BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRUỒNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC Tự NHIÊN TRẦN VÃN TÍNH BƯỚC DẦU NGHIÊN CỨU MỘT sô CHẤT ẢNH HƯỞNG VÀ ĐIỀU KIỆN HOẠT DỘNG TỐI UỊJ CỦA ENZYM LUẬN ÁN THẠC SỸ KHOA HỌC HOÁ HỌC CHUYÊN NGÀNH: HOÁ HỌC HŨU '^ , A MA • -HUM :■ Ví ; Nc M-lsịH Hướng dẫn khoa học: PGS.TSKH Nguyến Đình Triệu TS Nguyễn Anh Trí |\ỌI í ! MỤC LỤC ĐẬT VẤN ĐỀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT ('HƯƠNG 1: TổNG QUAN TÀI LIỆU 1.1- Cacboxylesteraza: Danh pháp, phân bố, cấu trúc, sinh tổng hợp, chức sinh AdCMV: AdenoCytoMegaloVirus lý bệnh lý thể 1.1.1- Danh pháp phân bố cacboxylesteraza ANAE: a-naphtylacetate 1.1.2- Cấu trúc ANAE 1.1.3- Sinh tổng hợp ANAE Asp: Aspartic 1.1.4- Chức sinh lý bệnh lý ANAE thể 1.1.5- ứng dụng ANAE y học .12 1.2- Cơ chế, điều kiện tối ưu yếu tố ảnh hưởng đến hoạt động xúc tác phản CE: CacboxyEsteraza ứng thuỷ phân liên kết este ANAE 16 1.2.1- Cơ chế điều kiện tối ưu xúc tác phản ứng thuỷ phân liên kết este CPT-11: 7-ethyl-10-[l-piperidino-l-piperidino] carbonyloxy-camptothecin ANAE .16 1.2.2- Các chất ảnh hưởng đến hoạt động xúc tác cho phản ứng thuỷ phân liên kết ELISA: Enzym - Linked ImmunoSorbent Assay - Kỹ thuật hấp thụ miễn este ANAE .19 1.3- Các phương pháp xác định ANAE 21 1.3.1- Phương pháp phá vỡ tế bào 22 dịch gắn enzym 1.3.2- Phương pháp không phá vỡ tế bào hay hoá học tế bào 25 1.3.3- Những ưu nhược điểm hai phương pháp phân tích 27 FAB: French-American-Bristish - Bảng phân loại Pháp -Anh - Mỹ 1.3.4- ứng dụng toán học tin học nghiên cứu enzym 28 CHUƠNG 2: Đối TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 32 2.1Đối tượng 32 FACEES: Fatty Acid 2-CloroEthyl Este Synthase 2.2- Phương pháp nghiên cứu 32 i / 3.1- Kết tối 3.1.1- Các tham ưu hoá hình học phương pháp tính lượng tử gần 42 số vể mật độ điện tích electron cấu trúc lập thể 42 3.1.2- Kết nãng lượng, nhiệt hình thành phân tử (kcal/mol) .49 3.2- Kết tối ưu hoá thực nghiệm theo phương pháp đơn hình 53 3.3- Kết chất có ảnh hưởng tới hoạt động xúc tác ANAE 57 3.3 L- Kết tiêu đối chứng: 57 3.3.2- Nhóm halogen kim loại nặng: .57 3.2.3- Nhóm chất vitamin kháng sinh: 58 3.3.4- Nhóm chất bảo vệ thực vật thuốc bảo quản: 59 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 63 4.1 - Tối ưu hoá hình học 63 4.1.1- Về mật độ điện tích electron: 63 4.1.2- Về mặt lượng: 64 4.1.3- Về mặt cấu trúc lập thể: 66 4.2- Về tối ưu hoá thực nghiệm theo phương pháp đơn hình 67 4.2.1- Về nhiệt độ 67 4.2.2- Về pH 68 4.2.3- Về thời gian 68 4.2.4- Về nồng độ chất: 68 4.3 - Về ảnh hướng chất hoá học 69 4.3.1 - Về ảnh hưởng muối natri halogenua ion kim loại 69 4.3.2- Về ảnh hưởng kháng sinh vitamin 70 11 / ĐẶT VẤN ĐỂ Cacboxvlesteraza bạch cầu enzym thuỷ phân liên kết este axit cacboxvlic với ancol (E.c 1.1.1), enzym không gồm nhiều isoenzym, tổng hợp sinh học ribosom nguyên sinh chất lưới nội mô Chức sinh lý esteraza thuỷ phân dị nguyên vi khuẩn, độc tố trình chuyển hoá tế bào tức tham gia vào chức khác tế bào bạch cầu Vì loại bạch cầu khác có chứa cacboxylesteraza khác nhau, có khả xúc tác phản ứng thuỷ phân cho chất tuỳ thuộc vào chức Sự khác phát chất, chất ức chế, chất hoạt hoá hay thay đổi điều kiện môi trường pH, nhiệt độ, chất cố định Nhiều loại enzym phát phân loại nhờ kỹ thuật ức chế hoạt hoá như: Phát esteraza bạch cầu týp A B nhận nhờ chất ức chế hợp chất photpho hữu cơ: týp A không bị ức chế týp B bị ức chế Ngoài nghiên cứu ức chế hoạt hoá cho phép hiểu sâu chế hoạt độne enzym, tác dụng, ảnh hưởng chất đưa vào thể cách chủ động hay vô tình như: dược phẩm, thuốc trừ sâu, hoá chất Việc nghiên cứu chất ức chế hoạt hoá trở thành đề tài quan tâm thường xuyên đăng tải tạp chí khoa học Đúng giáo sư Kaphalia khoa Y học Trường Đại học tổng hợp Texas viết tạp chí "Hoá học độc chất" tháng 2/1997 sau: "Việc nghiên cứu chất ức chế, hoạt hoá thực nghiệm độc chất enzym Iihữnq sà khoa học tảng giúp nắm vững 11 quyên nhân bệnh sinh bệnh người" [79] Hiện phương pháp nhuộm phát cacboxylesteraza mà cụ thể anaphtylacetate esteraza (ANAE) ứng dụng rộng rãi phòng xét nghiệm huyết học để chẩn đoán dòng tế bào bệnh ung thư máu tiêu chuẩn để xếp loại thể bệnh theo FAB Ngoài ra, HW Macedo c.s (1991) dùng phương pháp nhuộm hoá học tế bào ANAE để phát giảm tế bào lymphocytes T bệnh nhàn phong so sánh với phương pháp phát marker kháng thể đơn dòng đến kết luận: phương pháp nhuộm ANAE phát số lượng tế hào lvmphocytes T không đặc hiệu kỹ thuật miễn dịch song kỹ / thuật tin cậy, kinh tế, không đòi hỏi máy móc đắt tiền đáp ứng nhu cầu chẩn đoán điều trị [98 ] Về mặt chất lượng kỹ thuật đòi hỏi