ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN [ \ BÙI ĐỨC CƯỜNG PHÂN LẬP VÀ SÀNG LỌC CÁC CHỦNG TRICHODERMA CÓ LỢI TỪ HAI VƯỜN QUỐC GIA BÙ GIA MẬP VÀ LÒ GÒ XA MÁT Chuyên ngành: VI SINH VẬT HỌC Mã số chuyên ngành: 60 42 40 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS DƯƠNG HOA XÔ Thành phố Hồ Chí Minh – năm 2012 LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: Quý Thầy (Cô) trường Đại học KHTN – ĐHQG TP HCM nhiệt tình dạy dỗ, truyền đạt kiến thức niềm đam mê nghiên cứu khoa học cho sinh viên suốt thời gian học tập trường TS Dương Hoa Xô, người tận tình hướng dẫn, ủng hộ hướng nghiên cứu giúp đỡ hoàn thành luận văn tốt nghiệp ThS Đinh Minh Hiệp, người dẫn dắt bước vào đường nghiên cứu khoa học người hướng dẫn khoa học thứ hai giúp hoàn thành luận văn TS Phạm Nguyễn Đức Hoàng bên cạnh động viên, nhiệt tình giúp đỡ khơi gợi hướng nghiên cứu mới, giúp vững bước đường nghiên cứu khoa học Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: Ban Giám Đốc Trung tâm CNSH TP HCM đồng ý cho triển khai cấp kinh phí thực nghiên cứu Các đồng nghiệp Trung tâm CNSH TP HCM, đặc biệt cán phòng Công nghệ Vi sinh tổ Sản xuất-Thử nghiệm, tạo điều kiện làm việc giúp đỡ nhiều trình thực luận văn BQL vườn quốc gia Bù Gia Mập, BQL vườn quốc gia Lò Gò Xa Mát, Trung tâm đa dạng sinh học phát triển (Viện Sinh học nhiệt đới TP HCM), Viện Công nghệ sinh học môi trường (trường Đại học Nông Lâm TP HCM), Chi cục kiểm dịch thực vật sau nhập vùng 2,… hợp tác nhiệt tình để hoàn thành tốt luận văn Các bạn đại học khóa 2004-2008 học viên cao học khóa K20/2010, trường Đại học KHTN – ĐHQG TP HCM, đặc biệt bạn Mỹ Linh, Khoa My Lệ Chi, bên cạnh giúp đỡ suốt trình học tập trường Các bạn sinh viên trường Đại học KHTN TP HCM Đại học Bách khoa TP HCM có thời gian cộng tác số nội dung liên quan tới công trình nghiên cứu Cuối cùng, từ tận đáy lòng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới Bố-Mẹ dành tình yêu thương cho chúng Cảm ơn gia đình ủng hộ, động viên tạo niềm tin để vững bước đường chọn./ MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cảm ơn Mục lục Danh mục bảng i Danh mục hình iii Danh mục biểu đồ iv Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt vi ĐẶT VẤN ĐỀ .1 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Trichoderma 1.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hoá loài Trichoderma spp .4 1.2.1 Môi trường sống .4 1.2.2 Chất chuyển hóa thứ cấp kháng sinh 1.3 Ảnh hưởng số nhân tố sinh thái lên sinh trưởng Trichoderma 1.4 Các chế kiểm soát sinh học Trichoderma 1.4.1 Ký sinh nấm (mycoparasitism) 1.4.2 Kháng sinh (antibiosis) .8 1.4.3 Cạnh tranh (competition) 1.4.4 Thúc đẩy phát triển gia tăng sức đề kháng trồng .9 1.5 Một số hệ enzyme thủy phân Trichoderma 10 1.5.1 Chitinase 11 1.5.2 Glucanase .11 1.5.3 Protease 12 1.5.4 Cellulase, Xylanase hệ enzyme thủy phân khác 13 1.6 Định danh Trichoderma sinh học phân tử 14 1.7 Một số nghiên cứu Trichoderma Việt Nam 16 1.8 Địa điểm thu nhận mẫu đất nghiên cứu 18 1.8.1 Vườn quốc gia Bù Gia Mập 18 1.8.1.1 Vị trí địa lý 18 1.8.1.2 Diện tích 18 1.8.1.3 Đa dạng sinh học tài nguyên sinh vật 18 1.8.2 Vườn quốc gia Lò Gò Xa Mát 19 1.8.2.1 Vị trí địa lý 19 1.8.2.2 Địa hình-địa mạo .20 1.8.2.3 Địa chất-thổ nhưỡng 20 1.8.2.4 Đa dạng sinh học tài nguyên sinh vật 20 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 22 2.1 Vật liệu .22 2.2 Phương pháp 23 2.2.1 Thu nhận mẫu đất 23 2.2.2 Phân lập chủng Trichoderma 23 2.2.3 Giữ giống Trichoderma 24 2.2.4 Định danh Trichoderma sinh học phân tử .24 2.2.5 Khảo sát hoạt độ số enzyme thủy phân chủng Trichoderma, bao gồm chitinase, beta-glucanase, cellulase, xylanase, mannanase, amylase protease, dựa vòng phân giải chất đặc hiệu 26 2.2.6 Khảo sát khả đối kháng chủng Trichoderma với số loài nấm gây bệnh trồng 26 2.2.7 Xử lý, tổng hợp số liệu 27 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Thu thập mẫu đất từ hai vườn quốc gia Bù Gia Mập Lò Gò Xa Mát 29 3.2 Phân lập chủng Trichoderma 31 3.3 Định danh số chủng Trichoderma dựa vùng trình tự bảo tồn ITS15.8S-ITS2 36 3.4 Đánh giá khả phân hủy chất hữu chủng Trichoderma dựa vào khả sinh tổng hợp số enzyme thủy phân môi trường chất đặc hiệu 38 3.4.1 Hoạt độ chitinase 39 3.4.2 Hoạt độ β-glucanase .40 3.4.3 Hoạt độ cellulase 41 3.4.4 Hoạt độ xylanase 42 3.4.5 