Đang tải... (xem toàn văn)
ĐỀ tài ,xây DỰNG QUY TRÌNH ĐÁNH GIÁ ,HISTAMINE TRONG cá , đh nông lâm tphcm
Trường ĐH Nông Lâm TPHCM ĐỀ TÀI: XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐÁNH GIÁ HISTAMINE TRONG CÁ LỜI MỞ ĐẦU Trong sống đại đời sống người ngày nâng cao tinh thần vật chất đời sống ẩm thực người ngày trọng.Ngày có nhiều thức ăn đời đáp ứng nhu cầu ăn uống người có thức ăn mang lại nhiều mối nguy hiểm cho sức khỏe người bạn có biết dưa có chất gây bệnh ung thư là: rhodamine sữa có melamin gây sỏi thận, suy thận trẻ em nước tương có 3MCPD số chất gây bệnh ung thư cá có chất đe dọa sức khỏe cho người dùng là:histamine A CÁ VÀ VẤN ĐỀ AN TOÀN VỆ SINH THỰC PHẨM LIÊN QUAN ĐẾN CÁC MÓN ĂN CHẾ BIẾN TỪ CÁ 1.GIỚI THIỆU VỀ CÁ 1.1 CÁ TRONG ĐỜI SỐNG THIÊN NHIÊN Cá động vật có vây sống hầu hết biến nhiệt (máu lạnh) có mang số có phổi sống nước Hiện người ta biết khoảng 29.000 loài cá, điều làm cho chúng trở thành nhóm đa dạng số động vật có dây sống Về mặt phân loại học, cá nhóm cận ngành mà quan hệ xác cịn gây tranh cãi nhiều phân chia phổ biến chia chúng thành cá không hàm (siêu lớp Agnatha với 75 loài, bao gồm loài cá mút đá cá mút đá myxin), cá sụn (lớp Chondrichthyes với 800 loài, bao gồm loại cá mập cá đuối), lớp lại cá xương (lớp Osteichthyes) Trong tiếng Việt, nhiều loài động vật sống nước khác gọi "cá", chẳng hạn (cá) mực hay cá vi, cá heo, cá nhà táng, cá sấu thực ra, chúng cá thực thụ Một số lồi cá trì thân nhiệt cao tới vài độ so với môi trường xung quanh Tấ loài cá thu nhiệt (cá xương) thuộc phân Scombroidei bao gồm loại cá săn mồi, cá ngừ loài cá thu "nguyên thủy" (Gasterochisma melampus) Tất loài cá mập họ Lamnidae – cá mập mako vây ngắn, cá mập mako vây dài, cá nhám trắng, cá nhám hồi – biết đến có có khả thu nhiệt, chứng cho thấy đặc điểm tồn họ Alopiidae (cá nhám đuôi dài) Mức độ thu nhiệt dao động từ loại cá săn mồi làm ấm mắt não, tới cá ngừ vây xanh cá nhám hồi trì thân nhiệt tới 20°C cao so với môi trường nước xung quanh Xem thêm trì thân nhiệt động vật khổng lồ Quá trình thu nhiệt, mặt trao đổi chất tốn kém, có số ưu làm tăng lực co bóp cơ, tốc độ xử lý cao hệ thần kinh trung ương tốc độ tiêu hóa cao Phương pháp tiến hành 5.1 Chuẩn bị mẫu thử: 5.1.1 Nghiền 200 g mẫu máy nghiền đồng thể (4.1.3) Cân xác 10 g mẫu nghiền đồng thể (kí hiệu W) cho vào bình tam giác 150 ml (4.1.9) 5.1.2 Thêm 50 ml metanol (4.2.2), lắc phút Ðặt bình chứa dung dịch mẫu bể điều nhiệt (4.1.4) nhiệt độ 60oC 15 phút Sau đó, chuyển tồn sang bình định mức 100 ml; tráng bình tam giác metanol (4.2.2) 5.1.3 Ðể nguội dung dịch tới nhiệt độ phòng định mức đến vạch metanol (4.2.2) để có 100 ml (kí hiệu V1) Lắc dung dịch lọc qua giấy lọc (4.1.10) Dịch chiết bền vài tuần lễ bảo quản lạnh 5.2 Chuẩn bị mẫu trắng: Mẫu trắng mẫu thuỷ sản xác định không chứa histamin Tiến hành chuẩn bị mẫu trắng chuẩn bị với mẫu thử theo qui định taị Ðiều 5.1 5.3 Chuẩn bị mẫu để xác định độ thu hồi 100 ppm: Thêm xác ml dung dịch chuẩn histamin 1000 mg/l (4.3.1.1) vào 10 g mẫu trắng nghiền đồng thể Tiến hành chuẩn bị mẫu để xác định độ thu hồi chuẩn bị với mẫu thử theo qui định t aị Ðiều 5.1 5.4 Làm mẫu: 5.4.1 Chuẩn bị cột làm Nhồi nhựa trao đổi anion chuẩn bị (4.3.3) vào cột thủy tinh (4.1.8) đến chiều cao khoảng cm giữ không để khô cột Trước sử dụng phải rửa cột thủy tinh với 10 ml nước cất (4.2.1) 5.4.2 Làm mẫu Lần lượt cho ml dịch chiết thu Ðiều 5.1, 5.2 5.3 (kí hiệu V2) qua cột, rửa cột - ml nước cất (4.2.1) Thu dịch chảy vào bình 50 ml chứa ml dung dịch axit HCl M (4.3.2.2) Khi lớp dung dịch cách mặt lớp nhựa khoảng mm phải cho tiếp nước cất (4.2.1) vào cột thu khoảng 35 ml dịch giải hấp Khóa cột định mức phần dịch giải hấp thu nước cất (4.2.1) để có 50 ml (kí hiệu V3) 5.5 Tạo dẫn xuất huỳnh quang: 5.5.1 Dung dịch xác định đường chuẩn Hút xác ml dung dịch chuẩn histamin làm việc (4.3.1.3) vào bình định mức 50 ml, thêm ml dung dịch NaOH M (4.3.2.4) vào bình lắc Sau khoảng phút, thêm ml dung dịch OPT (4.3.2.5) vào bình Sau phút, tiếp tục thêm ml dung dịch H3PO4 1,19 M (4.3.2.6) vào bình, định mức đến vạch dung dịch HCl 0,1 M (4.3.2.3) lắc bình Chú thích: phải lắc dung dịch sau lần thêm hóa chất lần trình tạo phản ứng với dung dịch OPT (4.3.2.5) 5.5.2 Mẫu trắng: Hút xác ml dịch chiết mẫu trắng làm (5.4.2) vào bình tam giác 50 ml Sau đó, tiến hành tạo dẫn xuất dung dịch xác định đường chuẩn theo qui định Ðiều 5.5.1 5.5.3 Mẫu xác định độ thu hồi: Hút xác ml dịch chiết mẫu xác định độ thu hồi làm (5.4.2) vào bình tam giác 50 ml Sau đó, tiến hành tạo dẫn xuất dung dịch xác định đường chuẩn theo qui định Ðiều 5.5.1 5.5.4 Mẫu thử: Hút xác ml dịch chiết mẫu thử làm (5.4.2) vào bình tam giác 50 ml Sau đó, tiến hành tạo dẫn xuất dung dịch xác định đường chuẩn theo qui định Ðiều 5.5.1 5.6 Tiến hành phân tích HPLC: 5.6.1 Ðiều kiện phân tích: a Cột sắc ký : cột Licrocart C18, kích thước 50 x 4,6 mm, mm (4.1.2) b Nhiệt độ cột : 40oC c Pha động : hỗn hợp gồm: KH2PO4 ,axetonitril TEA (4.3.4) d