phải đạt tính đặc hiệu tức phải phát enzym esteraza, giữ nguyên vị trí chúng tế bào sóng thời điểm nghiên cứu Vì kỹ thuật phát esteraza kỹ thuật khó, trình bày kỹ thuật chịu tác động nhiều yếu tố như: nhiệt độ chất cố định, thời gian bán huỷ, nồng độ chất, tác dụng chất ức chế hoại hoá dễ dẫn đến kết sai khác với cấu trúc tổ chức esteraza bạch cầu tế bào sống Tại Việt Nam có vài phòng thí nghiệm triển khai kỹ thuật ứng dụng vào việc phân loại dòng tế bào ung thư máu Nhưng kết nhuộm có sai lệch độ đặc hiệu so với kỹ thuật marker cần điều chỉnh tới 26,19% [10] Nguyên nhân sai lệch kỹ thuật nhuộm cúa chưa đạt độ nhạy theo yêu cầu kỹ thuật phân loại bạch cầu FAB dẫn tới nhận định sai kết VI vấn đề mà quan tâm phái tìm cách nâng cao chất lượng nhuộm giúp cho việc chấn đoán xác bệnh dùng đến kỹ thuật nhuộm ANAE Xuất phát từ điều trình bày định chọn đề tài: “Bước đầu nghiên cứu số chất ảnh hưởng điều kiện hoạt động tối ưu enzym cacboxyesterciza bạch cầu người phương pháp nhuộm hoá học tê bào” Vói mục tiêu: - Tìm hiểu chế động học phản ứng nhuộm ANAE thông qua tham số lượng tử từ rút điều kiện tối ưu, yếu tố có khả ảnh hưởng đến phản ứng - Tìm điều kiện tối ưu mặt thực nghiệm cho phản ứng nhuộm ANAE bạch cầu CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1- CACBOXYLESTERAZA: DANH PHÁP, PHÂN Bố, CẤU TRÚC, SINH TổNG HỢP, CHỨC NĂNG SINH LÝ VÀ BỆNH LÝ TRONG THỂ Cucboxvlesteraza bạch cầu enzym nằm nhóm enzym cacboxylesteraza nên nghiên cứu enzym cấn phải dựa hiểu biết cacboxylesterazu nói chung 1.1.1- Danh pháp phân bô cacboxylesteraza Danh pháp: Cacboxyesteraza (CE) enzym thuỷ phân liên kết este axit cacboxylic ancol Cũng enzym khác CE có nhiều tên gọi khác Trong tế bào CE tìm Gomori (1952) phương pháp nhuộm hoá học tế bào tế bào bạch cầu monocytes macrophages gọi monocytes/macrophages esteraza [20, 29] Sau người ta thường gọi tên phân loại enzym cách lấy tên chất đặc hiệu enzym cộng thêm đuôi aza Nhưng CE có khả thuỷ phân nhiều loại chất khác (19 chất) gọi esteraza không đặc hiệu [36] Tuy anaphtylaxetat chất đặc hiệu thường sử dụng nghiên cứu để gọi theo tên chất CE gọi alpha naphtyl acetat esteraza (ANAE) Khi nghiên cứu cấu trúc tâm hoạt động chế thuỷ phân người ta thấy vị trí xúc tác cho phản ứng cắt đút liên kết este nằm gốc serin nên người ta gọi serin esteraza Sau để thống tên gọi cho enzym nói chung Hội Hoá sinh quốc tế (UIC) đưa cách phân loại dựa loại phản ứng chế phản ứng Như nhóm enzym có tên gọi thức cacboxyesteraza nằm nhóm hệ thống enzym thuỷ phân (E.c.3.1 1.1) Tuy việc sử dụng tên gọi enzym theo chất giúp rõ isoenzym đặc hiệu chất nehiên cứu, đề tài sử dụng danh pháp thường gọi y văn alpha naphtol acetate esterase (ANAE) / Về phân bở: Các công trình công bố gần cho thấy ANAE có mặt hầu hết mỏ CO' người Hàm lượng ANAE cao tế bào thực bào, sau đến tế bào gan, ruột, dày, phổi, tiền liệt tuyến, tuỵ não [96, 145, 168] Bên cạnh B Yan c.s (1994) kỹ thuật Western immunoblotting không thấy có có ARN thông tin (mRNA) ANAE týp B tế bào tuyến sinh dục, phổi, não tim [185] Ở gan G.c Budd c.s kỹ thuật đo hình thái định lượng phát xạ đồ hiển vi điện tử tìm thấy 64- 67% vùng gan có ANAE dương tính [145] Hàm lượng ANAE phân bố khác mô tuỳ thuộc vào chức nhiệm vụ mô thể Đối với tế bào máu, tùy thuộc vào dòng tế bào giai đoạn trưởng thành mà phân bố khác Trong dòng bạch cầu tế bào đơn nhân thực bào dòng monocytes, macrophages có hàm lượng ANAE lớn nhấl sau đến dòng bạch cầu đoạn trung tính, đòng hồng cầu dòng lymphocytes [1 17, 122, 155] Đặc biệt tế bào huỷ cốt bào cho phản ứng ANAE dương tính mạnh (JR Connor c.s -1995) [39] Một điều cần lưu ý giai đoạn phát triển dòng tế bào tế bào trung gian thường có hàm lượng ANAE lớn tế bào đẩu dòng tế bào trưởng thành Khi quan sát kính hiển vi điện tử tiêu nhuộm hoá học tế bào, RM Hoedemakers c.s (1995) cho hàm lượng ANAE tỷ lệ với kích thước tế bào [67] Như có mặt ANAE để đảm nhiệm chức tế bào thể nên có the có tế bào mà lại tế bào khác Ví dụ dòng bạch cầu monocyles có nhiệm vụ thực bào nên cần có hàm lượng ANAE lớn dòng tế bào khác để đảm nhiệm chức nâng thuỷ phân chống lại dị nguyên xâm nhập từ bên vào [84] Trong tế bào phân bố ANAE khác phận tế bào Đối với bạch cầu hàm lượng ANAE cao màng tế bào, tiểu bào quan, dịch bào tương dịch nhân Nơi dự trữ phóng thích ANAE nhiều lưới nội AN AE có mặt mặt màng bào tương mặt bao quanh thân tế bào Kurloff Còn M Frage c.s (1991) phân tích ảnh tán xạ ngược (Ì)LU kscattered) ảnh electron thứ cấp (secondary electron) thấy tế bào lymphocytes ANAE tập trung chủ yếu màng hạt bào tương tế bào [30] Các công trình công bố gần cho thấy hầu