BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN MINH CHÂU NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ SẮC KÝ DẤU VÂN TAY CỦA THÂN RỄ HAI LOÀI: CỦ GẤU (CYPERUS ROTUNDUS L.) VÀ CỦ GẤU BIỂN (CYPERUS STOLONIFERUS RETZ.) LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Hà Nội – 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN MINH CHÂU NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ SẮC KÝ DẤU VÂN TAY CỦA THÂN RỄ HAI LOÀI: CỦ GẤU (CYPERUS ROTUNDUS L.) VÀ CỦ GẤU BIỂN (CYPERUS STOLONIFERUS RETZ.) Chuyên ngành: Hóa Hữu Mã số: 62440114 LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Trần Thƣợng Quảng TS Nguyễn Tiến Đạt Hà Nội – 2016 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chƣa đƣợc công bố công trình khác Hà Nội, ngày Tập thể hƣớng dẫn TS Trần Thƣợng Quảng TS.Nguyễn Tiến Đạt tháng năm 2016 Nghiên cứu sinh Nguyễn Minh Châu ii LỜI CẢM ƠN Trƣớc tiên, xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới TS Trần Thƣợng Quảng TS Nguyễn Tiến Đạt, hai thầy hƣớng nghiên cứu, tận tình hƣớng dẫn, động viên giúp đỡ suốt trình thực công việc luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy cô giáo, cán Bộ môn Hóa Hữu - Viện Kỹ thuật Hóa học - Trƣờng Đại học Bách Khoa Hà Nội, cán phòng Hoạt chất Sinh học - Viện Hóa Sinh Biển - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, ban lãnh đạo cán Công ty Cổ phần Thiết bị Sài Gòn, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành luận án Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn gia đình bạn bè cổ vũ, động viên hoàn thành tốt luận án Xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng Tác giả Luận án Nguyễn Minh Châu năm 2016 iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH, ĐỒ THỊ ix MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chi Cyperus L 1.1.1 Chi Cyperus L giới 1.1.2 Chi Cyperus L Việt Nam 1.2 Thành phần hóa học chi Cyperus L 1.2.1 Các hợp chất terpenoid 10 1.2.2 Các hợp chất flavonoid 13 1.2.3 Các hợp chất quinone 14 1.2.4 Thành phần tinh dầu 15 1.2.5 Các hợp chất khác 16 1.3 Nghiên cứu sắc ký dấu vân tay 16 1.4 Giới thiệu hai loài củ gấu củ gấu biển 21 1.4.1 Vài nét thực vật 21 1.4.2 Công dụng hoạt tính sinh học 23 1.4.3 Các nghiên cứu thành phần hóa học 24 1.4.4 Các nghiên cứu sắc ký dấu vân tay 34 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 2.1 Mẫu thực vật 36 2.1.1 Mẫu nghiên cứu thành phần hóa học 36 2.1.2 Mẫu nghiên cứu dấu vân tay sắc ký 36 2.2 Phƣơng pháp phân lập hợp chất 37 2.2.1 Phƣơng pháp ngâm chiết 37 2.2.2 Sắc ký lớp mỏng (TLC) 37 2.2.3 Sắc ký cột (CC) 38 2.3 Phƣơng pháp xác định cấu trúc hóa học hợp chất 38 2.3.1 Điểm nóng chảy (Mp) 38 2.3.2 Độ quay cực ([α]D) 38 2.3.3 Phổ hồng ngoại (IR) 38 2.3.4 Phổ lƣỡng sắc tròn (CD) 38 2.3.5 Phổ khối lƣợng (MS) 38 2.3.6 Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân (NMR) 38 2.4 Phƣơng pháp xây dựng dấu vân tay sắc ký 39 2.4.1 Phƣơng pháp chuẩn bị mẫu 39 iv 2.4.2 Sắc ký lớp mỏng hiệu cao (HPTLC) 