Hoạt độ mannanase .43 3.4.6 Hoạt độ amylase .44 3.4.7 Hoạt độ protease .44 3.4.8 Chọn lựa chủng Trichoderma có tiềm sinh tổng hợp hệ enzyme thủy phân hoạt độ cao .45 3.4.9 Khảo sát mối tương quan hoạt độ trung bình hệ enzyme phân giải polysaccharid 46 3.5 Đánh giá khả đối kháng Trichoderma số loài nấm gây bệnh trồng điển hình 47 3.5.1 Khả đối kháng Trichoderma Sclerotium rolfsii 47 3.5.2 Khả đối kháng Trichoderma Rhizoctonia solani 48 3.5.3 Khả đối kháng Trichoderma Phytophthora capsici 49 3.5.4 Khả đối kháng Trichoderma Fusarium sp .50 3.5.5 Khả đối kháng Trichoderma Colletotrichum sp 51 3.5.6 Khả đối kháng Trichoderma Pythium sp .52 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .55 4.1 Kết luận .55 4.2 Đề nghị 56 DANH MỤC CÔNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ .57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 PHỤ LỤC 74 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Sơ lược đặc điểm hình thái khuẩn lạc đặc trưng 47 chủng Trichoderma phân lập môi trường PDA 32 Bảng 3.2 Danh sách định danh loài Trichoderma dựa vào trình tự vùng bảo tồn ITS1-5.8S-ITS2 36 Bảng 3.3 Đường kính vòng phân giải chủng Trichoderma cao nguồn chất chitin huyền phù 39 Bảng 3.4 Đường kính vòng phân giải chủng Trichoderma cao nguồn chất β-glucan 40 Bảng 3.5 Đường kính vòng phân giải chủng Trichoderma cao nguồn chất carboxymethyl cellulose 41 Bảng 3.6 Đường kính vòng phân giải chủng Trichoderma cao nguồn chất xylan 42 Bảng 3.7 Đường kính vòng phân giải chủng Trichoderma cao nguồn chất guargum 43 Bảng 3.8 Đường kính vòng phân giải chủng Trichoderma L5 L7 nguồn chất tinh bột 44 Bảng 3.9 Đường kính vòng phân giải chủng Trichoderma cao nguồn chất gelatin 45 Bảng 3.10 Hoạt tính cellulase, chitinase, β-glucanase, xylanase, mannanase, protease chủng Trichoderma có tổ hợp hoạt tính enzyme cao 46 i Bảng 3.11 Mức độ đối kháng tất loài nấm bệnh chủng Trichoderma đối kháng mạnh .54 ii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Khuẩn lạc đặc trưng Trichoderma môi trường PDA khuẩn ty quan sinh bào tử chúng Hình 1.2 Những hoạt động thúc đẩy tăng trưởng trồng Trichoderma spp .10 Hình 1.3 Sơ đồ vùng rDNA-ITS nấm .15 Hình 1.4 Bản đồ trạng thảm thực vật hai vườn quốc gia Gia Bù Gia Mập Lò Gò Xa Mát 21 Hình 2.1 Phương pháp cấy đối kháng trực tiếp .25 Hình 3.1 Các địa điểm thu nhận mẫu đất hai VQG Bù Gia Mập Lò Gò Xa Mát 31 Hình 3.2 Hình ảnh sơ định danh phòng ẩm số chủng Trichoderma phân lập 36 Hình 3.3 Sơ đồ phát sinh loài 13 chủng Trichoderma phân lập dựa vào trình tự vùng bảo tồn ITS1-5.8S-ITS2 37 Hình 3.4 Khả đối kháng Trichoderma với Sclerotium rolfsii 47 Hình 3.5 Khả đối kháng Trichoderma với Rhizoctonia solani 48 Hình 3.6 Khả đối kháng Trichoderma với Phytophthora capsici 49 Hình 3.7 Khả đối kháng Trichoderma với Fusarium sp 50 Hình 3.8 Khả đối kháng Trichoderma với Colletotrichum sp 51 Hình 3.9 Khả đối kháng Trichoderma với Pythium sp .52 iii DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Hoạt độ chitinase chủng Trichoderma sau 48 nuôi cấy môi trường TSM có bổ sung 1% chitin huyền phù 39 Biểu đồ 3.2 Hoạt độ β-glucanase chủng Trichoderma sau 48 nuôi cấy môi trường TSM có bổ sung 1% β-glucan 40 Biểu đồ 3.3 Hoạt độ cellulase chủng Trichoderma sau 48 nuôi cấy môi trường TSM có bổ sung 1% carboxymethyl cellulose 41 Biểu đồ 3.4 Hoạt độ xylanase chủng Trichoderma sau 48 nuôi cấy môi trường TSM có bổ sung 1% xylan 42 Biểu đồ 3.5 Hoạt độ mannanase chủng Trichoderma sau 48 nuôi cấy môi trường TSM có bổ sung 1% guargum .43 Biểu đồ 3.6 Hoạt độ amylase chủng Trichoderma sau 48 nuôi cấy môi trường TSM có bổ sung 1% tinh bột 44 Biểu đồ 3.7 Hoạt độ protease chủng Trichoderma sau 48 nuôi cấy môi trường TSM có bổ sung 1% gelatin 44 Biểu đồ 3.8 Mức độ đối kháng chủng Trichoderma Sclerotium rolfsii 48 Biểu đồ 3.9 Mức độ đối kháng chủng Trichoderma Rhizoctonia solani 49 Biểu đồ 3.10 Mức độ đối kháng chủng Trichoderma với Phytophthora capsici 50 Biểu đồ 3.11 Mức độ đối kháng chủng Trichoderma với Fusarium sp 51 iv Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Phụ lục Kết phân lập chủng Trichoderma từ 31 mẫu đất thu nhận hai vườn quốc gia Bù Gia Mập Lò Gò Xa Mát B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 B8 B9 B10 B11 B12 B13 B14 B15 B16 75 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Phụ lục B17 B18 B19 B20 B21 B22 B23 B24 B25 B26 B27 B28 B29 B30 B31 B32 B33 B34 B35 B36 L1 L2 L3 L4 76 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ L5 Phụ lục L9 L8 L7 L6 L10 L11 Hình ảnh khuẩn lạc đặc trưng môi trường PDA 47 chủng phân lập có triển vọng thuộc giống Trichoderma 77 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Phụ lục Kết trình tự nucleotide vùng ITS1-5.8S-ITS2 13 chủng Trichoderma giống 3.1 Chủng B1: Trichoderma asperellum GAAGTTTCCA ACCTTCCCAA CCAATTGTGA ACGTTACCAA ACTGTTGCCT 51 CGGCGGGGTC ACGCTCGGGT GCGTCGCAGC CCCGGAACCA GGCGCTCGCC 101 GGAGGAACCA ACCAAACTCT TTCTGTAGTC CCCTCGCGGA CGTATTTCTT 151 ACAGCTCTGA GCAAAAATTC AAAATGAATC AAAACTTTCA ACAACGGATC 201 TCTTGGTTCT GGCATCGATG AAGAACGCAG CGAAATGCGA TAAGTAATGT 251 GAATTGCAGA ATTCAGTGAA TCATCGAATC TTTGAACGCA CATTGCGCCC 301 GCCAGTATTC TGGCGGGCAT GCCTGTCCGA GCGTCATTTC AACCCTCGAA 351 CCCCTCCGGG GGATCGGCGT TGGGGATCGG GACCCCTCAC ACGGGTGCCG 401 GCCCCCGAAA TACAGTGGCG GTCTCGCCGC AGCCCTCTCC TGCGCAGTAG 451 TTTGCACAAC TCGCACCGGG GAGCGCGGCG CGTCCACGTC CGTAAAACAC 501 CCAACTTTCT GAAATGTTGA CCTCGGATCA GGTAGGAATA CCCGCTGAAC 551 TTAAGCATAT C 3.2 Chủng B4: Trichoderma virens AGGGACATTT ACCGAGTTTA CAACTTCCCA AACCCAATGT GAACGTTACC 51 AAACTGTTGC CTCCGGCGGG ATCCTCTGCC CCGGGCGCCG TCCGCAGCCC 101 CGGACCAAGG CGCCCGCCGG AGGACCAACC AAAACTCTTA TTGTATACCC 151 CCTCGCGGGT TTTTTACTAT CTGAGCCATC TCGGCGCCCC TCGTGGGCGT 201 TTCGAAAATG AATCAAAACT TTCAACAACG GATCTCTTGG TTCTGGCATC 251 GATGAAGAAC GCAGCGAAAT GCGATAAGTA ATGTGAATTG CAGAATTCAG 301 TGAATCATCG AATCTTTGAA CGCACATTGC GCCCGCCAGT ATTCTGGCGG 351 GCATGCCTGT CCGAGCGTCA TTTCAACCCT CGAACCCCTC CGGGGGGTCG 401 GCGTTGGGGA TCGGCCCTTT ACGGGGCCGG CCCCGAAATA CAGTGGCGGT 451 CTCGCCGCAG CCTCTCCTGC GCAGTAGTTT GCACACTCGC ATCGGGAGCG 501 CGGCGCGTCC ACAGCCGTTA AACACCCCAA ACTTCTGAAA TGTTGACCTC 551 GGATCAGGTA GGAATACCCG CTGAACTTAA GC 3.3 Chủng B5: Trichoderma asperellum GAAGTTACAA CCTTCCCAAA CCAATTGTGA ACCATACCAA ACTGTTGCCT 51 CGGCGGGGTC ACGCTCGGGT GCCGTCGCAG CCCCGGAACC AGGCGCTCGC 101 CGGAGGGACC AACCAAACTC TTTCTGTAGT CCCCTCGCGG ACGTTATTTC 151 TTTACAGCTC TGAGCAAAAA TTCAAAATGA ATCAAAACTT TCAACAACGG 201 ATCTCTTGGT TCTGGCATCG ATGAAGAACG CAGCGAAATG CGATAAGTAA 251 TGTGAATTGC AGAATTCAGT GAATCATCGA ATCTTTGAAC GCACATTGCG 301 CCCGCCAGTA TTCTGGCGGG CATGCCTGTC CGAGCGTCAT TTCAACCCTC 351 GAACCCCTCC GGGGGGTCGG CGTTGGGGAT CGGGAACCCC TAAGACGGGG 401 ATCCCGGCCC CGAAATACAG TGGCGGTCTC GCCGCAGCCC TCTCCTGCGC 78 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Phụ lục 451 AGTAGTTTGC ACAACTCGCA CCGGGAGCGC GGCGCGTCCA CGTCCGTAAA 501 ACACCCAACT TCTGAAATGT TGACCTCGGA TCAGGTAGGA ATACCCGCTG 551 AACTTAAGC 3.4 Chủng B8: Trichoderma virens GAAGTTTCCN ACCTTCCCAA ACCAATGTGA ACGTTACCAA ACTGTTGCCT 51 CGGCGGGATC TCTGCTCGGG TGCGTCGCAG CCCGGACCAA GGCGCTCGCC 101 GGAGGACAAC CAAAACTCTT ATTGTATACC TCTCGCGGGT TTTTTACTAT 151 CTGAGCCATC TCGGCGCTCC TCGTGGGCGT TTCGAAAATG AATCAAAACT 201 TTCAACAACG GATCTCTTGG TTCTGGCATC GATGAAGAAC GCAGCGAAAT 251 GCGATAAGTA ATGTGAATTG CAGAATTCAG TGAATCATCG AATCTTTGAA 301 CGCACATTGC GCCCGCCAGT ATTCTGGCGG GCATGCCTGT CCGAGCGTCA 351 TTTCAACCCT CGAACCCCTC CGGGGGGTCG GCGTTGGGGA TCGGCCCTTT 401 ACGGGGGCCG GCCCCGAAAT ACAGTGGCGG TCTCGCCGCA GCCTCTCCTG 451 CGCAGTAGTT TGCACACTCG CATCGGGAGC GCGGCGCGTC CACAGCCGTT 501 AAACACCCCA AACTTCTGAA ATGTTGACCT CGGATCAGGT AGGAATACCC 551 GCTGAACTTA AGCAT 3.5 Chủng B11: Hypocrea lixii (anamorph: Trichoderma harzianum) FJ461580.1 GAGGGACATT ACCGAGTTTA CAACTCCCAA ACCCAATGTG AACGTTACCA 51 AACTGTTGCC TCGGCGGGAT CTCTGCCCCG GGTGCGTCGC AGCCCCGGAC 101 CAAGGCGCCC GCCGGAGGAC CAACCAAAAC TCTTTTTGTA TACCCCCTCG 151 CGGGTTTTTT TATAATCTGA GCCTTCTCGG CGCCTCTCGT AGGCGTTTCG 201 AAAATGAATC AAAACTTTCA ACAACGGATC TCTTGGTTCT GGCATCGATG 251 AAGAACGCAG CGAAATGCGA TAAGTAATGT GAATTGCAGA ATTCAGTGAA 301 TCATCGAATC TTTGAACGCA CATTGCGCCC GCCAGTATTC TGGCGGGCAT 351 GCCTGTCCGA GCGTCATTTC AACCCTCGAA CCCCTCCGGG GGGTCGGCGT 401 TGGGGATCGG CCCTCCCTTA GCGGGTGGCC GTCTCCTAAA TACAGTGGCG 451 GTCTCGCCGC AGCCTCTCCT GCGCAGTAGT TTGCACACTC GCATCGGGAG 501 CGCGGCGCGT CCACAGCCGT TAAACACCCA ACTTCTGAAA TGTTGACCTC 551 GGATCAGGTA GGAATACCCG CTGAACTTAA GCATATCA 3.6 Chủng B12: Trichoderma virens GAGTTTACAA CTCCCAAACC CAATGTGAAC GTTACCAAAC TGTTGCCTCC 51 GGCGGGATCC TCTGCCCCGG GTGCGTCGCA GCCCCGGACC AAGGCGCCCG 101 CCGGAGGACC AACCAAAACT CTTATTGTAT ACCCCCTCGC GGGTTTTTTA 151 CTATCTGAGC CATCTCGGCG