hết ANAE liên kết với màng tế bào [17, 33, 49] 1.1.2- Cấu trúc ANAE ANAE enzym thuộc loại serin eseraza tức có tâm hoạt động cấu tạo ba axit amin Ser-His-Asp/Glu [182] Đây nhóm enzym không đồng mặt cấu trúc Các công trình công bố gần cho thấy tổ chức khác ANAE có cấu trúc khác Kích thước enzym vào khoảng 2-3 Ả Trọng lượng phân tử từ 19.500 đến 180.000 dantol Bằng kỹ thuật sắc ký cột sephadex Kaphalia c.s ị1997) xác định ANAE microsome tế bào mỡ gồm hai phần phần có trọng lượng phân tử 60 kDa phần 180 kDa Phần 180 kDa trimer bị ức chế diisopropyl florophotphat tức thuộc loại B esteraza [79] mặt điện tích ANAE enzym mang điện tích âm isoenzym nằm vùng đẳng điện (pl) từ 5,5-6,1 [146, 180] Nhiều isoenzym có tính đặc hiệu cao cho dòng tế bào coi giá trị tham chiếu để nhận dạng dòng tế bào SM Ginac c.s (1996) phương pháp điện di tìm isoenzym ANAE đặc hiệu cho dòng tế bào máu khác nhau: Monocytesl/Monocytes2 tìm thấy tế bào dòng monocytes, Myl/My2 tế bào dòng tuỷ, bệnh đa u tuỷ, dòng hồng cầu, dòng tiểu cầu, Lyml/Lym2 tế bào lymphocytes cuối Und dòng tế bào chưa biệt hoá [59] Có thể khẳng định ANAE nhóm enzym không tế bào khác bào quan khác ANAE khác Ớ tế bào thận chuột ANAE có hai isoenzym [22] cs Scott c.s, bàng phương pháp điện di thu ANAE tinh khiết nhờ kỹ thuật săc ký mảnh lưới nội nguyên sinh chất từ tế bào dòng tuỷ tìm hai isoenzym ANAE Hai isoenzym thường có mặt tế bào hai dòng bach cầu đoạn monocytes Sự khác biệt hai isoenzym khác ức i chế hởi nhiệt độ NaF [45] Trong lysosom tế bào monocytes, HJ Radzun c.s tìm isoenzym đặc hiệu cho vùng đẳng điện khác Theo ngân hàng liệu cấu trúc enzym Trung tâm Thông tin kỹ thuật sinh học Quốc gia Hoa Kỳ ( NCtìỉ) kỹ thuật Northern blot năm 1991, S.Munger c.s giải mã mARN tinh khiết chiết xuất từ tế bào monocytes tìm cấu trúc bậc ANAE gồm 503 axit (Xin xem phẩn phụ lục ỉ) Trên đồ gen người ANAE bạch cầu mã hoá nhiễm sắc thể thứ 16 [105] Trọng lượng phân tử 60 kDa bị ức chế diisopropyl florophotphat nồng độ mM Tác giả thấy có giống đến 90% cấu trúc ANAE bạch cầu với ANAE microsome cứa tế bào gan ANAE tế bào gan có cấu trúc gồm 507 axit amin tâm hoạt động gồm Ser - His - Asp [95, 113] Các cấu trúc bậc hai, bậc ba bậc bốn tiếp tục nghiên cứu Khi phân tích gen lambda mã hoá ANAE tế bào gan, T Langmann c.s (1997) nhận thấy chúng gồm trimer, xếp chồng lên với đoạn dài khoảng 30 kb làm thành 14 cầu ngoại có chiều dài từ 39 đến 379 bp [88, 150] Song vị trí mà nhà khoa học quan tâm vùng trung tâm hoạt động enzym Tất ANAE có tâm hoạt động bao gồm gốc nucleophil Ser, gốc bazơ His gốc axit Asp Ổ số isoenzym ANAE gốc axit Asp thay Glu [185, 186] 1.1.3- Sinh tổng họp ANAE Bản chất ANAE protein nên tổng hợp protein khác Quá trình tổng hợp diễn ri bosom Các ribosom thường gắn với màng lưới nội nguyên sinh Lưới nội nguyên sinh (reticuloendothelium) hệ thống ống nhỏ xuyên qua toàn tế bào đặc biệt phát triển tế bào chế tiết cao tế bào gan chiếm tới 70% Lưới nội nguyên sinh thành phần màng nhân, biệt hoá thành lỗ nhân, nhân liên hệ gần trực tiếp với nguyên sinh chất Tại ARN thông tin (mARN) sau chép thông tin di truyền từ ADN nhân qua cách dễ dàng tiến tới ribosom có gắn với màng lưới nội sinh gọi màng cửa sổ, màng tập trung nhiều nguyên sinh chài Các mARN qua lỗ mà vào nguyên sinh chất để gắn vào ribosom tự nguyên sinh chất Quá trình tổng hợp ANAE diễn ribosom gắn với màng lưới nội nguyên sinh chất chủ yếu mARN bạch cầu monocytes macrophage để tổng hợp ANAE bao gồm 1766 bases (S.Munger- 1991) Sự mã di truyền từ ADN sang mARN tế bào monocytes vùng Spl [87] Quá trình tổng hợp ANAE điều chỉnh hormon tăng trưởng chất nội tiết tố thể Điều chứng minh trình tổng hợp isoenzym ANAE ES-4 điều chỉnh thyroxin nội tiết tố tuyến giáp Các tiền hormon sinh dục như: Demethasone gây kìm hãm trình mã mANR dẫn tới làm giảm trình tổng hợp số isoenzym ANAE, testosteron kích thích tổng hợp ANAE [43, 54, 70, 140, 189] Các isoenzym chịu điều chỉnh hormon gọi ANAE phụ thuộc hormon sinh dục ANAE-29 isoenzym điển hình cho nhóm này, trình tổng hợp ANAE-29 mô phụ thuộc vào nồng độ testosterol huyết tương [178] Trong bệnh đái đường hàm lượng ANAE tuyến thượng thận thường giảm rõ rệt RD Duan c.s (1993) cho thiếu hụt insulin gây cảm ứng ức chế tổng hợp ANAE tuyến thượng thận [47] Cũng trình sinh học khác việc tổng hợp ANAE kích thích phản ứng cảm ứng chất đặc hiệu isoenzym HA Van Lith c.s thấy trình tổng hợp ANAE huyết tương ruột tăng lên tăng chế độ ãn dầu dừa, dầu oliu dầu ngô người bị bệnh đái đường Tác giả cho có tăng có cảm ứng chất isoenzym ANAE [173] Sau tổng hợp ANAE vận chuyển vào lưới nội nguyên sinh chất, từ ANAE tiếp tục đưa vào lysosom, ty lạp thể chủ yếu gắn với mặt màng tế bào [114] Ngoài có nhiều loại thuốc gây ức chế hay làm tăng tổng hợp ANAE bạch cầu như: hexametylen bisaxetamit làm tăng ANAE tế bào ung thư dòng tuỷ chưa biệt hoá U- Lange Stamford Connecticut, l lh edition, 1998, p.7 58 Gignac SM, Drexler HG: Monocytes-specific esterase isoenzyme demonstrated by isoelectric focusing, Electrophoresis 1990 Oct, volume 11, issue 10, p.819- 24 59 Gignac SM, Hu ZB, Denkmann SA, Uphoff CC, Drexler HG: Esterase isoenzyme profiles of 255 leukemia-lymphocytesma cell lines from all hematopoietic cell lineages, Leuk Lymphocytesma 1996 Jun, volume 22, issue 1- 60 2, p 143-51 Gjellesvik DR, Lorens JB, Male R: Pancreatic carboxylester lipase from Atlantic salmon , issue Salmo salar cDNA sequence and computer-assisted modelling of tertiary structure, Eur J Biochem 1994 Dec 1, volume 226, issue 2, p.603-12 61 Goullet P, Picard B: Electrophoretic type B2 of carboxylesterase B for characterisation of highly pathogenic Escherichia coli strains from extra- intestinal infections, J Med Microbiol 1990 Sep, volume 33, issue 1, p.l 1-6 62 Graffner-Nordberg M, Sjodin K, Tunek A, Hallberg A Synthesis and enzymatic hydrolysis of esters, constituting simple models of soft drugs, Chem Pharm Bull , Tokyo 1998 Apr, volume 46, issue 4, p.591-601 79 Association of carboxylesterase B electrophoretic pattern with presence and expression of urovirulence factor determinants and antimicrobial resistance among strains of Escherichia coli that cause urosepsis, Infect Immun 1991 Jul, volume 59, issue 7, p.2311-5 76 Kadner SS, Katz J, Finlay TH: Esterase-1: developmental expression in the mouse and distribution of related proteins in other species, Arch Biochem Biophys 1992 Aug 1, volume 296, issue 2, p.435-41 77 Kai H, Arai T, Yasuda F: Accomplishment of time-interval activation of esterase A4 by simple removal of pin fraction, Chronobiol Int 1999 Jan, volume 16, issue 1, p.51-8 78 Kambarage DM, Bland PW, Stokes CR, Brown P, Skuse AM: Ultrastructural, histochemical and immunohistochemical features of porcine intestinal lamina propria macrophages, peripheral blood monocytes and splenic adherent cells, J Comp Pathol 1995 Jan, volume 112, issue 1, p.63-77 79 Kaphalia BS, Fritz RR, Ansari GA: Purification and characterization of rat liver microsomal fatty acid ethyl and 2-chloroethyl ester synthase and their relationship with carboxylesterase, issue pi 6.1, Chein Res Toxicol 1997 Feb, volume 10, issue 2, p.211-8 80 Karotam J, Delves AC, Oakeshott JG: Conservation and change in structural and 5' flanking sequences of esterase in sibling Drosophila species, Genetica 1993, volume 88, issue 1, p 11-28 81 treatment of solid tumors, J Clin Invest 1998 Apr 15, volume 101, issue 8, p 1789-96 84 Kudweis M, Lojda Z, Julis I, Lenhardt L, Marcanik J, Svicky E: Synthesis of nonspecific esterase in small intestine enterocytes during experimental coccidiosis in suckling pigs, Vet Med , issue Praha 1991 Aug, volume 36, issue 8, p.467-75 Czech 85 Kugusheva LI, Nesterov VP, Rozengart VI, Dorenskaia GM, Kulieva AM: A comparative study of carboxylesterase in the white mouse and in the caterpillar of the cotton bollworm Heliothes armigera, Zh Evol Biokhim Fiziol 1994 Sep- Oct, volume 30, issue 5, p 650-5 Russian 86 Laguens G, Goni JM Jr, Laguens M, Goni JM, Laguens R: Demonstration and characterization of HLA-DR positive cells in the stroma of human endometrium, J Reprod Immunol 1990 Sep, volume 18, issue 2, p 179-86 87 Langmann T, Aslanidis C, Schuierer M, Schmitz G: Differentiation-dependent expression of a human carboxylesterase in monocytescytic cells and transcription factor binding to the promoter, Biochem Biophys Res Commun 1997 Jan 3, volume 230, issue 1, p.215-9 88 Langmann T, Becker A, Aslanidis C, Notka F, Ullrich H, Schwer H, Schmitz G: Structural organization and characterization of the promoter region of a human carboxylesterase gene, Biochim Biophys Acta 1997 Jan 3, volume 1350, issue 1, p.6574 89 Laurent A, Debart F, Lamb N, Rayner B: Esterase-triggered fluorescence of fluorogenic 82 Jan, volume 26, issue 1, p.60-5 92 Lee W, Ryu J, Hah J, Tsujita T, Jung CY: Association of carboxyl esterase with facilitative glucose transporter isoform , issue GLUT4 intracellular compartments in rat adipocytes and its possible role in insulin-induced GLUT4 recruitment, J Biol Chem 2000 Apr 7, volume 275, issue 14, p 10041-6 93 Lehnert BE, Valdez YE, Sebring RJ, Lehnert NM, Saunders GC, Steinkamp JA: Airway intra-luminal macrophages: evidence of origin and