẩn đoán nhà lưới 13.1 Phòng thí nghiệm chẩn đoán Những gợi ý sau dựa phòng thí nghiệm chẩn đoán xây dựng Chi cục Bảo vệ thực vật Quảng Nam, Thừa Thiên Huế, Nghệ An Trường Đại học Nông lâm Huế thông qua tài trợ dự án ACIAR “Chẩn đoán, khuyến nông phòng trừ bệnh hại trồng tỉnh miền Trung Việt Nam, CP/2002/115” Những phòng thí nghiệm xây dựng với mục đích chủ yếu hỗ trợ công tác chẩn đoán bệnh nấm Tuy nhiên, phương tiện phòng thí nghiệm thích hợp cho việc phân lập vi khuẩn gây bệnh phổ biến Khi làm việc phòng thí nghiệm nào, vấn đề an toàn rủi ro ảnh hưởng đến sức khỏe phải ý Phụ lục 2, sức khỏe an toàn, phác họa rủi ro thường gặp phải phòng thí nghiệm nghiên cứu chẩn đoán bệnh Tuy nhiên, cần tham khảo ý kiến phụ trách phòng thí nghiệm trước vào phòng thí nghiệm không quen thuộc 13.1.1 Vị trí phòng thí nghiệm Một phòng thí nghiệm chẩn đoán cần bố trí tòa nhà với tường bảo vệ tránh mưa Tại vùng nhiệt đới, nấm thường mọc mặt bên phía tường có mưa hắt Nấm mọc tạo bào tử làm lẫn tạp môi trường nuôi cấy Phòng thí nghiệm nên tầng hai lý tưởng Điều giảm vấn đề chuột sâu bọ khác kiến Phòng thí nghiệm nên có hai phòng lớn, phòng để chuẩn bị phòng Nên có phòng khu vực có mái che dùng để kiểm tra sơ mẫu từ đồng ruộng rửa đất khỏi mẫu rễ Tại nơi này, mẫu nhỏ chọn lọc cho việc phân lập tác nhân nấm vi khuẩn phòng Nơi dùng để tách lấy tuyến trùng ký sinh thực vật từ đất Phần 13 Phòng thí nghiệm chẩn đoán nhà lưới 171 a b c d Hình 13.1 Sắp xếp thiết bị phòng thí nghiệm chẩn đoán (phòng thí nghiệm Chi cục BVTV Nghệ An): (a) (b) hai vị trí phòng sạch, (c) (d) hai vị trí phòng chuẩn bị 13.1.2 Phòng chuẩn bị Phòng chuẩn bị dùng để chuẩn bị môi trường, bao gồm khử trùng dụng cụ vật liệu nồi hấp, khử trùng đĩa Petri tủ sấy, rửa cất giữ đồ thủy tinh, hóa chất vật dụng khác Phòng cần có quạt hút để hút nóng từ nồi hấp tủ sấy 13.1.3 Phòng Phòng dùng để phân lập nấm vi khuẩn từ mẫu bệnh làm Phòng dùng để nuôi cấy mẫu vi sinh vật điều kiện Các kính hiển vi đặt phòng nhằm kiểm tra mẫu nuôi cấy cấu trúc nấm Không kiểm tra lớn phòng Phân lập từ mẫu nhỏ rửa bụi đất bên trước đưa vào phòng thí nghiệm 172 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam Nếu điều kiện cho phép, phòng cần trang bị máy điều hòa không khí để bảo vệ thiết bị mẫu nuôi cấy Phòng cần giữ cho khỏi bụi côn trùng Tuy nhiên, đừng để phòng kín hơi, không độ ẩm cao nấm mốc phát triển tường thiết bị Nên dùng máy hút ẩm phòng Không mang đất vào phòng đất nguồn nhện ăn nấm làm lẫn tạp mẫu nuôi cấy 13.2 Bố trí phòng thí nghiệm Khi thiết kế phòng thí nghiệm, có nhiều khía cạnh cần xem xét Điều quan trọng công việc tiến hành theo thứ tự hợp lý bước trình chẩn đoán nên tách riêng khỏi Sau sơ đồ bố trí phòng thí nghiệm chẩn đoán (Hình 13.2), chủ yếu để chẩn đoán tác nhân nấm gây bệnh thực vật Tủ đựng mẫu nuôi cấy Buồng cấy vô trùng Phòng Giá để mẫu cấy Bàn làm việc Kính hiển vi/kính lúp soi Tủ lạnh/tủ đá Máy vi tính Cân Khu vực có mái che Phòng chuẩn bị Giá sách Bàn Tủ sấy Nồi hấp Tủ bảo quản Bồn rửa dụng cụ thủy tinh Bồn rửa mẫu vật Bàn Hình 13.2 Sơ đồ phòng thí nghiệm chẩn đoán, biểu thị sơ đồ bố trí thiết bị bàn Phần 13 Phòng thí nghiệm chẩn đoán nhà lưới 173 13.3 Thiết bị phòng thí nghiệm 13.3.1 Thiết bị cho phòng Những thiết bị cần thiết cho phòng liệt kê bên minh họa Hình 13.2: • Một kính hiển vi có gắn vật kính ×10, ×20, ×40, ×100 (vật kính dầu) Một kính hiển vi loại thường đủ cho hầu hết công việc chẩn đoán Nếu có điều kiện tài chính, kính hiển vi gắn với vật kính luyện kim ×20 với khoảng cách làm việc xa Vật kính lý tưởng cho việc kiểm tra in situ cấu trúc nấm môi trường nhân tạo, khoảng cách từ vật kính tới mẫu quan sát xa (xem Phần 6.2.2) • Một kính lúp soi để kiểm tra mẫu bệnh tìm cấu trúc nấm Điều đặc biệt quan trọng nhiều tác nhân gây bệnh mà nuôi cấy môi trường nhân tạo Kính dùng để cấy đơn bào tử nảy mầm cấy đỉnh sinh trưởng sợi nấm để làm mẫu nuôi cấy, để nghiên cứu tuyến trùng gây bệnh (xem Phần 6.2.1) • Một tủ cấy vô trùng dùng để đổ môi trường phân lập nấm khỏi mô Trong điều kiện khí hậu nhiệt đới Việt Nam, có nhiều bào tử nấm không khí Những bào tử lẫn tạp môi trường đổ, cấy phân lập cấy truyền mẫu nuôi cấy, trừ thao tác tiến hành tủ cấy vô trùng • Một giá dài có gắn đèn huỳnh quang bên để kích thích việc sản sinh bào tử sắc tố nhiều loài nấm môi trường nhân tạo mẫu để ẩm Nên có giá cho mẫu nuôi cấy giá riêng cho mẫu phân lập Một tủ mẫu nuôi cấy thuận tiện cho việc nuôi đĩa cấy cần điều kiện bóng tối Việc cần thiết mẫu nuôi cấy môi trường có chất kháng sinh bị phân hủy tác động ánh sáng (ví dụ môi trường chọn lọc cho Phytophthora) • Một tủ lạnh để dự trữ môi trường chai lọ, đĩa Perti chứa môi trường (trong bịch ny lông giấy nhôm để tránh cho môi trường khỏi bị khô), chất kháng sinh, mẫu nuôi cấy mẫu bệnh nhỏ • Cần có cân điện tử với độ xác 0,001 g để cân lượng kháng sinh hoá chất nhỏ • Các bàn làm việc lớn, để kính hiển vi cân điện tử, cho công việc phân lập chung nuôi cấy • Ghế ngồi thoải mái bàn làm việc • Sổ ghi chép mẫu, để ghi chi tiết lần chẩn đoán danh sách mẫu vi sinh vật lưu trữ 174 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam • Một giá sách gồm loạt ấn thông tin bệnh: – sách giáo khoa – cẩm nang – trích lược bệnh – báo khoa học • Ít máy vi tính nối mạng internet máy in cho: – công việc lưu trữ sở liệu – tìm kiếm thông tin – tiếp cận thư viện hình ảnh – liên lạc qua thư điện tử • Các dụng cụ nhỏ cho công việc phân lập cấy, bao gồm: – kẹp nhỏ – que cấy – cán dao mổ – que cấy khuẩn – lưỡi dao mổ – bút đánh dấu – dao nhỏ – cồn êtyl – que cấy truyền nấm (đầu dẹp) – giấy lau – thớt – lam kính lamen – giấy lọc Kiểm tra tường thiết bị thường xuyên để xem có bị nấm mọc hay không Sàn phòng cần lau chùi thường xuyên để loại bỏ bụi bẩn Cần phải tắt quạt đóng cửa sổ nuôi cấy để làm giảm di chuyển không khí phòng Công việc quan trọng cần thực buồng cấy lau cồn 70% Khử trùng bề mặt cần Phần 13 Phòng thí nghiệm chẩn đoán nhà lưới 175 Hình 13.3 Dụng cụ cần thiết cho việc phân lập, cấy truyền, làm giám định tác nhân nấm vi khuẩn gây bệnh Khử trùng mặt bàn rửa tay trước làm việc với mẫu cấy để giảm nguy lẫn tạp 13.3.2 Thiết bị cho phòng chuẩn bị Những thiết bị cần thiết cho phòng chuẩn bị liệt kê bên minh họa Hình 13.1: • Một tủ sấy để khử trùng đĩa Petri, đĩa Petri cần gói giấy báo túi giấy • Một nồi hấp nhỏ thích hợp cho khử trùng 1-2 lít môi trường nước bình tam giác chai Schott Nồi hấp dùng để khử trùng môi trường nước ống nghiệm thủy tinh chai McCartney, pipet đồ thủy tinh khác gói giấy giấy nhôm 176 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam • Một nồi áp suất để khử trùng lượng nhỏ môi trường nước Có thể mua thiết bị hầu hết chợ lớn • Một cân (độ xác đến 0,1 g) để cân hóa chất, khoai tây, cà rốt nguyên vật liệu tương tự cho việc chuẩn bị môi trường • Một bếp điện để nấu khoai tây cà rốt dùng cho môi trường • Một bàn để chuẩn bị môi trường • Một bồn để rửa đĩa Petri đồ thủy tinh khác • Một tủ đựng 13.4 Nhà lưới cho việc nghiên cứu bệnh Nhà lưới phần quan trọng phòng thí nghiệm chẩn đoán nhà lưới cần cho việc thực trình lây bệnh nhân tạo, đánh giá thuốc trừ nấm phương pháp phòng trừ bệnh khác Việc thiết kế cần đảm bảo điều kiện giúp cho mọc tốt ngăn ngừa lẫn tạp thí nghiệm lây bệnh nhân tạo thí nghiệm khác (Hình 13.4) Một nhà lưới cần có: • mái che suốt • sàn xi măng dốc thoát nước tốt • thoáng khí tốt điều kiện trời nóng (quạt cầu thông gió hiệu quả) (Hình 13.5) • thiết kế chống chuột • nguồn cung cấp nước tốt • bàn dài (Hình 13.5) • khu vực chuẩn bị bên gần nhà lưới Mái suốt cho phép 75% ánh nắng xuyên qua Dùng vật liệu polycarbonate làm mái tốt chống tia tử ngoại, bền dễ gắn vào khung mái sắt hay gỗ Tấm nhựa dùng làm mái bền độ 1-2 năm Mái thủy tinh không thích hợp cho vùng có bão tố mưa đá Tốt mái gắn cho hiên kín (tránh bão tố) Lưới che nắng dùng mùa hè để giảm nhiệt độ nhà lưới (Hình 13.5) Một sàn xi măng dốc thoát nước tốt giữ vòi xịt nước Phần 13 Phòng thí nghiệm chẩn đoán nhà lưới 177 Quạt thông gió NHÌN TỪ CUỐI NHÌN TỪ BÊN Thùng để khử trùng chậu Giá để chậu (cất giữ) Bàn chuẩn bị Bồn Thùng chứa