CCCCTCGTGG GCGTTTCGAA AATGAATCAA 201 AACTTTCAAC AACGGATCTC TTGGTTCTGG CATCGATGAA GAACGCAGCG 251 AAATGCGATA AGTAATGTGA ATTGCAGAAT TCAGTGAATC ATCGAATCTT 301 TGAACGCACA TTGCGCCCGC CAGTATTCTG GCGGGCATGC CTGTCCGAGC 79 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Phụ lục 351 GTCATTTCAA CCCTCGAACC CCTCCGGGGG GTCGGCGTTG GGGATCGGCC 401 CTTTACGGGG CCGGCCCCGA AATACAGTGG CGGTCTCGCC GCAGCCTCTC 451 CTGCGCAGTA GTTTGCACAC TCGCATCGGG AGCGCGGCGC GTCCACAGCC 501 GTTAAACACC CCAAACTTCT GAAATGTTGA CCTCGGATCA GGTAGGAATA 551 CCCGCTGAAC TTAAGCAT 3.7 Chủng B20: Trichoderma koningiopsis GAGTTTACAA CTCCCAAACC CAATGTGAAC CATACCAAAC TGTTGCCTCG 51 GCGGGGTCAC GCCCCGGGTG CGTCGCAGCC CCGGAACCAG GCGCCCGCCG 101 GAGGGACCAA CCAAACTCTT TCTGTAGTCC CCTCGCGGAC GTTATTTCTT 151 ACAGCTCTGA GCAAAAATTC AAAATGAATC AAAACTTTCA ACAACGGATC 201 TCTTGGTTCT GGCATCGATG AAGAACGCAG CGAAATGCGA TAAGTAATGT 251 GAATTGCAGA ATTCAGTGAA TCATCGAATC TTTGAACGCA CATTGCGCCC 301 GCCAGTATTC TGGCGGGCAT GCCTGTCCGA GCGTCATTTC AACCCTCGAA 351 CCCCTCCGGG GGGTCGGCGT TGGGGATCGG GAACCCCTAA GACGGGATCC 401 CGGCCCCGAA ATACAGTGGC GGTCTCGCCG CAGCCTCTCC TGCGCAGTAG 451 TTTGCACAAC TCGCACCGGG AGCGCGGCGC GTCCACGTCC GTAAAACACC 501 CAACTTCTGA AATGTTGACC TCGGATCAGG TAGGAATACC CGCTGAACTT 551 AAGCATATCA TA 3.8 Chủng B22: Trichoderma koningiopsis GAGTTTACAA CTTCCCAAAC CCAATGTGAA CCATACCAAA CTGTTGCCTC 51 CGGCGGGGTC CACGCCCCGG GTGCGTCGCA GCCCCGGAAC CAGGCGCCCG 101 CCGGAGGGAC CAACCAAACT CTTTCTGTAG TCCCCTCGCG GACGTTATTT 151 CTTACAGCTC TGAGCAAAAA TTCAAAATGA ATCAAAACTT TCAACAACGG 201 ATCTCTTGGT TCTGGCATCG ATGAAGAACG CAGCGAAATG CGATAAGTAA 251 TGTGAATTGC AGAATTCAGT GAATCATCGA ATCTTTGAAC GCACATTGCG 301 CCCGCCAGTA TTCTGGCGGG CATGCCTGTC CGAGCGTCAT TTCAACCCTC 351 GAACCCCTCC GGGGGGTCGG CGTTGGGGAT CGGGAACCCC TAAGACGGGA 401 TCCCGGCCCC GAAATACAGT GGCGGTCTCG CCGCAGCCTC TCCTGCGCAG 451 TAGTTTGCAC AACTCGCACC GGGAGCGCGG CGCGTCCACG TCCGTAAAAC 501 ACCCAACTTC TGAAATGTTG ACCTCGGATC AGGTAGGAAT ACCCGCTGAA 551 CTTAAGCATA 3.9 Chủng B26: Trichoderma koningiopsis GAGTTTACAA CTCCCAAACC CAATGTGAAC CATACCAAAC TGTTGCCTCG 51 GCGGGGTCAC GCCCCGGGTG CGTCGCAGCC CCGGAACCAG GCGCCCGCCG 101 GAGGGACCAA CCAAACTCTT TCTGTAGTCC CCTCGCGGAC GTTATTTCTT 151 ACAGCTCTGA GCAAAAATTC AAAATGAATC AAAACTTTCA ACAACGGATC 201 TCTTGGTTCT GGCATCGATG AAGAACGCAG CGAAATGCGA TAAGTAATGT 251 GAATTGCAGA ATTCAGTGAA TCATCGAATC TTTGAACGCA CATTGCGCCC 80 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Phụ lục 301 GCCAGTATTC TGGCGGGCAT GCCTGTCCGA GCGTCATTTC AACCCTCGAA 351 CCCCTCCGGG GGGTCGGCGT TGGGGATCGG GAACCCCTAA GACGGGATCC 401 CGGCCCCGAA ATACAGTGGC GGTCTCGCCG CAGCCTCTCC TGCGCAGTAG 451 TTTGCACAAC TCGCACCGGG AGCGCGGCGC GTCCACGTCC GTAAAACACC 501 CAACTTCTGA AATGTTGACC TCGGATCAGG TAGGAATACC CGCTGAACTT 551 AAGCATA 3.10 Chủng L3: Trichoderma asperellum GAGTTTACAA CTCCCAAACC CAATGTGAAC GTTACCAAAC TGTTGCCTCG 51 GCGGGGTCAC GCCCCGGGTG CGTCGCAGCC CCGGAACCAG GCGCCCGCCG 101 GAGGAACCAA CCAAACTCTT TCTGTAGTCC CCTCGCGGAC GTATTTCTTA 151 CAGCTCTGAG CAAAAATTCA AAATGAATCA AAACTTTCAA CAACGGATCT 201 CTTGGTTCTG GCATCGATGA AGAACGCAGC GAAATGCGAT AAGTAATGTG 251 AATTGCAGAA TTCAGTGAAT CATCGAATCT TTGAACGCAC ATTGCGCCCG 301 CCAGTATTCT GGCGGGCATG CCTGTCCGAG CGTCATTTCA ACCCTCGAAC 351 CCCTCCGGGG GATCGGCGTT GGGGATCGGG ACCCCTCACA CGGGTGCCGG 401 CCCCGAAATA CAGTGGCGGT CTCGCCGCAG CCTCTCCTGC GCAGTAGTTT 451 GCACAACTCG CACCGGGAGC GCGGCGCGTC CACGTCCGTA AAACACCCAA 501 CTTTCTGAAA TGTTGACCTC GGATCAGGTA GGAATACCCG CTGAACTTAA 551 GCATA 3.11 Chủng L6: Trichoderma virens GAGTTTACAA CTCCCAAACC CAATGTGAAC GTTACCAAAC TGTTGCCTCG 51 GCGGGATCTC TGCCCCGGGT GCGTCGCAGC CCCGGACCAA GGCGCCCGCC 101 GGAGGACCAA CCAAAACTCT TATTGTATAC CCCCTCGCGG GTTTTTTACT 151 ATCTGAGCCA TCTCGGCGCC CCTCGTGGGC GTTTCGAAAA TGAATCAAAA 201 CTTTCAACAA CGGATCTCTT GGTTCTGGCA TCGATGAAGA ACGCAGCGAA 251 ATGCGATAAG TAATGTGAAT TGCAGAATTC AGTGAATCAT CGAATCTTTG 301 AACGCACATT GCGCCCGCCA GTATTCTGGC GGGCATGCCT GTCCGAGCGT 351 CATTTCAACC CTCGAACCCC TCCGGGGGGT CGGCGTTGGG GATCGGCCCT 401 TTACGGGGCC GGCCCCGAAA TACAGTGGCG GTCTCGCCGC AGCCTCTCCT 451 GCGCAGTAGT TTGCACACTC GCATCGGGAG CGCGGCGCGT CCACAGCCGT 501 TAAACACCCC AAACTTCTGA AATGTTGACC TCGGATCAGG TAGGAATACC 551 CGCTGAACTT AAGCATA 3.12 Chủng L8: Hypocrea lixii (anomorph: Trichoderma harzianum) GAGTTTACAA CTCCCAAACC CAATGTGAAC GTTACCAAAC TGTTGCCTCG 51 GCGGGATCTC TGCCCCGGGT GCGTCGCAGC CCCGGACCAA GGCGCCCGCC 101 GGAGGACCAA