comparisons to alveolar macrophages, Am J Respir Cell Mol Biol 1990 Oct, volume 3, issue 4, p.377-91 94 Lidberg U, Nilsson J, Stromberg K, Stenman G, Sahlin P, Enerback S, Bjursell G: Genomic organization, sequence analysis, and chromosomal localization of the human carboxyl ester lipase , issue CEL gene and a CEL-like , issue CELL gene, Genomics 1992 Jul, volume 13, issue 3, p.630-40 95 Long RM, Calabrese MR, Martin BM, Pohl LR: Cloning and sequencing of a human liver carboxylesterase isoenzyme, Life Sci 1991, volume 48, issue 11, p.PL43-9 96 Lund-Pero M, Jeppson B, Arneklo-Nobin B, Sjogren HO, Holmgren K, Pero RW: Nonspecific steroidal esterase activity and distribution in human and other mammalian tissues, Clin Chim Acta 1994 Jan 14, volume 224 , issue 1, p 9-20 97 Lutty GA, Cao J, McLeod DS Relationship of polymorphonuclear leukocytes to capillary dropout in the human diabetic choroid, Am J Pathol 1997 Sep, volume 151, 83 profiles of esterase activities, Toxicol Sci 1998 Dec, volume 46, issue 2, p.211- 22 111 Muderhwa JM, Schmid PC, Brockman HL: Regulation of fatty acid 180 exchange catalyzed by pancreatic carboxylester lipase Mechanism and kinetic properties, Biochemistry 1992 Jan 14, volume 31, issue 1, p 141-8 112 Mukherjee JJ, Jay FT, Choy PC: Purification, characterization and modulation of a microsomal carboxylesterase in rat liver for the hydrolysis of acyl-CoA, Biochem J 1993 Oct 1, volume 295 , issue Pt 1, p.81-6 113 Munger.JS, Shi.GP, Mark.EA, Chin.DT, Gerard.C and Chapman.HA: A serin esterase released by human alveolar macrophages is closely related to liver microsomal carboxylesterases,, Journal Biol chem, 10/05/1991, p.266 114 Murakami K, Takagi Y, Mihara K, Omura T: An isozyme of microsomal carboxyesterases, carboxyesterase Sec, is secreted from rat liver into the blood, J Biochem , issue Tokyo 1993 Jan, volume 113, issue 1, p.61-6 115 Myers MA, Healy MJ, Oakeshott JG: Effects of the residue adjacent to the reactive serine on the substrate interactions of Drosophila esterase 6, Biochem Genet 1993 Aug, volume 31, issue 7-8, p.259-78 116 Nagy A, Plonowski A, Schally AV: Stability of cytotoxic luteinizing hormone- releasing hormone conjugate , issue AN-152 containing doxorubicin 14-0- hemiglutarate in mouse and human serum in vitro: implications for the design of preclinical studies, Proc Natl 85 to pancreatic carboxylic ester hydrolase, Eur J Biochem 1990 Sep 11, volume 192, issue 2, p.543-50 120 Nilsson J, Hellquist M, Bjursell G: The human carboxyl ester lipase-like , issue CELL gene is ubiquitously expressed and contains a hypervariable region, Genomics 1993 Aug, volume 17, issue 2, p.416-22 121 Okamoto Y, Tanigawa T, Tanaka Y, Kameie T, lino A, Kasagi N, Minami S: Scanning electron microscopic and cytochemical analyses of alveolar and peritoneal macrophages of mice, dogs and cats, J Vet Med Sci 1998 Oct, volume 60, issue 10, p 1145-8 122 Okawa H, Nagasawa M, Morio T, Takase K, Tanaka K, Yata J, Dan K, Nomura T, Sakamaki H, Onozawa Y, et al: Peroxidase-negative and myelomonocytescytic antigenpositive acute leukemia, Int J Hematol 1992 Apr, volume 55, issue 2, p 165-71 123 Omar MS, Raoof AM, al-Amari OM: Histochemical distribution of esterases in adult Onchocerca fasciata , issue Filarioidea: Onchocercidae, Trop Med Parasitol 1993 Dec, volume 44, issue 4, p.295-8 124 Ovnic M, Tepperman K, Medda S, Elliott RW, Stephenson DA, Grant SG, Ganschow RE: Characterization of a murine cDNA encoding a member of the carboxylesterase multigene family, Genomics 1991 Feb, volume 9, issue 2, p.344-54 125 Patel D, Scott CS: Inhibitor studies of purified haemopoietic , issue myeloid cell esterases Evidence for the existence of distinct enzyme species, Biochem Pharmacol 86 leukocytes' response to vaccine stimulation, Eur J Histochem 1996, volume 40, issue 1, p.57-66 129 Picard B, Journet-Mancy C, Picard-Pasquier N, Goullet P: Genetic structures of the B2 and B1 Escherichia coli strains responsible for extra-intestinal infections,J Gen Microbiol 1993 Dec, volume 139 , issue Pt 12, p.3079-88 130 Pindel EV, Kedishvili NY, Abraham TL, Brzezinski MR, Zhang J, Dean RA, Bosron WF: Purification and cloning of a broad substrate specificity human liver carboxylesterase that catalyzes the hydrolysis of cocaine and heroin, J Biol Chem 1997 Jun 6, volume 272, issue 23, p 14769-75 131 Poirie M, Raymond M, Pasteur N: Identification of two distinct amplifications of the esterase B locus in Culex pipiens , issue L mosquitoes from Mediterranean countries, Biochem Genet 1992 Feb, volume 30, issue 1-2, p 13-26 132 Pophdf.B: Inhibitors of sensillar eaterase reversibly block the responses of moth pheomone receptor cells, Journal of comparative Physiology A, 1998, Volume 183, Issue 2, p 153 133 Potter PM, Pawlik CA, Morton CL, Naeve CW, Danks MK: Isolation and partial characterization of a cDNA encoding a rabbit liver carboxylesterase that activates the prodrug irinotecan , issue CPT-11, Cancer Res 1998 Jun 15, volume 58, issue 12, p.2646-51 87 cDNA encoding a human liver carboxylesterase, Gene 1991 Dec 15, volume 108, issue 2, p.289-92 139 Robbi M, Beaufay H, Octave JN: Nucleotide sequence of cDNA coding for rat liver pi 6.1 esterase , issue ES-10, a carboxylesterase located in the lumen of the endoplasmic reticulum, Biochem J 1990 Jul 15, volume 269, issue 2, p.451-8 140 Ronai A, Beming W, Gaa A, von Deimling O: Esterase-30 , issue ES-30 of the house mouse: biochemical characterization and genetics of a new carboxylesterase isozyme linked to cluster-2 loci on chromosome 8, Biochem Genet 1993 Aug, volume 31, issue 7-8, p.279-94 141 Ross DW, Bishop C, Henderson A, Kaplow L: Whole blood staining in suspension for nonspecific esterase and alkaline phosphatase analyzed with a Technicon H - l , Cytometry 1990, volume 11, issue 4, p.552-5 142 Rune GM, de Souza P, Merker HJ: Ultrastructural and histochemical characterization of marmoset , issue Callithrix jacchus Leydig cells during postnatal development, Anat Embryol , issue Berl 1991, volume 183, issue 2, p 179-91 88 camptothecin prodrugs, Cancer Res 1996 Apr 1, volume 56, issue 7, p 1471-4 148 Severini C, Romi R, Marinucci M, Guillemaud T, Raymond M Esterases A5- B5 in organophosphate-resistant Culex pipiens from Italy, Med Vet Entomol 1997 Apr, volume 11, issue 2, p 123-6 149 Shao Z, Park GB, Krishnamoorthy R, Mitra AK: The physicochemical properties, plasma enzymatic hydrolysis, and nasal absorption of acyclovir and its 2'-ester prodrugs, Pharm Res 1994 Feb, volume 11, issue 2, p.237-42 150 Shibata F, Takagi Y, Kitajima M, Kuroda T, Omura T: Molecular cloning and characterization of a human carboxylesterase gene, Genomics 1993 Jul, volume 17, issue 1, p.76-82 151 Shiotsuki T, Kato Y: Induction of carboxylesterase isozymes in Bombyx mori by E coli infection, Insect Biochem Mol Biol 1999 Aug, volume 29, issue 8, p.731-6 152 Siedek E, Little S, Mayall S, Edington N, Hamblin A: Isolation and characterisation of equine dendritic cells, Vet Immunol Immunopathol 1997 Dec 12, volume 60, issue 1-2, p 15-31 153 Softie N, Jeren T: Morphological and cytochemical characteristics of atypical inonocytesnuclear cells in the blood of patients with the syndrome of infectious 89 Histochemistry & Cytochemistry, 01/01/1990, volume 38, Issue 1, p.6 158 Sternbv B, Barros H, Nilsson A: In vitro effects of ethanol on human gastric and pancreatic lipolytic activities/enzymes, Scand J Gastroenterol 1996 Feb, volume 31, issue 2, p 146-53 159 Sternby B, Nilsson A, Melin T, Borgstrom B: Pancreatic lipolytic enzymes in human duodenal contents Radioimmunoassay compared with enzyme activity, Scand J Gastroenterol 1991 Aug, volume 26, issue 8, p.859-66 160 Suematsu Y, Nishizawa Y, Shioi A, Hino M, Tahara H, Inaba M, Morii H, Otani S: Effect of 1,25-dihydroxy vitamin D3 on induction of scavenger receptor and differentiation of 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate-treated THP-1 human monocytes like cells, J Cell Physiol 1995 Dec, volume 165, issue 3, p.547-55 161 Takagi Y, Omura T, Go M: Evolutionary origin of thyroglobulin by duplication of esterase gene, FEBS Lett 1991 Apr 22, volume 282, issue 1, p 17-22 162 Tang BK, Kalow W: Variable activation of lovastatin by hydrolytic enzymes in human plasma and liver, Eur J Clin Pharmacol 1995, volume 47, issue 5, p.449-51 163 Tang J, Chambers JE: Detoxication of paraoxon by rat liver homogenate and serum carboxylesterases and A-esterases, J Biochem Mol Toxicol 1999, volume 13, issue 5, p.261-8 90 lipase, Eur J Biochem 1994 Aug 15, volume 224, issue 1, p.57-62 168 Van Lith HA, Beynen AC: Dietary cholesterol lowers the activity of butyrylcholinesterase , issue EC 3.1.1.8, but elevates that of esterase-1 , issue EC 3.1.1.1 in plasma of rats, Br J Nutr 1993 Nov, volume 70, issue 3, p.721-6 169 Van Lith HA, Haller M, Van Hoof IJ, Van Der Wouw MJ, Van Zutphen BF, Beynen AC Characterization of rat plasma esterase ES-1A concerning its molecular and catalytic properties, Arch Biochem Biophys 1993 Mar, volume 301, issue 2, p.265-74 170 Van Lith HA, Haller M, Van Tintelen G, Van Zutphen LF, Beynen AC: Plasma esterase1 , issue ES-1 activity in rats is influenced