39 2.4.3 Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 39 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 40 3.1 Chiết phân lập hợp chất từ thân rễ củ gấu 40 3.1.1 Quy trình chiết phân lập 40 3.1.2 Thông số vật lý kiện phổ chất phân lập từ thân rễ củ gấu 43 3.2 Chiết phân lập hợp chất từ thân rễ củ gấu biển 49 3.2.1 Quy trình chiết phân lập 49 3.2.2 Thông số vật lý kiện phổ hợp chất phân lập từ thân rễ củ gấu biển 52 3.3 Phân tích định tính sắc ký dấu vân tay HPTLC 55 3.3.1 Chuẩn bị mẫu phân tích HPTLC 55 3.3.2 Điều kiện sắc ký HPTLC 55 3.3.3 Kết 55 3.4 Nghiên cứu sắc ký dấu vân tay HPLC 55 3.4.1 Chuẩn bị mẫu phân tích HPLC 55 3.4.2 Điều kiện phân tích HPLC 55 3.4.3 Kết 56 3.5 Nghiên cứu định lƣợng số thành phần HPLC 56 3.5.1 Chuẩn bị mẫu phân tích định lƣợng HPLC 56 3.5.2 Phân tích định lƣợng HPLC 56 3.5.3 Kết 56 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 57 4.1 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất 57 4.1.1 Hợp chất CR1: ()-3,5,6,7,8,4-hexahydroxyflavane (Hợp chất mới) 57 4.1.2 Hợp chất CR2: (+)-catechin 60 4.1.3 Hợp chất CR3: eriodictyol 63 4.1.4 Hợp chất CR4: luteolin 67 4.1.5 Hợp chất CR5: 7,4'-dihydroxy-5,3'-dimethoxyflavone 70 4.1.6 Hợp chất CR6: hovetrichoside C 71 4.1.7 Hợp chất CR7: piceatannol 75 4.1.8 Hợp chất CR8: resveratrol 78 4.1.9 Hợp chất CR9: trans-scirpusin A 79 4.1.10 Hợp chất CR10: trans-scirpusin B 83 4.1.11 Hợp chất CR11: cassigarol E 84 4.1.12 Hợp chất CR12: 1,4-dihydroxyeudesm-11-ene 88 4.1.13 Hợp chất CR13: 1β,4β-dihydroxyeudesm-11-ene 90 4.1.14 Hợp chất CR14: 5,7-dihydroxychromone 91 4.1.15 Hợp chất CR15: (+)-lyoniresinol 3a-O--D-glucoside 94 4.1.16 Hợp chất CS1: (S)-5,5,7-trihydroxy-2,4-dimethoxy-6-methylflavanone (Hợp chất mới) 97 v 4.1.17 Hợp chất CS2: 3',4',6-trihydroxy-4-methoxyaurone 102 4.1.18 Hợp chất CS3: -mangostin .105 4.1.19 Các hợp chất khác 109 4.2 Nghiên cứu định tính dấu vân tay sắc ký HPTLC 112 4.3 Nghiên cứu định tính dấu vân tay sắc ký HPLC 114 4.3.1 Đánh giá độ lặp lại phân tích dấu vân tay sắc ký 114 4.3.2 Kết phân tích dấu vân tay sắc ký 115 4.4 Nghiên cứu định lƣợng số thành phần HPLC 124 4.4.1 Chuẩn bị chất thị thiết lập đƣờng chuẩn định lƣợng .124 4.4.2 Đánh giá hàm lƣợng chất mẫu 126 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 129 TÀI LIỆU THAM KHẢO 131 DANH MỤC CÁC C NG TR NH Đ C NG Ố CỦA LUẬN ÁN 146 PHỤ LỤC 147 vi DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Tiếng Anh 13 Cacbon-13 Nuclear Resonance Spectroscopy C-NMR Tiếng Việt Magnetic Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân Cacbon 13 H-1H COSY H-1H Correlation Spectroscopy H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân Spectroscopy proton Phổ tƣơng tác proton-proton CC Column Chromatography Sắc ký cột CD Circular Dichroism spectroscopy Phổ lƣỡng sắc tròn CE Capillary Electrophoresis Điện di mao quản Công thức phân tử CTPT Đầu dò mảng diốt DAD Diode Array Detector DEPT Distortionless Enhancement Polarization Transfer