Trờng ĐHNNI hà Nội Khoa c.n.t.y Bộ môn ngoại sản ============ Bi giảng Môn học sinh sản gia súc (Học phần kỹ thuật sinh sản) TS NGUYễN VĂN THANH - Kỹ thuật sinh sản A K THUT TH TINH NHN TO I Khái niệm: TTNT kỹ thuật mà ngời tiến hành lấy tinh dịch từ đực dùng dụng cụ chuyên dụng bơm tinh dịch vào đờng sinh dục động dục Đây biện pháp cải tạo giống nhanh nhất, tốt nhất, tiên tiến nhằm tạo đàn có sản lợng cao nhất, phẩm chất tốt II Lợi ích kinh tế, kỹ thuật công tác thụ tinh nhân tạo 2.1 Với công tác giống: + Tạo điều kiện thuận lợi cho việc truyền giống, lai tạo giống + Giảm nhẹ chi phí việc nhập nội đực giống tốt nhập tinh dịch đực giống tốt để cải tạo đàn giống địa phơng + Nâng cao hiệu sinh sản đực giống lợn tăng lên 30-50 lần, bò tăng lên hàng trăm lần + Thành lập đợc ngân hàng tinh dịch, nhằm bảo quản lâu dài tinh dịch để trao đổi, vận chuyển dễ dàng tạo điều kiện mở rộng không gian việc cải tạo giống cách nhanh chóng + Do tinh dịch đực giống nhanh chóng đợc ứng dụng toàn diện rộng nhanh chóng đánh giá đợc phẩm chất đực giống 2.2 Hiệu kinh tế + Giảm thấp đợc số lợng đực giống cần nuôi từ tiết kiệm đợc thức ăn chuồng trại công lao động vv làm tăng suất lao động hạ giá thành sản phẩm + Nâng cao đợc phẩm chất đời sau cách nhanh góp phần làm tăng nhanh sản phẩm cho xã hội + Do tinh dịch dùng thụ tinh nhân tạo đợc kiểm tra cách chặt chẽ đảm bảo đợc tỷ lệ sinh sản đàn 2.3 Về công tác thú y + Việc dùng dụng cụ chuyên dụng thích hợp đợc kiểm tra chặt chẽ tránh đợc lây lan bệnh truyền nhiễm ký sinh trùng thông qua đờng sinh dục ví dụ nh Brucellosis, leptospirosis, Vibrriois, Trichomonosis III Những hạn chế kỹ thuật thụ tinh nhân tạo - Do làm giảm số lợng đực giống từ làm thu nhỏ, đơn điệu hoá di truyền biến dị đời sau - Những thiếm khuyết đực giống di truyền thú y nhanh chóng lan rộng thực tiễn sản xuất Do việc chọn lọc đực giống nh quy trình chăm sóc nuôi dỡng quản lý khai thác sử dụng đực giống cần phải làm nghiêm túc chặt chẽ - Trang thiết bị vốn ban đầu đòi hỏi cao tốn - Là dao lỡi nh công tác thú y IV Kỹ thuật lấy tinh: 4.1 Các yêu cầu ca vic ly tinh: + Lấy đợc toàn tinh dịch với phẩm chất tốt khiết + Phơng pháp lấy tinh phải an toàn cho ngời vật + Trang bị không phức tạp, kỹ thuật phải đơn giản dễ áp dụng thực tiễn sản xuất 4.2 Khái quát phơng pháp lấy tinh + Phơng pháp hải miên + Phơng pháp âm đạo + Phơng pháp dùng túi + Phơng pháp giới(massage) + Phơng pháp dùng điện + Phơng pháp dùng âm đạo giả (AĐG) phơng pháp đợc áp dụng rộng rãi giới Lấy tinh âm đạo giả a Cấu tạo cách sử dụng âm đạo gi: âm đạo giả ống rỗng bao gồm lớp, lớp vỏ làm nhựa, lớp làm cao su mềm đàn hồi dài vỏ âm đạo 10-15cm, lớp vỏ có van để đổ nớc bơm vào có đai để cố định ruột âm đạo, có phễu hứng tinh lọ đựng tinh dịch Tuỳ theo loài gia súc mà ngời ta chế tạo AĐG cho có kích thớc phù hợp Loài gia Vỏ AĐG Ruột AĐG súc Dài Đờng kính Dài Đờng kính (cm) (cm) (cm) (cm) Bò 40 6-7 60-70 6-7 Lợn nội 20-25 30-35 4-5 Lợn ngoại 25-30 40-45 4-5 b Yêu cầu kỹ thuật + Nhiệt độ thích hợp để kích thích đực giống, thờng cao thân nhiệt 0.50C phụ thuộc vào cá thể mùa vụ, thực tế thờng sử dụng nớc nóng để điều chỉnh nhiệt độ + Phải có áp lực thích hợp (dùng biện pháp bơm không khí thông qua van có phần vỏ âm đạo ) + Phải có độ trơn thích hợp (dùng vazelin hay dầu thực vật để làm trơn lòng âm đạo) + Phải tuyệt đối vô trùng, không gây bệnh cho đực giống sinh sản (dùng biện pháp xông hay dùng nớc sôi) c Các bớc tiến hành để lấy tinh âm đạo giả + Huấn luyện đực giống: có 02 phơng pháp huấn luyện đực giống - Phơng pháp sinh vật: phơng pháp dùng động dục cố định vào giá nhảy cho đực cần huấn luyện vào, đực nhảy lên giá, ngời huấn luyện phải nhanh chóng, kịp thời khéo léo đa dơng vật đực giống vào âm đạo giả, dới tác động kích thích âm đạo giả đực xuất tinh, sau vài lần đực quen không cần dùng - Phơng pháp bắt chớc: dùng đực giống đợc huấn luyện thành thục biểu diễn thao tác cho đực cần huấn luyện xem bắt chớc đàn anh thao tác lại qua nhiều lần đực cần huấn luyện thành thạo Cả hai phơng pháp cần ý: ổn định ngời, thời gian địa điểm huấn luyện, nên huấn luyện vào lúc trời mát, yên tĩnh ngời huấn luyện cần ôn hoà, kiên trì khéo léo - Tuổi huấn luyện: tập từ lúc non sau thành thục tính cha qua giao phối với nào, nh vật hăng dễ huấn luyện cụ thể Lợn tập từ lúc 6-7 tháng nhng khoảng năm cho vào sản xuất; trâu 24-30 tháng; bò 18-24 tháng dê cừu 6-9 tháng, ngựa 25-30 tháng + Làm giá nhảy: - Giá nhảy lợn làm gỗ, xi măng - Giá nhảy trâu bò làm sắt hay gỗ chắn dùng bò đực thiến hay bò đợc huấn luyện làm giá nhảy + Chế độ lấy tinh thích hợp: Chế độ lấy tinh thích hợp bảo vệ đợc sức khoẻ kéo dài thời gian sử dụng đực giống, chế độ lấy tinh phụ thuộc vào loài giống mùa vụ - Bò 3-4 ngày lần; lợn ngoại - ngày lần, lợn nội 4- ngày lần, gia cầm lần / tuần, ngựa mùa động dịch tháng 4- tháng 10 ngày lấy lần nghỉ chủ nhật, dê cừu mùa sinh sản lấy 4-6 lần ngày 4.4 Các nhân tố ảnh hởng tới số lợng chất lợng tinh dịch đực giống a Dinh dỡng: đòi hỏi phải đầy đủ, cân đặc biệt ý chất protein, nguyên tố vi lợng nh I, Zn, thiếu chất lợng tinh dịch bị kém; khoáng đa lợng nh Ca, P thiếu phản xạ nhảy ; vitamin nh vitaminn A, E thiếu dẫn đến thoái hóa chai cứng niêm mạc ống sinh tinh, teo dịch hoàn b Chăm sóc đực giống + Thờng xuyên phải quan sát tình trạng ăn uống lại, nhịp thở, phân nớc tiểu đực giống + Cần ý công tác vệ sinh tắm trải cho đực giống đặc biệt ý khâu vệ sinh cho dịch hoàn nguyên vẹn da dịch hoàn da dịch hoàn đóng vai trò quan trọng việc điều tiết nhiệt độ cho dịch hoàn, nhiệt độ dịch hoàn thờng thấp nhiệt độ thể - 4oC C Vận động: đóng vai trò quan trọng chăn nuôi đực giống, vận động giúp cho vật không béo, thể đực giống cờng tráng, ngực nở bụng thon, chế độ vận động: áp dụng hình thức vận động # Vận động tự do: có sân chơi ý sân # Vận động cỡng - Lợn nội chạy + 1.5-2.km/lần tuần lần - Lợn ngoại chạy + 2-2.5km/lần tuần lần - Trâu, bò nhanh + lồng 10 -15 km lần tuần lần - Ngựa kiệu + phi 50 -60 km lần tuần -3 lần d Quản lý: cần nhốt riêng mối đục giống chuồng, cho chơi hay vận động phải nơi tránh chúng đánh, cắn lẫn e Giống tuổi, cá thể tuổi v mùa vụ : + Giống: giống khác số lợng chất lợng tinh dịch khác + Cá thể: loài giống số lợng chất lợng cá thể khác việc theo dõi chọn lựa đực giống khâu quan trọng chăn nuôi gia súc sính sản + Tuổi: tuổi thành niên số lợng chất lợng tinh dịch tốt sau số lợng tinh dịch cao nhng chất lợng tinh dịch dần cần sử dụng đực giống thời gian định - Lợn nội không năm; lợn ngoại năm; bò 12 năm + Mùa vụ: mùa vụ có ảnh hởng trực tiếp tới số lợng chất lợng tinh dịch: động vật sinh sản theo mùa mùa sinh sản có trình sản sinh tinh dịch, động vật không sinh sản theo mùa vào mùa xuân, mùa thu mùa đông tinh dịch tốt mùa hè, gia súc nuôi vùng núi cao tinh dịch vùng đồng f Kỹ thuật khai thác tinh dịch: khéo léo, thái độ ôn hoà kỹ thục ngời khai thác tinh dịch nh chế độ khai thác thích hợp khai thác đợc nhiều tinh dịch chất lợng tốt V Kiểm tra tinh dịch gia súc Mục đích: - Đánh giá sức sản xuất đực giống tiêu giám định đời sau đánh giá đợc phẩm chất đàn đực giống - Đánh giá chế độ chăm sóc nuôi dỡng quản lý khai thác sử dụng đực giống - Đánh giá sức khoẻ đực giống - Qua đánh giá phẩm chất tinh dịch đa đợc chế độ chăm sóc nuôi dỡng quản lý khai thác sử dụng đực giống cách hợp lý Khi kiểm tra tinh dich có trờng hợp sau + Tinh dịch phải bỏ tìm nguyên nhân + Tinh dịch bình thờng đa vào sản xuất + Tinh dịch có phẩm chất tốt đa vào bảo tồn dạng lỏng, dạng tơi + Từ tiêu VAC định đợc số lợng liều tinh n = VAC/ N n số liều tinh; A hoạt lực, C số lợng tinh trùng 1ml tinh dịch N số lợng tinh trùng cần thiết cho liều tinh 5.2 Yêu cầu: Nghiêm túc, xác trung thực, dụng cụ, thiết bị kiểm tra có chất lợng tốt, vô trùng 5.3 Nội dung kiểm tra 3.1 Các tiêu kiểm tra thờng xuyên Lợng tinh (V, ml) số lợng tinh dịch thu đợc