Bồn rửa chân Bàn tre Bàn tre Bàn tre Bàn tre NHÌN TỪ TRÊN Hình 13.4 Sơ đồ minh họa thiết kế nhà lưới thích hợp cho việc lây bệnh nhân tạo công việc thí nghiệm với tác nhân gây bệnh thực vật a Hình 13.5 Nhà lưới dùng cho nghiên cứu bệnh Chi cục BVTV Quảng Nam: (a) hình ảnh tổng quát nhà lưới với lưới chống côn trùng, (b) lưới che nắng mái tôn nhựa polycarbonate phẳng với quạt cầu thông gió 178 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam b Bốn bên nhà lưới tường gạch (cao khoảng 1m) Lưới sắt (như lưới B40) lưới sắt mạ kẽm (lỗ khoảng cm đường kính) gắn cột, tường gạch thấp kèo cột đỡ mái Lưới sắt giúp thông tốt đồng thời ngăn chuột chim chóc vào nhà lưới Lưới chống côn trùng tốn kém, quan trọng ngăn côn trùng xâm nhập vào nhà lưới Cần nguồn nước tốt để giữ cho sàn để cung cấp nước bệnh cho Ống dẫn nước phải mắc tường cho đầu vòi tưới không chạm sàn Có điện thắp sáng vận hành thiết bị tiện lợi Các bàn thép chống gỉ để đặt chậu nên cao khoảng m dài khoảng 2-3 m Độ cao giảm tối thiểu khả bị lẫn tạp từ sàn Nên có bàn dài loại dễ di chuyển, để di dời dễ dàng cần cho cao, có thân leo lên giàn ăn nhỏ trồng chậu lớn Có thể dùng bàn làm tre phải xử lý với thuốc trừ nấm để ngăn mốc Một cân đĩa 10 kg nên để nhà lưới để cân chậu trồng nhằm theo dõi lượng nước giá thể trồng 13.4.1 Khu chuẩn bị Khu chuẩn bị nhà lưới khu nhà gần Nên có giá đựng đồ cao khỏi mặt sàn để chứa chậu dụng cụ Cũng nên có nơi chứa hỗn hợp giá thể cát, xơ dừa, mùn cưa mục nguyên liệu bệnh khác để trồng phục vụ thí nghiệm lây bệnh nhân tạo Một bàn cần dùng cho việc chuẩn bị chậu cây, lây bệnh vào đất công việc khác Mặt bàn cần làm vật liệu dễ khử trùng, thép không gỉ đá hoa 13.4.2 Hỗn hợp giá thể Giá thể bệnh cần thiết cho trình lây bệnh nhân tạo nhiều thí nghiệm khác Giá thể bệnh cần cho việc sản xuất giâm hom bệnh trước đưa trồng ruộng thí nghiệm Có nhiều loại giá thể Các đặc tính hỗn hợp giá thể tốt khả giữ nước tốt dễ thoát nước Có vài loại hỗn hợp giá thể sử dụng Việt Nam Vật liệu phổ biến bao gồm mùn cưa mục, xơ dừa, cát, than bùn phân gà viên Một số thành phần chứa tác nhân gây bệnh; cát chứa tác nhân gây bệnh Pythium Phytophthora Xơ dừa mùn cưa thường bệnh Phần 13 Phòng thí nghiệm chẩn đoán nhà lưới 179 Đất ruộng thường mang nhiều tác nhân gây bệnh thực vật Những tác nhân cần diệt trừ xông xử lý nhiệt (khử trùng hỗn hợp nước/không khí 60oC 30 phút) trước đất dùng cho trình lây bệnh nhân tạo Đất từ đồng ruộng chưa xử lý không mang vào nhà lưới tác nhân đất làm lẫn tạp nhà lưới Hỗn hợp giá thể mùn cưa làm với mùn cưa, cát phân gà viên (70:28:2 theo thể tích) ủ 4-6 tháng Đầu tiên, giá thể trộn phải nóng tới khoảng 50oC thời gian dài để loại trừ tác nhân gây