ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - ĐÀO XUÂN THANH NGHIÊN CỨU TẠO VẬT LIỆU KHỞI ĐẦU PHỤC VỤ CHỌN TẠO GIỐNG BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY BAO PHẤN Ở CÂY LÚA LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP THÁI NGUYÊN, NĂM 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - ĐÀO XUÂN THANH NGHIÊN CỨU TẠO VẬT LIỆU KHỞI ĐẦU PHỤC VỤ CHỌN TẠO GIỐNG BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY BAO PHẤN Ở CÂY LÚA CHUYÊN NGÀNH: TRỒNG TRỌT MÃ SỐ: 60.62.01 LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS.TRẦN NGỌC NGOẠN PGS.TS.NGÔ XUÂN BÌNH THÁI NGUYÊN, NĂM 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn Lêi c¶m ¬n Để hoàn thành khóa học thực đề tài, nỗ lực thân, nhận đƣợc giúp đỡ, dẫn thầy cô giáo Khoa Nông học, tập thể cán công nhân Trung tâm Thực hành Thực nghiệm - Trƣờng Đại học Nông lâm Thái Nguyên, bạn bè gia đình Nhân dịp xin chân thành gửi lời cảm ơn tới tập thể thầy, cô giáo cán nhân viên: Bộ môn công nghệ sinh học - Khoa Nông học - Trƣờng Đại học Nông lâm Thái Nguyên Bộ môn Giống trồng - Khoa Nông học - Trƣờng Đại học Nông lâm Thái Nguyên Đặc biệt cho phép xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới: PGS.TS.Trần Ngọc Ngoạn – Phó Hiệu Trƣởng - Trƣờng Đại học Nông lâm Thái Nguyên PGS.TS Ngô Xuân Bình - Phó trƣởng khoa Nông học - Trƣờng Đại học Nông lâm Thái Nguyên ThS Phạm Văn Ngọc - Bộ môn trồng - Khoa Nông học - Trƣờng Đại học Nông lâm Thái Nguyên Đã tận tình hƣớng dẫn giúp đỡ thời gian vừa qua Xin kính chúc thầy cô, anh chị cán bạn bè gia đình mạnh khỏe, hạnh phúc công tác tốt Thái Nguyên, ngày 16 tháng 10 năm 2009 Học viên Đào Xuân Thanh Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Cây lúa (Oryza sativa L) lƣơng thực giữ vai trò quan trọng hàng đầu Mỗi năm, khoảng 1/2 dân số giới sử dụng lúa gạo làm lƣơng thực Lúa đƣợc trồng phổ biến nƣớc Châu á, Châu Phi, Châu Mĩ La Tinh Đối với nƣớc Châu nhƣ: Ấn Độ, Trung Quốc, Inđônêxia, Băngladesh, Miến Điện, Thái Lan Việt Nam lúa gạo lƣơng thực đặc biệt quan trọng đời sống ngƣời Trong năm gần đây, với đà tăng dân số, phát triển mạnh mẽ công nghiệp đô thị hoá nông thôn làm cho diện tích đất trồng trọt ngày thu hẹp lại Nếu mở rộng diện tích gặp nhiều khó khăn tốn Để đáp ứng đủ nhu cầu lúa gạo ngƣời tiêu dùng an ninh lƣơng thực quốc gia, nhà tạo giống phải tìm cách làm tăng suất, sản lƣợng lúa diện tích đất trồng mở rộng Phƣơng án sử dụng biện pháp kỹ thuật thâm canh giống lúa cao sản, chịu thâm canh thích hợp Bằng phƣơng pháp lai hữu tính, phƣơng pháp chuyển gen bất dục đực mẫn cảm nhiệt độ vào giống lúa thuần, phƣơng pháp xử lý đột biến v.v…các nhà tạo giống có nhiều thành công với giống có suất sản lƣợng cao Song việc sử dụng phƣơng pháp tạo giống nhƣ nói có tạo tổ hợp lai suất cao nhƣng độ chƣa ổn định Mặt khác, áp dụng phƣơng pháp chuyển gen bất dục đực mẫn cảm nhiệt độ vào giống lúa chọn nhƣ giống lúa phải khoảng 10 vụ giống bất dục đực mẫn cảm với nhiệt độ kết hạt điều kiện nhiệt độ < 24 C Nhƣ vậy, thời gian từ tạo đƣợc giống đến phổ biến sản xuất thực tiễn đại trà phải 10 năm Trong năm gần đây, việc ứng dụng biện pháp nuôi cấy bao phấn tạo dòng nhị Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn bội, nhanh chóng tạo giống lúa có suất cao, chống chịu tốt, thu đƣợc nhiều kết Đó phƣơng pháp tạo dòng nhanh hiệu Tuy nhiên, dòng lúa với tính trạng di truyền khác nhau, có hàm lƣợng Auxin khác có phản ứng khác với điều kiện nuôi cấy Để thành công việc tạo dòng kỹ thuật nuôi cấy phải xác định đƣợc yêu cầu vật liệu cấy, môi trƣờng dinh dƣỡng, tác nhân vật lý, hoá học…của dòng lúa đánh giá đƣợc khả thích ứng chúng đồng ruộng Xuất phát từ vấn đề trên, tiến hành đề tài: “Nghiên cứu tạo vật liệu khởi đầu phục vụ chọn tạo giống kỹ thuật nuôi cấy bao phấn lúa” Mục đích đề tài - Xác định đƣợc mức ảnh hƣởng nhân tố: vật lý, môi trƣờng