qua lần khai thác tinh dịch Để kiểm tra tiêu V dùng cốc đong, ống đong, bình đong có khắc độ để xác định, cần ý với lợn tinh dịch có nhiều keo phèn phải lọc keo phèn trớc kiểm tra V Mầu sắc: loài gia súc tinh dịch có mầu sắc khác + Tinh dịch lợn mầu nớc cháo, trắng sữa + Tinh dịch bò mầu trắng sữa, vàng ngà + Tinh dịch trâu mầu trắng sữa + Tinh dịch dê, cừu mầu trắng sữa, ghi + Tinh dịch gia cầm mầu ghi, ghi xám Khi tinh dịch có mầu bất thuờng: đỏ, nâu lẫn máu đờng sinh dục bị sây sát, xuất huyết, tinh dịch bị phân lớp bị lẫn nớc ta loại bỏ Độ vẩn: tinh dịch bao gồm thành phần hữu hình nh tinh trùng, hạt hữu treo lơ lửng tinh thanh, tinh trùng vận động ta tác động lực nhỏ vào cột tinh dịch tinh trùng tác động vào hạt hữu làm chuyển động tạo độ vẩn tinh dịch Tuỳ theo độ vẩn nhiều mà ngời ta có kí hiệu khác nhau: Vẩn nhiều +++++; vẩn mây nhiều ++++; vẩn mây trung bình +++; vẩn mây ++; vẩn mây + thực tế lợn nội dùng tinh dịch đạt từ ++; lợn ngoại +++ trở lên Mùi: mùi tinh dịch thờng mùi tanh, gây có mùi khác thờng nh mùi thối, khai ta loại bỏ tinh dịch Độ PH: dùng giấy quỳ hay máy đo PH để xác định PH tinh dịch loài gia súc tinh dịch có độ PH khác nhau, PH thay đổi ngỡng phải loại bỏ tinh dịch: Lợn TB 7.5 (7.3 -7.9); ngựa TB 7.3 ( 6.2-7.8); chó TB 6.3 ( 5.9-6.9) bò TB 6.8 ( 6.4-7.8); dê cừu 7.4 (6.98.3) gà TB 7,6 (6,8-8,1) Hoạt lực (A): tỷ lệ % tinh trùng vận động tiến thẳng A tiêu quan trọng định chất lợng tinh dịch, dùng kính hiển vi quan sát tinh dịch với độ phóng đại 150-300 lần quan sát tinh trùng vận động 90% tinh trùng vận động tiến thẳng A=0.9 tuơng tự 50% tinh trùng vận động tiến thẳng A=0.5 A càng cao tinh dịch tốt dùng A từ 0.6 trở lên Mật độ (d) kiểm tra với A ngời ta ớc lợng khoảng cách tơng đối tinh trùng với chiều dài (l) tinh trùng d < l mật độ dày, d > l mật độ tha d tơng đơng với l mật độ trung bình Chỉ tiêu d cho ta biết klhái niệm ban đầu số lợng tinh trùng có tinh dịch 5.3.2 Các tiêu kiểm tra định kỳ: Nồng độ (C): C số lợng tinh trùng tính triệu tỷ có ml tinh dịch: lợn thờng tháng kiểm tra lần, trâu bò 2-3 tuần kiểm tra lần có nhiều phơng pháp kiểm tra + Phơng pháp so mầu: ngời ta định sẵn thang mầu tơng ứng với số lợng tinh trùng có đơn vị tính + Phơng pháp dùng ống Spernio dencimettre (ống karras) ống thuỷ tinh miệng vuông (1x1cm) sâu 15 cm có chia vạch từ 0-100) Dùng 10ml tinh dịch pha với dung dịch pha loãng NaCl 0,9% theo tỷ lệ 1ml tinh dịch + ml dịch pha rót vào ống karras đến vạch 100, đặt mảnh giấy trắng phía sau ống Karras Nhìn vào ống Karras ta thấy độ đục tăng dần từ dới lên làm mờ dần chữ số vào vạch thành ống Ta đọc chữ số hàng chục cuối đọc đợc vạch nhìn rõ sau tra bảng ta có nồng độ tinh trùng Phơng pháp thờng dùng kiểm tra C lợn Thí dụ ta nhìn thấy số hàng chục cuối nhìn rõ vạch tiếp theo: 75 ta tra bảng có C = 195x 106/ml + Phơng pháp điện tử: dùng máy đếm tự động + Phơng pháp đếm buồng đếm hồng, bạch cầu Hiện thực tế Trạm trại ngời ta thờng dùng phơng pháp đếm trực tiếp buồng đếm hồng cầu bạch cầu Phơng pháp kiểm tra C buồng đếm hồng bạch cầu Độ Số ô Công Gia súc ống hút Vạch hút pha TB cần thức tính Tinh Dịch loãng đếm dịch pha Trâu, bò Hồng 101 100 C= cầu n.5.106 Dê, cừu Hồng 0,5 101 200 C= n.107 gia cầm cầu Lợn, Bạch 0,5 11 20 C= n.106 ngựa, cầu chó Môi trờng phải có lợng đệm: bảo tồn sống tinh trùng bảo tồn trình TĐC tinh trùng nghĩa phải giữ vững độ PH thích hợp muốn cần phải có lợng đệm thực tiễn ngời ta dùng muối kim loại Natri xitrat (Na3C6H5 O7) hay Kali tartrat (KNaC4 H4) 3Na+ + C6 H5 O7 3- Thí dụ môi trờng Na3C6 H5 O7 trình Glycoz tinh trùng thải H+ từ C6 H8 O7 Axit Citric C6 H8 O7 axit hữu 3H+ + C6 H5 O7 3yếu, hầu nh không phân ly đảm bảo cho tinh trùng TĐC mà H+ không tăng nghĩa PH đơc ổn định Tỷ lệ chất điện giải v không điện giải phải thích hợp Trong môi trờng chất điện giải phân li thành Cation Anion chúng có tác động xấu tới màng tế bào Các chất không điện giải tồn bên cạnh chất điện giải có tác dụng ngăn ngừa tác động xấu vào màng tinh trùng thực tế ngời ta dung đờng Glucoze, Lactoze, maltoze Thoả mãn tính thực tế v tính kỹ thuật: nghĩa nguyên liệu phải dễ kiếm giá phải c Các chất cấu tạo môi trờng Đờng: có tác dụng cung cấp nguyên liu cho trình trao đổi chất tinh trùng tác dụng giải độc cho tinh trùng đồng thời đảm bảo tỷ lệ thích hợp chất điện giải không điện giải Muối đệm: có tác dụng ổn định P thẩm thấu thực tiễn thờng dùng muối kim loại Natri xitrat (Na3C6H5O7) hay Kali tartrat (KNaC4 H4) Hoạt chất rửa môi trờng: xuất chất điện giải môi trờng phân li gây ô nhiễm môi trờng dó cần phải có chất làm môi trờng thực tế ngời ta dùng Trilon B, nhờ vào kết cấu phân tử hình cua, Trilon B gắn với ion Ca++, Mg++, Fe++, Fe+++ tạo muối phức vô hoạt không ảnh hởng tới tinh trùng Chất chống lạnh: + Leucitin: lipoid có nhiều lòng đỏ trứng, đậu lành + Glyerin: riệu đa nguyên tử với độ nhẹ có tác dụng chống lạnh Chất kháng sinh: có tác dụng diệt khuẩn Trong thực tế thờng dùng Sulffamid với liều 3mg/ml với tinh dịch bò 2mg/ml cho tinh dịch lợn dùng hỗn hợp Strreptomycin penicillin hay Tetracyclin Các chất khác: ngời ta bổ sung thêm chất nh dịch tiết động thực vật nh nớc dừa, sữa, mật ong vitamin nhằm kéo dài thời gian sống tinh trùng Ngoài ngời ta bổ sung số chất có hoạt tính sinh học cao nh Prostaglan din F2 d Một số môi trờng pha chế tinh dịch thờng dùng + Trong thực tiễn có nhiều loại môi trờng nh môi trờng Glucoza - Xitrat - trứng, môi trờng liên xô cũ, môi trờng T1l Công thức môi trờng Glucoza - Xitrat trứng cho loi gia súc Thành phần Cho tinh dịch Bò Cừu Ngựa Trâu Nớc cất lần (ml) 100 100 100 60 Glucoz y học khan 3,0 0,8 7,0 2,2 Glucoz (g) 3,3 0,9 7,5 Natri Xitrat 1,4 2,8 0,5 Lòng đỏ trứng (g) 20 20 0,8 40 Công thức số môi trờng liên xô cũ Chất liệu Nớc cất lần Glucoz y học khan TrilonB Natribicarbonat Natri xitrat Amon sulphat Tetrracyclin Lòng đỏ trứng ĐV ml g GXT-2 1000 60 GXTTR-2 1000 60 GXTS-8 1000 40 g g g g mg ml 1,85 0,60 1,78 50-100 2,44 0,80 1,78 50-100 30-40 2,6 0,5 3,8 1,8 50-100 30-40 bảo tồn to -120, bổ xung thêm lòng đỏ trứng giữ to 18 220 môi trờng không dùng lòng đỏ trứng Công thức môi trờng T1l3 v GXTr GXTr Chất liệu ĐV T1l3 Nớc cất lần ml 1000 1000 Glucoz y học g 46,6 30 khan Natri xitrat g 3,2 2,0 Trilon B g 1,5 Natribicarbonat g 0,5 Tetrracyclin g 0,05 0,05 Lòng đỏ trứng ml 50 50 o Ghi chú: bảo tồn t -13 bổ xung thêm lòng đỏ trứng 6.2 Kỹ thuật pha chế tinh dịch 6.2.1.Yêu cầu việc pha loãng tinh dịch: + Nhiệt độ môi trờng tổng hợp phải tơng đơng với nhiệt độ môi trờng tinh dịch Muốn ta dùng biện pháp cân nhiệt độ chậu thuỷ tinh đựng nớc ấm nhiệt độ 35 -360C 5-7 phút + Cơ giới: không chịu tác động xấu rung động sóc lắc + Đều: môi truờng tổng hợp phải hoà vào tinh dịch, tức phải đổ môi trờng vào tinh dịch, đổ tinh dịch cần ý đổ từ từ để tinh dịch chảy theo thành ống + Hiệu kinh tế kỹ thuật cao, pha loãng với tỷ lệ thích hợp 6.2.2 Bội số pha loãng Việc xác định bội số pha loãng có ý nghĩa quan trọng định tới tỷ lệ thu thai Nếu pha loãng vừa làm giảm thấp tỷ lệ thụ thai vừa làm giảm sức sống tinh trùng điều kiện thể, ngợc lại độ pha loãng thấp trớc hết làm lãng phí tinh dịch làm ảnh hởng tới hiệu kinh tế chăn nuôi đực giống Bội số pha loãng phụ thuộc vào nhiều yếu tố: giống tuổi, phẩm chất tinh dịch ,phơng thức sử dụng + Với bò: dạng tơi tuỳ theo nồng độ tinh trùng (C) pha loãng từ 5-50 lần tổng số tinh trùng liều phối phải 20 x106 có nghĩa số lợng liều tinh = VAC/ 20 x106 V tổng số ml tinh dịch môi trờng + lợn chủ yếu dùng dạng tơi bội số pha loãng tuỳ thuộc vào A C với lợn nội pha 1/1 - 1/3 cho nồng độ tinh trùng 1ml tinh dịch sau pha có từ 20 -30 x 106 liều tinh 30ml Lợn ngọai pha 1/3 - 1/10 cho nồng độ tinh trùng 1ml tinh dịch sau pha từ 30 -40 x 106 Liều phối cho lợn nái nội phải đảm bảo có 1x109 tinh trùng, lợn lai phải đạt 1.5 x 109 tinh trùng, lợn nái ngoại phải đạt 3.0 x 