DMSO Dimethyl sulfoxide ESI-MS ElectroSpray Spectroscopy GC Gas Chromatography GC-MS Gas Chromatography spectroscopy Glu Glucose Glucozơ HMBC Heteronuclear Multiple Phổ tƣơng tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết by Phổ DEPT (CH3)2SO Mass Phổ khối phun mù điện tử Ionization Sắc ký khí Mass Sắc ký khí khối phổ Bond Correlation spectroscopy Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao HPLC High Performance Chromatography HPTLC High Performance Chromatography HR-ESI-MS High Resolution ElectroSpray Phổ khối ion hóa phun mù điện Ionization Mass Spectroscopy tử phân giải cao HSQC Heteronuclear Single Coherence spectroscopy IR Infrared spectroscopy Phổ hồng ngoại J Coupling constant Hằng số tƣơng tác KLPT Thin Layer Sắc ký lớp mỏng hiệu cao Quantum Phổ tƣơng tác trực tiếp H-C Khối lƣợng phân tử vii Kí hiệu Tiếng Anh LC-MS Liquid Chromatography Spectroscopy MEEKC Microemulsion electrokinetic Tiếng Việt Mass Sắc ký lỏng khối phổ Sắc ký điện động vi nhũ tƣơng chromatography MeOH Methanol Methanol Mp Melting point Điểm nóng chảy NMR Nuclear Magnetic Resonance Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân NOE Nuclear Overhauser Effect Hiệu ứng NOE NOESY Nuclear Overhauser Phổ hiệu ứng NOE Effect Spectroscopy ppm part per million Phần triệu QTOF Quadrupole Time Of Flight Tứ cực thời gian bay RT Retention time Thời gian lƣu SPME Solid-phase microextraction Vi chiết pha rắn TLC, SKLM Thin Layer Chromatography Sắc ký lớp mỏng TMS Tetramethylsilane (CH3)4Si TOF-MS Time Of Flight Mass Spectroscopy Khối phổ thời gian bay UPLC Ultra performance chromatography UV Ultraviolet liquid Sắc ký lỏng siêu hiệu Tử ngoại VAST Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam YHCT Y học cổ truyền δC Độ chuyển dịch hóa học cacbon δH Độ chuyển dịch hóa học proton viii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Danh sách loài thực vật thuộc chi Cyperus L Việt Nam Bảng 1.2 Danh sách chất đƣợc phân lập từ loài chi Cyperus L Bảng 1.3 Thành phần tinh dầu có loài chi Cyperus L 15 Bảng 1.4 Một số công trình giới nghiên cứu dấu vân tay sắc ký 18 Bảng 1.5 Các loại dƣợc liệu công trình [5] 20 Bảng 1.6 Danh sách chất đƣợc phân lập từ Cyperus rotundus L 25 Bảng 2.1 Địa điểm thu thập mẫu nghiên cứu 36 Bảng 3.1 Chƣơng trình dung môi sắc ký dấu vân tay HPLC 56 Bảng 3.2 Nồng độ chất thị (µg/ml) để xây dựng đƣờng chuẩn 56 Bảng 4.1 Số liệu phổ NMR hợp chất CR1 chất tham khảo 60 Bảng 4.2 Số liệu phổ NMR hợp chất CR2 chất tham khảo 63 Bảng 4.3 Số liệu phổ NMR hợp chất CR3 chất tham khảo 67 Bảng 4.4 Số liệu phổ NMR hợp chất CR4 chất tham khảo 70 Bảng 4.5 Số liệu phổ 1H-NMR hợp chất CR5 chất tham khảo 71 Bảng 4.6 Số liệu phổ NMR hợp chất CR6 chất tham khảo 74 Bảng 4.7 Số liệu phổ NMR hợp chất CR7 chất tham khảo 78 Bảng 4.8 Số liệu phổ 1H-NMR hợp chất CR8 chất tham khảo 79 Bảng 4.9 Số liệu phổ NMR hợp chất CR9 chất tham khảo 82 Bảng 4.10 Số liệu phổ NMR hợp chất CR10 chất tham khảo 84 Bảng 4.11 Số liệu phổ NMR hợp chất CR11 chất tham khảo 87 Bảng 4.12 Số liệu phổ NMR hợp chất CR12 chất tham khảo 90 Bảng 4.13 Số liệu phổ NMR hợp chất CR13 chất tham khảo 91 Bảng 4.14 Số liệu phổ NMR hợp chất CR14 chất tham khảo 93 Bảng 4.15 Số liệu phổ NMR hợp chất CR15 chất tham khảo 96 Bảng 4.16 Số liệu phổ NMR hợp chất CS1 chất tham khảo 101 Bảng 4.17 Số liệu phổ NMR hợp chất CS2 chất tham khảo 105 Bảng 4.18 Số liệu phổ NMR hợp chất CS3 chất tham khảo 108 Bảng 4.19 Tổng hợp cấu trúc hợp chất phân lập đƣợc từ thân rễ đối tƣợng nghiên cứu củ gấu (Cyperus rotundus L.) củ gấu biển (Cyperus stoloniferus Retz.) khuôn khổ luận án 109 Bảng 4.20 Giá trị Rf cƣờng độ vết sắc ký đồ HPTLC quan sát dƣới ánh sáng UV 366 nm chƣa phun thuốc thử 112 Bảng 4.21 Danh sách chất thị sử dụng nghiên cứu sắc ký dấu vân tay 118 Bảng 4.22 Hệ số tƣơng đồng mẫu so với mẫu CGV1, CGB1 122 Bảng 4.23 Hệ số tƣơng đồng mẫu so với mẫu CGV, CGB trung bình cộng 123 Bảng 4.24 Các thông số phân tích định lƣợng số chất HPLC 125 Bảng 4.25 Hàm lƣợng chất (µg/g) mẫu nghiên cứu 126 - 39- Phổ DEPT hợp chất CS2 Phổ HMBC hợp chất CS2 - 40- Phổ ESI-MS hợp chất CS2 - 41- Phụ ục 18 Phổ hợp chất CS3 Phổ 1H-NMR hợp chất CS3 Phổ 13C-NMR hợp chất CS3 - 42- Phổ DEPT hợp chất CS3 Phổ HMBC hợp chất CS3 - 43- Phổ ESI-MS hợp chất CS3 - 44- Phụ ục 19 Sắc ký đồ HPTLC Bản HPTLC quan sát dƣới ánh sáng UV 254 nm trƣớc phun thuốc thử Bản HPTLC quan sát dƣới ánh sáng thƣờng sau phun thuốc thử - 45- Phụ lục 20 Thời gian ƣu pic sắc ký đồ HPLC mẫu nghiên cứu TT CGV1 CGV2 CGV3 1,44 1,39 1,40 10,08 10,05 10,08 10,55 10,52 10,54 12,04 12,04 12,67 12,63 12,65 14,06 14,10 14,71 15,10 15,06 15,09 10 15,90 15,87 15,89 11 18,21 18,18 18,19 12 18,89 18,84 18,88 13 19,89 19,84 19,88 14 20,13 20,09 20,13 15 20,42 20,38 20,42 16 20,85 17 21,51 21,46 21,50 18 21,79 21,83 19 20 22,82 22,76 22,81 21 23,11 22 24,27 24,21 24,24 23 27,12 27,09 27,12 24 27,91 27,87 27,90 25 29,55 29,46 29,49 26 31,32 31,28 31,31 27 31,53 31,49 31,52 28 32,52 32,49 32,51 29 32,91 32,87 32,89 30 33,33 33,31 33,33 31 34,53 34,55 32 - CGV4 CGV5 CGV6 CGB1 CGB2 1,40 1,40 1,40 1,44 1,39 8,98 8,97 9,03 8,95 10,09 10,09 10,09 10,55 10,55 10,55 10,55 10,56 12,06 12,04 12,03 12,03 12,03 12,73 12,67 12,67 12,66 12,66 14,10 14,11 13,95 14,11 14,68 14,76 15,10 15,11 15,10 15,10 15,11 15,94 15,91 15,92 15,93 18,01 18,22 18,22 18,20 18,22 18,85 18,89 18,89 18,89 18,90 19,89 19,88 19,88 19,89 20,12 20,14 20,14 20,14 20,15 20,44 20,43 20,43 20,79 20,75 20,75 21,50 21,51 21,50 21,52 21,52 21,97 21,95 21,94 22,00 22,00 22,61 22,62 22,62 22,62 22,62 22,81 22,81 23,16 23,16 23,15 23,17 23,18 24,30 24,26 24,27 24,28 24,29 27,12 27,11 27,12 27,12 27,11 27,90 27,90 27,90 27,85 27,90 29,55 29,53 29,53 29,55 29,55 31,31 31,31 31,31 31,31 31,32 31,53 31,53 31,52 31,53 31,54 32,51 32,51 32,51 32,53 32,52 32,92 32,92 32,91 32,92 32,92 33,33 33,33 33,33 33,33 33,33 34,50 34,54 34,66 34,83 - - 46- Phụ lục 20 Thời gian ƣu pic sắc ký đồ HPLC mẫu nghiên cứu (tiếp