nuôi cấy, nồng độ hormon kích thích sinh trƣởng đến khả tạo mô sẹo, tái sinh chồi rễ trình tạo lúa hoàn chỉnh phƣơng pháp nuôi cấy bao phấn - Tạo đƣợc dòng trình nuôi cấy - Bƣớc đầu đánh giá đƣợc dòng có triển vọng cho suất cao, thích nghi với điều kiện sinh thái đồng ruộng Thái Nguyên, có khả làm vật liệu khởi đầu công tác tạo giống lúa ƣu lai Yêu cầu đề tài - Xác định đƣợc thời gian xử lý lạnh thích hợp nuôi cấy bao phấn lúa - Xác định đƣợc nồng độ chất khử trùng hypocloratnatri thích hợp cho xử lý mẫu cấy - Xác định đƣợc ảnh hƣởng môi trƣờng MS môi trƣờng N6 đến khả tạo mô sẹo - Xác định đƣợc nồng độ chất 2,4 D; NAA thích hợp cho trình tạo mô sẹo mẫu cấy - Xác định đƣợc nồng độ chất Kinetin BAP thích hợp cho tái sinh chồi từ mô sẹo - Xác định đƣợc nồng độ chất NAA thích hợp cho trình rễ từ chồi xanh - Xác định ảnh hƣởng loại môi trƣờng dƣỡng đến trình sinh trƣởng lúa - Đánh giá sơ suất, yếu tố cấu thành suất số đặc điểm sinh trƣởng phát triển, khả kháng bệnh 20 dòng lúa đƣợc tạo phƣơng pháp nuôi cấy bao phấn Ý nghĩa đề tài * Ý nghĩa nghiên cứu khoa học: - Kết nghiên cứu góp phần bổ sung quy trình kỹ thuật tạo lúa đồng hợp tử phƣơng pháp nuôi cấy bao phấn Từ làm sở cho việc chọn dòng tế bào nhƣ: + Chọn dòng kháng sâu bệnh + Chọn dòng chịu thâm canh… - Lựa chọn sơ đƣợc số dòng thuần, làm vật liệu khởi đầu cho công tác tạo giống ƣu lai - Kết nghiên cứu góp phần định hƣớng, làm tăng tính khả thi cho đề tài nghiên cứu bao phấn lúa * Ý nghĩa thực tiễn sản xuất: Rút ngắn thời gian tạo giống, giảm giá thành sản xuất giống lúa đồng thời nhanh chóng đƣa đƣợc nhiều giống lúa vào sản xuất CHƢƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu mô tế bào thực vật 1.1.1 Lịch sử phát triển Nuôi cấy mô tế bào thực vật đƣợc nhà khoa học tiến hành vào cuối kỷ XIX Quá trình phát triển tạm chia thành giai đoạn [12] 1.1.1.1 Giai đoạn khởi xƣớng (1898-1930) Phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật đƣợc nhà Bác học ngƣời Đức Grottied Haberlandt đề xƣớng năm 1898 Ông tìm cách nuôi cấy tế bào thực vật phân lập nhƣng không thành công Các công trình nuôi cấy mô tế bào nhà khoa học khác nhƣ Winker (1902), Thielman (1924), Kuster (1929), không đạt đƣợc mục tiêu nghiên cứu Năm 1929 Schmacker bƣớc đầu thành công lĩnh vực Sau có Schitterer (1931), Pfeiffer (1931), Lanrue (1933) có thành công bƣớc đầu nuôi cấy đầu rễ phân lập môi trƣờng nhân tạo Điều giúp cho nhà khoa học tiếp tục nghiên cứu nhiều đối tƣợng khác 1.1.1.2 Giai đoạn nghiên cứu sinh lý (1930 -1950) Giai đoạn đƣợc bắt đầu công trình nuôi cấy đầu rễ cà chua môi trƣờng nhân tạo, đƣợc thực nhà bác học White (1934) Bằng thí nghiệm ông ngƣời chứng minh đƣợc mô phân sinh trì thời gian sinh trƣởng chúng tiếp tục đƣợc nuôi cấy môi trƣờng dinh dƣỡng Cũng thời gian này, Gautherets thành công nuôi cấy mô tƣợng tầng tìm đƣợc môi trƣờng dinh dƣỡng thích hợp cho nhiều loại Năm 1935 Went Thisnamn khám phá auxin IAA có khả kích thích hình thành mô sẹo Năm 1941, hai nhà khoa học ngƣời Mỹ Overbeek Steward với thí nghiệm nuôi cấy họ cà Datura, auxin kích thích sinh trƣởng có nƣớc dừa Cũng thời gian hai ông phát tác dụng chất kích thích sinh trƣởng nhân tạo thuộc nhóm auxin, đƣợc nghiên cứu tổng hợp thành công nhƣ NAA, 2,4 D có ảnh hƣởng tích cực việc tạo mô sẹo gây phân chia tế bào Nhiều nhà khoa học bổ sung Auxin Vitamin vào môi trƣờng nuôi cấy khẳng định vai trò chúng môi trƣờng nuôi cấy mô Năm 1955 Miller Skoog nuôi cấy mô lõi thuốc xác định đƣợc vai trò Kinetin tới việc kích thích phát triển mô Những phát mẻ vai trò chất kích thích sinh trƣởng 2,4D, IAA, NAA, kinetin, vitamin giai đoạn bƣớc tiến quan trọng lịch sử phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.1.1.3 Giai đoạn phát sinh hình thái (1950 - 1960) Năm 1956 Miller Skoog thành công thí nghiệm tạo chồi từ mô thuốc nuôi cấy Chính Skoog phát vai trò kinetin