109 tinh trùng, 6.3 Bảo tồn tinh dịch: có phơng thức bảo tồn tinh dịch + Bảo tồn dạng lỏng: tinh trùng lợn 6-10o C bò -14 tới -20 o C, cừu 10o C + Bảo tồn dạng đông lạnh: sử dụng cho tinh dịch bò với nhiệt độ Ni tơ lỏng với nhiệt độ -79 tới - 193 o C có dạng: dạng viên, dạng Ampoul dạng cọng 6.4 Vận chuyển tinh dịch: tinh dịch pha chế xong đợc vận chuyển xa hay gần phụ thuộc vào yêu cầu sản xuất viị trí, địa điểm Khi vận chuyển cần phải đảm bảo yêu cầu sau + Nhiệt độ phải ổn định + Tránh tác động học + Tránh nhầm lẫn, đổ vỡ VII Kỹ thuật dẫn tinh 7.1 Khái niệm: Dẫn tinh trình ngời dùng dụng cụ chuyên dụng thích hợp để đa tinh dịch vào đờng sinh dục động dục điều kiện thích hợp Đây khâu cuối công tác thụ tinh nhân tạo định hiệu trình thụ tinh nhân tạo Phơng pháp xác định thời gian dẫn tinh: a Phơng pháp lâm sng: dựa vào biểu lâm sàng cục CQSD toàn thân gia súc để định thời gian dẫn tinh + Toàn thân: thời gian đầu vật tăng cờng hoạt động, sau giảm dần Đây giai đoạn vật mê, mê biểu trạng thái chịu đực mà giai đoạn khác nh thích gần đực giống gặp đực giống đứng trạng thái chịu đực + Cục bộ: âm hộ xung huyết tăng sinh lúc đầu mầu đỏ tơi (ở lợn) sau giảm dần chuyển sang mầu tái thâm, dịch nhờn từ âm đạo chảy lúc đầu loãng mầu trắng sau đặc mầu vàng ngà b Phơng pháp sinh vật: dùng đực thí tình để phát động dục giai đoạn chụi đực c Phơng pháp thời gian: sở đúc rút kinh nghiệm ngời ta rút thời gian thích hợp để phối tinh cho loài gia súc nh lợn nội phối vào cuối ngày thứ đầu ngày th lợn nái ngoại phối vào cuối ngày thứ đầu ngày thứ , bò cuối ngày đầu ngày 2, kể từ bắt đầu động dục, chó ngày thứ 11-12 giai đoạn động dục, ngựa trớc ngừng động dục ngày d phơng pháp sờ khám buồng trứng qua trực trng: phát nang trứng chín rõ lên bề mặt buồng trứng để định thời gian dẫn tinh e Các phơng pháp khác: + Phơng pháp dùng máy phát động dục: ngời ta dùng Oestrogen mette (đo độ dẫn điện âm đạo động dục) + Phơng pháp kết tinh cành dơng sỉ niêm dịch cổ tử cung: chụi đực nồng độ Na++, K+ tăng cao chúng làm kết tinh Protein niêm dịch cổ tử cung dùng kính hiển vi quan sát kết tinh theo hình giáng cành dơng sỉ niêm dịch cổ tử cung + Phơng pháp đo nhiệt độ: áp dụng để xác định thời điểm phối tinh cho chó nghiệp vụ cho kết tốt 7.3 Kỹ thuật dẫn tinh cho loi gia súc: + Trâu bò: Bò biểu động dục rõ trâu trâu động dục ngầm Trâu thờng biểu đêm lúc yên tĩnh, - 11 dịch chảy (soi đèn phát đợc) Thời gian động dục thờng tập trung khoảng 18-36 giờ, biến động 12-48 Con vật chụi đực niêm dịch đặc hơn, dính kéo dài 20cm mà không đứt Thời gian phối thờng vào cuối ngày đầu ngày 2, ứng dụng quy luật sáng, chiều nghĩa sáng quan sát thấy động dục chiều phối, chiều quan sát thấy động dục sáng hôm sau phối nên phối 02 lần sáng chiều Để tiến hành dẫn tinh cho trâu bò cần phải cố định trâu bò giá chắn dùng phơng pháp trực tràng cổ tử cung: găng tay đa qua trực tràng tìm cổ tử cung, nắm cổ tử cung, tay cầm dẫn tinh quản hay súng bắn tinh đa qua âm đạo Kết hợp tay lắp cổ tử cung vào dẫn tinh quản hay súng bắn tinh (chú ý đa chếch lên 15 200) đa dẫn tinh quản qua đợc lớp gấp niêm mạc cổ tử cung (3 sật) bơm tinh dịch vào Chú ý không đa dẫn tinh quản hay súng bắn tinh vào sâu > cm qua cổ tử cung + Ngựa: động dục theo mùa: thờng tháng đến tháng 10 Xác định thời gian dẫn tinh ngựa dựa vào tợng sau, thử đực chụi đực đợc, lâm sàng ngựa đái rắt, đuôi cong lên niêm dịch chảy dính, dài Ngoài vào thời gian động dục 5-6 ngày Để dẫn tinh cho ngựa cần ngời sau cố định an toàn, tay găng bôi trơn cầm dẫn tinh quản đa vào âm đạo cắm sâu vào cổ tử cung giữ chặt, ngời khác bơm tinh vào, sau kết thúc từ từ rút tay dẫn tinh quản + Lợn: dễ thờng dẫn tinh vào ngày thứ với lợn nái nội ngày thứ với lợn nái ngoại kể từ bắt đầu động dục (hoa tái, lợn mê) Chú ý sật + Dê, cừu: động dục theo mùa cừu thờng động dục vào mùa thu (tháng 9) dê thờng động dục vào mùa xuân mùa thu Động dục cừu âm thầm, khó phát Để xác