theo) TT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 CGB3 10,51 11,98 12,60 13,90 15,05 15,86 18,15 18,83 19,83 20,08 20,78 21,45 21,93 22,57 23,12 24,22 27,08 27,85 29,50 31,28 31,50 32,49 32,89 33,30 - CGB4 1,39 10,55 12,03 12,66 14,75 15,10 15,89 18,21 18,89 19,86 20,14 20,76 21,50 21,94 22,62 23,25 24,25 27,10 27,89 29,55 31,32 31,54 32,52 32,92 33,34 - CGB5 1,41 10,56 12,03 12,66 13,96 14,74 15,10 18,21 18,89 19,88 20,14 21,51 21,98 22,62 23,17 24,27 27,13 27,87 29,55 31,31 31,53 32,53 32,92 33,34 - CGB6 1,40 10,56 12,03 12,66 13,94 15,11 18,21 18,90 19,88 20,14 21,51 21,97 22,62 23,17 24,26 27,12 27,85 29,54 31,31 31,53 32,52 32,91 33,33 - HP1 1,43 8,94 10,56 12,02 12,65 14,10 14,76 15,09 15,91 18,33 18,88 19,83 20,13 20,70 21,44 21,99 22,60 23,15 24,30 27,10 27,86 29,53 31,30 31,52 32,51 32,91 33,32 - HP2 1,45 8,93 10,55 12,02 12,65 14,10 14,74 15,10 15,92 18,20 18,89 19,85 20,14 20,79 21,51 22,02 22,62 23,17 24,30 27,11 27,89 29,54 31,31 31,53 32,52 32,91 33,31 - HP3 1,43 8,94 10,56 12,03 12,66 14,11 14,75 15,11 15,94 18,21 18,90 19,88 20,17 20,88 21,52 22,02 22,62 23,17 24,31 27,11 27,89 29,55 31,31 31,54 32,52 32,92 33,33 - HP4 1,43 8,92 10,55 12,02 12,64 14,10 14,74 15,10 15,92 18,19 18,88 19,85 20,13 20,86 21,50 22,01 22,61 23,16 24,29 27,11 27,89 29,53 31,31 31,53 32,51 32,91 33,32 - - 47- Phụ lục 21 Diện tích pic nghiên cứu sắc ký dấu vân tay HPLC STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 RT (phút) 1,44 8,98 10,08 10,55 12,04 12,67 14,06 14,71 15,10 15,90 18,21 18,89 19,89 20,13 20,42 20,79 21,51 21,97 22,62 22,82 23,11 24,27 27,12 27,91 29,55 31,32 31,53 32,52 32,91 33,33 34,53 34,83 CGV1 CGV2 585,12 49,34 34,01 30,67 8,47 12,01 47,69 222,63 20,93 22,72 31,01 29,41 42,13 14,79 17,75 42,50 36,49 115,31 41,26 39,48 32,25 79,33 - 277,46 83,85 216,60 56,16 125,14 29,61 26,89 42,26 9,84 68,02 6,11 19,39 46,10 46,54 26,05 65,90 17,90 23,15 122,11 277,36 112,13 123,47 108,13 17,74 179,54 38,11 - CGV3 630,83 123,41 180,72 31,05 155,33 47,12 8,62 53,19 20,22 230,29 638,84 27,65 59,49 101,04 12,23 108,34 57,13 87,82 3,59 32,15 16,86 130,60 235,60 136,30 127,97 126,26 25,66 223,14 57,45 - CGV4 164,14 14,41 40,80 106,13 14,77 110,07 21,70 34,99 32,20 9,76 25,02 33,83 51,22 23,23 28,16 10,22 166,82 138,90 67,58 95,81 420,26 45,44 184,25 186,79 214,05 740,53 161,37 5,07 11,42 CGV5 401,86 5,33 80,35 116,00 16,18 80,11 32,12 4,01 22,84 36,95 23,23 134,93 21,21 35,46 61,13 40,89 36,08 13,34 47,29 37,69 36,76 53,99 54,22 165,38 69,37 102,12 90,54 119,67 353,89 149,13 74,21 - CGV6 427,28 5,42 93,23 131,19 82,74 108,04 20,09 21,94 11,15 61,10 7,84 12,79 37,65 30,13 43,09 22,98 18,24 56,57 4,39 27,69 39,66 88,91 70,94 124,77 49,32 65,13 76,23 143,42 126,84 - - 48- Phụ lục 21 Diện tích pic nghiên cứu sắc ký dấu vân tay HPLC (tiếp theo) STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 RT (phút) 1,44 8,98 10,08 10,55 12,04 12,67 14,06 14,71 15,10 15,90 18,21 18,89 19,89 20,13 20,42 