bệnh tồn Hỗn hợp giá thể cần ủ mục thùng lớn Điều quan trọng tránh để giá thể tiếp xúc trực tiếp với đất ruộng bệnh Xơ dừa thành phần lý tưởng cho giá thể Hỗn hợp giá thể tiệt trùng hỗn hợp nước/không khí chưa ủ mục Có thể trộn hỗn hợp giá thể máy trộn xi măng Hạt phân bón thêm vào trộn 13.4.3 Vệ sinh nhà lưới Cần có quy định chặt chẽ cán sử dụng nhà lưới để tránh làm nhiễm tạp thí nghiệm lây bệnh nhân tạo nghiên cứu khác với tác nhân gây bệnh đất ruộng Thiết bị quy trình cần tuân thủ bao gồm: • đặt bồn rửa chân nơi cửa vào • có dép ủng cao su để dùng nhà lưới • không mang đất từ đồng ruộng bệnh vào nhà lưới • loại bỏ đất dùng thí nghiệm sau thí nghiệm hoàn tất đốt hủy bệnh • dùng nước bệnh • giữ cho đầu vòi nước không chạm sàn nhà • phun xịt rửa sàn đặn • cán không vào nhà lưới sau thăm ruộng mà phải tắm rửa thay quần áo trước sử dụng nhà lưới • khử trùng tất chậu với thuốc khử trùng mạnh sau dùng thí nghiệm, dung dịch nước Javen 1% 24 • để chậu khử trùng giá cao cách xa mặt sàn • xử lý bàn tre với thuốc trừ nấm chứa đồng 180 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam 13.4.4 Quản lý dinh dưỡng Trồng chậu cho trình lây bệnh nhân tạo nghiên cứu khác đòi hỏi việc quản lý cẩn thận vấn đề dinh dưỡng Các chậu nên có lỗ đáy để thoát nước tốt Sỏi nhỏ để đáy chậu để giúp cho việc thoát nước tốt Mục đích để tránh nước đọng đất nơi rễ phát triển Cân chậu thường xuyên để trì độ ẩm ổn định hỗn hợp giá thể tránh nước đọng Chỉ nên tưới nước cho giá thể đến ngưỡng “năng lực đồng ruộng” Cây cần trồng hỗn hợp giá thể bệnh Việc chọn lựa loại hỗn hợp giá thể tùy thuộc loại trồng, nguyên liệu sẵn có tính chất thí nghiệm Cần cung cấp đủ dinh dưỡng cho tăng trưởng bình thường Có thể cần bổ sung thêm phân bón dạng hạt vào giá thể trước trồng Thường phân bón lỏng dung dịch Hoagland's sản phẩm thương mại dùng 1-2 tuần lần để trì tăng trưởng bình thường (Hình 13.6) Cần bón thêm phân lỏng đặn đặc biệt lớn trồng chậu nhỏ thời gian dài Phân N-P-K dạng lỏng đậm đặc phân vi lượng dạng lỏng đậm đặc có sẵn Việt Nam Hình 13.6 Chuẩn bị phân bón thương phẩm để dùng nhà lưới Phần 13 Phòng thí nghiệm chẩn đoán nhà lưới 181 Có thể dùng dung dịch Hoagland’s thay (xem công thức Khung 13.1) Việc đặc biệt có lợi tình trạng dinh dưỡng cần giám sát, chất dinh dưỡng cần loại bỏ thí nghiệm nghiên cứu dinh dưỡng Khung 13.1 Dung dịch Hoagland's Dung dịch có tất chất dinh dưỡng cần thiết cho phát triển tăng trưởng Dung dịch Hoagland's pha từ số dung dịch mẹ pha sẵn, trộn với nước trước dùng Thêm vào lít nước: • 5 mL dung dịch nitrat kali • 5 mL dung dịch nitrat canxi • 1 mL dung dịch photphat axit kali • 2 mL dung dịch sunphat magie • 1 mL dung dịch vi lượng mẹ pha sẵn • 10 mL dung dịch sắt-EDDHA pha sẵn Dung dịch mẹ: • 1 M KNO3 nitrate kali (khoảng 101 g 1 L) • 1 M Ca(NO3)2.4H2O nitrate canxi (khoảng 236 g 1 L) • 1 M KH2PO4 Photphat axit kali (khoảng 136 g 1 L) • 1 M MgSO4.7H2O sunphate magie (khoảng 246.5 g 1 L) Dinh dưỡng vi lượng làm sẵn: • 0.046 M H3BO3 axit boric (khoảng 2.86 g 1 L) • 0.009 M MnCl2.4H20 clorua mangan (khoảng 1.81 g 1 L) • 0.765mM ZnSO4.7H2O sunphat kẽm (khoảng 0.22 g 1 L) • 0.320mM CuSO4.5H2O sunphat đồng (khoảng 0.08 g 1 L) • 0.111mM H2MoO4.H2O molybdic acid (85%) (khoảng 0.02 g 1 L) sắt-EDDHA (khoảng 2.45 g 1 L) Dung dịch sắt-EDDHA pha sẵn • 10mM 182 Fe(NO3)3 Cẩm nang chẩn đoán bệnh Việt Nam [...]... trong 1 L) • 1 M Ca(NO3)2.4H2O nitrate canxi (khoảng 236 g trong 1 L) • 1 M KH2PO4 Photphat axit kali (khoảng 136 g trong 1 L) • 1 M MgSO4.7H2O sunphate magie (khoảng 246.5 g trong 1 L) Dinh dưỡng vi lượng làm sẵn: • 0.046 M H3BO3 axit boric (khoảng 2.86 g trong 1 L) • 0.009 M MnCl2.4H20 clorua mangan (khoảng 1.81 g trong 1 L) • 0.765mM ZnSO4.7H2O sunphat kẽm (khoảng 0.22 g trong 1 L) • 0.320mM CuSO4.5H2O... bên dưới và minh họa trong Hình 13.1: • Một tủ sấy để khử trùng đĩa Petri, đĩa Petri cần được gói trong giấy báo hoặc túi giấy • Một nồi hấp nhỏ thích hợp cho khử trùng 1-2 lít môi trường hoặc nước trong bình tam giác hoặc chai Schott Nồi hấp cũng có thể được dùng để khử trùng môi trường hoặc nước trong ống nghiệm thủy tinh hoặc chai McCartney, pipet và các đồ thủy tinh khác gói trong giấy hoặc giấy... các cây cao, cây có thân leo lên giàn hoặc cây ăn quả còn nhỏ trồng trong chậu lớn Có thể dùng bàn làm bằng tre nhưng phải được xử lý với thuốc trừ nấm để ngăn mốc Một cân đĩa 10 kg nên để trong nhà lưới để cân các chậu trồng cây nhằm theo dõi lượng nước trong giá thể trồng 13.4.1 Khu chuẩn bị Khu chuẩn bị có thể ở trong nhà lưới hoặc trong khu nhà gần đó Nên có các giá đựng đồ cao khỏi mặt sàn để chứa... có thể được tạo ra và lẫn tạp vào trong nông sản trước khi thu hoạch hoặc trong quá trình bảo quản sau thu hoạch Điều quan trọng là nên bảo quản hạt trong điều kiện khô để giảm thiểu sự phát triển của nấm và tạp nhiễm độc tố sau thu hoạch Việc sản sinh độc tố thay đổi tùy theo loài Chẳng hạn như Fusarium graminearum sản sinh zearalenone trong hạt ngô nhưng không có trong hạt lúa mì Aspergillus flavus... vật liệu trong nồi hấp, khử trùng đĩa Petri trong tủ sấy, rửa và cất giữ đồ thủy tinh, hóa chất và các vật dụng cơ bản khác Phòng này cần có một quạt hút hơi để hút hơi nóng từ nồi hấp và tủ sấy 13.1.3 Phòng sạch Phòng sạch dùng để phân lập nấm và vi khuẩn từ các mẫu cây bệnh đã được làm sạch Phòng cũng được dùng để nuôi cấy các mẫu vi sinh vật trong điều kiện sạch Các