CCAAAACTCT TTTTGTATAC CCCCTCGCGG GTTTTTTTAT 151 AATCTGAGCC TTCTCGGCGC CTCTCGTAGG CGTTTCGAAA ATGAATCAAA 201 ACTTTCAACA ACGGATCTCT TGGTTCTGGC ATCGATGAAG AACGCAGCGA 81 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Phụ lục 251 AATGCGATAA GTAATGTGAA TTGCAGAATT CAGTGAATCA TCGAATCTTT 301 GAACGCACAT TGCGCCCGCC AGTATTCTGG CGGGCATGCC TGTCCGAGCG 351 TCATTTCAAC CCTCGAACCC CTCCGGGGGG TCGGCGTTGG GGATCGGCCC 401 TGCCTCTTGG CGGTGGCCGT CTCCGAAATA CAGTGGCGGT CTCGCCGCAG 451 CCTCTCCTGC GCAGTAGTTT GCACACTCGC ATCGGGAGCG CGGCGCGTCC 501 ACAGCCGTTA AACACCCAAC TTCTGAAATG TTGACCTCGG ATCAGGTAGG 551 AATACCCGCT GAACTTAAGC ATA 3.13 Chủng L11: Trichoderma koningiopsis GAGTTTACAA CTCCCAAACC CAATGTGAAC CATACCAAAC TGTTGCCTCG 51 GCGGGGTCAC GCCCCGGGTG CGTCGCAGCC CCGGAACCAG GCGCCCGCCG 101 GAGGGACCAA CCAAACTCTT TACTGTAGTC CCCTCGCGGA CGTTATTTCT 151 TACAGCTCTG AGCAAAAAAT TCAAAATGAA TCAAAACTTT CAACAACGGA 201 TCTCTTGGTT CTGGCATCGA TGAAGAACGC AGCGAAATGC GATAAGTAAT 251 GTGAATTGCA GAATTCAGTG AATCATCGAA TCTTTGAACG CACATTGCGC 301 CCGCCAGTAT TCTGGCGGGC ATGCCTGTCC GAGCGTCATT TCAACCCTCG 351 AACCCCTCCG GGGGGTCGGC GTTGGGGATC GGGAACCCCT CAGACGGGAT 401 CCCGGCCCCG AAATACAGTG GCGGTCTCGC CGCAGCCTCT CCTGCGCAGT 451 AGTTTGCACA ACTCGCACCG GGAGCGCGGC GCGTCCACGT CCGTAAAACA 501 CCCAACTTTC TGAAATGTTG ACCTCGGATC AGGTAGGAAT ACCCGCTGAA 551 CTTAAGCATA 82 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Phụ lục Kết khảo sát hoạt độ hệ enzyme thủy phân 47 chủng Trichoderma phân lập 4.1 Đường kính vòng phân giải (mm) hệ chitinase, β-glucanase cellulase 47 chủng Trichoderma phân lập môi trường TSM cải tiến + 1% chất (chitin huyền phù, β-glucan carboxymethyl cellulose) sau 36h, 48h, 60h 72 h nuôi cấy STT Chủng Trichoderma 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 B8 B9 B10 B11 B12 B13 B14 B15 B16 B17 B18 B19 B20 B21 B22 B23 B24 B25 B26 B27 B28 B29 B30 B31 B32 B33 B34 B35 B36 L1 L2 L3 L4 L5 Chitinase β-glucanase Thời gian khảo sát Thời gian khảo sát 36h 48h 60h 72h 36h 48h 60h 72h 9,5 19,0 53,0 71,0 5,0 8,0 11,5 16,0 20,5 30,0 50,5 68,0 4,5 9,0 12,5 17,5 20,0 39,5 54,5 73,0 5,5 12,0 13,5 17,0 12,5 20,5 43,5 66,0 16,5 27,5 64,0 83,5 21,5 35,0 51,5 61,5 26,5 42,5 77,5 89,5 11,5 44,5 60,5 72,5 42,5 67,0 80,5 89,0 25,0 55,0 59,0 77,5 38,5 60,5 78,5 88,5 32,0 57,0 69,5 69,5 6,5 10,0 12,5 17,5 16,5 37,5 65,5 84,0 5,0 10,0 13,0 15,5 19,0 40,5 71,5 79,0 7,5 12,0 18,0 31,0 29,5 48,5 68,0 76,5 7,0 10,5 15,0 22,5 24,0 49,5 61,0 75,5 24,5 44,5 56,0 69,5 20,0 26,5 34,5 61,0 8,0 11,0 15,5 20,5 17,5 39,0 65,0 77,0 6,5 10,0 16,5 24,0 34,5 51,5 66,0 88,5 4,5 8,0 10,0 12,0 22,5 46,0 69,0 78,0 4,5 7,0 10,0 12,0 10,0 15,5 41,0 59,0 26,5 38,5 54,5 75,5 9,0 14,0 16,0 20,0 13,0 26,0 35,5 41,0 22,5 36,5 63,0 78,5 31,0 39,5 72,5 86,5 11,0 18,5 46,0 71,0 34,5 45,5 75,0 89,0 31,0 41,0 54,5 64,0 32,0 45,5 62,5 78,0 7,5 17,0 30,0 41,0 40,0 50,5 77,5 89,5 27,0 47,5 66,0 80,5 9,5 16,5 24,5 39,0 20,0 32,5 65,5 79,0 5,5 11,0 22,5 40,0 26,0 52,0 74,5 89,0 20,5 41,5 75,5 82,0 13,5 25,5 40,0 61,0 26,0 44,5 58,0 76,5 7,5 14,5 21,5 35,5 0,0 4,0 8,0 11,5 6,0 10,5 19,5 34,0 3,5 6,0 13,5 23,0 20,0 37,0 63,5 89,5 3,0 5,0 15,0 23,5 18,5 36,5 62,5 78,5 5,5 9,0 13,0 25,5 12,5 19,5 33,5 58,5 6,0 13,0 23,5 39,0 17,5 28,0 57,5 86,5 8,5 23,5 36,0 62,0 16,5 39,5 62,0 72,0 0,0 3,0 8,5 18,0 6,0 13,5 21,5 34,5 10,5 16,5 28,0 43,5 9,5 16,0 22,0 30,5 7,5 12,0 15,5 19,0 11,5 24,5 55,0 77,5 0,0 3,0 6,5 10,5 26,0 41,5 65,5 74,0 21,5 45,0 71,0 89,5 24,0 39,0 66,5 79,5 2,5 6,0 16,0 28,5 14,0 22,5 51,0 65,5 7,0 12,0 20,5 31,0 7,0 14,5 21,0 38,5 7,0 11,0 18,5 29,5 24,5 41,5 60,5 73,5 34,5 53,5 65,0 78,0 83 Cellulase Thời gian khảo sát 36h 48h 60h 72h 7,5 11,5 15,5 20,0 16,0 30,0 43,5 61,5 32,5 45,0 66,0 89,0 8,5 14,5 20,0 41,0 19,0 34,5 45,0 61,5 20,0 39,5 65,0 88,0 22,5 31,5 49,0 71,0 14,5 29,0 45,5 56,0 16,0 30,5 45,0 58,5 22,5 38,5 51,0 75,5 24,0 37,0 48,5 76,5 7,5 20,0 30,5 44,5 20,5 32,0 58,5 44,5 21,0 37,0 46,0 65,5 9,5 19,0 28,5 36,0 18,0 37,5 49,0 61,5 27,0 39,0 56,0 70,0 10,0 14,0 19,0 28,0 31,0 46,5 66,0 88,5 6,0 10,5 18,0 30,5 16,0 23,5 31,0 41,0 10,0 23,5 44,5 54,0 16,5 32,5 44,0 60,5 24,5 34,5 42,5 54,5 18,5 30,5 46,5 74,0 26,5 41,0 67,0 73,5 8,0 14,5 24,0 31,5 5,5 9,5 13,0 20,5 20,5 30,5 56,0 75,0 20,5 32,0 45,5 54,5 6,5 12,0 24,5 42,5 15,0 22,5 54,0 73,5 21,0 32,5 45,0 63,5 8,5 15,5 23,5 36,0 5,0 9,5 13,5 