20,79 21,51 21,97 22,62 22,82 23,11 24,27 27,12 27,91 29,55 31,32 31,53 32,52 32,91 33,33 34,53 34,83 CGB1 CGB2 CGB3 100,53 278,88 819,62 753,69 186,72 161,58 276,60 436,42 50,21 86,25 57,71 39,77 33,38 46,01 81,45 26,43 286,64 100,02 177,53 50,80 151,15 385,14 151,13 - 581,42 6,67 56,69 267,83 292,29 93,76 12,75 31,75 28,35 99,87 347,25 33,94 66,18 35,66 24,41 47,23 68,57 94,20 43,19 162,59 100,37 228,05 53,67 131,39 763,11 224,54 - 433,11 992,52 1015,80 67,44 122,05 13,86 56,93 154,22 25,43 62,22 34,35 56,35 7,92 48,35 82,28 76,73 20,92 227,53 97,36 259,06 76,83 227,60 629,36 188,57 - CGB4 11,49 126,94 362,48 349,04 16,01 46,74 13,65 38,84 140,10 13,69 39,94 3,82 21,20 6,05 11,08 25,71 52,80 27,25 56,38 17,97 60,36 15,47 34,37 289,11 79,91 - CGB5 155,57 262,65 612,83 633,98 73,06 16,96 131,85 193,14 417,67 28,92 104,26 57,84 32,46 28,07 39,43 110,08 24,16 227,93 83,93 179,01 45,21 130,14 321,70 128,19 - CGB6 220,16 549,50 1122,35 1053,46 39,11 141,28 204,51 418,91 40,01 87,00 68,97 29,89 30,46 43,45 106,22 13,17 234,86 79,69 149,84 42,92 124,48 328,40 129,11 - - 49- Phụ lục 21 Diện tích pic nghiên cứu sắc ký dấu vân tay HPLC (tiếp theo) STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 RT(phút) 1,44 8,98 10,08 10,55 12,04 12,67 14,06 14,71 15,10 15,90 18,21 18,89 19,89 20,13 20,42 20,79 21,51 21,97 22,62 22,82 23,11 24,27 27,12 27,91 29,55 31,32 31,53 32,52 32,91 33,33 34,53 34,83 HP1 118,59 8,50 129,86 154,71 142,60 9,60 15,53 46,79 114,34 788,20 109,49 95,46 87,31 53,54 119,79 43,12 22,79 63,71 76,62 28,02 299,81 46,79 323,38 69,68 254,51 625,57 216,67 - HP2 42,31 272,68 35,93 161,27 244,23 114,61 18,17 29,50 75,45 206,94 626,64 83,71 197,62 33,83 35,41 72,50 94,15 59,80 290,32 38,79 167,05 85,08 224,43 35,62 129,83 657,76 295,89 - HP3 41,54 167,44 115,49 418,18 921,72 123,03 53,12 83,56 47,51 439,98 672,42 45,29 24,99 31,80 35,76 43,43 27,01 39,35 273,96 26,23 129,22 75,19 139,07 35,00 95,36 652,88 144,62 - HP4 230,86 7,88 86,25 62,09 54,73 27,67 13,33 65,72 195,73 524,21 100,21 133,11 32,69 51,67 69,29 36,05 18,35 133,69 43,04 171,63 75,97 235,91 45,93 174,20 415,78 194,08 - - 50- Phụ lục 22 Tín hiệu phổ khối m/z v cƣờng độ (%) pic nghiên cứu sắc ký dấu vân tay HPLC-MS STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 RT (phút) 1,44 8,98 10,08 10,55 12,04 12,67 14,06 14,71 15,10 15,90 18,21 18,89 19,89 20,13 20,42 20,79 21,51 21,97 22,62 22,82 23,11 24,27 27,12 27,91 29,55 31,32 31,53 32,52 32,91 33,33 34,53 34,83 MS Positive m/z (%) 203,1 (60) 268,0 (100) 579,0 (100) 563,2 (100) 291,0 (100) 291,0 (80) 275,1 (100) 393,2 (60) 362,2 (100) 245,1 (100) 487,1 (100) 291,1 (100) 471,1 (100) 271,1 (70) 291,1 (100) 291,1 (100) 289,1 (100) 253,1 (100) 301,1 (100) 315,1 (100) 287,0 (100) 347,2 (100) 257,2 (60) 259,2 (100) 219,2 (100) 219,1 (100) 289,1 (100) 219,1 (100) 216,2 (100) 218,2 (80) 411,2 (100) 219,1 (100) 321,1 (50) 311,1 (50) 273.0 (20) 307,0 (50) 257,0 (20) 297,2 (90) 475,3 (40) 265,1 (40) 