định thời gian dẫn tinh ta dùng đực thí tình lần đầu chịu đực nhắc lại lần sau 8-10h Để dẫn tinh cho dê cừu phải cố giá cố định để đầu chúc xuống, dùng mỏ vịt nhỏ mở âm đạo, dùng seringe cắm vào cổ tử cung bơm tinh dịch vào Với dê cừu hiệu thấp, 30 - 40%, cao đạt 60% B K THUT CY TRUYN HP T I NHNG VN CHUNG 1.I Khái niệm: Cấy truyền hợp tử (TE Transplantation of Embryo) hay gọi di thực phôi, cấy ghép hợp tử, cấy chuyển phôi kỹ thuật mà ngời tiến hành đem hợp tử (do thụ tinh Invivo hay Invitrro) bố mẹ cấy truyền vào vào khác giống động dục thời gian thích hợp dụng cụ chuyên dụng thích hợp Đây nói kỹ thuật công nghệ sinh học trình độ cao giúp cho công tác cải tạo giống cách nhanh , hiệu 1.2 Lợi ích công nghệ cấy truyền hợp tử + Nâng cao sức sinh sản cao sản đặc biệt động vật đơn thai ví dụ bò cao sản tự nhiên đời (15 -16năm) cho đợc 10 bê có bê Nếu sử dụng TE bò cao sản lần khai thác trung bình 10E (8-20) năm khai thác đợc khoảng 50E chắn thu đợc 15-20 bê nh năm thu đợc số bê 2-3 đời bò sinh sản tự nhiên + Khai thác tổng hợp tính u việt bố mẹ: Kỹ thuật TTNT khai thác đợc tính u việt bố công nghệ TE khai thác đợc tính u việt bố mẹ nh cai sinh quý tử + Rút ngắn thời gian gây dựng đàn sản xuất cao sản nghĩa rút ngắn thời gian cải tạo giống Ví dụ để cải tạo dàn bò sữa ấn Độ phải 200năm, ứng dụng TE thời gian 16-20 năm + Giảm tới mức tối đa tổn thất, chi phí trình nhập nội giống gia súc cao sản + Đặt cở sở cho công nghệ đỉnh cao nh chia cắt phôi, xác định giới tính, kỹ thuật cấy chuyển gen I.3 Vài nét phát triển, tơng lai công nghệ TE a Điểm khởi dầu Thí nghiệm công nghệ phải kể đến thí nghiệm Walter Heape 1890 Tuy nhiên sau nhiều lý tôn giáo, nhân văn lĩnh vực không đợc tiếp tục mở rộng phát triển b Giai đoạn xây dựng sở Từ năm 20 kỷ 20 mà hiểu biết sinh lý sinh sản rõ ràng dặc biệt khám phá mối quan hệ vùng dới đồi tuyến yên (Hypothalamus Hypofisis) lĩnh vực sinh sản ngời ta tập trung nghiên cứu thành mà Walter Heape đa Đến năm 1960 vấn đề đợc nghiên cứu phát triển mạnh mẽ động vật thí nghiệm chuột thỏ gia súc nh bò dê cừu trí ngời, vào năm 1960 Thibanlt nhà khoa học Pháp thành công thụ tinh Invitro trứng thỏ sau 1966 ông ngời nghiên cứu thành công nuôi trứng bò Invitro tới tế bào từ nhà khoa học bắt đầu tập trung nghiên cứu với lĩnh vực + Gây rụng trứng nhiều (Hammond) + Gây động dục đồng loạt, đồng pha (Lauderdah 1972 ; Roche 1975 đặc biệt việc nghiên cứu thành công lĩnh vực làm chủ đợc vòng động dục của Roche + Đông lạnh hợp tử bò (Whitingham 1972) nghiên cứu khác vận chuyển hợp tử, dụng cụ thụ cấy kỹ thuật cấy không mổ đặc bieet đến năm 1978 cậu bé louis Braww cậu bé ống nghiẹm đời báo hiệu thành công lớn công nghệ TE Ngày công nghệ TE đợc ứng dụng cách sâu rộng nớc phát triển nh Mỹ, Anh, Phắp, Đức đợc coi nh công cụ kỹ thuật hữu hiệu lĩnh vực sinh sản Việt Nam công nghệ TE đợc Bùi Xuân Nguyên cộng nghiên cứu thành công Ba Vì Hà Tây năm 1981 từ năm 1986-1990 công việc đợc tập thể cán khoa học Trung tâm nghiên cứu Đà Lạt, ĐHNNI, Viện Chăn nuôi Quốc gia, Học viện quân y đẩy mạnh nghiên cứu kết dã có nhiều bò cao sản đợc tạo từ công nghệ TE xây dựng đợc quy trình công nghệ TE ổn định bò II CƠ Sở KHOA HọCcủa kỹ thuật cấy truyền hợp tử 2.1 khái quát : Trứng đợc thụ tinh vị trí 1/3 phía trớc ống dẫn trứng sau đợc di chuyển làm tổ tử cung Trong trình di chuyển trứng không ngừng phát triển cụ thể bò sau trứng đợc thụ tinh tạo thành hợp tử với 2n nhiễm sắc thể trình phân bào đợc tiến hành sau thụ tinh 66-72 có 8-16 tế bào sau trứng tiếp tục phân chia thành 16-32 tế bào lúc hợp tử ngày tuổi sau tế bào tiếp tục nhân lên đến giai đoạn 6-7 ngày tuổi hình thành phức hệ dày đặc tế bào Sau 7- ngày tính từ lúc thụ tinh túi phôi đợc hình thành thời gian Embryo nằm tự khoang tử cung đợc nuôi dỡng phần nhờ vào nguyên sinh chất tế bào, phần khác nhờ vào dịch tiết tử cung (sữa tử cung) Sau hợp tử bớc sang giai đoạn chúng làm tổ niêm mạc tử cung