by the amount and type of dietary fat, and butyryl cholinesterase activity by the type of dietary fat, J Nutr 1992 Nov, volume 122, issue 11, p.2109-20 171 Van Lith HA, Haller M, Van Zutphen BF, Beynen AC: Determination of rat plasma esterase-1 , issue ES-1 activity by scanning densitometry of gradient polyacrylamide gels with zymogram detection, Electrophoresis 1991 Dec, volume 12, issue 12, p 104550 172 Van Lith HA, Haller M, Van Zutphen LF, Beynen AC: The use of three ferguson-plotbased calculation methods to determine the molecular mass of proteins as illustrated by molecular mass assessment of rat-plasma carboxylesterases ES-1, ES-2, and ES-14, Anal Biochem 1992 Mar, volume 201, issue 2, p.288-300 91 Ernahrungswiss 1990 Jun, volume 29, issue 2, p 129-34 176 Vasantha S, Kumar BV, Roopashree SD, Das S, Shankar SK: Neuroanatomy of Cysticercus cellulosae , issue Cestoda as revealed by acetylcholinesterase and nonspecific esterase histochemistry, Parasitol Res 1992, volume 78, issue 7, p.581-6 177 Vaughan A, Rodriguez M, Hemingway: The independent gene amplification of electrophoretically indistinguishable B esterases from the insecticide-resistant mosquito Culex quinquefasciatus, Biochem J 1995 Jan 15, volume 305 , issue Pt 2, p.651-8 178 Von Deimling O, Gaa A Esterase-29 , issue ES-29, p biochemical characterization and control by two independent gene loci of a testosterone- dependent mouse serum esterase, Biochem Genet 1992 Aug, volume 30, issue 7- 8, p.421-36 179 Von Deimling O, Wassmer B: Genetic identification of non-specific esterases of the mouse cauda epididymidis and description of esterase-28, a new carboxylesterase isoenzyme , issue EC 3.1.1.1, J Reprod Fertil 1990 Jan, volume 88, issue 1, p.41-50 180 Wallace TJ, Ghosh S, McLean Grogan W: Molecular cloning and expression of rat lung carboxylesterase and its potential role in the detoxification of organophosphorus compounds, Am J Respir Cell Mol Biol 1999 Jun, volume 20, issue 6, p 1201-8 92 10 20 30 40 50 * 60 610674, 620 630 mARN640 650 Mar 13, LỤC volume 1, p.BẬC 175-9 PHỤ 1: CÂUissue TRÚC MỘT CỦA ANAE 70 80 660 601 RCCTGGRCCR GGTGGCTCCC CTGCGCTGGG TCCRGGRCRR CRTTGCCRGC TTTGGRGGGR 90 100 110 120 (Theo Trung tâm Thông tin kỹ thuật sinh học Quốc gia Hoa Kỳ - National 130 Center160Biotechnology 140 150 170 Information 180 - NCBỈ) 185 Yan B, Yang D, Brady M, Parkinson A: Rat kidney carboxylesterase Cloning, 190 200 sequencing, cellular localization, and relationship to rat liver hydrolase, J Biol Chem 61 230 240 1994 Nov21025, volume220 269, issue 47, p.29688-96 121 181 ■241 301 250 301 260 270 280 290 300 186 Yan B, Yang D, Brady M, Parkinson A: Rat testicular carboxylesterase: cloning, cellular 361 320 GCRGTTACTC 421 c p 330 and relationship 340 350 hydrolase 360A, Arch Biochem Biophys 1995 Feb 1, localization, to liver TCflGRGCTflT TTRCRRRCCG ARRGGRGRHC ATTCCTCTCR volume 316, issue 2, p.899-908 310 481 370 541 187 Yang D, Bullock P, Parkinson A: 380 Yan B, 390 400 410 420 Rat serum carboxylesterase Cloning, expression, regulation, and evidence of secretion from liver, J Biol Chem 1995 Aug 11, 430 601 490 440 volume 270, p 19128-34 450 issue 32,460 470 510 500 520 480 530 540 188 Yan B, Yang D, Parkinson A: Cloning and expression of hydrolase C, a member of the 560 550 670 730 rat carboxylesterase family, Arch Biochem Biophys 1995 Feb 570 580 600 590 20, volume 317, issue 1, p.222-34 680 690 700 710 720 740 750 760 770 780 189 Yan H, Harding JJ: Inactivation and loss of antigenicity of esterase by sugars and a 790 800 810 820 830 840 850 860 870 880 890 R 900 R 9493 910 920 930 940 950 960 970 980 1201 990 1000 990 1341 1000 1010 1020 1030 1040 1070 1000 1090 1100 1130 1140 1150 1160 1190 1200 1210 1220 1250 1260 1270 1280 1401 1050 1060 1461 1110 1120 1521 1170 1180 1581 1230 1240 1641 1701 1761 TGGHGG 1281 C 96 95 PHỤ LỤC DANH SÁCH BỆNH NHÂN PHỤ LỤC 2: TÊN GỌI3:VÀ CÔNG THỨC CỦA MỘT NGHIÊN số CHẤTcứu SỬ TRONG DỤNG ĐỂ TRONG TÀI ĐỂ tài 1- Gentamycin: C2iH40O6N 2- Cefotaxim natri: NaC 16H 16N 507S2 3- Ampicilin: C16H19N3Sị04 4- Vitamin B,2: C 63H88CoN|4P XÁC NHẬN CỦA BỆNH VIỆN 19-8 5- Vitamin B 6: Dihydroymetyl - 4,5 - hydroxy - - metyl - - pyridin Bệnh viện ỉ 9-8 xác nhận anh Trần Văn Tính làm toàn phần thực nghiệm luận án thạc sỹ khoa học khoa Huyết học 6- Vitamin Bị! (aminomáu clorua - - metyl - - pyrimidinyl - - từ metyl) - 3-7/ỉ metyl Truyền - Bệnh viện 19-8 thời gian tháng 999 - tới tháng 712000 Hà Nội, ngày 25 tháng năm 2000 PGS.TS NGUYỄN QUANG HÙNG 98 97 [...]