20,0 24,0 37,5 54,5 70,5 14,5 22,0 40,0 71,5 18,5 29,0 38,5 47,0 9,5 18,0 32,5 47,5 13,0 17,5 29,5 46,0 18,5 42,5 55,5 87,0 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ 42 43 44 45 46 47 L6 L7 L8 L9 L10 L11 5,5 37,5 31,0 14,0 21,5 27,5 10,5 46,0 46,5 45,0 45,5 45,0 20,5 75,5 58,5 56,5 54,0 57,0 Phụ lục 29,5 89,5 73,5 56,5 73,0 70,5 9,5 25,5 5,5 26,0 40,5 27,5 24,5 42,5 18,0 34,0 56,5 42,5 56,0 45,0 21,5 62,5 70,0 64,0 75,0 74,0 33,5 89,5 87,5 77,0 7,5 18,5 22,5 19,5 29,5 25,5 13,5 37,0 31,0 29,0 40,5 46,0 26,0 50,0 43,5 40,5 53,0 53,0 47,5 82,5 78,5 53,0 72,5 88,5 4.2 Đường kính vòng phân giải (mm) hệ xylanase, mannanase protease 47 chủng Trichoderma phân lập môi trường TSM cải tiến + 1% chất (xylan, guargum gelatin) sau 36h, 48h, 60h 72 h nuôi cấy STT Chủng Trichoderma B1 Xylanase Mannanase Protease Thời gian khảo sát Thời gian khảo sát Thời gian khảo sát 36h 48h 60h 72h 36h 48h 60h 72h 36h 48h 60h 72h 7,0 13,5 25,5 52,0 12,5 36,0 47,5 61,5 20,5 35,0 51,0 61,5 B2 22,0 48,0 54,5 64,5 31,0 49,0 75,0 90,0 31,0 36,5 45,0 54,5 B3 14,0 21,5 44,5 59,5 19,0 30,0 56,5 72,5 23,0 35,0 46,0 57,0 B4 6,0 14,5 22,0 47,0 13,5 21,5 41,5 70,0 36,5 47,5 68,5 70,0 B5 19,0 27,5 45,0 64,0 31,0 50,5 72,0 81,0 33,5 39,5 56,0 72,0 B6 22,0 32,5 43,5 78,5 27,0 53,5 72,5 90,0 31,0 37,0 55,5 60,5 B7 29,0 45,0 66,5 89,0 29,0 54,0 90,0 90,0 31,5 38,0 50,5 58,5 B8 37,0 39,5 59,5 85,5 30,0 52,5 78,0 90,0 32,5 46,0 61,5 78,0 B9 20,5 32,0 66,5 75,0 25,5 47,0 72,5 90,0 27,0 41,5 51,0 65,0 10 B10 33,5 59,0 78,5 90,0 27,5 50,5 75,0 90,0 31,0 33,5 50,5 60,5 11 B11 18,0 35,5 50,0 61,5 43,0 65,0 90,0 90,0 23,5 40,0 56,5 55,5 12 B12 24,0 38,0 64,5 80,5 18,5 42,5 63,5 73,5 27,5 41,5 53,0 68,5 13 B13 29,0 49,0 64,5 73,5 28,0 52,0 71,0 90,0 27,0 36,5 48,5 60,0 14 B14 11,5 18,5 37,5 52,5 15,5 42,5 49,5 64,0 27,5 37,5 47,5 62,0 15 B15 15,5 41,0 68,0 81,0 17,0 41,0 60,0 75,5 30,5 40,0 56,5 75,0 16 B16 23,5 42,5 59,5 76,0 13,0 24,5 50,0 70,5 35,0 42,0 55,0 65,0 17 B17 14,0 24,0 32,5 49,5 6,0 12,0 36,0 45,5 22,0 30,5 43,0 64,0 18 B18 19 20 21 22 23 24 25 26 B19 B20 B21 B22 B23 B24 B25 B26 7,5 16,0 16,0 30,0 7,0 13,5 13,0 26,0 16,0 12,5 31,5 29,5 39,0 13,0 27,5 26,0 39,0 29,0 28,5 48,0 47,0 52,0 24,5 52,0 37,5 65,0 41,0 42,5 65,5 64,5 63,5 37,5 69,5 58,5 89,0 57,0 5,0 10,5 22,0 19,0 6,0 20,0 21,0 31,0 9,5 9,0 19,5 39,5 31,0 15,0 43,5 45,0 67,0 17,5 12,5 30,0 52,0 41,5 30,5 53,5 51,0 90,0 31,0 15,5 42,0 78,5 54,0 64,5 67,0 76,5 90,0 45,5 22,5 25,5 25,0 24,5 20,0 21,5 29,0 22,0 31,0 31,5 36,0 27,5 40,0 27,0 30,5 36,0 31,0 37,5 41,0 40,5 36,5 41,5 37,0 35,5 49,5 45,5 46,0 45,0 60,0 37,5 41,0 56,0 45,0 65,5 67,0 52,0 84 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ 27 28 29 30 31 32 33 34 35 B27 B28 B29 B30 B31 B32 B33 B34 B35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 Phụ lục B36 4,5 8,0 18,0 6,5 3,0 26,0 17,0 9,0 4,5 11,5 10,0 13,5 35,5 14,0 6,0 38,5 26,5 15,5 8,0 20,5 19,0 19,5 55,0 19,0 9,0 52,0 38,0 23,0 12,0 30,0 28,0 25,5 69,0 28,0 14,0 70,0 41,0 29,0 16,0 51,0 10,0 16,0 26,0 16,0 37,0 24,5 21,0 11,0 12,5 22,0 17,5 25,5 36,0 29,5 43,5 31,5 35,0 19,5 29,5 34,5 27,0 39,0 62,0 59,0 52,0 75,0 74,5 50,0 54,5 71,0 40,0 61,5 75,5 70,0 68,0 90,0 90,0 65,0 62,5 90,0 9,5 5,0 28,5 28,0 21,0 21,5 29,5 25,0 24,0 26,5 16,5 10,5 37,5 37,0 30,5 30,0 41,5 32,0 30,5 36,0 26,0 16,0 44,5 50,5 35,0 41,0 53,0 45,0 41,5 44,5 32,0 18,5 50,5 70,0 45,0 50,5 65,5 51,0 45,0 55,0 L1 L2 L3 L4 L5 L6 L7 L8 L9 L10 L11 21,0 29,5 16,0 5,0 31,0 4,0 36,0 26,5 22,5 20,0 21,5 42,0 46,0 39,0 7,0 48,0 9,0 50,0 40,0 35,0 39,5 34,5 60,0 63,0 51,5 10,5 59,5 12,0 61,5 57,5 53,5 54,0 57,0 78,0 88,0 60,0 16,0 81,0 16,5 81,0 71,0 68,0 65,0 65,5 55,0 24,0 15,0 17,5 50,5 15,0 53,5 26,0 11,5 15,0 12,0 71,0 48,0 27,5 32,0 76,0 30,5 78,0 46,0 38,0 31,0 33,5 82,5 72,5 31,0 52,5 90,0 48,0 90,0 80,5 50,0 75,5 46,0 90,0 90,0 49,5 80,0 90,0 65,0 90,0 90,0 86,0 90,0 51,5 20,5 25,0 26,0 26,5 20,5 30,5 21,0 24,5 35,0 24,5 27,0 28,0 33,0 41,5 36,5 29,0 41,0 33,5 30,5 40,5 32,0 28,0 41,5 44,5 55,0 55,5 41,5 52,5 38,5 43,0 52,0 40,0 54,5 55,0 55,0 66,0 75,0 44,0 71,5 51,0 51,5 70,0 50,5 59,5 85 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Phụ lục Kết khảo sát đối kháng Trichoderma số loài vi nấm gây bệnh trồng 5.1 Kết đối kháng Trichoderma Sclerotium rolfsii Chỉ tiêu Chỉ tiêu (5 