Tốc độ dòng : ml/phút đ Bước sóng kích thích : l = 350 nm e Bước sóng phát xạ : l = 444 nm g Thể tích tiêm : 20 ml 5.6.2 ổn định cột sắc ký 30 phút chế độ làm việc 5.6.3 Tiêm dung dịch chuẩn tạo dẫn xuất huỳnh quang (5.5.1) Dựng mối quan hệ tuyến tính diện tích píc sắc ký theo nồng độ 5.6.4 Tiêm dịch chiết mẫu trắng (5.5.2); dịch chiết mẫu xác định độ thu hồi (5.5.3) dịch chiết mẫu thử (5.5.4) tạo dẫn xuất huỳnh quang vào hệ thống HPLC Mỗi dịch thực lần Tính diện tích trung bình xác định nồng độ histamin dịch chiết từ đường chuẩn Tính hàm lượng histamin mẫu theo Ðiều 5.7 Yêu cầu độ tin cậy phép phân tích: 5.7.1 Ðộ lặp lại lần tiêm Ðộ lệch chuẩn (CVS) tính theo diện tích píc sắc ký lần tiêm dung dịch chuẩn phải nhỏ 0,5% 5.7.2 Ðộ thu hồi (R) Ðộ thu hồi mẫu xác định theo lần phân tích mẫu Ðộ thu hồi tính phải nằm khoảng từ 90 đến 110% 5.7.3 Ðường chuẩn phải có độ tuyến tính tốt, hệ số tương quan quy hồi tuyến tính (R2) phải lớn 0,99 Tính kết Hàm lượng histamin có mẫu thử tính theo công thức sau: C x V1 x V3 M (mg/kg) = W x V2 Trong đó: - M hàm lượng histamin có mẫu, tính theo mg/kg - C nồng độ histamin có dịch chiết mẫu (5.6.4), tính theo mg/ml - V1 thể tích dịch mẫu thử (100 ml) định mức (5.1) - V2 thể tích dịch chiết (1 ml) chuẩn bị làm (5.4.2) - V3 thể tích dịch làm (5.4.2) chứa bình định mức (50 ml) - W khối lượng (10 g) mẫu thử nghiền đồng thể (5.1) Chú thích: Nếu kết tính mẫu lớn 15 mg/100 g thủy sản phải pha lỗng dịch chiết mẫu thực lại qui trình từ Ðiều 5.4 SẮC KÍ ĐỒ CỦA MỘT THÍ NGHIỆM XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG HISTAMINE TRONG CÁ BẰNG HPLC TÀI LIỆU THAM KHẢO: WWW.GOOGLE.COM CỔNG THÔNG TIN CỦA CỤC KIỂM TRA ĐO LƯỜNG CHẤT LƯỢNG CỔNG THÔNG TIN CỦA BỘ NN&PTNT WWW.HUS.EDU.COM CỔNG THÔNG TIN VIỆN VỆ SINH DỊCH TỂ TÂY NGUYÊN www.baophuyen.com.vn WWW.BAODATVIET.VN CỔNG THÔNG TIN ĐIỆN TỬ HỘI NGHỀ CÁ KHÁNH HÒA ... thành histamine Trong cá người có histamine cá bình thường histamine tồn với liều lượng Tuy nhiên, cá ngừ hay số loại cá khác cá thu ,cá trích, cá nục, loại cá có chứa Histamine cao Chất tạo cá chết... loài, bao gồm loại cá mập cá đuối ), lớp lại cá xương (lớp Osteichthyes) Trong tiếng Việt, nhiều loài động vật sống nước khác gọi "cá" , chẳng hạn (cá) mực hay cá vi, cá heo, cá nhà táng, cá sấu... D.TIẾN HÀNH QUY TRÌNH ĐÁNH GIÁ HÀM LƯỢNG HISTAMINE TRONG CÁ Mục đích quy trình: Quy trình áp dụng để xác định xác hàm lượng histamine mẫu thử.Từ đưa kết luận hàm lượng histamine cá Các bước tiến