588,5 (15) 229,1 (85) 291,1 (100) 307,1 (40) 235,1 (70) 323,1 (30) 253,2 (100) 275,1 (100) 234,2 (100) 275,1 (100) 563,3 (30) 525,3 (40) 241,2 (40) 214,2 (50) 525,3 (40) 507,3 (80) 577,5 (30) 235,1 (35) 325,1 (40) 307,0 (60) 437,2 (20) 307,0 (70) 588,5 (60) 273,2 (100) 337,2 (10) 409,2 (10) 525,3 (100) 509,2 (40) MS Negative m/z (%) 268,8 (100) 295,1 (100) 302,2 (100) 577,2 (100) 561,2 (100) 289,1 (100) 289,0 (100) 449,1 (100) 289,0 (100) 281,2 (100) 243,1 (100) 243,1 (100) 521,0 (100) 505,1 (100) 249,2 (100) 285,1 (100) 303,1 (100) 287,1 (100) 301,0 (95) 299,1 (100) 305,2 (100) 285,0 (100) 345,1 (100) 571,3 (80) 311,2 (100) 339,2 (100) 339,2 (100) 409,1 (100) 353,0 (70) 489,2 (40) 597,2 (45) 325,1 (55) 325,1 (75) 304,9 (15) 561,1 (50) 319,1 (60) 568,6 (20) 597,1 (60) 485,2 (5) 303,1 (75) 469,1 (45) 285,1 (80) 577,1 (60) 323,2 (60) 323,1 (20) 521,1 (100) 599,2 (15) 521,1 (10) 299,1 (5) 249,0 (35) 569,2 (60) 285.1 (20) - 51- Phụ lục 23 Phổ UV chất phân tích định ƣợng Phổ UV hợp chất CR2-CS5 Phổ UV hợp chất CR1-CS4 Phổ UV hợp chất CR15 - 52- Phụ lục 23 Phổ UV chất phân tích định ƣợng (tiếp theo) Phổ UV hợp chất CR7-CS8 Phổ UV hợp chất CR10-CS11 - 53- Phụ lục 23 Phổ UV chất phân tích định ƣợng (tiếp theo) Phổ UV hợp chất CR3-CS6 Phổ UV hợp chất CS1 [...]... và củ gấu biển (Cyperus stoloniferus Retz.) - 2- 2 Mục đích, đối tƣợng và phạm vi nghiên cứu Mục đích của luận án là làm rõ hơn về thành phần hóa học, so sánh sự khác biệt về thành phần hóa học giữa hai loài củ gấu và củ gấu biển Nghiên cứu cũng góp phần xây dựng bộ dữ liệu sắc ký dấu vân tay cho hai loài củ gấu và củ gấu biển, ứng dụng vào đánh giá chất lƣợng và phân biệt hai loài này Nhiệm vụ của. .. khai thác từ loài củ gấu biển [13] (Cyperus stoloniferus Retz.) Tuy hai loài này đều đƣợc sử dụng làm dƣợc liệu Hƣơng phụ nhƣng cho tới nay chƣa có nghiên cứu so sánh về thành phần hoá học dịch chiết của hai loài này Thực tiễn nêu trên đã định hƣớng tác giả lựa chọn nội dung nghiên cứu của luận án: Nghiên cứu thành phần hóa học và sắc ký dấu vân tay của thân rễ hai loài: củ gấu (Cyperus rotundus L.). .. - Nghiên cứu thành phần hoá học: phân lập các hợp chất sạch từ thân rễ hai loài củ gấu và củ gấu biển bằng các phƣơng pháp sắc ký, xác định cấu trúc hóa học các chất tách đƣợc bằng các phƣơng pháp phổ kết hợp - Nghiên cứu sắc ký dấu vân tay: xây dựng dữ liệu vân tay sắc ký của hai loài củ gấu, củ gấu biển trên cơ sở các chỉ thị hóa học, xác định hàm lƣợng một số hoạt chất chính trong các mẫu thân rễ. .. rễ hai loài: củ gấu, củ gấu biển và dƣợc liệu Hƣơng phụ thu thập ở những địa điểm khác nhau 3 Ý nghĩa khoa học của luận án Luận án đóng góp những hiểu biết mới về thành phần hóa học và sắc ký dấu vân tay của 2 loài thực vật: củ gấu, củ gấu biển ở Việt Nam Ứng dụng những phƣơng pháp vật lý hiện đại trong nghiên cứu cấu trúc hóa học của các hợp chất hữu cơ 4 Những đóng góp mới của luận án Hai loài củ gấu. .. acetate của thân rễ củ gấu 42 Hình 3.4 Sơ đồ phân