ngày) Chỉ tiêu (13 ngày) Kết đối kháng Số lượng chủng 4+ 3+ 2+ 1+ 15 B1, B4, B5, B8, B12, B20, B22, B26, B31, B34, L3, L4, L6, L10, L11 - 32 B2, B3, B6, B7, B9, B10, B11, B13, B14, B15, B16, B17, B18, B19, B21, B23, B24, B25, B27, B28, B29, B30, B32, B33, B35, B36, L1, L2, L5, L7, L8, L9 4+ B1, B4, B8, B12 3+ B31 2+ 1+ 10 B5, B20, B22, B26, B34, L3, L4, L6, L10, L11 32 B2, B3, B6, B7, B9, B10, B11, B13, B14, B15, B16, B17, B18, B19, B21, B23, B24, B25, B27, B28, B29, B30, B32, B33, B35, B36, L1, L2, L5, L7, L8, L9 - Tên chủng Trichoderma 5.2 Kết đối kháng Trichoderma Rhizoctonia solani Chỉ tiêu Chỉ tiêu (5 ngày) Chỉ tiêu Kết đối kháng Số lượng chủng Tên chủng Trichoderma 4+ B1, B4, B5, B8 3+ 10 B7, B12, B15, B20, B25, B26, B30, B31, B36, L11 2+ 17 B2, B6, B9, B11, B16, B17, B19, B24, B29, B33, B34, B35, L1, L2, L5, L6, L7 1+ 11 B10, B13, B14, B18, B23, B32, L3, L4, L8, L9, L10 - B3, B21, B22, B27, B28 4+ 22 B1, B3, B4, B5, B7, B8, B9, B11, B12, B14, B15, 86 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Phụ lục (13 ngày) B16, B19, B20, B22, B24, B29, B31, B33, B34, B35, L11 3+ 15 B2, B6, B17, B21, B25, B26, B27, B30, B36, L1, L2, L5, L6, L7, L10 2+ B10, B13, B18, B23, B32, L3, L4, L8, L9 1+ - B28 5.3 Kết đối kháng Trichoderma Phytophthora capsici Chỉ tiêu Chỉ tiêu (5 ngày) Chỉ tiêu (11 ngày) Kết đối kháng Số lượng chủng Tên chủng Trichoderma 4+ B4, B5, L5, L11 3+ B9 2+ 13 B1, B3, B11, B12, B14, B17, B20, B22, B25, B26, B29, L7, L10 1+ 19 B2, B6, B7, B8, B10, B13, B16, B18, B19, B21, B23, B27, B30, B32, B33, B36, L3, L4, L6 - 10 B15, B24, B28, B31, B34, B35, L1, L2, L8, L9, 4+ 10 B1, B4, B5, B9, B12, B20, B21, B26, L5, L11 3+ B3, B7, B17, B18, B24, L7 2+ 24 B2, B6, B10, B11, B14, B15, B16, B19, B22, B23, B25, B27, B28, B29, B31, B32, B33, B36, L1, L2, L3, L4, L6, L10 1+ B8, B13, B30, B34, B35, L8, L9 - 87 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Phụ lục 5.4 Kết đối kháng Trichoderma Fusarium sp Chỉ tiêu Chỉ tiêu (5 ngày) Chỉ tiêu (13 ngày) Kết đối kháng Số lượng chủng Tên chủng Trichoderma 4+ B5, B11, B33, L2, L7 3+ B3, B6, B9, B10, B26, B35, L3, L6, L8 2+ 14 B4, B7, B8, B12, B17, B18, B23, B25, B24, B30, L1, L4, L9, L11 1+ 14 B1, B2, B13, B14, B16, B20, B21, B22, B27, B29, B31, B32, L5, L10 - B15, B19, B28, B34, B36 4+ 10 B3, B5, B10, B11, B33, B35, L2, L3, L6, L7 3+ 11 B6, B9, B17, B23, B24, B25, B26, B30, L4, L8, L11 2+ 18 B2, B4, B7, B8, B12, B13, B14, B16, B18, B20, B21, B22, B27, B29, B31, B32, L1, L9 1+ B1, B15, B19, B34, B36, L5, L10 - B28 5.5 Kết đối kháng Trichoderma Colletotrichum sp Chỉ tiêu Chỉ tiêu (5 ngày) Chỉ tiêu Kết đối kháng Số lượng chủng 4+ 3+ B7, L1 2+ 11 B1, B3, B4, B17, B23, B25, B26, L4, L9, L10, L11 1+ 21 B5, B6, B8, B9, B10, B11, B12, B20, B21, B22, B29, B30, B31, B32, B36, L2, L3, L5, L6, L7, L8 - 13 B2, B13, B14, B15, B16, B18, B19, B24, B27, B28, B33, B34, B35 4+ L1 Tên chủng Trichoderma 88 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ (12 ngày) Phụ lục 3+ B7, B23, L11 2+ 19 B1, B3, B4, B17, B20, B21, B22, B25, B26, B29, B30, B31, B32, B36, L2, L3, L4, L9, L10 1+ 20 B5, B6, B8, B9, B10, B11, B12, B13, B14, B15, B16, B18, B19, B24, B33, B34, L5, L6, L7, L8 - B2, B27, B28, B35 5.6 Kết đối kháng Trichoderma Pythium sp Chỉ tiêu Chỉ tiêu (5 ngày) Kết đối kháng Số lượng chủng Tên chủng Trichoderma 4+ B12, B20, L3 3+ B17, B18, B21, B26, B36, L1, L2, L6, L11 12 B6, B7, B10, B11, B15, B16, B21, B24, B29, L4, L5, L8 13 B1, B2, B3, B4, B5, B19, B23, B25, B33, B34, B35, L7, L10 - 10 B13, B14, B22, B31, B32, B8, B9, B27, B28, L9 4+ B12, B20, B21, B26, L3, L4 12 B7, B10, B17, B18, B24, B29, B30, B36, L1, L2, L6, L11 10 B6, B11, B15, B16, B19, B23, B25, B33, L5, L8 14 B1, B2, B3, B4, B5, B13, B14, B22, B31, B32, B34, B35, L7, L10 B8, B9, B27, B28, L9 2+ 1+ 3+ Chỉ tiêu (13 ngày) 2+ 1+ - 89 [...]