... nghiệm, từ đó có thể giảm được số thí nghiệm 4.1.2- ứng dụng toán học trong hoá học thực nghiệm Toán học từ lâu đã là công cụ không thể thiếu được đối với các nhà khoa học thực nghiệm Đặc biệt gần đây xuất hiện rất nhiều phương pháp toán học để giải các bài toán về qui hoạch hoá thực nghiệm và xử lý số liệu như: Phương pháp đơn hình, phương pháp qui hoạch hoá thực nghiệm theo ma trận bậc, theo đường... của lần thí nghiệm sau phụ thuộc hoàn toàn vào kết quà và điều kiện phản ứng của lần thí nghiệm trước trừ đơn hình gốc Ngoài ra số thí nghiệm và điểm tối ưu bị phụ thuộc nhiều vào đơn hình ban đầu cùng với bước nhảy cúa các điều kiện thực nghiệm; Nếu bước nhảy nhỏ thì sẽ phải làm quá nhiều thực nghiệm và nếu bước nhảy lớn thì dễ bỏ qua điểm tối ưu Vì thế để khắc phục tình trạng này Nelder và Mead đã... chất của photpho hữu cơ: Về mặt hoá học thì đó là một nhóm chất mà trong phân tử của nó có chứa ion photpho hoá trị 5 liên kết trực tiếp với các gốc hữu cơ hoặc thông qua nguyên tử oxy Đây là một phản ứng ức chế cạnh tranh giữa cơ chất và hợp chất có chứa photpho hữu cơ [36] Quá 19 trình ANAE xúc tác cho phản ứng thuỷ phân cơ chất là quá trình thuận nghịch, enzym sau khi tham gia vào phản ứng thuỷ... toán học và tin học trong nghiên cứu enzym Trong nghiên cứu enzym, để tìm được các điều kiện hoạt động tối ưu nhằm thu được hiệu suất cao đòi hỏi cần phải nắm vững cơ chế hoá học cũng như cơ chế động học của phản ứng Muốn vậy phải sử dụng những công cụ nghiên cứu lí thuyết và thực nghiệm một cách phù hợp với đối tượng nghiên cứu Tin học và toán học là hai công cụ quan trọng giúp các nhà khoa học nhanh... lên kết qủa thực nghiệm Đơn hình s0: Thay i vào ta có: Căn cứ vào các điều kiện hoạt động tối ưu (1.2.1) và kết quả thu được từ phần tối ưu Nhân tố hoá hình học ( 3 1 ) chúng tôi lựa chọn mức gốc như sau: HO N=N CH 3 CH 3 —o CH,—o Ma trận tương ứng với đơn hình gốc bốn nhân tố ảnh hưởng đến kết quả thực nghiệm o=\ chưa thay số: (xem bảng 2.2) Công thức chuyển thành các giá trị của ma trận thực nghiệm. .. dài liên kết, nhiệt hình thành phân tử, momen lưỡng cực và cấu trúc lập thể của phân tử Từ các dữ liệu này có thể dự đoán được hướng và khả năng tương tác của các tiểu phân trong môi trường phản ứng đổng thời xác định được các yếu tố có thể ảnh hưởng đến quá trình phản ứng Như vậy, kết quả của các chương trình tính gần đúng lượng tử sẽ là cơ sở định hướng cho các mô hình kế hoạch hoá thực nghiệm, từ... và có độ chính xác cao với a=0,01 ANAE giảm dần tại các mô bị chết theo thời gian và tổn tại tối đa là 4 giờ sau khi chết Dựa vào đường cong động học của quá trình giảm này 12 Trong chấn íỉoán dôc chất : E.Heymann ( 1 9 9 9 ) đã giới thiệu hai phương pháp định lượng photpho hữu cơ nhờ kỹ thuật ức chế ANAE [66] Cả hai phương pháp đều dựa vào việc thêm một lượng mẫu chưa biết nồng độ photpho hữu cơ vào... tôi xin đề cập đến một phương pháp hay được sử dụng trong thực nghiệm đó là phương pháp đơn hình 29 Quỵ tắc ỉ Phải loại bỏ thực nghiệm nào mà cho giá trị hàm mục tiêu nhỏ nhất và thay thế thí nghiệm đó bằng một thí nghiệm khác, đối xứng qua trọng tâm của k đỉnh còn lại Khi đó đơn hình mới được xác định bằng k đỉnh cũ và đỉnh thực nghiệm mới Ọuá trình như vậy được lặp đi lặp lại cho đến khi không tìm... đây, nhất là những năm đầu thập kỷ cuối cùng của thế kỷ 20, sự phát triển mạnh mẽ của kỹ thuật máy tính cùng với sự ra đời các chương trình tính lượng tử khác nhau như: Quanta, Sybyl, Alchemy, Hyperchem, Gaussian [2]; đã cho phép người ta tiến hành các nghiên cứu lý thuyết về cấu trúc phân tử, khả năng và cơ chế xảy ra phản ứng để dự đoán các quá trình hoá học Kết quả các chương trình tính toán này có... Brestkin và c.s cho rằng quá trình ức chế ANAE phụ thuộc vào cấu trúc của gốc ankyl và trọng lượng phân tử của hợp chất photpho hữu cơ [25] Hầu hết các hợp chất này là các chất độc Bằng thực nghiệm trên chuột Nagy và c.s (2000) đã chứng minh diisopropyl florophotphat gây ức chế hoạt động của ANAE, làm giảm khả năng thải độc đối với chất độc 2-pyrrolino-doxorubixin [116] Ngoài ra parathion sau khi vào cơ ... phản ứng Như vậy, kết chương trình tính gần lượng tử sở định hướng cho mô hình kế hoạch hoá thực nghiệm, từ giảm số thí nghiệm 4.1.2- ứng dụng toán học hoá học thực nghiệm Toán học từ lâu công... nhà khoa học thực nghiệm Đặc biệt gần xuất nhiều phương pháp toán học để giải toán qui hoạch hoá thực nghiệm xử lý số liệu như: Phương pháp đơn hình, phương pháp qui hoạch hoá thực nghiệm theo... đơn hình gốc Ngoài số thí nghiệm điểm tối ưu bị phụ thuộc nhiều vào đơn hình ban đầu với bước nhảy cúa điều kiện thực nghiệm; Nếu bước nhảy nhỏ phải làm nhiều thực nghiệm bước nhảy lớn dễ bỏ qua