lập cặn nƣớc của củ gấu 43 Hình 3.5 Sơ đồ chiết phân bố mẫu thân rễ củ gấu biển 49 Hình 3.6 Sơ đồ phân lập cặn chiết chloroform của thân rễ củ gấu biển 50 Hình 3.7 Sơ đồ phân lập cặn chiết ethyl acetate của thân rễ củ gấu biển 51 Hình 3.8 Sơ đồ phân lập cặn nƣớc của thân rễ củ gấu biển 52 Hình 4.1.1 Phổ 1H-NMR của hợp... Hai loài củ gấu và củ gấu biển ở Việt Nam lần đầu đƣợc nghiên cứu một cách có hệ thống về thành phần hóa học và dấu vân tay sắc ký 4.1 Về thành phần hóa học - Từ củ gấu (Cyperus rotundus L.) đã phân lập và xác định đƣợc cấu trúc hóa học của 15 hợp chất, trong đó có hợp chất ()-3,5,6,7,8,4-hexahydroxyflavane (CR1) là hợp chất mới - Từ củ gấu biển (Cyperus stoloniferus Retz.) đã phân lập và xác định đƣợc... dấu vân tay sắc ký để xác định chất hoặc hỗn hợp các chất [150, 151] Định nghĩa về dấu vân tay sắc ký: Dấu vân tay sắc ký của một mẫu dƣợc liệu là bản sắc ký đồ của dịch chiết các thành phần hóa học có hoạt tính dƣợc lý của dƣợc liệu đó Sắc đồ này phải đảm bảo các yêu cầu về sự xuất hiện “rõ ràng” hay “mờ nhạt”, sự “giống nhau” hay “khác nhau” của các yếu tố hóa học có mặt trong dƣợc liệu [3, 70] Dấu. .. 4.22 Sắc ký đồ các mẫu thân rễ củ gấu ở bƣớc sóng 275 nm 116 Hình 4.23 Sắc ký đồ các mẫu thân rễ củ gấu biển ở bƣớc sóng 275 nm 116 Hình 4.24 Sắc ký đồ các mẫu dƣợc liệu Hƣơng phụ ở bƣớc sóng 275 nm 116 Hình 4.25 Sắc ký đồ của 16 mẫu nghiên cứu ở bƣớc sóng 275 nm 117 Hình 4.26 Sắc ký đồ của 16 mẫu nghiên cứu ở bƣớc sóng 230 nm 117 Hình 4.27 Sắc ký đồ của 16 mẫu nghiên cứu ở bƣớc... C17H35 và tăng dần các nhóm CH2 đến C27H55 1.2.4 Th nh phần tinh dầu Bên cạnh các nghiên cứu về thành phần hóa học bằng việc phân lập các chất có trong các bộ phận của các loài trong chi Cyperus L còn có nhiều nghiên cứu về thành phần hóa học của tinh dầu trong các loài của chi Cyperus L Các nghiên cứu về thành phần tinh dầu của các loài trong chi Cyperus L đƣợc thực hiện chủ yếu bằng kỹ thuật sắc ký khí... cho nhóm lignan của Đỗ trọng, alcaloid bay hơi của Xuyên khung và thành phần bay hơi của dƣợc 1.4 Giới thiệu về hai loài củ gấu và củ gấu biển 1.4.1 V i nét về thực vật Củ gấu còn gọi là cỏ gấu, cỏ cú, cỏ hƣơng phụ, hƣơng phụ; có tên khoa học là Cyperus rotundus L., thuộc họ Cói (Cyperaceae) Củ gấu biển hay còn gọi là cỏ cú biển, cú chồi, hƣơng phụ biển; có tên khoa học là Cyperus stoloniferus Retz., ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN MINH CHÂU NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ SẮC KÝ DẤU VÂN TAY CỦA THÂN RỄ HAI LOÀI: CỦ GẤU (CYPERUS ROTUNDUS L.) VÀ CỦ GẤU BIỂN (CYPERUS STOLONIFERUS. .. giả lựa chọn nội dung nghiên cứu luận án: Nghiên cứu thành phần hóa học sắc ký dấu vân tay thân rễ hai loài: củ gấu (Cyperus rotundus L.) củ gấu biển (Cyperus stoloniferus Retz.) - 2- Mục đích,... lƣợng củ gấu Tóm lại nghiên cứu dấu vân tay sắc ký củ gấu (Cyperus rotundus L.) củ gấu biển (Cyperus stoloniferus Retz.) Việt Nam nhƣ giới bƣớc đầu chƣa có nghiên cứu sâu dấu vân tay sắc ký hai