phân hoá quan thuốc Những năm 1958-1959 Reinert (Đức) Steward (Mỹ) nuôi cấy tế bào cà rôt thu đƣợc phôi soma từ mô chúng Năm 1956 Nickell nuôi cấy thành công tế bào đơn Phaseolus vulgais dung dịch lỏng Năm 1960, kỹ thuật gieo tế bào, Bergman tái sinh thành công tế bào đơn thuốc 1.1.1.4 Giai đoạn nghiên cứu di truyền (1960 đến nay) Các thành tựu giai đoạn thức ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật invitro vào công tác giống nghiên cứu di truyền Năm 1960 Cooking (Anh) dùng men Cellulose để phân hủy vỏ cellulose tế bào thực vật thu đƣợc tế bào vỏ, gọi tế bào trần (protoplast) Nitsch (1967), Nakata Tanaka (1968) ngƣời thành công việc tạo thuốc đơn bội kỹ thuật nuôi cấy bao phấn Takabe (1971) tái sinh đƣợc thuốc hoàn chỉnh từ protoplast Melchers(1977) dung hợp protoplast thành công khoai tây cà chua tạo “Pomate” Năm 1985, thuốc mang gen biến nạp đƣợc công bố Khái niệm chuyển gen trở thành phổ cập thuật ngữ công nghệ sinh học thực vật Ledoux cho gây biến dị di truyền biến dị tế bào, chí hạt giống cách cho chúng hấp thụ ADN ngoại lai.[20] Từ năm 1980 đến nay, hàng loạt thành công lĩnh vực công nghệ đƣợc công bố Nuôi cấy mô tế bào trở thành công cụ thiếu công nghệ tạo giống nhân giống đại Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào mang lại sở lý luận mẻ cho sinh học đại 1.1.2 Tình hình nuôi cấy bao phấn lúa giới Năm 1968 Nishi cộng tác giả thành công lĩnh vực nuôi cấy bao phấn mầm sau công bố kết tái sinh lúa hoàn chỉnh từ mô sẹo Sau đó, hàng loạt tác giả công bố kết khả quan nhƣ: Chu et al (1975), Chen (1977), Chalyf anh Stalanrl (1981), Wang et.al (1982), Mich et.al (1985) Kết tạo đơn bội lƣỡng bội thu đƣợc chủ yếu loài phụ Japonica, loài phụ Indica kết chƣa cao Các giống lúa có nguồn gốc họ phụ Indica giống lúa khó tính việc nuôi cấy bao phấn Để tiến tới thành công, nhà khoa học tìm cách xác định ảnh hƣởng yếu tố có tác động trực tiếp gián tiếp đến trình nuôi cấy Các yếu tố là: Kiểu gen cho phấn, giai đoạn phát triển thời điểm lấy mẫu, thành phần môi trƣờng nuôi cấy, yếu tố vật lý nhƣ nhiệt độ, ánh sáng * Ảnh hưởng kiểu gen cho bao phấn: Sự thay đổi tần số tạo mô sẹo khả tái sinh mô sẹo phấn hoa phụ thuộc phần lớn vào kiểu gen Kết quan sát Oono (1968), Chu (1982), Hu (1985), Zapata (1990) cho thấy khác biệt kiểu gen kéo theo khác biệt khả nuôi cấy lúa Kiểu gen loài phụ Indica phát triển tạo mô sẹo so với loài phụ Japonica Theo Mathias Fukki (1986) khả tái sinh lúa nuôi cấy tế bào bị chi phối tƣơng tác tế bào chất, nhân * Ảnh hưởng giai đoạn phát triển thời điểm lấy mẫu Các tác giả Oono (1975), Lin (1976), Chen (1977) cho thấy: mẫu bao phấn đƣợc lấy vào thời điểm tiểu bào tử bao phấn giai đoạn đơn bào muộn tốt Bao phấn giai đoạn tứ thể khả phát triển môi trƣờng nuôi cấy invitro, Bao phấn giai đoạn đơn bào sớm phát triển Hạt phấn phát triển tốt tách khỏi tứ tử (giai đoạn đơn bào đến đơn bào muộn) *Ảnh hưởng nhiệt độ thời gian xử lý đòng Kêt nghiên cứu Zhou Cs (1983) cho thấy rằng: Xử lý đòng nhiệt độ thấp có hiệu nuôi cấy bao phấn lúa Điều kiện lạnh làm tăng khả tạo xanh + Chaleff Cs (1975) xử lý đòng C ngày 3 3 11.4000 9.90000 9.46667 8.70000 SE(N= 3) 0.146566 5%LSD 12DF 0.451619 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NAA 19/ 9/** 16:48 PAGE Thi nghiem anh huong cua NAA den kha nang tao re lua KimA/R278 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE MOSEO GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 10.572 STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.3957 0.25386 2.4 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO RE FILE RECAY 12/ 9/** 23:13 PAGE Anh huong cua NAA den kha nang re cua choi xanh to hop KimA/R17 VARIATE V003 SO RE RE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================ 32.9378 6.58756 31.96 0.000 = CTHUC$ * RESIDUAL 12 2.47333 206111 * TOTAL (CORRECTED) 17 35.4111 