kính hiển vi được đặt trong phòng... phát triển và sản sinh aflatoxins trong ngô và lạc (Hình 12.2) Ngay cả trong một loài, việc sản sinh độc tố cũng thay đổi đáng kể Trong loài F graminearum, các nguồn phân lập có thể sản sinh deoxynivalenol hoặc nivalenol Những khác biệt này rất quan trọng, bởi vì các độc tính và tác động của chúng lên các loài động vật khác nhau đáng kể Một số nấm sản sinh độc tố trong các cấu trúc nấm như hạch nấm... các thí nghiệm khác (Hình 13.4) Một nhà lưới cơ bản cần có: • mái che trong suốt • sàn xi măng dốc thoát nước tốt • thoáng khí tốt trong điều kiện trời nóng (quạt cầu thông gió rất hiệu quả) (Hình 13.5) • thiết kế chống chuột • nguồn cung cấp nước tốt • các bàn dài (Hình 13.5) • một khu vực chuẩn bị bên trong hoặc gần nhà lưới Mái trong suốt cho phép ít nhất 75% ánh nắng xuyên qua Dùng vật liệu polycarbonate... sản sinh ảnh hưởng bởi một số yếu tố bao gồm: • giá thể • nhiệt độ • độ ẩm trong giá thể • dòng nấm 164 Cẩm nang chẩn đoán bệnh cây ở Việt Nam 12.2 Các loài Aspergillus có độc tính 12.2.1 Aspergillus flavus Nguồn Aspergillus flavus thường có trong lạc và ngô ở các vùng nhiệt đới, cũng có thể tìm thấy trong các sản phẩm bảo quản trong kho kể cả gia vị Phát sinh bệnh ở cây Aspergillus flavus tồn tại trên... nước/không khí ở 60oC trong 30 phút) trước khi đất có thể được dùng cho quá trình lây bệnh nhân tạo Đất từ đồng ruộng chưa được xử lý không được mang vào nhà lưới bởi vì các tác nhân trong đất có thể làm lẫn tạp nhà lưới Hỗn hợp giá thể mùn cưa có thể được làm với mùn cưa, cát và phân gà viên (70:28:2 theo thể tích) và ủ trong 4-6 tháng Đầu tiên, giá thể trộn này phải nóng tới khoảng 50oC trong thời gian... nào tồn tại trong đó Hỗn hợp giá thể cần được ủ mục trong các thùng lớn Điều quan trọng là tránh để giá thể tiếp xúc trực tiếp với đất ruộng hoặc cây bệnh Xơ dừa có thể là một thành phần lý tưởng cho giá thể Hỗn hợp giá thể cũng có thể được tiệt trùng bằng hỗn hợp hơi nước/không khí nếu chưa được ủ mục Có thể trộn hỗn hợp giá thể trong máy trộn xi măng sạch Hạt phân bón có thể được thêm vào trong khi ... 101 g 1 L) • 1 M Ca(NO3)2.4H2O nitrate canxi (khoảng 236 g 1 L) • 1 M KH2PO4 Photphat axit kali (khoảng 136 g 1 L) • 1 M MgSO4.7H2O sunphate magie (khoảng 246.5 g 1 L) Dinh dưỡng vi lượng làm sẵn:... 1 L) • 0.009 M MnCl2.4H20 clorua mangan (khoảng 1.81 g 1 L) • 0.765mM ZnSO4.7H2O sunphat kẽm (khoảng 0.22 g 1 L) • 0.320mM CuSO4.5H2O sunphat đồng (khoảng 0.08 g 1 L) • 0.111mM H2MoO4.H2O molybdic... khăn Bảng 11.2 Các bệnh phổ biến cà chua Bệnh Tác nhân Dấu hiệu chẩn đoán Héo vi khuẩn Ralstonia solanacearum Héo, dịch khuẩn xuất thân, thân biến màu nâu Thối gốc Sclerotium rolfsii Hạch nấm nhỏ