... Trong đó, một số chủng Trichoderma dùng sản xuất các sản phẩm này được phân lập tại Việt Nam, nhưng cũng có những sản phẩm sử dụng các chủng giống có nguồn gốc ngoại nhập, do đó sẽ có những hạn chế nhất định về việc thích nghi với các điều kiện sản xuất thực tiễn ở Việt Nam Do vậy, nghiên cứu Phân lập và sàng lọc các chủng Trichoderma có lợi từ hai vườn quốc gia Bù Gia Mập và Lò Gò Xa Mát được thực... chưa có nghiên cứu nào về Trichoderma được thực hiện tại hai vườn quốc gia Bù Gia Mập (tỉnh Bình Phước) và Lò Gò Xa Mát (tỉnh Tây Ninh) Vì vậy, với mong muốn phân lập các chủng Trichoderma còn giữ nguyên các đặc tính hoang dại nguyên thủy của chúng cũng như tránh việc phân lập lại những chủng Trichoderma đã thương mại hóa trong các sản phẩm phân bón, nghiên cứu này được đề xuất nhằm sưu tập các chủng Trichoderma. .. Trichoderma từ các mẫu đất thu thập tại hai vườn quốc gia Bù Gia Mập và Lò Gò Xa Mát - Định danh một số chủng Trichoderma bằng sinh học phân tử - Khảo sát hoạt độ một số hệ enzyme thủy phân ngoại bào (chitinase, betaglucanase, cellulase, xylanase, mannanase, amylase và protease) của các chủng Trichoderma phân lập, từ đó sàng lọc một số chủng Trichoderma tiềm năng trong việc phân giải chất hữu cơ, xác bã thực... Trichoderma từ hai vườn quốc gia Bù Gia Mập và Lò Gò Xa Mát, từ đó sàng lọc các chủng tiềm năng trong việc phân giải chất hữu cơ, xác bã thực vật và phòng, trị một số nấm gây bệnh cây trồng nhằm phát triển thành các sản phẩm dùng trong sản xuất nông nghiệp ở Việt Nam 17 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Tổng quan tài liệu 1.8 Địa điểm thu nhận các mẫu đất nghiên cứu 1.8.1 Vườn quốc gia Bù Gia Mập 1.8.1.1... nay vẫn chưa có nghiên cứu nào về Trichoderma được thực hiện tại vườn quốc gia Bù Gia Mập 1.8.2 Vườn quốc gia Lò Gò Xa Mát 1.8.2.1 Vị trí địa lý Vườn quốc gia Lò Gò Xa Mát nằm trên địa phận 3 xã Tân Lập, Tân Bình, Hoà Hiệp thuộc huyện Tân Biên, tỉnh Tây Ninh, cách thị xã Tây Ninh khoảng 30 km về phía Bắc Tây Bắc, theo đường 781, diện tích 18.765 ha với tọa độ từ 11°02’ tới 11°47’ vĩ bắc, và từ 105°57’... nấm Các nghiên cứu về sự đa dạng giới nấm thể hiện qua thành phần loài, với các giống ưu thế là Ganoderma, Lepiota, Poloyporus, Amauroderma, Trametes, Lentunus Tuy nhiên, hiện vẫn chưa có nghiên cứu vào về Trichoderma được thực hiện tại vườn quốc gia Lò Gò Xa Mát Hình 1.4 Bản đồ hiện trạng thảm thực vật hai vườn quốc gia Gia Bù Gia Mập (A) và Lò Gò Xa Mát (B) 21 Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Vật liệu và. .. sưu tập các chủng Trichoderma có tính bản địa từ hai vườn quốc gia nói trên, từ đó tiến hành sàng lọc các chủng tiềm năng trong việc phân giải chất hữu cơ, xác bã thực vật và phòng, trị một số nấm gây bệnh cây trồng nhằm phát triển thành các sản phẩm dùng trong sản xuất nông nghiệp ở Việt Nam NỘI DUNG NGHIÊN CỨU - Phân lập, định danh sơ bộ theo hình thái và bảo quản các chủng Trichoderma từ các mẫu... 1.8.1.1 Vị trí địa lý Vườn quốc gia Bù Gia Mập nằm ở phía Đông Bắc tỉnh Bình Phước, trên địa bàn xã Bù Gia Mập huyện Phước Long tỉnh Bình Phước, tại vị trí cực Bắc của tỉnh Phía Đông vườn quốc gia này là tỉnh Đắk Nông, phía Tây Bắc là biên giới Việt Nam Campuchia Tọa độ từ 12°08’30” tới 12°17’30” vĩ bắc, và từ 107°03’30” đến 107°14’30” kinh đông 1.8.1.2 Diện tích Vườn quốc gia Bù Gia Mập có tổng diện tích... 1.692 ha rừng nghèo, 5.064 ha rừng hỗn giao và 11.434 ha rừng lồ ô Vùng đệm vườn quốc gia có diện tích 15.200 ha gồm 7.200 ha thuộc tỉnh Bình Phước và 8.000 ha của tỉnh Đăk Nông 1.8.1.3 Đa dạng sinh học về tài nguyên sinh vật Hệ thực vật Hệ thực vật vườn quốc gia Bù Gia Mập rất đa dạng và phong phú, các nghiên cứu sơ bộ đã thống kê tại vườn quốc gia Bù Gia Mập có 808 loài thực vật, 396 giống, 118 họ,... cũng sàng lọc ra các chủng Trichoderma có hoạt tính enzyme cao, thuộc các loài T longibrachiatum, T virens, T harzianum, T asperellum, T sinensis, T koningii và T stromaticum Nhìn chung, các nghiên cứu về Trichoderma ở Việt Nam từ trước tới nay chỉ tập trung sưu tập, sàng lọc và nghiên cứu các chủng vi nấm này từ các vùng đất trồng cây ăn trái Nam Bộ [7], đất nông nghiệp từ Trung Bộ đến Nam Bộ và hải ... [36, 39, 100] Cơ chất -1 ,3-glucanase polymer có chứa glucose liên kết với -1 ,3-glucosid -1 ,3-glucanase chia thành endo- (sản phẩm cuối phân giải polymer glucose ngắn) exo-glucanase (sản phẩm cuối... protein, l m bất hoạt enzyme thủy phân B cinerea, từ l m giảm khả gây bệnh [53] 1.5.4 Cellulase, Xylanase hệ enzyme thủy phân khác Họ enzyme cellulase bao gồm exo-(cellobiohydrolase) endo- -1 ,4-glucanase... anthroquinon (pachybasin-[1,8-dihydroxy-3-methyl-9,10anthraquinon]; emodin-[1,6,8-trihydroxy-3-methyl-9,10-anthroquinon]), chức chúng chưa biết, số chất khác benzoquinon (thermophyllin), cardinan (avocettin);