hình thành thai phát triển thành phôi thai bào thai 2.2 Một số kết luận chung - Trứng sau thụ tinh sống phát triển độc lập nhờ vào dinh dỡng dự trữ thân - Cần thiết phải thu hợp tử giai đoạn 5-8 ngày tuổi - Có thể cấy hợp tử vào tử cung khác với điều kiện trạng thái niêm mạc tử cung thích hợp với yêu cầu phát triển hợp tử IIi Các nội dung chủ yếu kỹ thuật cấy truyền hợp tử 3.1 Donors (các cho) Đó cao sản, đẹp, có sức sống cao, có sức khoẻ tốt có nghĩa đạt yêu cầu mong muốn cần đợc phát triển phát triển Những đợc phối tinh với đực cao sản, đẹp, khoẻ có tiềm di truyền đặc điểm tốt cao chúng đợc chăm sóc nuôi dỡng quản lý khai thác sử dụng quy trình kỹ thuật 3.2 Receptors (các nhận) Các nhận phải có khả sinh sản tốt, khoẻ mạnh không bệnh tật ngoại hình không đẹp sức sản xuất không cao Chúng phải có tầm vóc lớn để mang thai dễ đẻ chúng đợc chăm sóc nuôi dỡng quản lý khai thác sử dụng quy trình kỹ thuật 3.3 Super ovulation ( gây rụng trứng nhiều cho) Bình thờng động vật đơn thai rụng 01 trứng chu kỳ động dục động vật đa thai rụng số trứng 01 chu kỳ động dục Trong kỹ thuật TE, để nâng cao hiệu sinh sản tốt ngời ta chủ động gây động dục cho cho làm cho rụng trứng với số lợng gấp nhiều lần bình thờng Ví dụ bò ngời ta cho rụng lần tới 10-25 trứng Để gây siêu noãn chủ động ngời ta dùng công thức sau Sơ đồ gây rụng trứng nhiều lặp lại sớm Ngày Chọn bò Tiêm 10, 11, 12, 13 14 Nghỉ 14 ngày 21 35 Đặt CIDR Tiêm FSH Phối giống Đ Đặt CIDR Estradiol - Tiêm PGF2 - Thu phôi, phân loại phôi - Rút CIDR - Tiêm PGF2 Thụt CIDR ( Controlled Internal Drug Release) l dng- c cú giửa hỡnh ch T, cha 1,9g Progesteron PGF2( Prostaglandine nhúm F2 3.4 Thu trứng: Ngời ta dùng dụng cụ chuyên dụng thích hợp để thu trứng 3.5 Kiểm tra trứng: Đặt dịch thu nhiệt độ 37oC gạn loại bỏ dịch thụt rửa trứng sau san dần phần lại vào đĩa có chia ô dùng kính hiển vi soi để tìm kiểm tra hình thái trứng trứng đạt yêu cầu trứng có vỏ dày, sáng, Nhân có tế bào sau kiểm tra hút dồn trứng vào đĩa có môi trờng nuôi giũ trứng Sau cấy trứng tơi cho nhận nên cấy vào thời gian sớm tốt cấy 6h sau thu trứng cần bảo quản phôi dùng kỹ thuật đông lạnh phôi 3.6 Gây động dục đồng pha cho nhận Để đạt đợc kết sinh sản nhận cần phải gây động dục đồng loạt đồng pha với cho kỹ thuật cấy trứng tơi Nghĩa trứng cấy vào phải tơi thời điểm cấy lúc trạng thái tử cung sau động dục sử dụng công thức sau ngày Ngày Pg Ngày Pg Động dục không AI Đặt vòng Tháo vòng cấy tai Tháo tai 11-12 ngày Pg( trớc Donor 12 -18h) Động dục không AI 3.7 Kỹ thuật cấy hợp tử: Kỹ thuật cấy truyền hợp tử bao gồm bớc sau: + Cố định nhận vào giá cố định, vệ sinh moi hết phân trực tràng + Kiểm tra tử cung, kiểm tra buồng trứng xác định tuổi thể vàng tơng ứng với tuổi trứng + Nạp trứng vào pistolet( trứng đông lạnh phải giải đông, kiểm tra hình thái trứng, hoạt lực trứng) + Đa pistolet qua cổ tử cung khéo léo da đầu pistolet vào 1/3 -1/2 sừng tử cung có trứng rụng bơm hợp tử vào sau nhẹ nhàng rút pistolet + Chú ý: - Dụng cụ phải vô trùng - Thao tác phải khéo léo, nhẹ nhàng, xác, nhanh 3-5 phút - Con nhận phải đợc chăm sóc tốt, ý bổ sung đạm, khoáng, vitamin [...]... tinh dịch vào đờng sinh dục con cái khi con cái động dục trong điều kiện thích hợp Đây là khâu cuối cùng của công tác thụ tinh nhân tạo nó quyết định hiệu quả của cả quá trình thụ tinh nhân tạo 7 2 Phơng pháp xác định thời gian dẫn tinh: a Phơng pháp lâm sng: dựa vào những biểu hiện trên lâm sàng ở cục bộ CQSD và toàn thân gia súc cái để quyết định thời gian dẫn tinh + Toàn thân: ở thời gian đầu con vật... để phát hiện con cái động dục ở giai đoạn chụi đực c Phơng pháp thời gian: trên cơ sở đúc rút kinh nghiệm ngời ta rút ra thời gian thích hợp để phối tinh cho từng loài gia súc nh lợn nội phối vào cuối ngày thứ 2 đầu ngày th 3 còn lợn nái ngoại thì phối vào cuối ngày thứ 3 đầu ngày thứ 4 , ở bò cuối ngày 1 đầu ngày 2, kể từ khi bắt đầu động dục, ở chó ngày thứ 11-12 của