2.08301 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE RECAY 12/ 9/** 23:13 PAGE Anh huong cua NAA den kha nang re cua choi xanh to hop KimA/R17 MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS 3 3 3 SO RE 12.1000 13.0333 12.5333 10.6667 9.86667 9.46667 SE(N= 3) 0.262114 5%LSD 12DF 0.807662 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE RECAY 12/ 9/** 23:13 PAGE Anh huong cua NAA den kha nang re cua choi xanh to hop KimA/R17 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SO RE GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 11.278 STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.4433 0.45399 4.0 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE DAI RE FILE NAA 19/ 9/** 20:45 PAGE Thi nghiem anh huong cua NAA den dai re cua choi xanh lua KimA/R278 VARIATE V003 DAI RE DAI RE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================ CTHUC$ 10.8117 2.16233 149.70 0.000 = * RESIDUAL 12 173334 144445E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 10.9850 646176 - TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NAA 19/ 9/** 20:45 PAGE Thi nghiem anh huong cua NAA den dai re cua choi xanh lua KimA/R278 MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ SE(N= 5%LSD 3) 12DF NOS 3 3 3 DAI RE 6.20000 8.73333 7.56667 7.40000 7.20000 6.80000 0.693889E-01 0.213811 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NAA 19/ 9/** 20:45 PAGE Thi nghiem anh huong cua NAA den dai re cua choi xanh lua KimA/R278 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE DAI RE GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 7.3167 STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.80385 0.12019 1.6 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE DAI RE FILE NAA 19/ 9/** 20:54 PAGE Thi nghiem anh huong cua NAA den dai re lua KimA/R17 VARIATE V003 DAI RE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================ CTHUC$ 17.2178 3.44356 206.61 0.000 = * RESIDUAL 12 200000 166667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 17.4178 1.02458 - TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NAA 19/ 9/** 20:54 PAGE Thi nghiem anh huong cua NAA den dai re lua KimA/R17 MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS 3 3 3 DAI RE 6.30000 9.30000 8.46667 7.76667 7.50000 6.93333 SE(N= 3) 0.745357E-01 5%LSD 12DF 0.229670 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NAA 19/ 9/** 20:54 PAGE Thi nghiem anh huong cua NAA den dai re lua KimA/R17 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE DAI RE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ | (N= 18) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | 18 7.7111 1.0122 0.12910 1.7 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLSONG FILE TLSONG 14/10/** 10:44 PAGE Anh huong cua moi truong thuan duong den ty le song cua cay lua nuoi cay tu bao phan VARIATE V003 TLSONG LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================ CTHUC$ 10000.0 3333.33 57.14 0.000 * RESIDUAL 466.667 58.3333 * TOTAL (CORRECTED) 11 10466.7 951.515 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TLSONG 14/10/** 10:44 PAGE Anh huong cua moi truong thuan duong den ty le song cua cay lua nuoi cay tu bao phan MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS 3 3 TLSONG 100.000 100.000 100.000 33.3333 SE(N= 3) 4.40959 5%LSD 8DF 14.3792 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TLSONG 14/10/** 10:44 PAGE Anh huong cua moi truong thuan duong den ty le song cua cay lua nuoi cay tu bao phan F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TLSONG GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ | (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | 12 83.333 30.847 7.6376 9.2 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TDRE FILE DO DAI RE 19/ 9/** 23:54 PAGE Thi nghiem anh huong moi truong thuan duong den dai re KimA/R278 VARIATE V003 TDRE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================ 71.6223 23.8741 169.77 0.000 = CTHUC$ * RESIDUAL 1.12500 140625 * TOTAL (CORRECTED) 11 72.7473 6.61339 - TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE DO DAI RE 19/ 9/** 23:54 PAGE Thi nghiem anh huong moi truong thuan duong den dai re KimA/R278 MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS 3 3 TDRE 12.8333 16.2167 19.5000 17.6667 SE(N= 3) 0.216506 5%LSD 8DF 0.706005 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE DO DAI RE 19/ 9/** 23:54 PAGE Thi nghiem anh huong moi truong thuan duong den dai re KimA/R278 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TDRE GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 16.554 STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 2.5717 0.37500 2.3 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE TDRE FILE TLSONG 20/ 9/** 0: PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den chieu dai re cua cay lua KimA/R17 VARIATE V003 TDRE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================ CTHUC$ 75.1273 25.0424 567.01 0.000 * RESIDUAL 353326 441658E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 75.4806 6.86187 - TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TLSONG 20/ 9/** 0: PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den chieu dai re cua cay lua KimA/R17 MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS 3 3 TDRE 12.7500 16.7333 19.5000 17.9667 SE(N= 3) 0.121334 5%LSD 8DF 0.395658 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TLSONG 20/ 9/** 0: PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den chieu dai re cua cay lua KimA/R17 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TDRE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ | (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | 12 16.738 2.6195 0.21016 1.3 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCAY FILE XONG 20/ 9/** 22: PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den chieu cao cay lua KimA/R278 VARIATE V003 CCAY LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================ CTHUC$ 866.047 288.682 314.72 0.000 = * RESIDUAL 7.33809 917261 * TOTAL (CORRECTED) 11 873.385 79.3987 - TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE XONG 20/ 9/** 22: PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den chieu cao cay lua KimA/R278 MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS 3 3 CCAY 11.3100 24.0533 21.0867 35.1367 SE(N= 3) 0.552950 5%LSD 8DF 1.80311 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE XONG 20/ 9/** 22: PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den chieu cao cay lua KimA/R278 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CCAY GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 22.897 STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 8.9106 0.95774 4.2 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCAY FILE XONG 20/ 9/** 22:55 PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den chieu cao cay lua KimA/R17 VARIATE V003 CCAY LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================ CTHUC$ 872.053 290.684 951.85 0.000 = * RESIDUAL 2.44310 305388 * TOTAL (CORRECTED) 11 874.496 79.4996 - TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE XONG 20/ 9/** 22:55 PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den chieu cao cay lua KimA/R17 MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS 3 3 CCAY 11.7100 25.3200 22.6533 35.6700 SE(N= 3) 0.319055 5%LSD 8DF 1.04041 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE XONG 20/ 9/** 22:55 PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den chieu cao cay lua KimA/R17 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE CCAY GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 23.838 STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 8.9163 0.55262 2.3 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE CAOCAY FILE CAOCAY 20/ 9/** 3:32 PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den kha nang la cac dong lua duoc tao tu bao phan.KimA/R278 VARIATE V003 CAOCAY LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================ CTHUC$ 102.182 34.0608 817.44 0.000 = * RESIDUAL 333339 416674E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 102.516 9.31960 - TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE CAOCAY 20/ 9/** 3:32 PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den kha nang la cac dong lua duoc tao tu bao phan.KimA/R278 MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS 3 3 CAOCAY 4.33333 5.00000 5.75000 11.6667 SE(N= 3) 0.117852 5%LSD 8DF 0.384304 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE CAOCAY 20/ 9/** 3:32 PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den kha nang la cac dong lua duoc tao tu bao phan.KimA/R278 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 12) NO OBS STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | | | | | CAOCAY 12 6.6875 3.0528 0.20413 3.1 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SOLA FILE SOLA 13/ 9/** 8:41 PAGE Thi nghiem nghien cuu anh huong cua moi truong thuan duong den kha nang la to hop KimA/R17 VARIATE V003 SOLA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================ 110.854 36.9514 591.20 0.000 = CTHUC$ * RESIDUAL 500018 625023E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 111.354 10.1231 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE SOLA 13/ 9/** 8:41 PAGE Thi nghiem nghien cuu anh huong cua moi truong thuan duong den kha nang la to hop KimA/R17 MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS 3 3 SOLA 4.25000 4.83333 6.16667 11.9167 SE(N= 3) 0.144340 5%LSD 8DF 0.470679 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE SOLA 13/ 9/** 8:41 PAGE Thi nghiem nghien cuu anh huong cua moi truong thuan duong den kha nang la to hop KimA/R17 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SOLA GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 6.7917 STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 3.1817 0.25000 3.7 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE DNHANH FILE NHANH 21/ 9/** 13:24 PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den kha nang de nhanh cua lua.KimA/R278 VARIATE V003 NHANH LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CTHUC$ 1.93229 644097 61.83 0.000 * RESIDUAL 833334E-01 104167E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.01562 183239 - TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NHANH 21/ 9/** 13:24 PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den kha nang de nhanh cua lua.KimA/R278 MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS 3 3 CCAY 0.750000 1.00000 1.16667 1.83333 SE(N= 3) 0.589256E-01 5%LSD 8DF 0.192150 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NHANH 21/ 9/** 13:24 PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den kha nang de nhanh cua lua.KimA/R278 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE DNHANH GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ | (N= 12) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | 12 1.1875 0.42806 0.10206 8.6 0.0000 BALANCED ANOVA FOR VARIATE DNHANH FILE NHANH 21/ 9/** 13:31 PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den kha nang de nhanh.KimA/R17 VARIATE V003 DNHANH LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================ CTHUC$ 3.93750 1.31250 63.00 0.000 = * RESIDUAL 166667 208333E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 4.10417 373106 - TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NHANH 21/ 9/** 13:31 PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den kha nang de nhanh.KimA/R17 MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ NOS 3 3 CCAY 0.500000 1.00000 1.25000 2.08333 SE(N= 3) 0.833334E-01 5%LSD 8DF 0.271742 - ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NHANH 21/ 9/** 13:31 PAGE Thi nghiem anh huong cua moi truong thuan duong den kha nang de nhanh.KimA/R17 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE DNHANH GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ (N= 12) SD/MEAN | NO BASED ON BASED ON % | OBS TOTAL SS RESID SS | 12 1.2083 0.61082 0.14434 11.9 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE TGST FILE TGST 12/10/** 4:58 PAGE Thoi gian sinh truong cua cac dong lua nuoi cay tu bao phan vu mua 2008 VARIATE V003 TGST LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF SQUARES MEAN SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CTHUC$ 20 415.714 20.7857 0.53 0.939 * RESIDUAL 42 1662.00 39.5714 * TOTAL (CORRECTED) 62 2077.71 33.5115 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TGST 12/10/** 4:58 PAGE Thoi gian sinh truong cua cac dong lua nuoi cay tu bao phan vu mua 2008 MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 NOS 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 TGST 115.000 112.000 114.000 117.000 112.000 114.000 119.000 114.000 119.000 116.000 114.000 120.000 115.000 116.000 116.000 114.000 119.000 110.000 116.000 112.000 114.000 SE(N= 3) 3.63187 5%LSD 42DF 10.3647 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TGST 12/10/** 4:58 PAGE Thoi gian sinh truong cua cac dong lua nuoi cay tu bao phan vu mua 2008 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TGST GRAND MEAN (N= 63) NO OBS 63 115.14 STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 5.7889 6.2906 5.5 0.9387 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE NSUAT FILE NSUAT 12/10/** 4:35 PAGE Nang suat cac dong lua nuoi cay tu bao phan vu mua 2008 VARIATE V003 NSUAT LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================ CTHUC$ 20 6541.82 327.091 48.70 0.000 = * RESIDUAL 42 282.064 6.71582 * TOTAL (CORRECTED) 62 6823.88 110.063 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NSUAT 12/10/** 4:35 PAGE Nang suat cac dong lua nuoi cay tu bao phan vụ mua 2008 MEANS FOR EFFECT CTHUC$ CTHUC$ 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 NOS 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 NSUAT 45.4200 55.0333 45.2333 50.8000 64.6333 54.4667 32.6867 54.2167 40.9533 71.2133 40.6300 54.9133 46.1500 72.9667 65.0133 45.3233 48.0933 49.6133 38.6833 46.0167 52.7500 SE(N= 3) 1.49620 5%LSD 42DF 4.26986 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NSUAT 12/10/** 4:35 PAGE Nang suat cac dong lua nuoi cay tu bao phan vụ mua 2008 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE NSUAT GRAND MEAN (N= 63) NO OBS 63 51.181 STANDARD DEVIATION C OF V |CTHUC$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 10.491 2.5915 5.1 0.0000 | | | | [...]... sau đó, cây đơn bội đã đƣợc tạo ra bằng nuôi cấy bao phấn ở hàng loạt cây trồng khác nhau Ngoài nuôi cấy bao phấn các nhà khoa học còn thành công rất lớn trong nuôi cấy noãn chƣa thụ tinh, nuôi cấy hạt phấn tách rời Kỹ thuật này tạo ra nhanh chóng hàng loạt cây đơn bội, phục vụ đắc lực cho công tác chọn tạo giống cây trồng Hai phƣơng pháp nghiên cứu cây đơn bội hiện nay là : - Nuôi cấy bao phấn hay... lý của vật liệu nuôi cấy [11] Trong nuôi cấy mô ngƣời ta thƣờng sử dụng vật liệu nuôi cấy nhƣ đỉnh sinh trƣởng, chồi, bao phấn, gieo qua hạt, thân mầm… 1.3.8 Các yếu tố ảnh hƣởng đến quá trình nuôi cấy mô, tế bào 1.3.8.1 Kiểu gen của cây cho bao phấn Kiểu gen của cây cho bao phấn nuôi cấy có ảnh hƣởng rất lớn đến kết quả nuôi cấy Nuôi cấy bao phấn của các giống lúa thuộc loài phụ Japonica (kể cả trƣờng... đã có nhiều nghiên cứu về ảnh hƣởng của nhiệt