giai đoạn động dục, ngựa trớc khi... cái sinh sản tự nhiên + Khai thác tổng hợp tính u việt của cả bố và mẹ: Kỹ thuật TTNT mới chỉ khai thác đợc tính u việt của bố thì công nghệ TE khai thác đợc tính u việt của cả bố và mẹ và nh vậy những con cai kém vẫn có thể sinh quý tử + Rút ngắn thời gian gây dựng đàn sản xuất cao sản nghĩa là rút ngắn thời gian cải tạo giống Ví dụ để cải tạo dàn bò sữa ấn Độ phải mất 200năm, nếu ứng dụng TE thời gian... tinh dịch từ đó nâng cao đợc sức sinh sản của đực giống - Kéo dài đc thời gian sống của tinh trùng trong điều kiện ngoài cơ thể - Nâng cao hiệu quả kinh tế trong chăn nuôi nói chung và TTNT nói riêng - Có thể khai thác hiệu quả kinh tế của đực giống tốt - Rút ngắn đợc thời gian cải tạo giống trên phạm vi rộng để nhanh chóng đẩy mạnh năng suất chăn nuôi nhất là đối với đại gia súc 6.1.2 Môi trờng pha chế... đó giảm dần Đây là giai đoạn con vật mê, khi mê nó biểu hiện trạng thái chịu đực mà ở các giai đoạn khác không có nh thích gần đực giống khi gặp đực giống thì luôn đứng ở trạng thái chịu đực + Cục bộ: âm hộ xung huyết tăng sinh lúc đầu mầu đỏ tơi (ở lợn) sau đó giảm dần chuyển sang mầu tái thâm, dịch nhờn từ âm đạo chảy ra lúc đầu loãng mầu trắng sau đó đặc mầu vàng ngà b Phơng pháp sinh vật: dùng đực... về tôn giáo, về nhân văn cho nên lĩnh vực này không đợc tiếp tục mở rộng và phát triển b Giai đoạn xây dựng cơ sở Từ những năm 20 của thế kỷ 20 khi mà những hiểu biết về sinh lý sinh sản rõ ràng hơn dặc biệt là sự khám phá về mối quan hệ giữa vùng dới đồi và tuyến yên (Hypothalamus Hypofisis) trong lĩnh vực sinh sản ngời ta mới tập trung nghiên cứu những thành quả mà Walter Heape đa ra Đến những... đó các tế bào tiếp tục nhân lên đến giai đoạn 6-7 ngày tuổi hình thành phức hệ dày đặc những tế bào Sau 7- 8 ngày tính từ lúc thụ tinh túi phôi đợc hình thành trong thời gian này Embryo nằm tự do trong khoang của tử cung và nó đợc nuôi dỡng một phần nhờ vào nguyên sinh chất của tế bào, phần khác nhờ vào dịch tiết của tử cung (sữa tử cung) Sau đó hợp tử bớc sang một giai đoạn mới chúng làm tổ ở niêm mạc... bố mẹ này cấy truyền vào vào những con cái khác cùng giống đã động dục ở thời gian thích hợp bằng những dụng cụ chuyên dụng và thích hợp Đây có thể nói là kỹ thuật công nghệ sinh học ở trình độ cao giúp cho công tác cải tạo giống một cách nhanh nhất , hiệu quả nhất 1.2 Lợi ích của công nghệ cấy truyền hợp tử + Nâng cao sức sinh sản của con cái cao sản đặc biệt là động vật đơn thai ví dụ một bò cái cao... 7.3 Kỹ thuật dẫn tinh cho các loi gia súc: + Trâu bò: Bò biểu hiện động dục rõ hơn trâu bởi vì trâu động dục ngầm Trâu thờng biểu hiện về đêm lúc yên tĩnh, 9 - 11 giờ dịch chảy ra (soi đèn có thể phát hiện đợc) Thời gian động dục thờng tập trung trong khoảng 18-36 giờ, biến động 12-48 giờ Con vật chụi đực niêm dịch đặc hơn, dính có thể kéo dài 20cm mà không đứt Thời gian phối thờng vào cuối ngày 1 đầu... tinh trùng Ngoài ra ngời ta có thể bổ sung một số chất có hoạt tính sinh học cao nh Prostaglan din F2 d Một số môi trờng pha chế tinh dịch thờng dùng + Trong thực tiễn hiện nay có nhiều loại môi trờng nh môi trờng Glucoza - Xitrat - trứng, môi trờng của liên xô cũ, môi trờng T1l 3 Công thức môi trờng Glucoza - Xitrat trứng cho các loi gia súc Thành phần Cho tinh dịch Bò Cừu Ngựa Trâu Nớc cất 2 lần (ml) ... lợng tinh dịch: động vật sinh sản theo mùa mùa sinh sản có trình sản sinh tinh dịch, động vật không sinh sản theo mùa vào mùa xuân, mùa thu mùa đông tinh dịch tốt mùa hè, gia súc nuôi vùng núi cao... cục CQSD toàn thân gia súc để định thời gian dẫn tinh + Toàn thân: thời gian đầu vật tăng cờng hoạt động, sau giảm dần Đây giai đoạn vật mê, mê biểu trạng thái chịu đực mà giai đoạn khác nh thích... dùng đực thí tình để phát động dục giai đoạn chụi đực c Phơng pháp thời gian: sở đúc rút kinh nghiệm ngời ta rút thời gian thích hợp để phối tinh cho loài gia súc nh lợn nội phối vào cuối ngày