độ và thời gian xử lý đòng đến kết quả nuôi cấy bao phấn Kết quả của các tác giả cho thấy rằng xử lý đòng ở nhiệt độ khác nhau sẽ cho kết quả nuôi cấy khác nhau 1.4 Các giai đoạn chính trong nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.4.1 Khái niệm nuôi cấy bao phấn Nuôi cấy bao phấn chứa các bào tử hoặc hạt phấn chƣa chín trong môi trƣờng nhân tạo nhằm tạo cây đơn bội... đƣợc nghiên cứu kỹ vào cây lúa nhƣ gen kháng bạc lá, gen chịu phèn, gen chịu rét, gen chịu mặn…Tuy nhiên số lƣợng những giống lúa đạt năng suất, chất lƣợng đƣợc tạo ra chƣa nhiều Đỗ Năng Vịnh và Lê Thị Diệu Muội [15] đã nghiên cứu một số yếu tố ảnh hƣởng đến khả năng tạo thành mô sẹo và tạo thành cây lúa từ hạt phấn bằng phƣơng pháp nuôi cấy invitro Sau nhiều năm tiến hành nghiên cứu về nuôi cấy bao phấn, ... bội Kỹ thuật tạo cây đơn bội invitro bằng cách kích thích tiểu bào tử phát triển thành cây thông qua nuôi cấy bao phấn đã tạo ra hàng loạt cây đơn bội một cách nhanh chóng Đây là thành tựu vô cùng to lớn, mở ra một hƣớng đi mới trong lĩnh vực ứng dụng đơn bội vào công tác chọn giống cây trồng, có thể rút ngắn thời gian tạo giống từ 5 đến 7 năm 1.5.2 Kỹ thuật đơn bội trong công tác chọn tạo giống cây. .. Nam Ở nƣớc ta, nghiên cứu nuôi cấy mô thực vật mới bắt đầu từ năm 1975 [16] Kỹ thuật nhân giống invitro đã đƣợc tiến hành trên nhiều đối tƣợng thực vật khác nhau nhƣ: chuối, khoai tây, cà chua, ngô, lúa, phong lan…và cũng đã đạt đƣợc những kết quả nhất định, làm tăng hệ số nhân giống và tạo đƣợc giống mới sạch bệnh ở các loại cây này Kỹ thuật nuôi cấy bao phấn lúa đƣợc ứng dụng rất sớm vào công tác chọn. .. cứu phôi và nuôi cấy bao phấn Phƣơng pháp này cho phép ta có thể chuyển những gen kháng từ cây dại vào cây trồng để cải thiện nguồn gen của cây trồng - Tối ƣu hoá môi trƣờng nuôi cấy để chọn tạo ra các giống lúa hạt dài chất lƣợng cao Tại trƣờng Đại học tổng hợp Lossiana (Mỹ), ngƣời ta đã xây dựng chiến lƣợc chọn giống lúa hạt dài cho miền Nam nƣớc Mỹ bằng nuôi cấy bao phấn lúa Các giống lúa hạt dài... tạo ra dòng thuần với những đặc tính khác nhau - Sử dụng kỹ thuật chỉ thị phân tử để chọn những dòng thuần mang gen kháng bệnh - Khảo nghiệm những dòng thuần chọn lọc trong những điều kiện sản xuất khác nhau để chọn giống tốt, kháng bệnh CHƢƠNG II VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu và phạm vi nghiên cứu 2.1.1 Vật liệu - Vật liệu nuôi cấy invitro là bao phấn của một số dòng lúa. .. tỷ lệ thành cây thƣờng cao hơn nuôi cấy bao phấn của các giống lúa thuộc loài phụ Indica Chen và Lin (1981) còn thấy rằng tỷ lệ bao phấn tạo callus, khả năng callus tái sinh thành cây, tỷ lệ cây xanh /cây bạch tạng và số lƣợng nhiễm sắc thể của cây tái sinh đều liên quan đến kiểu gen của cây cho bao phấn Điều này chứng tỏ khả năng nuôi cấy bao phấn lúa cũng do gen điều khiển, đối với những giống phản... rãi trong cải tiến giống cây trồng Thông qua phƣơng pháp này rút ngắn thời gian chọn tạo, tăng tính biến dị cho chọn lọc và giải quyết vấn đề lai xa Từ đó tạo dòng thần từ nuôi cấy bao phấn F1 hoăc F2 trong thời gian ngắn Kỹ thuật nuôi cấy invitro kích thích tiểu bào tử phát triển thành cây trong môi trƣờng nuôi cấy bao phấn và hạt phấn Cho phép nhân nhanh chóng, tạo ra hàng loạt cây đơn bội đó là một ... thớ nghim nuụi cy bao phn lỳa c trỡ iu kin : - S gi chiu sỏng ngy: - 10 h/ngy - Nhit phũng nuụi cy: 18 - 25 C - Cng ỏnh sỏng: 200 0-3 000 lux - m : 80 - 90% Thớ nghim thun dng cõy tỏi sinh c b trớ... Ngon Phú Hiu Trng - Trng i hc Nụng lõm Thỏi Nguyờn PGS.TS Ngụ Xuõn Bỡnh - Phú trng khoa Nụng hc - Trng i hc Nụng lõm Thỏi Nguyờn ThS Phm Vn Ngc - B mụn cõy trng - Khoa Nụng hc - Trng i hc Nụng... t lnh nhit 10 C nhng khong thi gian khỏc - CT1: khụng x lý lnh - CT2: x lý lnh ngy - CT3: x lý lnh ngy - CT4: x lý lnh ngy - CT5: x lý lnh ngy - CT6: x lý lnh 10 ngy Sau ngy cy mu vo mụi trng,